KELOMPOK 3:VICKY EFENDY DEVI ATIKA SARIJUMIDA KROMATOGRAFI A. PENGERTIANKromatograf adalah suatu teknik pemisahan molekulberdasarkanperbedaan pola pergerakan antara fase gerak dan fase diamuntukmemisahkankomponen(berupamolekul) yangberadapadalarutan.[1]Molekul yang terlarut dalamfase gerak, akan melewati kolomyangmerupakan fase diam.[1]Molekul yang memiliki ikatan yang kuat dengankolomakanenderungbergeraklebihlambat dibandingmolekul yangberikatan lemah.[!]"engan ini, berbagai maamtipe molekul dapatdipisahkan berdasarkan pergerakan pada kolom. #etelahkomponenterelusi dari kolom, komponentersebut dapatdianalisis dengan menggunakan detektoratau dapat dikumpulkan untukanalisis lebih lan$ut.[!]%eberapa alat&alat analitik dapat digabungkandengan metode pemisahan untuk analisis seara on-line (on-line analysis)seperti' penggabungan kromatograf gas (gas chromatography) dankromatograf air (liquid chromatography) denganmass spectrometry(()&M#dan*)&M#),Fourier-transforminfraredspectroscopy(()&+,-.),dan diode-array /0&0-# (12*)&/0&0-#)%. 345-# K.6M7,6(.7+-1. KROMATOGRAFI KOLOMKromatografkolomdigunakanuntukmemisahkansuatuampuransenyawa.Kolomyangterbuat darigelas diisi denganfase diam berupaserbuk penyerap (seperti selulosa, silika gel, poliamida). +ase diam dialiri(dielusi) dengan fase gerak berupa pelarut.#ampel yang mengandung ampuran senyawa dituangkan ke bagian atasdari kolom, kemudian dielusidengan pelarut sebagai fase gerak. #etiapsenyawa8komponen dalam ampuran akan didorong oleh fase gerak dansekaligusditahanolehfasediam. Kekuatansenyawaditahanolehfasediam akan berbeda dengan senyawa lainnya.+aktor&faktor yang mempengaruhi pemisahan dengan kromatograf kolomadalah fase diam yang digunakan, kepolaran pelarut (fase diam), ukurankolom (diamter dan pan$ang kolom), keepatan alir elusi.2. Kromao!ra" #a$%& %$%&a. Kromatograf lapis tipis merupakan salah satu analisis kualitatif dari suatusampelyangingin dideteksi dengan memisahkankomponen&komponensampel berdasarkan perbedaan kepolaran.'. 2rinsip2rinsip ker$anya memisahkan sampel berdasarkan perbedaan kepolaranantarasampel denganpelarutyangdigunakan.[1],eknikini biasanyamenggunakanfasediamdari bentukplatsilikadan fase geraknyadisesuaikandengan$enis sampelyang ingin dipisahkan.[1]*arutan atauampuranlarutanyangdigunakandinamakaneluen.[1]#emakindekatkepolaran antara sampel dengan eluen maka sampel akan semakinterbawa oleh fase gerak tersebut(. 0isualisasi2roses berikutnya dari kromatograf lapis tipis adalah tahap 9isualisasi.[1],ahapan ini sangat penting karena diperlukan suatu keterampilandalammemilihmetodeyangtepatkarena harus disesuaikan dengan $enissampel yang sedang diu$i.[1]#alah satu yang dipakai adalahpenyemprotan denganlarutanninhidrin.[:]5inhidrin (!,!&"ihydro;yindane&1,:&dione)adalahsuatularutanyangakandigunakanuntuk mendeteksi adanya gugus amina.[:]7pabila pada sampel terdapatgugusaminamakaninhidrinakanbereaksi men$adi berwarnaungu.[:]%iasanya padatan ninhidirn ini dilarutkan dalam larutan butanol.). 5ilai .f3arak antara $alannya pelarut bersifat relatif.[]#edangkan, bila nilai .fnya berbeda, senyawa tersebut dapat dikatakanmerupakan senyawa yangberbedahttp'88id.wikipedia.org8wiki8Kromatograf?lapis?tipis3. KROMATOGRAFI KERTASKromatograf kertas merupakan kromatograf partisi dimana fasegeraknyaadalahair yangdisokongolehmolekul&molekul selulosadarikertas. Kertasyangdigunakanadalahkertas@hatman5o.1dankertasyanglebihtebal @hatman5o. :biasanyauntukpemisahanampurandalam $umlah yang lebihbesar karena dapat menampung lebihbanyakuplikan (#astrohamid$o$o, 1AA1).2ada awalnya kromatograf dianggap semata&mata sebagai bentuk partisiairanBairan. #erat selulosayanghidroflikdari kertastersebut dapatmengikat air, setelah disingkapkan ke udara yang lembab, kertas saringyang tampak kering itu sebenarnya dapat mengandung air denganpersentase tinggi, katakan !C D (bobot8bobot) akan lebih. 3adi kertas itusebenarnya dapat mengandung air dengan persentase tinggi dan kertasitu dipandang sebagai analog dengan sebatang kolomyang berisistasioner berair. Eat&Fat terlarut itu padahal fase geraknya dapat ampurdengan air akan dalam beberapa kasus, malahan fase geraknya adalahlarutan itu sendiri ("ay G /nderwood, 1AHC).https'88dyheesadonna.wordpress.om8!C1!81!81>8kromatograf&kertas8*. Kromao!ra" Ca%r +Liquid Chromatography,Kromatograf air merupakan teknik yang tepat untuk memisahkan ionataumolekulyang terlarut dalamsuatu larutan. 3ika larutan sampelberinteraksi dengan fase stasioner, maka molekul&molekul didalamnyaberinteraksi dengan fase stasionerI namun interaksinya berbeda dikarenakanadanya perbedaan daya serap (adsorption), pertukaran ion (ion exchange),partisi (partitioning), atau ukuran. 2erbedaan ini membuat komponenterpisah satu dengan yang lain dan dapat dilihat perbedaannya dari lamanyawaktu transit komponen tersebut melewati kolom-. R./.r&. $0a&. (0romao!ra$01Reversephasechromatographymerupakanalat analitikal yangkuatdengan memadukan sifat hidrofobik serta rendahnya polaritas fase stasioneryang terikat seara kimia pada padatan inert seperti silika.[][K]Metode inidapat dilakukan dalam dua tipe,yaitu dalam kolommaupunruangdatar (planar).[>],erdapat dua tipepertukaranion, yaitupertukaran kation (cation exchange) dan pertukaran anion (anion exchange).[K]2adapertukarankation, fasestasioner bermuatannegatifI sedangkanpada pertukaran anion, fase stasioner bermuatanpositif.[K]Molekulbermuatan yang berada pada fase air akan melewati kolom.[K]3ika muatanpada molekul samadengan kolom,maka molekul tersebutakan terelusi.[K]5amun $ika muatan pada molekul tidak sama dengan kolom, maka molekultersebut akanmembentukikatanionikdengankolom.[K]/ntukmengelusimolekul yang menempel pada kolomdiperlukan penambahan larutandenganp1dankekuatanioniktertentu.[K]2emisahandenganmetodeinisangat selektif dan karena biaya untuk men$alankan metode ini murah sertakapasitasnyatinggi, makametodeini biasadigunakanpadaawal proseskeseluruhan:. Kromao!ra" !a&Kromatograf gas termasuk dalam salah satu alat analisa (analisa kualitatifdananalisakuantitatif), kromatografgasdi$a$arkansebagai araanalisayangdapat digunakanuntukmenganalisasenyawa&senyawaorganik. Kitatelah mengetahui bahwa ada dua $enis kromatograf gas, yatiu kromatografgas padat (K(2), dankromatografgas air (K()). "alamkeduahalinisebagai fasabergerakadalahgas(hinggakeduanyadisebut kromatografgas), tetapi fasa diamnya berbeda. Meskipun kedua ara tersebutmempunyai banyapersamaan. 2erbedaanantarakedunyahanyatentangara ker$a.2ada kromatograf gas padat (K(2) terdapat adsorbsi dan padakromatograf gas air (K()) terdapat partisi (larutan). Kromatograf ga padat(K(2)digunakansebelumtahun1HCCuntukmemurnikangas. Metodeiniawalnyakurangberkembang. 2enemuan$enis&$enis padatanbarusebagihasil riset memperluas penggunaan metode ini. Kelemahan metode ini miripdengankromatografair padat. #edangkankromatografgasair seringdisebut oleh para pakar kimiaorganisebagai kromatograf fasa uap.2ertama kali dikenalkan oleh 3ames dan Martin pada tahun 1A>!. Metode inipaling banyak digunakan karena efsien, serba guna, epat dan peka.)uplikandenganukuranbeberapamirogramsampel denganukuran1Cgram masih dapat dideteksi. #ayangnya komponen uplikan harusmempunyai tekanan beberapa torr pada suhu kolom2ada dasarnya komponen penting pada yang harus ada pada setiap alat kromatograf gas adalah '1.,angki pembawa gas!.2engatur aliran dan pengatur tekanan:.tempat in$eksi.detektorK.rekorderA. PRINSIP KERJA KROMATOGRAFI GASKromatograf merupakan medan yang bergerak epat karena sangatpentingnyadalampraktekdalambanyakbidangpenelitian. /saha&uasahaberlan$utsepan$angbanyak$alur, beberapadiantaranyaadalah' detektoryang lebih baik, bahan kemasan kolomyang baru, hubungan denganinstrument lain (seperti spetrometer massa) yang dapat membantu untukmengidentifkasi komponen&komponen yang dipisahkan.)araker$adari kromatografgasadalahgaspembawalewatmelaluisatu sisi detektor kemudian memasuki kolom. "i dekat kolom ada suatu alatdi mana sampel B sampel bisa dimasukkan ke dalam gas pembawa ( tempatin$eksi). #ampel B sampel tersebut dapat berupa gas atau airan yang 9olatil(mudah menguap). *ubang in$eksi dipanaskan agar sampel teruapkandengan epat. 7lirangasselan$utnyamenemui kolom, kolommerupakan$antungintrumentempat di manakromatografberlangsung. Kolomberisi suatupadatan halus dengan luas permukaan yang besar dan relatif inert. 5amunpadatan teresebut hanya sebuah penyangga mekanika untuk airan.#ebelum diisi ke dalam kolom, padatan tersebut diimpregnasi dengan airanyang diinginkan yang berperan sebagai fasa diam atau stasionersesungguhnya, airan ini harus stabil dan non9olatil pada temperatur kolomdan harus sesuai dengan pemisahan tertentu. #etelahmunul dari kolomitu, alirangas lewat melalui sisi laindetektor. Makaelusi Fat terlarut dari kolommengatur ketidakseimbanganantara dua sisi detektor yang direkam seara elektrik. #ebagai gambaran bagaimana yang ter$adi di dalam kolom, anggapbahwadalamkolomtersebut memilki serangkaiankamar B kamar keil,masing B masing mengandung suatu bagian airan yang non9olatil sebagaifasastasioner. #uatufasabergerakataugaspembawabersamaBsamadengan airan yang sudah berupa gas masuk ke dalam kamar pertama, dimanasuatusampel (gasyangdikromatografkan)dari fasabergerak. 3ikaairan tersebut (fasa stasioner) ook dengan tu$uan, sebagian sampel akanyangberupagas tersebut akanmasuk dandanlarut di dalamnyadansebagian lagi akan tetap ikut bersama dengan gas pembawa tersebut.#ekarang hukum 1enry, dalam bentuk biasanya, menyatakan bahwatekanan parsial yang dihasilkan oleh Fat terlarut dalam suatu larutan enersebanding dengan fraksi molnya. Maka untuk distribusi benFena antara fasaair dan uap dalam kamar itu dapat dituliskan sebagai berikut '2benFena = k LbenFena"i mana 2benFena adalah tekanan parsial dalam fasa uap, LbenFena adalah fraksimol benFena dalam airan dan ksebuah tetapan. "alam kromatograf gas,tekanan parsial dan fraksi mol seringkali digantikan dengan konsentrasi yangmnghasilkan suatu koefsisen distribusi yang tak bersatuan, K 'K = konsentrasi benFena dalam fasa air8konsentrasi benFenadalam fasa gas2indahkan gasnitrogen yangmembawa sebagian sampel yangtidakterhenti pada kamar pertama ke kamar kedua, di mana gastersebut bertemudnegan airan. "alam hal ini sebagian sampel di dalamnya akan melarut danyanglainnyatetapikutdengangaspembawaataufasageraknya. "alamkromatograf, aliran fasa gerak berlan$ut sampai Fat terlarut telah bermigrasisepan$ang kolomitu. 5amun, setelah menelusuri pan$ang kolomsuatuampuran akan mengalami fraksinasi, dan kemudian munul satu demi satuuntuk memasuki detektor.Kamar atau ruang khayalan dalam peralatan ()disebut pelat B pelat teoritis. 2etun$uk ara ker$a kromatograf gas@alaupun beberapa sistem()sangat rumit, pada dasarnya araker$anyasama. 3ika()telahdinyalakanmakadapat dilakukanbeberapalangkah berikut ini 'a.-strumendiperiksa, terutama$ikatidakdipakai terus&menerus. -nidilakukanuntukmengeekapakahtelahdipasangkolomyangtepat,apakah septum in$etor tidak rusak (apakah ada lubang besar atau boorkarenaseringdipakai), apakahsambungansalurangaskedap, apakahtutup tanur tertutup rapat, apakah semua bagian listrik beker$a denganbaik, dan apakah detektor yang terpasang sesuai.b. 7lirangaskekolomdimulai ataudisesuaikan. -ni dilakukandenganmembuka katuputama pada tangkigas dan kemudianmemutar katup(diafragma) sekunder kesekitar 1>psi dan membuka katup $arum sedikit.-ni memungkinkanalirangasyanglambat(!&>ml)8menituntukkolomkemas dan sekitar C,>ml8menit untuk kolom kapiler melewati system danmelindungi kolomdan detektor terhadap perusakan seara oksidasi."alambanyak instrument modern, aliran gas dapat diatur denganrotameter ataualiranotomatis ataupengendali tekanan, ataudapatdimasukkan melalui modul pengendali berlandas mikroprosesor. 7papun$enisnya, sambungan system (terutama sambungan kolom) harus diekdenganlarutan sabun untukmengetahuiapakah adayang boor, ataudengan larutan khusus untuk mendeteksi kebooran (#5662),atau dapat$uga dengan larutan pendeteksi kebooran niaga.. Kolom dipanaskan sampai suhu awal yang dikehendaki. -ni dilakukan,pada instrument buatan lama, dengan memutar transformator teganganpeubahyangmengendalikangelunganpemanasdalamtanurkesekitarAC 0.;.r%97a9a59%a#%0a'.'.ra$a9.!75aa59romao!ra"!a&$a)a '%)a5!