47

LAMPIRAN

48

Lampiran 1 Prosedur analisis karakteristik fisik

1. Rendemen (AOAC 1995 yang dimodifikasi)

Rendemen adalah persentase bahan baku utama yang menjadi produk akhir

atau perbandingan produk akhir dengan bahan baku utama.

% Rendemen (bb) = Berat produk akhir x 100 % (Berat daun + berat pengisi)

2. Kelarutan (Fardiaz et al. 1992)

0,5 gram bubuk dilarutkan dalam 100 ml air, kemusidan disaring dengan

kertas saring Whatman 42 dengan penyaring vakum. Sebelumnya kertas

saring dikeringkan pada suhu 1050C selama 30 menit (di dalam oven), dan

ditimbang. Setelah penyaringan dengan vakum, kertas saring dan endapan

dikeringkan pada suhu 1050C selama 3 jam, didinginkan dalam desikator

selama 15 menit. Kemudian ditimbang.

% Kelarutan = 100 − ( % ) 100%3. Warna (RHS 2001)

Sebanyak 1 gram bubuk dimasukkan ke dalam kantong plastik bening,

kemudian diratakan hingga setiap sampel memiliki luas permukaan yang

sama. Setiap sampel kemudian dicocokkan dengan warna yang terdapat

dalam Colour Chart RHS. Warna-warna yang terdapat dalam Colour Chart

RHS dapat dilihat pada gambar berikut.

49

Fan 1 Fan 2 Fan 3 Fan 4

1A 57A 111A 155A1B 57B 111B 155B1C 57C 111C 155C1D 57D 111D 155D

2A 58A 112A 156A2B 58B 112B 156B2C 58C 112C 156C2D 58D 112D 156D

3A 59A 113A 157A3B 59B 113B 157B3C 59C 113C 157C3D 59D 113D 157D

4A 60A 114A 158A4B 60B 114B 158B4C 60C 114C 158C4D 60D 114D 158D

5A 61A 115A 159A5B 61B 115B 159B5C 61C 115C 159C5D 61D 115D 159D

6A 62A 116A 160A6B 62B 116B 160B6C 62C 116C 160C6D 62D 116D 160D

7A 63A 117A 161A7B 63B 117B 161B7C 63C 117C 161C7D 63D 117D 161D

8A 64A 118A 162A8B 64B 118B 162B8C 64C 118C 162C8D 64D 118D 162D

9A 65A 119A 163A9B 65B 119B 163B

50

Fan 1 Fan 2 Fan 3 Fan 4

9C 65C 119C 163C9D 65D 119D 163D

10A 66A 120A 164A10B 66B 120B 164B10C 66C 120C 164C10D 66D 120D 164D

11A 67A 121A 165A11B 67B 121B 165B11C 67C 121C 165C11D 67D 121D 165D

12A 68A 122A 166A12B 68B 122B 166B12C 68C 122C 166C12D 68D 122D 166D

13A 69A 123A 167A13B 69B 123B 167B13C 69C 123C 167C13D 69D 123D 167D

14A 70A 124A 168A14B 70B 124B 168B14C 70C 124C 168C14D 70D 124D 168D

15A 71A 125A 169A15B 71B 125B 169B15C 71C 125C 169C15D 71D 125D 169D

16A 72A 126A 170A16B 72B 126B 170B16C 72C 126C 170C16D 72D 126D 170D

17A 73A 127A 171A17B 73B 127B 171B17C 73C 127C 171C17D 73D 127D 171D

51

Fan 1 Fan 2 Fan 3 Fan 4

18A 74A 128A 172A18B 74B 128B 172B18C 74C 128C 172C18D 74D 128D 172D

19A 75A 129A 173A19B 75B 129B 173B19C 75C 129C 173C19D 75D 129D 173D

20A 76A 130A 174A20B 76B 130B 174B20C 76C 130C 174C20D 76D 130D 174D

21A 77A 131A 175A21B 77B 131B 175B21C 77C 131C 175C21D 77D 131D 175D

22A 78A 132A 176A22B 78B 132B 176B22C 78C 132C 176C22D 78D 132D 176D

23A 79A 133A 177A23B 79B 133B 177B23C 79C 133C 177C23D 79D 133D 177D

24A 80A 134A 178A24B 80B 134B 178B24C 80C 134C 178C24D 80D 134D 178D

25A 81A 135A 179A25B 81B 135B 179B25C 81C 135C 179C25D 81D 135D 179D

26A 82A 136A 180A

52

Fan 1 Fan 2 Fan 3 Fan 4

26B 82B 136B 180B26C 82C 136C 180C26D 82D 136D 180D

27A 83A 137A 181A27B 83B 137B 181B27C 83C 137C 181C27D 83D 137D 181D

28A 84A 138A 182A28B 84B 138B 182B28C 84C 138C 182C28D 84D 138D 182D

29A 85A 139A 183A29B 85B 139B 183B29C 85C 139C 183C29D 85D 139D 183D

30A 86A 140A 184A30B 86B 140B 184B30C 86C 140C 184C30D 86D 140D 184D

31A 87A 141A 185A31B 87B 141B 185B31C 87C 141C 185C31D 87D 141D 185D

32A 88A 142A 186A32B 88B 142B 186B32C 88C 142C 186C32D 88D 142D 186D

33A 89A 143A 187A33B 89B 143B 187B33C 89C 143C 187C33D 89D 143D 187D

34A 90A 144A 188A34B 90B 144B 188B34C 90C 144C 188C

53

Fan 1 Fan 2 Fan 3 Fan 4

34D 90D 144D 188D

35A 91A 145A 189A35B 91B 145B 189B35C 91C 145C 189C35D 91D 145D 189D

36A 92A 146A 190A36B 92B 146B 190B36C 92C 146C 190C36D 92D 146D 190D

37A 93A 147A 191A37B 93B 147B 191B37C 93C 147C 191C37D 93D 147D 191D

38A 94A 148A 192A38B 94B 148B 192B38C 94C 148C 192C38D 94D 148D 192D

39A 95A 149A 193A39B 95B 149B 193B39C 95C 149C 193C39D 95D 149D 193D

40A 96A 150A 194A40B 96B 150B 194B40C 96C 150C 194C40D 96D 150D 194D

41A 97A 151A 195A41B 97B 151B 195B41C 97C 151C 195C41D 97D 151D 195D

42A 98A 152A 196A42B 98B 152B 196B42C 98C 152C 196C42D 98D 152D 196D

54

Fan 1 Fan 2 Fan 3 Fan 4

43A 99A 153A 197A43B 99B 153B 197B43C 99C 153C 197C43D 99D 153D 197D

44A 100A 154A 198A44B 100B 154B 198B44C 100C 154C 198C44D 100D 154D 198D

45A 101A 199A45B 101B 199B45C 101C 199C45D 101D 199D

46A 102A 200A46B 102B 200B46C 102C 200C46D 102D 200D

47A 103A 201A47B 103B 201B47C 103C 201C47D 103D 201D

48A 104A 202A48B 104B 202B48C 104C 202C48D 104D 202D

49A 105A49B 105B49C 105C49D 105D

50A 106A50B 106B50C 106C50D 106D

51A 107A51B 107B

55

Fan 1 Fan 2 Fan 3 Fan 4

51C 107C51D 107D

52A 108A52B 108B52C 108C52D 108D

53A 109A53B 109B53C 109C53D 109D

54A 110A54B 110B54C 110C54D 110D

55A55B55C55D

56A56B56C56D

Keterangan:

Fan 1 Green-Yellow (GY): 1, Yellow (Y): 2-13, Yellow-Orange (YO): 14-23,

Orange (O):24-30, Orange-Red (OR): 31-35, Red (R): 36-56

Fan 2 Red-Purple (RP): 58-74, Purple (P): 75-79, Purple-Violet (PV): 80-82,

Violet (V): 83-88, Violet-Blue (VB): 89-98, Blue (B): 99-110

Fan 3 Blue-Green (BG): 111-124, Green (G): 125-143, Yellow-Green (YG): 144-

154

Fan 4 Greyed Yellow-Orange-Red-Purple-Green (160-198), Brown (200), Grey

(201), Black (202)

56

Lampiran 2 Prosedur analisis karakteristik kimia

1. Analisis kadar air (Apriyantono et al 1989)

Cawan dikeringkan selama 30 menit, didinginkan dalam desikator, kemudian

ditimbang. Timbang 2-3 gram sampel dalam cawan. Cawan beserta sampel

dipanaskaan dalam oven selama 6 jam pada suhu 1050C, angkat dan

dinginkan dalam desikator, kemudian ditimbang.

% kadar air (basis basah) = kehilangan berat (g) x 100% Berat sampel (g)

Kehilangan berat (g)

= Berat sampel (g) – (berat cawan dan sampel akhir (g) –berat cawan (g))

2. Analisis kadar pH (Apriyantono et al 1989)

1 gram sampel dilarutkan dalam 20 ml akuades, diaduk dengan magnetic

stirrer sampai homogen, kemudian diukur pHnya menggunakan pH meter.

57

Lampiran 3 Hasil analisis karakteristik fisik bubuk Cu-turunan klorofil

1. Rendemen

Hasil analisis rendemen bubuk Cu-turunan klorofil

PerlakuanRendemen (%)

0 mol 0,001 mol 0,002 mol 0,004 mol 0,006 mol 0,008 molUlangan 1 14,67 15,69 16,13 15,56 15,74 15,84Ulangan 2 15,14 15,62 15,73 15,59 15,81 16,29Rata-rata 14,91 15,65 15,93 15,57 15,78 16,06

Hasil sidik ragam rendemen bubuk Cu-turunan klorofilSumberVariasi

JumlahKuadrat df

KuadratTengah F hitung Sig.

Perlakuan 1.778 5 .356 5.769 .027

Galat .370 6 .062

Total 2.148 11Signifikansi < 0,05 berarti berpengaruh nyata

Hasil uji lanjut Duncan rendemen bubuk Cu-turunan klorofil

Perlakuan nSubset for alpha = 0.05

1 2

.000 2 14.91

.004 2 15.58

.001 2 15.66

.006 2 15.78

.002 2 15.93

.008 2 16.14

Sig. 1.000 .077Nilai rata-rata pada kolom berbeda, berbeda nyata

2. Kelarutan

Hasil analisis kelarutan bubuk Cu-turunan klorofil

PerlakuanKelarutan (%)

0 mol 0,001 mol 0,002 mol 0,004 mol 0,006 mol 0,008 molUlangan 1 97,10 94,78 95,99 98,90 98,18 94,74Ulangan 2 97,50 99,97 98,63 97,33 97,25 97,26Rata-rata 97,30 97,37 97,31 98,12 97,71 96,00

Hasil sidik ragam kelarutan bubuk Cu-turunan klorofilSumberVariasi

JumlahKuadrat

dfKuadratTengah

F hitung Sig.

Perlakuan 5.064 5 1.013 .278 .909

Galat 21.873 6 3.645

Total 26.937 11

58

Signifikansi < 0,05 berarti berpengaruh nyata

Hasil uji lanjut Duncan kelarutan bubuk Cu-turunan klorofil

Perlakuan nSubset for alpha = 0.05

1

.008 2 96.00

.000 2 97.30

.002 2 97.31

.001 2 97.38

.006 2 97.72

.004 2 98.12

Sig. .328 Nilai rata-rata pada kolom berbeda, berbeda nyata

Lampiran 4 Hasil analisis karakteristik kimia bubuk Cu-turunan klorofil

1. Kadar Air

Hasil analisis kelarutan bubuk Cu-turunan klorofil

PerlakuanKadar Air (%)

0 mol 0,001 mol 0,002 mol 0,004 mol 0,006 mol 0,008 molUlangan 1 3,16 3,64 3,45 4,77 5,36 5,97Ulangan 2 3,63 4,07 3,96 4,91 5,43 6,00Rata-rata 3,39 3,86 3,71 4,84 5,40 5,98

Hasil sidik ragam kadar air bubuk Cu-turunan klorofilSumberVariasi

JumlahKuadrat

dfKuadratTengah

F hitung Sig.

Perlakuan 10.769 5 2.154 36.748 .000

Galat .352 6 .059

Total 11.120 11Signifikansi < 0,05 berarti berpengaruh nyata

Hasil uji lanjut Duncan kadar air bubuk Cu-turunan klorofil

Perlakuan nSubset for alpha = 0.05

1 2 3

.000 2 3.39

.002 2 3.70

.001 2 3.86

.004 2 4.84

.006 2 5.40 5.40

.008 2 5.98

Sig. .114 .060 .052Nilai rata-rata pada kolom berbeda, berbeda nyata

59

2. Kadar pHHasil analisis kelarutan bubuk Cu-turunan klorofil

PerlakuanpH

0 mol 0,001 mol 0,002 mol 0,004 mol 0,006 mol 0,008 molUlangan 1 5,27 7,28 7,68 7,24 7,40 7,35Ulangan 2 5,25 7,14 7,24 7,25 7,58 7,51Rata-rata 5,26 7,21 7,46 7,24 7,49 7,43

Hasil sidik ragam pH bubuk Cu-turunan klorofilSumberVariasi

JumlahKuadrat

dfKuadratTengah

F hitung Sig.

Perlakuan 7.534 5 1.507 66.547 .000

Galat .136 6 .023

Total 7.669 11Signifikansi < 0,05 berarti berpengaruh nyata

Hasil uji lanjut Duncan pH bubuk Cu-turunan klorofil

Perlakuan nSubset for alpha = 0.05

1 2

.000 2 5.26

.001 2 7.21

.004 2 7.24

.008 2 7.43

.002 2 7.46

.006 2 7.49

Sig. 1.000 .128Nilai rata-rata pada kolom berbeda, berbeda nyata

3. Kadar Cu TotalHasil analisis kadar Cu total bubuk Cu-turunan klorofil

PerlakuanCu Total (mg/g)

0 mol 0,001 mol 0,002 mol 0,004 mol 0,006 mol 0,008 molUlangan 1 0,00 1,26 2,96 4,77 7,07 8,98Ulangan 2 0,00 1,01 2,73 4,65 7,96 8,16Rata-rata 0,00 1,13 2,85 4,71 7,51 8,57

Hasil sidik ragam kadar Cu total bubuk Cu-turunan klorofilSumberVariasi

JumlahKuadrat

dfKuadratTengah

F hitung Sig.

Perlakuan 118.324 5 23.665 77.559 .000

Galat 1.831 6 .305

Total 120.155 11Signifikansi < 0,05 berarti berpengaruh nyata

60

Hasil uji lanjut Duncan kadar Cu total bubuk Cu-turunan klorofil

Perlakuan nSubset for alpha = 0.05

1 2 3 4

.000 2 .00

.001 2 1.13

.002 2 2.85

.004 2 4.71

.006 2 7.51

.008 2 8.57

Sig. .086 1.000 1.000 .105Nilai rata-rata pada kolom berbeda, berbeda nyata

4. Kadar Cu-Chlorophyllin

Hasil analisis kadar Cu-Chlorophyllin bubuk Cu-turunan klorofil

Perlakuan Cu-Chlorophyllin (mg/g)

0 mol 0,001 mol 0,002 mol 0,004 mol 0,006 mol 0,008 molUlangan 1 0,00 13,03 31,60 51,45 80,90 94,94Ulangan 2 0,00 12,33 30,67 50,42 81,09 89,00Rata-rata 0,00 12,68 31,14 50,94 80,99 91,97

Hasil sidik ragam kadar Cu-Chlorophyllin bubuk Cu-turunan klorofilSumberVariasi

JumlahKuadrat

dfKuadratTengah

F hitung Sig.

Perlakuan 13595.730 5 2719.146 71.865 .000

Galat 227.022 6 37.837

Total 13822.752 11Signifikansi < 0,05 berarti berpengaruh nyata

Hasil uji lanjut Duncan Cu-Chlorophyllin bubuk Cu-turunan klorofil

Perlakuan nSubset for alpha = 0.05

1 2 3 4

.000 2 .0000

.001 2 12.6799

.002 2 31.1371

.004 2 50.9390

.006 2 80.99

.008 2 91.97

Sig. .085 1.000 1.000 .125Nilai rata-rata pada kolom berbeda, berbeda nyata

61

Lampiran 5 Nilai LC50 bubuk Cu-turunan klorofil

Hasil analisis nilai LC50 bubuk Cu-turunan klorofil

Perlakuan LC50

0 mol 0,001 mol 0,002 mol 0,004 mol 0,006 mol 0,008 molUlangan 1 1859,94 1655,23 2619,44 1583,61 987,16 735,22Ulangan 2 1345,74 1184,07 1998,67 970,08 795,24 791,01Rata-rata 1602,84 1419,65 2309,05 1276,84 891,20 763,11

Hasil sidik ragam nilai LC50 bubuk Cu-turunan klorofilSumberVariasi

JumlahKuadrat

dfKuadratTengah

F hitung Sig.

Perlakuan 3088869.302 5 617773.860 5.755 .027

Galat 644061.362 6 107343.560

Total 3732930.664 11Signifikansi < 0,05 berarti berpengaruh nyata

Hasil uji lanjut Duncan nilai LC50 bubuk Cu-turunan klorofil

Perlakuan nSubset for alpha = 0.05

1 2

.008 2 763.11

.006 2 891.20

.004 2 1276.84

.001 2 1419.65

.000 2 1602.84 1602.84

.002 2 2309.05

Sig. .053 .075Nilai pada kolom yang berbeda, berbeda nyata

62

y = 4.2245x + 1.8925R² = 0.9977

0.00

10.00

20.00

30.00

40.00

50.00

60.00

70.00

80.00

90.00

100.00

0 5 10 15 20 25

Absorbansi

Konsentrasi Vitamin C standar (ppm)

Lampiran 6 Cara perhitungan aktivitas antioksidan bubuk Cu-turunan klorofil terpilihKurva standar Vitamin C setelah direaksikan dengan DPPH

Tabel Aktivitas antioksidan vitamin C standar pada berbagai konsentrasi

Konsentrasi Vit C standar (ppm) Absorban % Aktivitas AO

0 0,678 0,0025 0,655 3,3950 0,641 5,46

100 0,609 10,18200 0,546 19,47300 0,486 28,32400 0,423 37,61500 0,365 46,17750 0,241 64,45

1000 0,103 84,81Cara perhitungan aktivitas antioksidan

Aktivitas antioksidan (%) = (Abs. blanko – Abs. sampel) x 100% Abs. blanko

Hasil analisis aktivitas antioksidan bubuk Cu-turunan klorofil terpilih

Perlakuan Absorban % Aktivitas Antioksidan (AAO)

Blanko 0,678

Ulangan 10,369 45,610,363 46,43

Ulangan 20,344 49,260,360 46,96

Rata-rata 47,07

63

Ascorbic acid Equivalent Antioxidant Capacity (AEAC)

AEAC (mg/ 100 g) = [(% AAO - b)

a x

Volume akhir

Vol.yang ditambahkan] x

100

Berat sampel

Hasil analisis AEAC bubuk Cu-turunan klorofil terpilih

PerlakuanBerat

sampel(g)

Volume akhir(ml)

Volume yang ditambahkan

(ml)a b AAO(%)

AEAC (mg vitamin C/100g)

Ulangan 12,5064 5 0,02 4,224 1,892 45,61 103,232,5056 5 0,02 46,43 105,20

Ulangan 22,5088 5 0,02 49,26 111,752,5082 5 0,02 46,96 106,36

Rata-rata 47,07 106,64

Cara perhitungan berat DPPH teredam per gram bubuk Cu-turunan klorofil

100Berat sampel (g) x

(%AAO100 x Berat DPPH per penambahan (mg) x

Volume ekstrak (ml)Volume sampel (ml)

100

=

1002,5073 g

x (47,07%

100 x 0,3943 mg x

5 ml0,02 ml

100

= 18,51 mg/g

Cara perhitungan berat DPPH setiap penambahan

= Vol.DPPH per penambahan

1000 x ([DPPH]x BM DPPH) x 1000

= 1 ml

1000 x (0,001 M x 394,3 g/mol) x 1000

= 0,3943 mg

64

Lampiran 7 Kromatogram kadar alkohol bubuk Cu-turunan klorofil terpilih

65

Lampiran 8 Dokumentasi proses pembuatan bubuk Cu-turunan klorofil

Penimbangan daun murbei segar sebanyak

200 g

Etanol 96% sebanyak 800 ml sebagai pelarut

Proses ektraksi klorofil menggunakan blender

Penimbangan Cu-asetat untuk setiap perlakuan

Proses pembuatan larutan Cu-turunan klorofil

Proses homogenasi larutan Cu-turunan klorofil dengan maltodekstrin

Proses pengeringan larutan Cu-turunan klorofil menggunakan spray dryer