Hayati, Maret 2005, hlm. 1-6 Vol. 12, No. 1ISSN 0854-8587

Pengelompokan Biotipe Wereng Cokelat Berdasarkan Hasil PCR-RAPD

Clustering of Brown Planthopper Biotype Based on RAPD-PCR

BAHAGIAWATI*, HABIB RIJZAANI

Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Bioteknologi dan Sumberdaya Genetik Pertanian,

Jalan Tentara Pelajar No. 3A, Bogor 16114

Diterima 16 Juni 2003/Disetujui 31 Januari 2005

Random amplified polymorphic DNA (RAPD) technique was used to differentiate two brown planthopper biotypes,that were multiplied in the greenhouse. Ten selected random decamer RAPD primers produced unique DNA bandpatterns for each individual brown planthopper. However, no single primer produced DNA band that could differentiatethe two brown planthopper biotype populations. Nonetheless, analysis of the DNA band patterns was able to cluster themajority of the individual samples according to their respective biotypes. Molecular data analysis also indicated greatergenetic variation within biotype population than among biotypes.

___________________________________________________________________________

_________________∗∗∗∗∗Penulis untuk korespondensi, Tel. +62-251-316897,

Fax. +62-251-338820, E-mail: bahagiawati@indo.net.id

PENDAHULUAN

Nilaparvata lugens atau wereng cokelat merupakan hamautama padi di Indonesia. Hama ini merusak padi secaralangsung dengan menghisap cairan dari batang hinggatanaman kering dan mati. Secara tidak langsung wereng cokelatmenjadi vektor bagi penyebaran penyakit kerdil rumput dankerdil hampa yang disebabkan oleh virus.

Para peneliti mengelompokkan wereng cokelat dalambeberapa biotipe berdasarkan virulensi pada varietas-varietaspadi pembeda atau biasa disebut dengan differential varieties(Panda & Khush 1995). Varietas pembeda adalah satu setvarietas-varietas padi yang telah diketahui gen ketahanannyaseperti berikut: Pelita I/1 atau Taichung Native-1 (tidakmempunyai gen tahan wereng cokelat), IR26 atau Mudgo(mempunyai gen tahan Bph1; brown planthopper (bph)), IR36atau IR42 (mempunyai gen tahan bph2), Rathu Heenathi(mempunyai gen tahan Bph3), dan Babawee (mempunyai gentahan bph4) (Mochida 1979). Biotipe 1 adalah populasi werengcokelat yang hanya dapat hidup pada varietas padi yang tidakmempunyai ketahanan terhadap wereng cokelat, sedangkanbiotipe 2 dapat hidup pada varietas padi yang tidakmempunyai ketahanan terhadap wereng cokelat, dan juga padavarietas padi yang mempunyai gen tahan Bph1. Biotipe 3 dapathidup pada varietas yang tidak mempunyai ketahanan terhadapwereng cokelat, dan pada varietas padi yang mempunyai gentahan bph2, dan biotipe 4 dapat hidup dan menyerang varietaspadi yang tidak mempunyai gen tahan, dan yang mempunyaigen tahan Bph1, bph2, dan Bph3. Ketiga biotipe werengcokelat tersebut telah ditemui di alam, sedangkan biotipe 4hanya ada di laboratorium (Mochida 1979). Indonesia telahmengalami beberapa kali serangan wereng cokelat yang berat.Serangan berat wereng cokelat pertama terjadi pada tahun1973/1974 menyerang varietas padi unggul pertama yaitu PB5dan PB8. Varietas padi tersebut tidak mempunyai gen tahan

wereng cokelat dan populasi wereng cokelat tersebut dikenaldengan wereng cokelat biotipe 1. Serangan berat berikutnyaterjadi pada tahun 1976/1977 yang menyerang ratusan ribuhektar padi IR26, yaitu padi asal International Rice ResearchInstitute (IRRI) yang mengandung gen tahan wereng cokelatBph1. Wereng cokelat yang menyerang IR26 ini disebutdengan wereng cokelat biotipe 2. Untuk menanggulangiwereng cokelat biotipe 2 dilepas IR36 dan IR42 pada 1977,namun pada tahun 1982 IR42 juga diserang berat oleh werengcokelat yang dikenal dengan biotipe 3 Sumatera Utara.

Sejak tahun 1983/1984 mulai diterapkan pengendalianwereng cokelat terpadu sehingga sejak itu tidak lagi ditemukanserangan wereng cokelat dalam areal yang luas. Sejak 1978telah dikembangkan teknik untuk mengindetifikasi biotipewereng cokelat di lapang berdasarkan perbedaan reaksivarietas padi pembeda terhadap suatu populasi wereng cokelatyang didapat dari lapangan. Pembagian wereng cokelat dalambiotipe dapat bermanfaat dalam menjelaskan reaksifenotipiknya terhadap varietas padi. Tetapi apakah perbedaanini mempunyai dasar genetika? Pertanyaan ini telah pulamenjadi sumber beberapa diskusi mengenai kemungkinanpembagian wereng cokelat sebagai biotipe dalam kategorisubspesies. Sampai sekarang biotipe wereng cokelat hanyadibedakan berdasarkan reaksi terhadap varietas diferensialpadi. Tidak ada perbedaan wereng dalam morfologi ataukarakter biokimia (Sogawa 1982).

Penelitian berdasarkan informasi molekuler terhadapbiotipe-biotipe wereng cokelat belum banyak dilakukan. IRRI(1986) mencoba mencari informasi molekuler denganmenganalisa kandungan protein yang dimiliki biotipe-biotipewereng cokelat. Hasil analisa beberapa isoenzim menunjukkanbeberapa perbedaan kecil frekuensi alel isoenzim tersebut antarbiotipe.

RAPD adalah teknik sidik jari DNA yang sederhana danberpotensi dalam menampilkan perbedaan molekulerorganisme dalam berbagai tingkatan taksonomi (Welsh &McClelland 1990; Williams et al. 1990). Beberapa penelitiantelah melaporkan penggunaan teknik ini untuk membedakan

Copyright © 200 Institut Pertanian Bogor. Production and hosting by Elsevier B.V. This is an open access article under the CC BY-NC-ND license (http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).

5

dua spesies atau bahkan subspesies, selain itu dapatmembedakan di tingkat strain atau pathovar yang berbeda;penggunaannyapun amat luas dari tanaman, mamalia, jamur,serangga, hingga bakteri (Hodge et al. 1995; Brown et al.1997; Castrillo & Brooks 1998; Loo et al. 1999; Martinez &Pastene 1999).

Shufran dan Whalon (1995) menyatakan bahwaberdasarkan hasil PCR-RAPD, biotipe-biotipe wereng cokelattidak terlalu berbeda. Pada tiga populasi wereng denganbiotipe yang berbeda (biotipe 1, 2, dan 3) tidak diperoleh polapita DNA atau sidik jari yang dapat membedakan ketiga biotipe.Shufran dan Whalon (1995) menyimpulkan bahwa biotipe tidakdapat dijelaskan secara molekuler melalui PCR-RAPD. Namunbila dilihat kembali hasil analisis tersebut, secara keseluruhan,setiap kelompok biotipe mempunyai pola pita DNA yang miripdan berbeda dengan kelompok lain.

Walaupun Shufran dan Whalon (1995) memakai limaprimer terpilih tidak dapat membedakan biotipe wereng cokelatdengan PCR-RAPD; penelitian kami bertujuan untukmengkonfirmasi hasil penelitian Shufran dan Whalon (1995)dengan memakai primer berbeda dan dengan jumlah primeryang lebih banyak. Lebih lanjut penelitian ini bertujuan untukmengelompokkan biotipe wereng cokelat berdasarkan analisispola pita DNA hasil PCR-RAPD. Secara tidak langsungpenelitian ini juga bertujuan untuk mencari primer RAPD yangdapat membedakan biotipe-biotipe wereng cokelat.

BAHAN DAN METODE

Wereng Cokelat. Pada penelitian ini digunakan biotipewereng cokelat yaitu biotipe 1 ialah wereng cokelat yangdiperbanyak di varietas padi TN1 (Taichung Native 1, varietaspadi yang tidak mempunyai gen ketahanan terhadap werengcokelat) dan biotipe 2 yaitu wereng cokelat yang diperbanyakdi varietas padi IR26 yang mempunyai gen tahan Bph 1. Keduabiotipe wereng cokelat ini diperbanyak di rumah kasa milikBalai Besar Penelitian dan Pengembangan Bioteknologi danSumberdaya Genetik Pertanian, Bogor.

Primer Oligonukleotida. Penelitian ini menggunakan 20decamer primer oligonukleotida (selanjutnya disebut primer)yang berasal dari Integrated DNA Technology. Keduapuluhprimer ini kemudian diseleksi tingkat polimorfismenya.Sepuluh primer yang menunjukkan tingkat polimorfisme tinggidipakai untuk analisis pengelompokan wereng cokelat. SekuenDNA dari sepuluh primer terpilih dapat dilihat pada Tabel 1.

Ekstraksi DNA. Dua puluh individu dari tiap populasidiambil secara acak dan dibekukan pada -20 oC. Setiap werengdimasukkan dalam satu tabung mikro 1.5 ml dan ditambahkan45 µl bufer homogenisasi yang mengandung: NaCl 0.5 M,sucrose 0.2 M, EDTA 0.05 M pH 8, dan Tris-Cl 0.1 M pH 8.Dengan penumbuk mini, wereng digerus dengan cepat hinggahalus. Bufer pemecah sel (EDTA 0.25 M, Tris-Cl 0.5 M pH 8,and SDS 6.25% b/v) sebanyak 5 µl kemudian ditambahkandan larutan diaduk dengan menggoyang secara perlahan.Kemudian tabung ditutup dan dipanaskan dalam pemanas airbersuhu 65 oC selama 30 menit. Setelah inkubasi selesai,7 µl 8 M kalium asetat ditambahkan dan dicampur secaraperlahan. Larutan kemudian didinginkan selama setengah jamdalam es. Sisa-sisa gerusan kemudian diendapkan dengansentrifusa pada kecepatan 10 000 g selama 15 menit. Supernatandipindahkan ke tabung 1.5 ml baru sebanyak 40 µl. Alkohol96% yang telah didinginkan pada -20 oC selama minimal satumalam kemudian ditambahkan sebanyak 80 µl. Setelahdicampur dengan membolak-balikkan tabung secara perlahan,larutan dibiarkan selama 5-10 menit dalam suhu kamar. DNAkemudian diendapkan dengan sentrifusa berkecepatan 10 000 gselama 15 menit. Supernatan dibuang dan pelet dicuci denganalkohol 70% dua kali. Setelah dikeringkan dari sisa alkoholdengan membiarkannya di udara terbuka selama beberapamenit, DNA dilarutkan dalam 50 µl bufer TE pH 8.0 (Tris HCl10 mM, EDTA 1 mM) dan disimpan pada -20 oC.

Kualitas dan konsentrasi DNA yang terekstraksi diukurdengan spektrofotometer (U-2000 Spectrophotometer,Hitachi). DNA dengan perbandingan A

260:A

280 sekitar 1.8 atau

lebih dipakai pada reaksi PCR selanjutnya. Konsentrasi DNAdihitung berdasarkan nilai serapan pada sinar UV berpanjanggelombang 260 nm dengan asumsi satu A

260 sama dengan 50 µg/

µl DNA utas ganda.Penapisan Primer Oligonukleotida. Tahap ini bertujuan

untuk menapis 20 primer yang dipakai untuk mendapatkan 10primer yang memberikan persentase polimorfisme yang tinggi.Konsentrasi DNA yang digunakan adalah 10 ng sedangkanprimer adalah 5 pikomol per 25 μl reaksi. Proses PCR danvisualisasi hasilnya sesuai dengan yang diuraikan di bawahini. DNA cetakan berasal dari 20 individu wereng cokelat untukmasing-masing biotipe.

PCR-RAPD dan Elektroforesis. Untuk tahappengelompokan biotipe wereng cokelat berdasarkankarakterasi molekuler, DNA cetakan yang digunakan ialahDNA dari 10 individu masing-masing biotipe. Reaksi RAPDdilakukan pada volume total 25 µl (PTC-100, MJ Research).Konsentrasi komponen PCR adalah: KCl 50 mM, Tris-HCl10 mM, Triton 0.1%, MgCl

2 2.5 mM, dNTP 0.24 mM, 1 U Taq

polimerase, 10 ng DNA cetakan, dan 0.2 µM primer. AmplifikasiDNA dilakukan pada: 94 oC selama 2 menit untuk denaturasi;44 putaran 94 oC selama 10 detik, 36 oC selama 10 detik, dan72 oC selama 2 menit untuk penggandaan; diakhiri denganpemanjangan akhir pada 72 oC selama 10 menit. Produk PCRdisimpan pada -20 oC sampai dianalisa dengan elekroforesis.

Sebanyak 20 µl produk PCR dicampur dengan 2 µl 10Xloading dye dan dielekroforesis pada 1.4% gel agarosa selamasekitar 75 menit dengan tegangan 90 volt (sekitar 3 volt/cm).

Tabel 1. Sepuluh primer oligonukleotida yang dipakai dalam PCR-RAPD untuk individu-individu wereng cokelat

Kode Sekuen (5’-3’) % GC Total pita RAPD % pita polimorfikIDT31IDT32IDT36IDT40IDT41IDT45IDT46IDT47IDT48IDT50

TGCGGGTCCTCACAGCTGCCCCATTCCCCAGGACAACGAGCTCTGCGCGTTGGCGCAGTGCCGCTACCGACCTTTCCCTCACGCCAGAGGGGTCTGCTTG

70706060707070607060

6766334474

100 86100100100100100100100100

2 BAHAGIAWATI DAN RIJZAANI Hayati

DNA hasil elektroforesis diwarnai dengan etidium bromida.Pita-pita DNA yang dihasilkan dipendarkan denganultraviolet dan difoto dengan film Polaroid 667.

Analisa Data untuk Pengelompokan Wereng Cokelat.Semua analisa didasarkan ada atau tidaknya pita DNA yangteramplifikasi. Intensitas pita DNA tidak terlalu diperhitungkankarena analisa RAPD bersifat kualitatif. Data dari kesepuluhprimer dijadikan satu dan digunakan sebagai masukan bagiprogram NTSysPC versi 2.10s untuk mengetahui jarak genetik(genetic distance) antar sampel. Algoritma yang dipakai untukmenentukan pengelompokan ini adalah UPGMA denganbootstrap 100 kali. Kemiripan antar sampel ditentukan dengankoefisien Dice. Sebagai alat bantu visualisasi, programFreeTree (Pavlicek et al. 1999) digunakan untuk menghasilkantree atau dendogram yang menunjukkan pengelompokan dariseluruh sampel berdasarkan profil RAPD. Variasi genetik daridua populasi dianalisis dengan program WinAmova. Untukkeperluan ini, kesetimbangan genetik Hardy-Weinbergdiasumsikan terjadi dalam populasi wereng cokelat yangdianalisa.

HASIL

Penapisan Primer. Dari keduapuluh primer yang disaringdidapat sepuluh primer yang potensial untuk menunjukkanpolimorfisme antar biotipe (Tabel 1). Tiga hingga tujuh pitaDNA dihasilkan dari setiap reaksi RAPD dengan ukuransekitar 200 pb hingga 1600 pb. Secara total didapat 50 pitaDNA yang dapat diskor untuk analisa profil RAPD (Gambar1a & 1b).

Penelitian ini juga menunjukkan bahwa polimorfisme jugadapat dilihat antar individu dalam satu populasi (biotipe) danantar populasi (Tabel 2 & 3). Tabel 2 memperlihatkan ukuranpita DNA yang polimorfik dari tiap primer yang digunakanpada DNA individu wereng cokelat biotipe 1 dan 2. Tabel 3memperlihatkan hasil analisa variasi baik di dalam satu populasimaupun antar populasi. Dari Tabel 2 terlihat bahwa ukuranpita DNA polimorfik yang dihasilkan dari setiap primerumumnya berbeda. Tabel ini juga menunjukkan bahwafrekuensi kemunculan pita polimorfik itu juga berbeda. Darikelimapuluh pita DNA yang diskor, hanya ada satu primer(IDT32) yang menunjukkan satu pita (250 pb) yang dimilikioleh semua individu dari kedua populasi. Dengan kata lain,RAPD menggunakan sepuluh primer ini menghasilkan 98%pita-pita DNA polimorfik. Tidak ada dua individu yangmempunyai profil RAPD yang sama. Hal ini menunjukkanpotensi kemampuan teknik RAPD dalam mendeteksiperbedaan genetik antar individu. Artinya setiap individumempunyai profil RAPD atau sidik jari yang berbedaberdasarkan primer tersebut. Tidak ada pita DNA yangkhusus hanya ditemui dalam salah satu populasi. Tabel 3menyatakan bahwa variasi di dalam satu populasi jauh lebihbesar dari antar populasi.

Pengelompokan Wereng Cokelat. Hasil pengelompokanwereng cokelat berdasarkan pola pita DNA dengan analisisUPGMA dapat dilihat pada Gambar 2. Meskipun belum didapatprimer RAPD yang menghasilkan pita DNA yang dapatmembedakan kedua biotipe wereng cokelat, hasil RAPD dalam

penelitian ini mengelompokkan sebagian besar dari individuanggota satu biotipe dalam satu kelompok. Dari dendogramyang dihasilkan terlihat bahwa individu-individu biotipe 2sebagian besar tergabung dalam satu kelompok. Ada duaanggota dari biotipe 2 yang tergabung dalam kelompok biotipe1. Kelompok biotipe 1 terbagi menjadi 2, dengan satu kelompokberanggota individu biotipe 1 saja dan satu kelompok dengantambahan individu biotipe 2. Kelompok yang beranggotabiotipe 1 saja terlihat mempunyai jarak kesamaan genetik yangrelatif lebih jauh antar sesama anggotanya atau dengankelompok yang lain (Gambar 2).

Tabel 2. Ukuran pita yang dihasilkan tiap primer yang dipakai dalamanalisa PCR-RAPD dan frekuensi kemunculan pita pada tiapbiotipe wereng cokelat

Frekuensi kemunculan pita pada

Biotipe 1 (%) Biotipe 2 (%)Primer No. pita Ukuran (bp)

IDT31

IDT32

IDT36

IDT40

IDT41

IDT45

IDT46

IDT47

IDT48

IDT50

12345612345671234561234561231231234123412345671234

11001000 700 500 400 350 950 700 600 500 400 25013001200 800 700 650 550 50013001000 700 600 400 300 850 800 700 650 500 30010501000 800 500160011001000 8001000 900 800 500 450 400 2501050 800 700 500

50 0 60100 0 60 90 0 50 50 90100 40 60 30 30 30 30 30 80 0 40 50 50 20 10 70 10 10 50 90 10 80 50 0 10 20 40 30 70 10 10 50 40 10 20 0 0 90 0

20 60 0 90 40 0100 10 10 80 90100 20 50 10 0100 10 30 70 10 30 80 20 0 80100 0 40 60 60 30 60 0 50 0 60 10 0 60 10 0 70 40 0 0 20 10 90 20

Vol. 12, 2005 HASIL PCR-RAPD WERENG COKELAT

3

Gambar 1a. Hasil PCR-RAPD dengan primer IDT31, 32, 36, 40, dan 41 dengan DNA dari masing-masing individu wereng cokelat. Bio 1 ialahbiotipe 1 dan bio 2 ialah biotipe 2 wereng cokelat. Satuan untuk penanda DNA adalah kilo-basa.

PEMBAHASAN

Penelitian ini tidak menemukan primer yang menghasilkanpita DNA yang dapat membedakan biotipe 1 dan biotipe 2wereng cokelat secara nyata. Hal serupa ditemui oleh Shufrandan Whalon (1995) yang belum pula menemukan pita DNAyang dapat membedakan ketiga populasi biotipe werengcokelat.

Roderick (1994) mencatat satu sifat dari wereng cokelatyang mungkin menyulitkan pencarian marka RAPD pembedabiotipe. Karakter biotipe suatu wereng cokelat sangat mungkindisebabkan oleh interaksi banyak gen. Hal ini sangat jelasterlihat dari kemampuan suatu biotipe untuk beradaptasi danberubah menjadi biotipe yang lain dalam beberapa generasi(Wilson & Claridge 1985). Meskipun secara fenotipik karaktersuatu biotipe dapat jelas dibedakan satu dengan yang lain,secara genetik biotipe-biotipe wereng cokelat sulit dibedakan.

4 BAHAGIAWATI DAN RIJZAANI Hayati

IDT31

bio 1

Gambar 1b. Hasil PCR-RAPD dengan primer IDT45, 46, 47, 48, dan 50 dengan DNA dari masing-masing individu wereng cokelat. Bio 1 ialahbiotipe 1 dan bio 2 ialah biotipe 2 wereng cokelat. Satuan untuk penanda DNA adalah kilo-basa.

Berdasarkan analisa variasi molekuler (DNA), terlihatbahwa variasi terutama terdeteksi antar individu (79.1%)daripada antar populasi (20.9%) (Tabel 3). Hal ini menunjukkanbahwa variasi dalam satu populasi biotipe cukup tinggi. Jarakgenetik dari kedua populasi biotipe hanya sebesar 0.064(kesamaan sebesar 0.936). Meskipun kecil, jarak ini lebih tinggidari yang diperkirakan oleh Shufran dan Whalon (1995)sebesar 0.013. Tidak terlihat pula perbedaan besar dalam nilairata-rata heterozigositas kedua populasi, meskipun nilai yangdiperoleh di penelitian ini lebih besar daripada yang diperoleh

Tabel 3. Hasil analisa variasi genetik dari profil PCR-RAPD individu-individu wereng cokelat dari dua biotipe

Populasi

Biotipe 1 Biotipe 2

Rata-rata heterozigositas (unbiased)% lokus polimorfik*

1.828 (20.89%)6.922 (79.11%)0.064

0.23678.000

0.20368.000

Variasi antar populasi**Variasi dalam populasi**Jarak Genetik (Unbiased, Nei 1978)

*kriteria 0.95, **p = 0.001

Vol. 12, 2005 HASIL PCR-RAPD WERENG COKELAT

5

IDT45

bio 1

b1.h

b2.c b2.eb1.e

b1.i

b1.d

b1.fb2.f

b2.b

b2.a

b2.d

b2.g

b2.ib2.j

b1.b

b1.a

b1

b2.h

b1.j

b1.c

4644

9 27

329

34

14

63

0.1

Gambar 2. Pengelompokan individu-individu wereng cokelatberdasarkan derajat kesamaan profil RAPD. b1: individu-individu biotipe 1 (a-j), b2: individu-individu biotipe 2(a-j). Nilai bootsrap dari 100 kali bootstrap diberikanpada cabang-cabang utama.

Shufran dan Whalon (1995). Pada Tabel 3 juga terlihat bahwaada perbedaan yang cukup berarti pada persentase pita DNApolimorfik dari kedua populasi wereng cokelat yaitu sebesar10%. Perbedaan persentase pita DNA polimorfis dalam jumlahrelatif sama juga ditemukan oleh Shufran dan Whalon (1995).Hal ini pula yang menyebabkan pengelompokan yang belumtegas dalam dendogram (Gambar 2). Beberapa wereng cokelatbiotipe 2 pada kelompok biotipe 1 dan sebaliknya sejalandengan postulat yang dibuat oleh IRRI (1986) yangmengatakan di dalam satu populasi biotipe tertentu terdapatsebagian kecil individu yang mempunyai karakterisasivirulensi berbeda. Individu-individu tersebut akan menjadibiotipe baru bila lingkungan berubah. IRRI (1988) juga melihatkecilnya variasi frekuensi beberapa alel isoenzim antarpopulasi. Variasi alel isoenzim lebih terlihat antar individuanggota satu populasi (IRRI 1988). Kecilnya variasi isoenzimantar populasi ini pula yang mungkin menyebabkan belumdapat diperolehnya primer RAPD pembeda biotipe.

RAPD dengan sepuluh primer dekamer acak belummenghasilkan pita DNA atau marka RAPD yang dapatmembedakan wereng cokelat biotipe 1 dan 2. Meskipundemikian, teknik RAPD yang digunakan dalam penelitian inimengelompokkan sebagian besar individu-individu werengcokelat yang dianalisa sesuai dengan biotipe mereka meskipun

tidak secara tegas, dimana hal yang sama juga dikemukakanoleh Shufran dan Whalon (1995).

UCAPAN TERIMA KASIH

Penelitian ini dibiayai oleh dana APBN 2001. Penulismengucapkan terima kasih kepada Sutrisno dan Ifa Manzila,dimana masing-masing telah menyumbangkan beberapaprimer dan menyiapkan biotipe wereng cokelat yang dipakaidalam penelitian ini.

DAFTAR PUSTAKA

Brown RJ, Malcolm CA, Mason PL, Nichols RA. 1997. Geneticdifferentiation between and within strains of the saw-toothed grainbeetle, Oryzaephilus surinamensis (Coleoptera: Silvinidae) atRAPD loci. Insect Mol Biol 6:285-289.

Castrillo LA, Brooks WM. 1998. Differentiation of Beauveriabassiana isolates from the Darkling Beetle, Alphitobius diaperinus,using isozyme and RAPD Analyses. J Invert Pathol 72:190-196.

Hodge KT, Sawyer AJ, Humber RA. 1995. PCR-RAPD for identificationof Zoopthora radicans isolates in biological control of potatoleafhopper. J Invert Pathol 65:1-9.

[IRRI] International Rice Research Institute. 1986. IRRI AnnualReport. Manila: IRRI. hlm 92-98.

[IRRI] International Rice Research Institute. 1988. IRRI AnnualReport. Manila: IRRI. hlm 103-105.

Loo AHB, Tan HTW, Kumar PP, Saw LG. 1999. Population analysisof Licuala glabra Griff. var. glabra (Palmae) using RAPD profiling.Ann Botany 84:421-427.

Martinez I, Pastene LA. 1999. RAPD-typing of Central and EasternNorth Atlantic and Western North Pacific minke whales,Balaenoptera acutorostrata. ICES J Marine Sci 56:640-651.

Mochida O. 1979. Brown planthopper reduced rice production. IndonAgric Res Dev J 1 & 2: 2-7.

Panda N, Khush GS. 1995. Host plant Resistance to Insects. Wallingford:CAB International.

Pavlicek A, Huda S, Flegr J. 1999. FreeTree-Freeware program forconstruction of phylogenetic trees on the basis of distance dataand bootstrap/jackknife analysis of the robustness application inthe RAPD analysis of the genus Frenkelia. Folia Biologica 45:97-99.

Roderick GK. 1994. Genetic of host plant adaptation in delphacidplanthoppers. Di dalam: Denno RF, Perfect TJ (ed). Planthoppers:Their Ecology and Management. New York: Chapman & Hall.hlm 799.

Shufran KA, Whalon ME. 1995. Genetic analysis of brown planthopperbiotypes using random amplified polymorphic DNA-polymerasechain reaction (PCR-RAPD). Insect Sci Applic 16:27-33.

Sogawa K. 1982. The rice brown planthopper: feeding physiology andhost plant interactions. Ann Rev Entomol 27:49-73.

Welsh J, McClelland M. 1990. Fingerprinting genomes using PCR witharbitrary primers. Nucl Acids Res 18:7213-7218.

Williams JGK, Kubelik AR, Kivak KJ, Rafalski JA, Tingey SV. 1990.DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful asgenetic markers. Nucl Acids Res 18:6531-6535.

Wilson MR, Claridge MF. 1985. The leafhoppers and planthoppersfaunas of rice fields. Di dalam: Nanlt LR, Rodriquez JC (ed). TheLeafhoppers and Planthoppers. New York: John Wiley. hlm 500.

6 BAHAGIAWATI DAN RIJZAANI Hayati