PENGHAMBATAN PEMBENTUKAN ENZIM ......Penelitian ini menggunakan metode ekstraksi daun Ambre dengan...

perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id

commit to user

i

PENGHAMBATAN PEMBENTUKAN ENZIM EKSOPROTEASE

BAKTERI Aeromonas hydrophila BERBASIS SISTEM QUORUM SENSING

DENGAN EKSTRAK ETANOLIK DAUN AMBRE (Geranium radula

Cavan.)

SKRIPSI

Untuk memenuhi sebagian persyaratan

guna memperoleh gelar Sarjana Sains

Oleh:

Unoviana Kartika Setia

M0408090

JURUSAN BIOLOGI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS SEBELAS MARET

SURAKARTA

2012


commit to user

iv

PERNYATAAN

Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi ini adalah hasil penelitian saya sendiri

dan tidak terdapat karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar

kesarjanaan di suatu Perguruan Tinggi serta tidak terdapat karya atau pendapat

yang pernah dituliskan atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara

tertulis diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.

Apabila di kemudian hari dapat ditemukan adanya unsur penjiplakan maka gelar

kesarjanaan yang telah diperoleh dapat ditinjau kembali dan/atau dicabut.

Surakarta, Juli 2012

Unoviana Kartika

Setia

M0408090


commit to user

v

PENGHAMBATAN PEMBENTUKAN ENZIM EKSOPROTEASE

BAKTERI Aeromonas hydrophila BERBASIS SISTEM QUORUM SENSING

DENGAN EKSTRAK ETANOLIK DAUN AMBRE (Geranium radula

Cavan.)

UNOVIANA KARTIKA SETIA

Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,

Universitas Sebelas Maret, Surakarta.

ABSTRAK

Enzim eksoprotease adalah salah satu faktor virulensi pada bakteri

A. hydrophila. Enzim eksoprotease dibentuk dari hasil komunikasi antar bakteri

yang disebut sistem quorum sensing. Sistem ini memungkinkan bakteri dapat

berkomunikasi dengan mensekresikan molekul sinyal yang disebut autoinducer.

A. hydrophila merupakan bakteri patogen oportunistik penyebab penyakit Motil

Aeromonas Septicemia pada ikan air tawar.

Tujuan dari penelitian ini yaitu untuk mengetahui pengaruh ekstrak

etanolik daun Ambre terhadap pembentukan enzim eksoprotease A. hydrophila

yang disintesis melalui sistem quorum sensing dan mengetahui konsentrasi

ekstrak etanol daun Ambre yang paling optimal dalam menghambat produksi

enzim eksoprotease A. hydrophila.

Penelitian ini menggunakan metode ekstraksi daun Ambre dengan pelarut

etanol dan dibuat konsentrasi yaitu 2,5, 5, 10, 15, dan 20%. Kemudian dilanjutkan

dengan pengukuran zona bening dari aktivitas proteolitik enzim eksoprotease

terhadap susu skim, pertumbuhan A. hydrophila dengan metode optical density

(spektofotometer), aktivitas enzim eksoprotease, dan pengukuran kadar protein.

Hasil penelitian ini menunjukkan ekstrak etanol daun Ambre berpengaruh

terhadap penghambatan pembentukan enzim eksoprotease A. hydrophila.

Pengaruh penghambatan oleh ekstrak etanol daun Ambre signifikan dibandingkan

dengan kontrol dan CMC. Penghambatan dilakukan berbasis sistem quorum

sensing, bukan pada penurunan jumlah bakteri saat pertumbuhannya. Ekstrak

daun Ambre yang paling optimal dalam menghambat produksi enzim

eksoprotease A. hydrophila yaitu pada konsentrasi 20%.

Kata kunci: Aeromonas hydrophila, Geranium radula Cavan., quorum sensing,

penghambatan, eksoprotease


commit to user

vi

THE INHIBITION OF Aeromonas hydrophila EXOPROTEASE-ENZYME-

FORMATION BASED ON QUORUM SENSING SYSTEM BY AMBRE

(Geranium radula Cavan.) LEAVES ETHANOL EXTRACT

UNOVIANA KARTIKA SETIA

Department of Biology. Faculty of Mathematics and Natural Sciences,

Sebelas Maret University, Surakarta

ABSTRACT

Exoprotease enzyme is one of the virulence factors from A. hydrophila.

Exoprotease enzyme was formed by the result of communication inter bacteria

which is called quorum sensing system. The system allows bacteria to

communicate by secreting signal molecule which is called autoinducer. A.

hydrophila is opportunistic pathogen bacteria which causing Motil Aeromonas

Septicemia disease on freshwater fishes.

The aims of this research were to investigate the effect of Ambre leaves

ethanol extract to exoprotease enzyme formation from A. hydrophila which was

synthesized based on the quorum sensing system and to determine the

concentration of Ambre leaves ethanol extract which was the most optimal to

inhibit exoprotease enzyme formation from A. hydrophila.

This research used Ambre leaves extraction method with ethanol and the

extract concentrations were 2.5, 5, 10, 15, and 20%, then followed by measuring

the clear zone from proteolytic activity of exoprotease enzyme to the skim milk,

investigating the growth of A. hydrophila by the optical density

(spectrophotometer) method, measuring exoprotease enzyme activity, and

determining the total protein content.

The results showed that ethanol extract of Ambre leaves gave an impact to

the inhibition of A. hydrophila exoprotease enzyme formation. The impact was

significant compared to the control and CMC. The inhibition was performed

based on the quorum sensing systems, instead of the increasing in the number of

bacteria growth. The most optimal Ambre leaves extract in inhibiting the

production of

A. hydrophila exoprotease enzymes was at the concentration 20%.

Keywords: Aeromonas hydrophila, Geranium radula Cavan., quorum sensing,

inhibition, exoprotease


commit to user

vii

MOTTO

“Keep challenging yourself, never be satisfied, and make sure you always perform

beyond expectation”

“Always give extra miles”

“Man jadda wajada. Man shabara zhafira.”

“Keep both feed on the ground”

“You’ll never walk alone”


commit to user

viii

PERSEMBAHAN

The Almighty Allah SWT

Mom, Hifi Heriana. Dad, Sukarnadi.

Sisters, Donna Ayu Savanti and Astria Sharinta Dewanti.

All big family of Benny Hasjim

Beloved Almamater, Sebelas Maret University


commit to user

ix

KATA PENGANTAR

Puji dan syukur kepada Tuhan Yang Maha Kuasa sehingga Penulis dapat

menyelesaikan penyusunan skripsi dengan judul “Penghambatan Pembentukan

Enzim Eksoprotease Bakteri Aeromonas hydrophila Berbasis Sistem Quorum

Sensing dengan Ekstrak Etanolik Daun Ambre (Geranium radula Cavan.)”

A. hydrophila merupakan bakteri patogen oportunistik yang dapat

menyebabkan penyakit pada ikan. Pengobatan beralih pada pemanfatan bahan-

bahan alam yang tidak mengakibatkan resistensi bakteri dan meminimalkan

dampak pencemaran lingkungan. Salah satunya yaitu daun Ambre yang memiliki

kandungan saponin, flavonoid, tanin dan minyak atsiri yang dapat berpengaruh

terhadap penghambatan produksi faktor virulensi A. hydrophila yaitu enzim

eksoprotease. Diharapkan penelitian ini dapat memberikan informasi mengenai

pengaruh ektrak daun Ambre terhadap produksi enzim eksoprotease A. hydrophila

sehingga dapat mengendalikan patogensi bakteri terhadap ikan air tawar.

Penulis menyadari bahwa dalam menyelesaikan skripsi ini tidak lepas dari

dukungan dari berbagai pihak, untuk itu Penulis mengucapkan banyak terima

kasih kepada yang terhormat:

1. Dr. Agung Budiharjo, M.Si., selaku Ketua Jurusan Biologi yang selalu

memberikan semangat dan dorongan selama proses penyelesaian skripsi.

2. Estu Retnaningtyas, S.Tp., M.Si, selaku pembimbing I sekaligus

Pembimbing Akademis yang telah memberikan bimbingan dan

pengarahan dalam penyusunan skripsi ini.


commit to user

x

3. Dr. Ari Susilowati, M.Si., yang selalu ada dalam memberikan banyak

bimbingan, saran, masukan, serta membantu dalam proses penyelesaian

skripsi ini.

4. Dr. Artini Pangastuti, M.Si. dan Dra. Endang Anggarwulan, M.Si yang

telah memberikan banyak masukan dan pengarahan yang sangat berarti

demi kesempurnaan penyusunan skripsi ini.

5. Ari Pitoyo S.Si, M.Sc., atas kesediaan memberikan akses penggunaan

bahan-bahan guna penelitian, serta saran dan masukan yang sangat

membantu dalam penyelesaian skripsi ini.

6. Keluarga besar Penulis yang sangat peduli terhadap setiap proses dalam

pembuatan skripsi. Eyang Sri Amini, Drs. Catur Yulisman, Drs. Budi

Putranda, Dra, Estu Diantina, Dra. Estrelita Aprilianti, Drs. Yudi Fitriandi,

M.A., keluarga besar Mintardjo.

7. Kurnia Ritma Dhanti, Endang Werdiningsih, Rumiyati, Zulfiyah, Erna

Susilowati, Yeni Indra Kumalasari, S.Si, Wahyu Susilowati, Puji Sayekti,

S.Si, serta semua teman-teman di Biologi Angkatan 2008 ”Angkatan

Terdepan”, BIGREDS, Green Movement Community, LPM SCIENTA,

KS Biotek, BEC Study Club, dan HIMABIO FMIPA UNS, terima kasih

atas segala doa dan bantuannya selama ini.

8. Para dosen di Jurusan Biologi FMIPA UNS atas segala ilmu yang dengan

sukacita dan tulus ikhlas dibagikan kepada Penulis. Terima kasih karena

telah memberikan ilmu dan pelajaran yang tidak dapat ternilai harganya.


commit to user

xi

9. Semua staf Laboratorium Biologi FMIPA UNS dan Laboratorium Pusat

UNS yang telah memberikan bantuan dan kemudahan dalam

melaksanakan penelitian, serta semua pihak yang tidak dapat Penulis

sebutkan satu-persatu.

Penulis menyadari bahwa hasil penelitian ini belumlah sempurna, namun

Penulis berharap semoga penelitian ini dapat bermanfaat.

Surakarta, Juli 2012

Penulis

Unoviana Kartika Setia

M0408090


commit to user

xii

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL ........................................................................................ i

HALAMAN PERSETUJUAN ........................................................................ ii

HALAMAN PENGESAHAN .......................................................................... iii

HALAMAN PERNYATAAN ........................................................................ iv

ABSTRAK .. .................................................................................................... v

ABSTRACT .................................................................................................... vi

HALAMAN MOTTO ...................................................................................... vii

HALAMAN PERSEMBAHAN ...................................................................... viii

KATA PENGANTAR ..................................................................................... ix

DAFTAR ISI .................................................................................................... xii

DAFTAR TABEL ............................................................................................ xiv

DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... xv

DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................... xvi

BAB I PENDAHULUAN ............................................................................... 1

A. Latar Belakang Masalah .................................................................. 1

B. Perumusan Masalah ......................................................................... 4

C. Tujuan Penelitian ............................................................................ 4

D. Manfaat Penelitian ........................................................................... 5

BAB II LANDASAN TEORI ......................................................................... 6

A. Tinjauan Pustaka ............................................................................. 6

1. Bakteri Aeromonas hydrophila ................................................... 6

2. Enzim Eksoprotease .................................................................... 9

3. Pengukuran Pertumbuhan Bakteri dan Enzim Eksoprotease ...... 11

4. Sistem Quorum Sensing .............................................................. 12

5. Mekanisme Penghambatan Quorum Sensing ............................. 15

6. Daun Ambre (Geranium radula Cavan.) .................................... 18

B. Kerangka Pemikiran ........................................................................ 20

C. Hipotesis .......................................................................................... 22

BAB III METODE PENELITIAN................................................................... 23


commit to user

xiii

A. Waktu dan Tempat Penelitian ......................................................... 23

B. Alat dan Bahan ................................................................................ 23

1. Alat .............................................................................................. 23

2. Bahan .......................................................................................... 24

C. Cara Kerja ........................................................................................ 24

1. Ekstraksi Daun Ambre ................................................................ 24

2. Pembuatan Larutan Stok ............................................................. 25

3. Pemeliharaan Kultur ................................................................... 25

4. Penyiapan Inokulum A. hydrophila ........................................... 25

5. Pengujian Kualitatif Produksi Enzim Eksoprotease ................... 25

6. Pengukuran Pertumbuhan A. hydrophila .................................... 26

7. Pengujian Produksi Enzim Eksoprotease secara Kuantitatif ...... 27

8. Pengukuran Total Protein ........................................................... 28

D. Analisis Data ................................................................................... 30

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................ 31

A. ................................................................................................. Peng

hambatan Pembentukan Enzim Eksoprotease ................................ 31

B. ................................................................................................. Peng

ukuran Pertumbuhan A.hydrophila ................................................. 34

C. Penghambatan Aktivitas Enzim Eksoprotease A. hydrophila oleh

daun Ambre dan Total Protein......................................................... 39

BAB V PENUTUP ........................................................................................... 43

A. Kesimpulan ..................................................................................... 43

B. Saran ................................................................................................ 43

DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................... 44

LAMPIRAN .................................................................................................... 50

HALAMAN RIWAYAT HIDUP PENULIS ................................................... 62


commit to user

xiv

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 1. Diameter zona bening pada pemberian ekstrak etanol daun Ambre ....... 34

Tabel 2. Analisis statistik pertumbuhan A. hydrophila dengan pemberian

ekstrak etanol daun Ambre pada jam ke-18 .......................................... 39

Tabel 3. Analisis statistik unit aktivitas enzim eksoprotease A. hydrophila

dengan pemberian ekstrak etanol daun Ambre pada jam ke-18 ........... 41


commit to user

xv

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 1. Bakteri Aeromonas hydrophila ........................................................... 7

Gambar 2. Pengaturan mekanisme quorum sensing pada bakteri gram negatif ... 15

Gambar 3. Mekanisme penghambatan quorum sensing bakteri gram negatif ...... 16

Gambar 4. Daun Geranium radula Cavan. ........................................................... 19

Gambar 5. Alur Kerangka Pemikiran.................................................................... 22

Gambar 6. Skema Cara Kerja................................................................................ 29

Gambar 7. Zona bening terbentuk akibat adanya aktivitas proteolitik enzim

eksoprotease terhadap susu skim........................................................ 32

Gambar 8. Kurva Pertumbuhan A. hydrophila untuk kontrol, diberi CMC, dan

ekstrak daun Ambre dengan konsentrasi 20%. .................................. 37


commit to user

xvi

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

Lampiran 1. Komposisi medium dan larutan ...................................................... 50

Lampiran 2. Diameter Zona Bening pada Media LA dan Susu Skim ............... 51

Lampiran 3. Absorbansi pertumbuhan bakteri .................................................... 52

Lampiran 4. Absorbansi aktivitas enzim eksoprotease ....................................... 55

Lampiran 5. Absorbansi total protein.................................................................. 56

Lampiran 6. Hasil Regresi Total Protein A.hydrophila ...................................... 57

Lampiran 7. Hasil SPSS pertumbuhan A. hydrophila ......................................... 58

Lampiran 8. Hasil SPSS aktivitas enzim eksoprotease A. hydrophila

pada jam ke-18 ............................................................................... 60


commit to user

1

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang Masalah

Produksi ikan air tawar yang memiliki peran penting dalam penyediaan

protein hewani bagi masyarakat di Indonesia mengalami penurunan diakibatkan

oleh infeksi bakteri. Menurut Maulana et al. (2006), secara ekonomi masalah ini

sangat penting karena merugikan usaha sektor perikanan yang dapat menurunkan

produksi dan kualitas ikan. Salah satu penyebab infeksi pada ikan adalah bakteri

Aeromonas hydrophila. Bakteri A. hydrophila merupakan bakteri gram negatif

dan bersifat oportunistik pada ikan yang dapat menyebabkan penyakit Motil

Aeromonas Septicemia (MAS) (Tan et al., 1994).

Penggunaan suatu senyawa yang dapat membunuh atau menghambat

pertumbuhan bakteri menjadi dasar dari upaya penanggulangan penyakit yang

dikarenakan oleh infeksi bakteri secara konvensional. Penggunaan antibiotik telah

banyak diteliti dapat menimbulkan resistensi bakteri. Kaskhedikar dan Chhabra

(2010) melaporkan A. hydrophila sudah resisten terhadap antibiotik ampicillin dan

colistin, dan berkurang sentivitasnya terhadap oxytetracycline sebanyak 50%,

ciprofloxacin, cefuroxime, ceftriaxone, cephotaxime, chloramphenicol,

gentamycin, kanamycin, dan nitrofurantoin sebanyak 37.8%. Semakin banyak

antibiotik yang kehilangan sensitivitasnya terhadap A. hydrophila, maka akan

semakin sulit menanggulangi penyakit MAS.


commit to user

2

Penelitian kemudian berkembang terhadap uji yang dapat menghambat

patogenitas bakteri, namun tidak sampai mematikan bakteri, yaitu penghambatan

quorum sensing (Fitri, 2010). Menurut Wahyudi (2010) quorum sensing

merupakan suatu proses yang memungkinkan bakteri dapat berkomunikasi dengan

mensekresikan molekul sinyal yang disebut autoinducer. Pada penelitiannya,

terjadi penghambatan sistem quorum sensing bakteri Pseudomonas aeruginosa

oleh ekstrak Alpinia galanga.

Pencegahan infeksi dapat dilakukan dengan mencegah pengumpulan

massa bakteri atau merusak sistem komunikasi interseluler bakteri. Penghambatan

komunikasi antar sel tersebut akan menurunkan patogenisitas suatu bakteri yaitu

dengan mencegah terjadinya aktivasi gen penyandi faktor virulensi. Aktivasi gen

terjadi ketika protein regulator dalam sel bakteri membentuk kompleks dengan

autoinducer. Pengetahuan mengenai sistem quorum sensing dapat dikembangkan

sebagai suatu cara pengendalian bakteri yang tidak terbatas pada pemberantasan

bakteri atau antibiotik (Kievit dan Igleweski, 2000).

Enzim eksoprotease merupakan faktor virulensi yang disekresikan oleh

bakteri A. hydrophila. Enzim ini berperan dalam memecah ikatan peptida protein

kasein sehingga menghasilkan komponen asam amino dalam bentuk bebas (Swift

et al, 1999; Seccades et al., 1999). Produksi enzim eksoprotease A. hydrophila

dikontrol oleh suatu molekul senyawa N-butanol-L-homoserine lactone (C4-HSL)

yang berfungsi sebagai molekul sinyal dalam sistem quorum sensing (Swift et al.,

1999). Semakin banyak populasi bakteri, semakin tinggi konsentrasi C4-HSL di


commit to user

3

lingkungan sehingga berdifusi kembali ke dalam sel dan mampu mengaktifkan

gen penyandi enzim eksoprotease.

Penelitian tentang kandungan tanaman yang memiliki aktivitas

penghambatan quorum sensing telah banyak dilakukan. Bawang putih (Allium

sativum) mempunyai senyawa aktif yang mampu menghambat quorum sensing

yaitu N-Hexanoyl-L-Homoserine-Lactone (HHL) (Persson et al., 2005). Senyawa

kurkumin yang diisolasi dari kunyit (Curcuma domestica) dapat menghambat

sistem quorum sensing pada Chromobacterium violaceum (Rukayadi dan Hwang,

2009). Sayekti (2011) menyatakan daun talok (Muntinga calabura L.) memiliki

senyawa tanin, flavonoid, dan polifenol yang memiliki aktivitas penghambatan

quorum sensing pada A. hydrophila. Penelitian-penelitian tersebut dapat dijadikan

dasar dari pengujian penghambatan quorum sensing pada bakteri.

Daun Ambre (Geranium radula Cavan.) diduga memiliki senyawa yang

analog dengan molekul C4-HSL sehingga dapat menghambat quorum sensing

pada A. hydrophila. Senyawa yang diduga dapat menjadi analog berasal dari

golongan senyawa fenol. Target pengambilan senyawa kimia dari daun Ambre

yaitu senyawa bersifat polar, sehingga proses ekstraksi menggunakan pelarut

polar yaitu etanol.

Penelitian Ariyani (2011) menggunakan daun Ambre pada bakteri

C. violaceum yang ditunjukkan dengan adanya zona jernih sekitar sumuran yang

diisikan ekstrak etanolnya. Hal ini menunjukan adanya aktivitas penghambatan

quorum sensing dari bakteri C. violaceum yang memiliki molekul sinyal HHL.

Sinyal HHL merupakan jenis sinyal pemicu quorum sensing yang ditunjukkan


commit to user

4

oleh pigmen violacein ungu. Terbentuknya zona jernih menunjukkan pigmen

violacein ungu tidak terproduksi saat jumlah bakteri mencapai quorum, sehingga

ekstrak daun Ambre disimpulkan dapat menghambat quorum sensing bakteri,

namun penelitian mengenai penghambatan pembentukan enzim eksoprotease yang

merupakan faktor virulensi ekstraseluler dari A. hydrophila akibat pemberian daun

Ambre belum pernah dilaporkan.

B. Rumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang di atas maka dapat dirumuskan permasalahan

dari penelitian ini yaitu:

1. Apakah ekstrak etanol daun Ambre berpengaruh terhadap penghambatan

pembentukan enzim eksoprotease A. hydrohila berbasis sistem quorum

sensing?

2. Berapa konsentrasi ekstrak etanol daun Ambre yang paling optimal dalam

menghambat produksi enzim eksoprotease A. hydrophila?

C. Tujuan Penelitian

Mengacu pada rumusan masalah di atas maka tujuan dari penelitian ini

yaitu:

1. Mengetahui pengaruh ekstrak etanol daun Ambre terhadap penghambatan

pembentukan enzim eksoprotease A. hydrohila berbasis sistem quorum sensing

2. Mengetahui konsentrasi ekstrak etanol daun Ambre yang paling optimal dalam

menghambat produksi enzim eksoprotease A. hydrophila.


commit to user

5

D. Manfaat Penelitian

Penelitian ini dapat digunakan sebagai dasar pengembangan metode

pendekatan aktivitas penghambatan quorum sensing bakteri A. hydrophila dengan

menggunakan ekstrak etanol daun Ambre. Ekstrak digunakan dalam menghambat

pembentukan enzim eksoprotease berbasis quorum sensing. Sistem quorum

sensing merupakan sistem komunikasi bakteri yang digunakan A. hydrophila

untuk membentuk faktor virulensi. Pengacauan sistem komunikasi bakteri tidak

menimbulkan resistensi bakteri namun dapat mengendalikan patogensi bakteri

terhadap ikan air tawar.


commit to user

6

BAB V

PENUTUP

A. KESIMPULAN

1. Ekstrak etanol daun Ambre berpengaruh terhadap penghambatan produksi

enzim eksoprotease A. hydrophila. Pengaruh penghambatan oleh ekstrak etanol

daun Ambre signifikan dibandingkan dengan kontrol dan CMC. Penghambatan

dilakukan berbasis sistem quorum sensing, bukan pada penurunan jumlah

bakteri saat pertumbuhannya.

2. Ekstrak daun Ambre yang paling optimal dalam menghambat pembentukan

enzim eksoprotease A. hydrophila yaitu pada konsentrasi 20%.

B. SARAN

Perlu adanya penelitian lebih lanjut untuk potensi ekstrak etanol daun

Ambre untuk menghambat faktor virulensi A. hydrophila lainnya seperti produksi

elatase dan pembentukan biofilm. Penurunan produksi faktor virulensi berupa

enzim eksoprotease dengan ekstrak daun Ambre menggunaan metode SDS-PAGE

juga perlu lakukan untuk mendeteksi keberadaan enzim tersebut. Selain itu perlu

adanya penelitian dengan menggunakan isolasi senyawa bahan alam yang

terkandung di dalam daun Ambre yang berperan dalam menghambat faktor

virulensi, serta aplikasi secara in vivo pada ikan air tawar yang terinfeksi A.

hydrophila.


commit to user

7

DAFTAR PUSTAKA

Adinarayana, K., J. Bezaweda, and E. Poluri. 2005. Production of Alkaline

Protease with Immobilized Cells of Bacillus subtilis PE-11 in Various

Matrices by Entrapment Technique. AAPS PharmSciTech. 06 (03): 391-

397

Ariyani, D.F. 2011. Skrining Aktivitas Anti-Quorum Sensing Fraksi Etanolik

Enam Tanaman Obat dengan Bakteri Chromobacterium violaceum.

Skripsi. Jurusan Biologi FMIPA Universitas Sebelas Maret Surakarta.

Austin, B. and D.A. Austin. 1993. Bacterial Fish Pathogen, Disease in Farmed

and Wild Fish. Ellis Horwood Ltd. England.

Backer, C. A. and V.d.B. Jr. Bakhuizen. 1968. Flora of Java Volume 3.

Groningen: Noordhoff Press.

Bradford, M.M. 1976. A Rapid and Sensitive Method for Quantitation of Protein

Utilization The Principle of Protein-Dye Binding Anal. Biochem. 72: 248-

254.

Brenden, R.A. and H.W. Huizinga. 1986. Susceptibility of Normal and X-ray

Irradiated Animal to Aeromonas hydrophila Infections. Current Microbiol.

13: 129-132.

Chan, K.G., Savithri, D. Puthucheary, X.Y. Chan, W.F. Yin, C.S. Wong, W.S.S.

Too, K.H. Chua. 2011. Quorum Sensing in Aeromonas Species Isolated

from Patients in Malaysia. Curr Microbiol. 62:167–172

Chen, R., Z. Zhou, Y. Cao, Y. Bai, and B. Yao. 2010. High yield expression of an

AHL-lactonase from Bacillus sp. B546 in Pichia pastoris and its

application to reduce Aeromonas hydrophila mortality in aquaculture.

Microbial Cell Factories. 9 (39): 1-10.

Cipriano, R.L. 2001. Aeromonas hydrophila and Motile Aereomonad Septicemias

of Fish. Fish and Disease Leaflet 68.

Decho, A.W., R.L. Frey, and J.L. Ferry. 2011. Chemical Challenges to Bacterial

AHL Signaling in the Environment. Chem. Rev. 111: 86-99

Departemen Kesehatan RI. 2009. Ambre. http://tanamanobat.org//artikel//tentang

tanaman obat/depkes/ buu/ 1-134.pdf. Tanggal Akses 14 November 2011

Dewi dan M. Leni. 2006. Efektivitas Daya Tolak Ekstrak Geranium radula

Cavan. Terhadap Nyamuk Aedes aegypti (Linn.). Koleksi Skripsi, Tesis

dan Disertasi Perpustakaan UPI. http://digilib.upi.edu/pasca/available/etd-

0626106-084844. Tanggal Akses 2 November 2011

http://tanamanobat.org/artikel/tentang

http://digilib.upi.edu/pasca/available/etd-0626106-084844

http://digilib.upi.edu/pasca/available/etd-0626106-084844


commit to user

8

Dong, Y.H., L.H. Wang, J.L. Xu, H.B. Zhang, X.F. Zhang, and L.H. Zhang. 2002.

Quenching quorum-sensing-dependent bacterial infection by an N-acyl

homoserine lactone. Journal Nature. 411:813-817

Dwijasaputro, D. 1998. Dasar-dasar Mikrobiologi. Jakarta: Penerbit Djambatan.

Eberl, L. 1999. N-Acyl Homoserine Lactone Mediated Genes Regulation in Gram

Negative Bacteria. Systematic and Applied Microbiology. 22 (4): 493-506.

Ellanvihara, M. 2005. Pertumbuhan dan Aktivitas Eksoprotease Bacillus

licheniformis dan Bacillus megaterium di Medium Ekstrak Limbah Padat

udang. Skripsi. Jurusan Biologi FMIPA Universitas Sebelas Maret

Surakarta.

Fitri, S.T. 2010. Skrining Ekstrak Etil Asetat dan Etanol Sepuluh Tanaman Obat

sebagai Penghambat Quoeum Sensing Chromobacterium violaceum.


Floyd, R.F. 2002. Aeromonas Infection. University of Florida.

http://edis.ifas.ufl.edu/FA042. Tanggal akses 14 November 2011

Fuqua, W.C., S.C. Winans, and E.P Greenberg. 1994. Quorum Sensing in

Bacteria The LuxR-Luxl Family of Cell Density Responsive

Transcripsional Regulators. Journal of Bacterial 76 (22): 69-75

Gera, C. and S. Srivastava. 2006. Quorum-sensing: The Phenomenon of

Microbial Communication. Current Science, 9 (5).

Hayes, J. 2005. Aeromonas hydrophila. Oregon State University.

http://hmsc.oregonstate.edu/classes/MB492/hydrophilahayes. tanggal

akses 9 November 2011

Hentzer, M. and M. Givskov. 2003. Pharmalogical Inhibition of Quorum Sensing

for The Treatment of Chronic Bacterial Infection. J. Clin. Invest. 112 :

1300-1307

Irawan, G.D.E., K. Winarno, dan A. Susilowati. 2003. Pengaruh Ekstrak Daun

Mimba (Azadirachta indica A. Juss) terhadap Penurunan Mortalitas Lele

Dumbo (Clarias gariepinus) akibat Infeksi Aeromonas hydrophila. J.

Enviro 3 (1): 28-35.

Isohood, B. and D. Drake. 2002. Aeromonas hydrophila: Bacterial Fish

Pathogen. Fish and Disease Leaflet 79.

Jafra, S., J. Przysowa, R. Czajkowski, A. Michta, P. Garbeva, and V.J.M. Wolf.

2006. Detection and Characterization of Bacteria from The Potato

Rhizosphere Degrading N-acyl-homoserine lactone. Microbioly. 52: 1006–

1015.

http://edis.ifas.ufl.edu/FA042

http://hmsc.oregonstate.edu/classes/MB492/hydrophilahayes


commit to user

9

Kadner, R.J. 2006. Bacteria. Encyclopedia Britannica. http://www.britannica.com/EBchecked/topic/48203/bacteria/58987/Classifica

tion-of-bacteria. Tanggal akses 25 Desember 2011

Kanai, K. and Y. Takagi. 1986. Alpha-haemolytic Toxin of Aeromonas

hydrophila Produced in vivo. J. Fish Pathol. 21 (4): 245-250

Kannan, K.S., V. Jayavignesh, and D.A. Bhat. 2011. Biochemical characterization

and cytotoxicity of the Aeromonas hydrophila isolated from Catfish.

Archives of Applied Science Research. 3 (3):85-93

Kaskhedikar, M. and D. Chhabra. 2010. Multiple drug resistance in Aeromonas

hydrophila isolates of fish. Veterinary World. 3(2): 76-77

Keivit, T.R and B.H Igleweski. 2000. Bacterial Quorum Sensing in Phatogenic

Relationship. Infection and Imunology. 68 (9): 4839-4849

Lestari, U. 2006. Penghambatan Produksi Enzim Eksoprotease Aeromonas

hydrophila oleh Ekstrak Temu Lawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb.).


Mangunwardoyo, W., R.A. Sophia dan E.S. Heruwati. 2007. Seleksi dan

Pengujian Aktivitas Enzim L-Histidine Decarboxylase dari Bakteri

Pembentuk Histamin. J. Makara Sains. 11 (2):104-109.

Maulana, K. Ine, dan H. Junianto. 2006. Pengaruh Memiran dalam Pakan untuk

Mencegah Infeksi Bakteri Aeromonas sp. pada Benih Ikan Mas (C.

carpio). Penelitian. UNPAD. Bandung.

Milton, D.L., A. Hardman, M. Camara, S.R. Chabra, B.W. Bycroft, G.S.A.B

Stewart, and P. Williams. 1997. Quorum Sensing in Vibrio anguillarum:

Characterization of The VanI/VanR Locus and Indentification of The

Autoinducer N-(3-oxodecanoyl)-L-homoserine lactone. Journal Bacteriol

179: 3004-3012.

Muliawan, S.Y. 2009. Bakteri Spiral Patogen. Jakarta: Erlangga.

Narayan, S.S. 2012. Antibacterial Potential of Crude Methanolic Extract of

Leonotis nepetifolia (L) R. Br. Pharmacy. 2 (2): 277-278

Novitasari, Y. 2010. Penghambatan Aktivitas Enzim Eksoprotease Aeromonas

hydrohila dengan Pemberian Ekstrak Segar dan Kering Rimpang

Lengkuas (Alpinia galanga). Skripsi. Jurusan Biologi FMIPA Universitas

Sebelas Maret Surakarta.

Ozbilge, H., E.G. Kaya, O.M. Taskin, and M. Kosar. 2010. Antimicrobial Activity

of Pelargonium endlicherianum Fenzl. (Geraniaceae) Roots against Some

Microorganisms. Medicinal Plants Research. 4 (24): 2647-2650

http://www.britannica.com/EBchecked/topic/48203/bacteria/58987/Classification-of-bacteria

http://www.britannica.com/EBchecked/topic/48203/bacteria/58987/Classification-of-bacteria


commit to user

10

Parsek, M.R., D.L. Val, B.L. Hanzelka, J.E.J. Cronan, and E.P. Greenberg. 1999.

Acyl Homoserine-Lactone Quorum-Sensing Signal Generation. Proc. Natl

Acad Sci. USA, 96, 4360-4365.

Persson, T., T.H. Hansen, T.B. Rasmussen, S.E. Skindorsoe, M. Givskov, and J.

Nielsen. 2005. Rational Design and Synthesis of New Quorum Sensing

Inhibitors Derived from Acylated Homoserine Lactone and Natural

Product from Garlic. Royal Society. 3 (2): 253-262

Purwoko, T. 2007. Fisiologi Mikroba. Jakarta: Bumi Aksara.

Rahayu, K. 1990. Enzim Mikrobia. PAU Pangan dan Gizi UGM. Yogyakarta.

Rao, M.B., A.M. Tanksale, M.S. Ghatge, and V.V. Deshpande. 1998. Molecular

and Biotechnological Aspects of Microbial Protease. Microbiology and

Molecular Biology Reviews.

Rasch, M., C. Buch, B. Austin, W.J. Slierendrecht, K.S. Ekman, J.L Larsen, C.

Johansen, K. Riedel, L. Eberl, M. Givskiv, and L. Gram. 2004. An

Inhibitor of Bacterial Quorum Sensing Reduced Mortality Caused by

Vibriosis in Rainbow Trout (Oncorthynchus mykiss wal-baum). Journal

Sistematic and Applied Microbiology. 27 (3): 350-359

Remington, J.S., and M.N. Swartz. 1992. Current Clinical Topics in Infectious

Diseases. Cambridge: Blackwell Scientific. 12: 26–36.

Riedel, K., M. Hentzer, O. Geisenberger, B. Huber, A. Steidle, H. Wu, N. Hoiby,

M. Givskov, S. Molin, and L. Eberl. 2001. N-Acylhomoserinelactone-

mediated communication between Psuedomonas aeruginosa and

Burkholderia cepacia in Mix Biofilms. Journal Microbiology 147: 3249-

3262

Rodriguez, L.A., A.E. Ellis and T.P. Nieto. 1992. Purification and

Characterization of an Extracellular Metalloprotease, Serine Protease, and

Hemolisin of Aeromonas hydrophila I strain B32: All are Lethal for Fish.

Microbpathogen (13): 17-24

Rothman, S. 2009. Flower Morphology Of Pelargonium Odoratissimum And

Pelargonium Ionidiflorum Using Scanning Electron Microscopy. Smith

College, Northampton MA.

Rukayadi, Y. dan J.K Hwang. 2009. Pencegahan Quorum Sensing Suatu

Pendekatan Baru untuk Mengatasi Infeksi Bakteri. Scientific Journal of

Pharmaceutical Development and Medical Aplication. 22 (1): 24-48

Saksinchai S., M. Suphantharika, and C. Verduyn. 2001. Application of a simple

yeast extract from spent brewer's yeast for growth and sporulation of


commit to user

11

Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki: a Physiological Study.

Microbiology and Biotechnology. 17 (3): 307-216

Santos, Y., A.E. Toranzo, C.P. Dopazo, T.P. Nieto, and J.L Barja. 1987.

Relationship among Virulance for Fish Enterogenicity and Phenotyphic

Characteristics of Motile Aeromonas. Journal of Aquaculture. 67:29-39

Sayekti, P. 2011. Penghambatan Ekspresi Faktor Virulensi Bakteri Aeromonas

hydrophila Berbasis Sistem Quorum Sensing dengan Ekstrak Etanol Daun

Talok (Muntingia calabura L.). Skripsi. Jurusan Biologi FMIPA

Universitas Sebelas Maret Surakarta.

Schaudes, S. and B.L. Bassley. 2001. The Language of Bacteria. Microbiology 15

(12): 1468-1480.

Seccades, D. and J.A Guijarno. 1999. Purification and Characterization of an

Extracelluler Proteases from Fish Pathogen Yesinia ruckeri and Effect of

Cultures Condition and Production. Applied and Environmental Microbiol.

65 (9): 3969-3975

Strom, M. S. and C. M. Pepe. 1999. Characterization of the tap Type IV Pilus

Gene Cluster in Aeromonas hydrophila and A. salmonicida. 6th

International Aeromonas-Plesiomonas Symposium. 5 (30): 13-25

Swann, L. and M.R.D.V.M. White. 1989. A Guide to Approved Chemicals in Fish

Production and Fishery Resource Management. University of Arkansas

Cooperative Extension Service.

Swift, S., M.J. Lynch, L. Fish, D.F. Leink, J.M. Thomas, C.J.A.B. Stewart, and P.

Williams. 1999. Quorum Sensing-Dependen Regulation and Blockade of

Eksoprotease Production in Aeromonas hydrophila. Infection and

Immunity. 4: 18-28

Taga, M.E. and B.L. Bassler. 2003. Chemical communication among Bacteria.

Proceeding of The National Academy of Science USA 7 (2): 14549-14554

Tan, E., K.W. Low, W.S.F. Wong, and K.Y. Leung. 1998. Internalization of

Aeromonas hydrophila by Fish Epithelial Cells Can be Inhibited with A

Tyrosine Kinase Inhibitor. Microbiology. 144: 299-307.

Thune, R.L., M.C. Johnson, T.E. Graham and R.L. Amborski. 1986. Aeromonas

hydrophila b hemolysin: purification and examination of its role in

virulence in O-Group Channel Catfish Ictalurus punctatus (Rafinesque).

Journal Fish Dis 9: 55-61.

Tinaz, G.B. 2003. Quorum Sensing in Gram-Negative Bacteria. Turj. Journal Biol

27: 85-93


commit to user

12

Vally, H., A. Whittle, S. Cameron, K. Gary, and T. Watson. 2004. Outbreak of

Aeromonas hydrophila Wound Infections Associated with Mud Football.

Clinical Infectious Diseases. 38: 1084–1089

Wahyudi, D. 2010. Penghambatan Quorum Sensing pada Pseudomonas

aeruginosa oleh ekstrak Alpinia galanga L. Tesis. Pascasarjana UNS.

Wahyuni, D.S.C. dan R. Rakhmawati. 2008. Skrining Toksisitas Beberapa

Tanaman di Kawasan Tawangmangu Surakarta dan Profil Kandungan

Kimianya. Laporan Penelitian LPPM, Universitas Sebelas Maret.

Weichart, D., Q. Nadine, D. Mathias, and H. Regine. 2003. Global Role for ClpP-

Containing Proteases in Stationary-Phase Adaptation of Escherichia coli.

Bacteriology. 185 (1): 115-125

Yates, E.A., B. Philipp, C. Buckley, S. Atkinson, S.R. Chhabra, R.E. Sockett, M.

Goldner, Y. Dessaux, M. Camara, H. Smith, and P. Williams. 2002. N-

acyllhomoserine lactones undergo lactonoilsis in a pH, temperature, and

acyl length-dependent manner during growth of Yersinia

psudotuberculosis and Pseudomonas aeruginosa. Journal of Immun. 70:

5635-5646.

Yaxian, Y., S. Jianhe, C. Huaiqing, and L. Chengping. 1995. Isolation and

Characterization of A Non-Pathogenic Aeromonas hydrophila Strain.

Agriculture. 30: 29-41

Yogananth, N., R. Bhakyaraj, A. Chanthuru, T. Anbalagan, and N. Mullai. 2009.

Detection of Virulence Gene in Aeromonas hydrophila Isolated from Fish

Samples Using PCR Technique. Biotechnology & Biochemistry. 4 (1): 51-

53.

Yu, C.P. and K.H. Chu. 2011. Molecular quantification of virulence gene-

containing Aeromonas in water samples collected from different drinking

water treatment processes. Environ Monit Assess. 176:225–238

Zakaria, Z.A. 2007. Free Radical Scavenging Activity of Some Plants Available

in Malaysia. Pharmacology and Therapeutics. 5 (1): 87-91.

PENGHAMBATAN PEMBENTUKAN ENZIM ......Penelitian ini menggunakan metode ekstraksi daun Ambre dengan...

Documents

Transcript of PENGHAMBATAN PEMBENTUKAN ENZIM ......Penelitian ini menggunakan metode ekstraksi daun Ambre dengan...