Teknik Isolasi-1 %5bcompatibility Mode%5d

8/3/2019 Teknik Isolasi-1 %5bcompatibility Mode%5d

1/20

TEKNIK ISOLASI

Ir. Woro Hastuti Satyantini, M.Si.

Program Studi Budidaya PerairanFakultas Kedokteran Hewan

Universitas Airlangga2007


2/20

Teknik Isolasi :

metode/teknik untuk mengisolasi

fitoplankton

Tujuan isolasi :

untuk memperoleh fitoplankton

monospesies (spesies tunggal)dengan cara mengisolasi sampelplankton yang didapat dari alam


3/20

Ada 6 metode isolasi :

1.Metode pipet kapiler2. Metode pipet kapiler yang disederhanakan

3. Metode streak plating

4. Metode spray plating

5. Metode isolasi pada media agar

6. Metode isolasi dari atmosfer

Dari ke 6 metode isolasi metode pipet kapiler

dan streak plating yang direkomendasikan untuk

semua isolasi

4 metode lain variasi metode isolasi


4/20

1.Metode Pipet Kapiler- sterilisasi petri dish, watch glass, segitigakaca

- gelas kaca diletakkan di atas watch glass- 6-8 tetes medium kultur diletakkan di ataswatch glass atau plate dengan 3 lubang

- tambahkan 2-3 tetes sampel dari alam kedalam medium kultur pada watch glass

- Pasteur pipet steril dipanaskan ujungnyahingga berpijar lalu ditarik dengan pinsethingga membentuk ujung kapiler

- tentukan unit plankton yang diinginkan denganmelihatnya di bawah mikroskop

- ujung pipet kapiler diletakkan dekat unit plankton

yang akan diambil- unit plankton yang terambil dipindahkan pada tetesmedium di watch glass kedua, dst

- terakhir memasukkannya ke dalam test tube berisimedium kultur untuk penumbuhan plankton tersebut


5/20

2. Pipet Kapiler Yang Disederhanakan

- 10-15 tetes sampel diletakkan pada bag. Tengah tutup

petri dish

- 6-8 tetes medium kultur diletakkan melingkari tetes

sampel searah jarum jam- unit plankton yang diinginkan pada tetes sampel diambil

dengan menggunakan pipet kapiler

- pindahkan unit plankton yang didapat pada tetes 1 yg

melingkari tetes sampel hingga tetes ke 6- terakhir memindahkan unit plankton yg benar-benar

single sel dari tetes ke 6 masuk ke dalam test tube yg

telah berisi medium kultur untuk penumbuhan plankton


6/20

3. Streak PlatingBila uk. Plankton < 10 m isolasi mudah

dengan streak atau spray plating

- menyiapkan petri dish berisi media agar dengan konsentrasi 1,5%setebal -2/3 bag. tinggi petri

- 1-2 tetes sampel diteteskan dekat sisi pinggir petri dish- jarum ose dipanaskan di atas api bunsen yg sebelumnya dicelupkan

pada alkohol 70%- jarum ose dibiarkan dingin sejenak lalu digunakan untuk menggoressampel yg telah diteteskan pada media agar

- tutup dengan tutup petri dish, letakkan secara terbalik dan diinkubasi4- 8 hari

- setelah tumbuh, diamati di bawah stereomikroskop, ambil plankton ygdiinginkan dengan jarum steril, letakkan pd tetesan medium kultur pdobjek glass dan amati di bawah mikroskop

- streaking pada media agar ke dua lalu diinkubasi- koloni plankton yg tumbuh selanjutnya dipindahkan pd test tube berisimedium kultur


7/20

4. Spray plating

Hampir sama dengan streak plating, hanya sampel disemprotkan pd

permukaan medium agar dengan pasteur pipet yang dilengkapi

kompressor udara atau pompa udara spray plating

5. Isolasi pada agar pemisahan plankton dari

kontaminan Menyiapkan petri dish berisi medium agar

Membuka tutup petri dish, biarkan permukaan agar sedikitmengering

1 tetes sampel diteteskan pd bag. tengah medium agar pada petri

Dengan menggunakan jarum ose steril dan pengamayan dibawah mikroskop dilakukan penarikan unit plankton yangdiinginkan dengan cara zigzag hingga terisolasi dari yg lain

Unit plankton yang terisolasi diambil dengan pipet kapiler ataudengan memotong agar dengan mikrospatula pindah ketest tube berisi medium kultur


8/20

6. Isolasi dari atmosfer

- Menyiapkan petri dish berisi media agar

- Meletakkan dengan posisi vertikal ke arah atmosfer

selama 5-10 menit dari benda yang bergerak dengankecepatan 50-70mph

- Menutup dengan tutup petri dish, diletakkan terbalik dan

diinkubasi pada ruang steril selama 2-6 minggu

- Selanjutnya diikuti dengan metode streak plating


9/20

Beberapa metode isolasi mikroalga kultur

monospesies

Metode-metode ini tidak hanya mengisolasi

spesies yg diinginkan dari populasi plankton di

alam yg berisi spesies mix, tetapi dapat juga

digunakan untuk mengisolasi spesies kultur yg

terkontaminasi dengan organisme lain


10/20

Dari 6 metode isolasi, dapat pula

menggunakan 3 metode di bawah iniyaitu :

1. Metode pipet dan kait

2. Metode agar plate (streakingon agar)

3. Metode kultur berulang


11/20

1. Metode pipet dan kait


12/20

2. Metode Agar Plate (Streaking Plate)


13/20

3. Metode sub kultur berulang

sampel pengenceran Media yg berbeda


14/20

Hasil isolasi baru dapat dilihat setelah inkubasi

beberapa hari

Isolasi harus dikerjakan pada tempat yg sterildan diinkubasi dalam ruang yg cukupintensitas

cahaya


15/20

Pembuatan medium agar untuk isolasi

- Menimbang bacto agar sebanyak 1,5 gr dilarutkan dalam

100 ml air (tawar atau laut) sesuai dengan jenis plankton

yang akan diisolasi

- Dipanaskan sampai mendidih dan lar. menjadi jernih

- Selama pemanasan dilakukan pengadukan agar tidak

menggumpal- Setelah mendidih, larutan diangkat dari pemanasan

- Setelah agak dingin, ditambahkan pupuk/nutrien sesuai

dengan jenis plankton yang akan diisolasi

- Larutan agar dituang ke dalam petri dish steril denganketebalan (1/2 tinggi petri) atau ke dalam tabung reaksi

steril dengan posisi miring (agar slant)

- Setelah media agar membeku, siap digunakan untuk

menanam inokulan


16/20

Komposisi pupuk/nutrien untuk kultur skalalaboratorium

No.

Bahan Kimia Conwy/Walne Guillard

1.

2.

3.

4.5.

6.

7.

8.

9.10.

EDTA

NaH2PO4.2H2O

FeCl3.6H2O

H3BO3MnCl2NaNO3Na2SiO3.9H2O

Trace metal solution

VitaminAquadest sampai

45 gr

20 gr

1,5 gr

33,6 gr0,36 gr

100 gr

-

1 ml

1 ml1000 ml

10 gr

10 gr

2,9 gr

-3,6 gr

100 gr

5 gr/ml

1 ml

1 ml1000 ml


17/20

Komposisi Trace Metal Solution

No.

Bahan Kimia Conw y/ Walne Guillard

1.

2.3.

4.

5.

6.

ZnCl2

CuSO4.5H2OZnSO4.7H2O

CoCl2.6H2O

(NH4)6.Mo7O24.4H2O

Aquabidest sampai

2,1 gr

2,0 gr-

2,0 gr

0,9 gr

100 ml

-

1,96 gr4,40 gr

2,0 gr

1,26 gr

100 ml


18/20

Kultur Di Media Cair

Tahap kultur selanjutnya dari media agar

Koloni fitoplankton yang tumbuh dan berkembang di media agar

dipindahkan ke media cair dengan menggunakan jarum ose steril

Tabung-tabung reaksi yang telah berisi bibit fitoplankton hasil isolasi

ditempatkan dalam rak tabung reaksi dan diletakkan pada rak

dengan dilengkapi lampu neon

Selama kultur di tabung reaksi sesering mungkin dikocok untuk

menghindari pengendapan dan untuk difusi udara

Pertumbuhan dan perkembangan fitoplankton semakin meningkat

kepadatannya pindah ke erlenmeyer 100-250 ml

pindah ke erlenmeyer 500 ml dst, sampai vol. masal


19/20

Kontaminasi

- Kultur fitoplanktonmembutuhkan medium kultur

yang steril

- Untuk menghasilkan kultur fitolankton yang

murni, maka semua alat, media dan bahan-

bahan lain yang digunakan harus steril


20/20

Ada 4 metode untuk menghasilkan kultur fitoplankton

yang bebas kontaminan yaitu :

1. Centrifuse

2. Treatment ultrasonic

3. Treatment antibiotik

100 mg penicillin G

50 mg streptomycin SO4 mix dengan 10 ml aquadest

10 mg chloramphenicol dilarutkan dalam 1 ml 95% ethanol

mix dengan lar. Penicillin dan streptomycin

4. Treatment Potassium Tellurite (K2TeO3)

1-1,5% lar. Agar + 10 mg/l K2TeO3

Teknik Isolasi-1 %5bcompatibility Mode%5d

Documents

Transcript of Teknik Isolasi-1 %5bcompatibility Mode%5d