TEHNIK ANALISA

KROMATOGRAFI SEDERHANA

KROMATOGRAFI

• ADALAH SUATU TEHNIK PEMISAHAN, YG

PERTAMA KALI DIPAKAI MEMISAHKAN ZAT-2

WARNA TANAMAN. KROMA= ZAT WARNA.

• PRINSIP YG MEMUNGKINKAN TEHNIK

KROMATOGRAFI DIPAKAI DLM AHP ADALAH:

MEMANIPULASI SIFAT-2 FISIK ZAT-2 YG

MENYUSUN SUATU CAMPURAN

PANGAN/ZAT PENYUSUN BAHAN PANGAN.

MANIPULASI SIFAT FISIK ZAT

PENYUSUN BHN PANGANS ADL:

1. TENDENSI MOLEKUL DARI SUATU ZAT UTK

LARUT DLM SUATU PELARUT/CAIRAN.

2. TENDENSI MOLEKUL DARI SUATU ZAT UTK

DAPAT TERADSORPSI PADA BUTIR-2 ZAT

PADAT YG HALUS DGN PEMUKAAN YG

LUAS

3. TENDENSI MOLEKUL DARI SUATU ZAT

UNTUK MASUK KE FASE UAP/MENGUAP.

• KRN PERBEDAAN SATU/LEBIH DAI SIFAT-2

FISIK TADI, CAMPURAN BERBAGAI ZAT

DAPAT DIPISAHKAN DALAM SUATU SISTEM

YG BERGERAK SECARA KONTINYU.

• DPT PULA DIKATAKAN TIDAK ADA DUA ZAT

ATAU LEBIH YG MEMILIKI SIFAT FISIK YG

SAMA. OLEH SEBAB ITU PEMISAHAN SUATU

CAMPURAN ZAT DAPAT SELALU

DILAKUKAN.

CONTOH:

• GLUKOSA, FRUKTOSA DAN SUKROSA

ATAU GULA SEDERHANA LAINNYA

SELALU DAPAT DIPISAHKAN DLM

SUATU CAMPURAN ZAT YG

MENGANDUNG GULA SEDERHANA

TSB DGN TEHNIK KROMATOGRAFI.

DEMIKIAN PULA UTK SUATU ZAT

CAMPURAN/SENYAWA CAMPURAN

LAINNYA.

POLARITAS DLM ILMU

KROMATOGRAFI• ARTI POLARITAS: ADANYA

PEMISAHAN KUTUB MUATAN POSITIF

DAN NEGATIF DARI SUATU MOLEKUL

AKIBAT TERBENTUKNYA

KONFIGURASI TERTENTU DARI ATOM-

2 YG MENYUSUNNYA.

• POLARITAS DLM KROMATOGRAFI

DIPAKAI SEBAGAI PETUNJUK SIFAT

PELARUT, ADSORBEN DAN SOLUTE.

POLARITAS ZAT PELARUT

KONSTANTE

DIELEKTRIK

NAMA ZAT PELARUT

1,890 PE, HEKSAN, HEPTAN

2,023 SIKLOHEKSAN

2,238 KARBON TETRAKLORIDA,TRIKLOROETILEN, TOLUEN

2,284 BENZENE, DIKLOROMETANE

4,806 KLOROFORM

4,340 ETIL ETER

6,020 ETIL ASETAT

20,700 ASETON, n.PROPANOL

24,300 ETANOL

33,620 METANOL

80,370 AIR

ADSORBENT= ZAT

PENYERAP/PENGIKAT• ADSORBENT DAPAT BERSIFAT POLAR ATAUPUN

NON-POLAR

• ADSORBEN POLAR: SILIKA GEL, ALUMINA

• NON-POLAR: ARANG ATAU CHARCOAL

• PROSES ADSORPSI SAMA DGN PROSES

TERLARUTNYA SOLUTE DALAM PELARUT YAITU:

LIKE DISSOLVES LIKE

• CONTOH: ALKOHOL TERIKAT > KUAT d.p. eter

TERHADAP ADSORBEN SILIKA GEL, SEBALIKNYA

ETER >TERIKAT KUAT PADA CHARCOAL d.p.

ALKOHOL

KROMATOGRAFI PARISI &

ADSORPSI• PEMISAHAN SCR KROMATOGRAFI PARTISI

ATAUPUN ADSORPSI SANGAT DIPENGARUHI OLEH:

• PERBEDAAN POLARITAS SOLUTE YG DIPISAHKAN.

CHROMATOGRAPHY PAPER

TLC PLATES

PEMISAHAN JENIS GULA

• PERSIAPAN SAMPEL: LAKUKAN SAMA

SPT PENETAPAN GULA REDUKSI

• LARUTAN STD: LAR. GLUKOSA,

LAKTOSA, MANNOSA DSB 1%

• PELARUT/FASE MOBIL:

PELARUT/FASE MOBIL:

• 1. n-butanol:asam asetat:air: 4:1:5 (v/v)

• 2. n-butanol:asam asetat:eter:air: 9:6:3:1

(v/v)

• 3. isopropanol:piridin:air:asetat:8:8:4:1

• 4.butanol:etanol:air:40:11:19

• 5.etil asetat:asetat:air:3:3:1

• 6.etil asetat:piridin:air:10:4:3

PENDETEKSI:

• LARUTAN ANILIN-FTALAT: LAR.1.669 G

ASAM 0-FTALAT &0,91 ML ANILIN DLM

CAMPURAN 48 ML n-BUTANOL, 48 ML ETER

& 4 ML AIR. SEMPROTANPD

KROMATOGRAM KERING, PANASKAN PADA

105-110 0C selama 5 – 7 MENIT.

• PEREAKSI RESORSINOL:

• PEREAKSI ANILIN DIFENILAMIN:

PENGUKURAN DGN

KROMATOGRAFI KERTAS

• PERSIAPAN KERTAS KROM.: 25X25 CM,

GARIS 3 CM DR SATU SISI, TANDAI GRS TSB

DGN PENSIL JARAK 2,5 CM, BERI TANDA

• SPOTTING: ISI BEJANA DGN 50-100 ML DGN

FASE MOBIL BIARKAN BEJANA JENUH,

SAMBIL NUNGGU TETESKAN SAMPEL &

LAR. STD PD TITIK-2NYA.

LANJUTAN KROM. KERTAS

• BESARNYA SPOT TETESAN 2 CM

• BIARKAN KERING ATAU PERCEPAT KERING DGN HAIR-DRYER

• KERTAS DIBENTUK SILINDER, JEPIT, LETAKKAN DLM BEJANA JENUH, LAKUKAN FASE DEVELOPING.

• BIARKAN FASE MOBIL MEMBASAHI KERTAS SAMPAI ¾ KERTAS, ANGKAT KERTAS KERINGKAN

• DETEKSI & PENGUKURAN Rf

• SEMPROT SPOT DGN LAR. PENDETEKSI

DETEKSI & PENGUKURAN Rf

• SEMPROT SPOT DGN LAR.

PENDETEKSI, KERINGKAN, WARNA

SPOT TERBENTUK, KERTAS

PANASKAN 105 0C, tandai bag. Tengah

spot dgn pensil ukur & bandingkan dgn Rf

spot std.

• Rf = jarak start-spot/jarak start-finish.

TLC ACCECORIES

TLC REAGENT SRP

F.M SPRAY BOTTLE

GLASS CC

Alat pelapis adsorben

Cara pengembangan

Hasil pengembangan ganda

Al.kromatografi atsorbsi

• PRINSIP PROSEDUR ANALISA:

PEMISAHAN PEWARNA MAKANAN SCR

KROMATOGRAFI KERTAS

• PEMISAHAN ASAM AMINO DARI

SAMPEL DGN CARA KROMATOGRAFI

LAPIS TIPIS.