Eritroplakia dan leukoplakia berbintik adalah lesi prakanker mulut yang memiliki potensi tinggi untuk transformasi ganas .AIM :

Sebuah analisis retrospektif dilakukan untuk mengetahui fitur klinikopatologi dari 13 kasus eritroplakia lisan dan leukoplakia berbintik-bintik pada pasien yang terlihat di pusat khusus dalam Stomatology dan diagnosis histopatologis penyakit mulut .BAHAN DAN METODE :

Semua kasus didiagnosis dengan eritroplakia dan leukoplakia berbintik antara tahun 1978 dan 2006 yang diambil dari arsip layanan.HASIL :

Lesi dipamerkan kecenderungan untuk laki-laki dengan rasio perempuan-ke - laki-laki dari 1:3.3 . Usia rata-rata berusia 57 tahun dan langit-langit lunak adalah situs terpengaruh pada 77 % kasus . Gejala sakit dilaporkan oleh 61,5 % pasien dan asosiasi dengan faktor risiko seperti merokok dan asupan alkohol yang berlebihan terlihat pada 100 % dan 46 % dari kasus , masing-masing. Lesi menunjukkan displasia epitel , di mana lebih dari 50 % didiagnosis pada karsinoma in situ atau invasif .KESIMPULAN :

Meskipun prevalensi rendah , eritroplakia homogen lisan dan leukoplakia berbintik menunjukkan perubahan histopatologi bervariasi dari displasia epitel menjadi karsinoma invasif . Lesi ini harus disertakan antara mereka lesi oral dengan potensi tertinggi untuk transformasi ganas .

Sebuah lesi bebercak atau halus nodular putih di atas dasar eritematosa atrofi yang dapat dilihat di latar belakang erythroplasia yang datar atau tertekan di bawah mukosa sekitarnya . Temuan ini jarang di mulut , dan membawa risiko transformasi ganas

pengantarLeukoplakia adalah gangguan yang berpotensi ganas dari mukosa mulut yang didefinisikan sebagai patch putih atau plak risiko dipertanyakan yang tidak dapat ditandai secara klinis atau patologis seperti halnya penyakit lain yang dikenal ( 1 ) Setelah biopsi , beberapa leukoplakia mungkin menunjukkan displasia epitel yang mungkin terkait dengan perkembangan kanker ( 2,3 ) . Fitur lain dari leukoplakia , seperti merokok ( 4,5) dan lokasi di lantai mulut dan / atau di lidah ( 2,6 ) , juga telah dikaitkan dengan peningkatan risiko transformasi ganas .Beberapa studi telah berusaha untuk mengidentifikasi biomarker yang mungkin berguna dalam memprediksi transformasi maligna ( 7 ) . The reseptor faktor pertumbuhan epidermal ( EGFR ) adalah anggota dari keluarga reseptor tirosin kinase yang diekspresikan dalam beberapa jenis kanker , termasuk karsinoma sel skuamosa oral ( OSCC ) ( 8-10 ) . Ada bukti kuat bahwa ekspresi tinggi EGFR berkorelasi dengan stadium lanjut tumor , metastasis , dan hasil klinis yang buruk ( 11 ) . Studi sebelumnya juga telah menunjukkan bahwa EGFR upregulation mungkin menjadi penanda berguna untuk mengidentifikasi individu yang berisiko pembangunan OSCC ( 12-15 ) Namun , clinicopathological fitur lesi yang dapat mengganggu ekspresi EGFR pada gangguan yang berpotensi ganas belum diselidiki .Mekanisme pasti yang terlibat dalam pengendalian proliferasi sel melalui jalur EGFR tidak sepenuhnya dipahami . Baru-baru ini , studi praklinis memeriksa EGFR telah menunjukkan bahwa inhibitor tirosin kinase memblokir aktivitas tirosin kinase EGFR , sehingga penghambatan proliferasi sel dan upregulation p27 dalam sel OSCC ( 16-18 ) .Ekspresi EGFR di leukoplakia kemungkinan diubah oleh clinicopathological fitur dan dapat memodulasi indeks proliferasi . Penelitian ini mengevaluasi immunoexpression EGFR dalam sampel leukoplakia lisan dan hubungannya dengan displasia , konsumsi tembakau , lokasi lesi , dan tingkat proliferasi .Pengambilan sampelProtokol penelitian disetujui oleh Komite Etika Universidade Federal de Minas Gerais ( ETIC 48 / 08 ) . Sampel dengan diagnosis klinis oral leukoplakia ( OL ) dan epitel normal mulut ( NOE ) dikumpulkan dari file Dinas Patologi Oral , Universidade Federal de Minas Gerais ( UFMG ) , Brasil . Catatan klinis setiap kasus dievaluasi , dan penggunaan tembakau diselidiki . Bagian dari formalin-fixed , parafin-embedded insisional biopsi spesimen OL dievaluasi oleh hematoxilin - eosin ( HE ) pewarnaan . Empat puluh delapan OL dipilih , dipisahkan menurut situs ( tinggi dan berisiko rendah ) dan diklasifikasikan secara histopatologi dalam dua kelompok sesuai dengan displasia epitel ( ada atau tidaknya ) mengikuti rekomendasi WHO ( 3 ) . Lidah dan lisan lantai dianggap situs berisiko tinggi , sedangkan semua situs intra -oral lainnya dianggap berisiko rendah ( 2,6 ) . Kasus yang terletak di bibir tidak dimasukkan dalam penelitian kami . Sepuluh NOE , dari situs lisan yang berbeda ( risiko rendah dan tinggi ) ditambahkan untuk tujuan perbandingan .Imunohistokimia ( IHC )Reaksi IHC untuk mendeteksi EGFR , Ki - 67 , dan p27 antigen dilakukan dengan menggunakan klon 31G7 antibodi monoklonal ( Zymed Laboratories Inc , San Francisco , CA , UK ) , MIB - 1 ( Dako , Carpinteria , Amerika Serikat ) , dan SX5368 ( Dako , Carpinteria , Amerika Serikat ) , masing-masing. Secara singkat , bagian 4m yang Dewaxed dalam xylene dan terhidrasi dengan etanol bergradasi . Pemblokiran peroksidase endogen dan aktivitas avidin - biotin dilakukan . Protokol yang berbeda pengambilan antigen dipekerjakan . Antigen pengambilan untuk EGFR dilakukan dengan pepsin 10 % pada 37 C. Untuk Ki - 67 dan p27 , bagian ditempatkan dalam sebuah kapal yang mengandung 10m asam sitrat ( pH 6,0 ) selama 20 menit dan Tris / EDTA (pH 8,0 ) selama 20 menit , masing-masing. Antibodi utama untuk EGFR dan Ki - 67 diinkubasi selama 18 H pada suhu kamar dan diencerkan 1:100 . Antibodi untuk p27 diinkubasi selama 18 H pada 4 C dan diencerkan 1:150 . Semua pengenceran berada di 1 % bovine serum albumin .Setelah membilas di Tri - HCl penyangga, bagian diinkubasi selama 30 menit pada suhu kamar dengan terbiotinilasi multi-link babi anti - kambing , tikus , dan immunoglobulin ( LSAB Kit , dako , Carpinteria , CA , USA) kelinci . Reaksi terungkap dengan menerapkan tetrahydrochloride diaminobenzidin (padat , DMBA ) . Bagian kemudian counterstained dengan Mayer `s hematoxylin dan dipasang di Permount ( Fisher Scientific , NJ , USA ) . Kontrol negatif diperoleh oleh kelalaian dari antibodi primer .Evaluasi PosyanduThe imunohistokimia noda dianalisis oleh pemeriksa buta dan dikalibrasi ( RDC ) ekspresi EGFR dievaluasi dengan tingkat dan intensitas EGFR immunolabeling di membran sel dan diklasifikasikan pada skala empat poin sebagai berikut : 0 (tidak ada label atau label < 10 % dari sel epitel ) , 1 ( pelabelan lemah, > 10 % ) , 2 ( pelabelan moderat , > 10 % ) , dan 3 ( pelabelan intens , > 10 % ) . Untuk analisis data , kategori ini dibagi menjadi dua kelompok , 0 ( negatif, tidak ada atau lemah label 0 , 1 ) dan 1 ( positif, moderat dan intens 2 , 3 ) ( 12,19 ) .Ekspresi Nuklir Ki - 67 dan p27 ditentukan untuk setiap lapisan epitel , termasuk lapisan basal ( inti positif tepat di atas membran basal ) , lapisan parabasal ( inti positif dalam dua lapisan di atas membran basal ) , dan lapisan suprabasal ( positif inti dalam lapisan yang lebih atas di atas lapisan parabasal ) . Persentase inti positif pewarnaan untuk Ki - 67 dan p27 pada sel epitel 500 untuk setiap lapisan dihitung sebagai indeks pelabelan ( LI ) ( 20 ) .Berdasarkan Ki - 67 dan p27 tingkat ekspresi dalam epitel oral ( 20-21 ) , nilai cutoff dari 20 % ditetapkan . Nilai ini digunakan untuk menganalisis hubungan antara EGFR dengan Ki - 67 dan p27 . Untuk menganalisis perbedaan proliferasi sel di hadapan dan tidak adanya displasia , para LI rata-rata untuk setiap lapisan yang digunakan .Prosedur statistik:SPSS ( Statistic Package untuk Ilmu Sosial ) 15.0 for Windows ( SPSS Inc , Chicago , IL , USA) digunakan untuk menganalisis data . Perbedaan ekspresi EGFR dianalisis menggunakan uji chi -square dan uji eksak Fisher ( p < 0,05 ) . Tes T dan Mann-Whitney tes ( p < 0,05 ) digunakan untuk mengevaluasi perbedaan LI mean / median antara kelompok displastik dan non - displastik untuk Ki - 67 dan p27 pada setiap lapisan .hasilDari 48 kasus yang dianalisis, 28 adalah laki-laki dan 20 adalah perempuan. Usia berkisar 24-78 tahun, dengan usia rata-rata 53 tahun. Berkaitan dengan lokasi anatomi, 34 yang terletak di lokasi dengan risiko rendah dan 14 di situs berisiko tinggi. Mengenai konsumsi tembakau, 30 pasien adalah perokok, dan 18 non-perokok. Dua puluh sampel histopatologi diklasifikasikan sebagai hiperkeratosis dengan displasia, dan 28 memenuhi syarat sebagai hiperkeratosis tanpa displasia.EGFR positif pada 30 (62,5%) kasus leukoplakia, dan pewarnaan terlokalisasi pada membran dan melibatkan ekstensi basal ke lapisan suprabasal (Gambar 1). Dalam NOE, EGFR positif pada 50% dari sampel dan pewarnaan yang dibatasi terutama untuk lapisan basal dan parabasal. Meskipun NOE situs yang berbeda yang disertakan, tidak ada hubungan antara lokasi NOE dan EGFR immunoexpression.Dalam leukoplakia oral, EGFR immunoexpression tidak menunjukkan variasi yang signifikan dengan adanya atau tidak adanya displasia atau antara perokok dan non-perokok. Ada perbedaan dalam ekspresi EGFR antara leukoplakia di lokasi tinggi dan berisiko rendah, dengan jumlah yang lebih tinggi EGFR lesi positif dalam risiko tinggi dibandingkan dengan daerah berisiko rendah. Ketika semua lapisan epitel dianggap, p27 indeks juga berbeda secara signifikan antara EGFR positif dan negatif leukoplakia. Sebagian besar leukoplakia p27 negatif EGFR positif, tetapi tidak ada perbedaan signifikan yang terlihat untuk Ki-67 ekspresi terhadap EGFR immunoexpression (Tabel 1).Indeks untuk Ki-67 menunjukkan tidak ada perbedaan yang signifikan antara displasia dan non-dysplasia (Tabel 2). Sebaliknya, indeks untuk p27 jauh lebih rendah pada lapisan epitel parabasal dengan displasia daripada epitel tanpa displasia (Tabel 3).diskusiStudi sebelumnya telah menunjukkan peningkatan ekspresi EGFR oral leukoplakia ( 13,15 ) . Dalam studi ini , kami mengevaluasi pengaruh faktor clinicopathological pada immunoexpression EGFR dalam kelompok oral leukoplakia serta asosiasi EGFR dan proliferasi selular.Metode untuk evaluasi EGFR immunoexpression adalah variabel dan termasuk semikuantitatif dan otomatis analisis ( 12,15 ) dengan indeks variabel dan akibatnya memberikan hasil kontroversial ( 13,22 ) . Beberapa penelitian menggunakan metode evaluasi mempertimbangkan tingkat dan intensitas immunostaining , seperti yang digunakan dalam penelitian ini ( 19 ) sedangkan penulis lain menunjukkan metode kuantitatif ketat ( 23 ) .Dalam leukoplakia secara umum diterima bahwa karakteristik histopatologi tidak ada atau displasia ringan memiliki risiko lebih rendah transformasi ganas dari displasia sedang atau berat ( 2 ) . Beberapa laporan menggambarkan peningkatan dramatis dalam ekspresi EGFR dengan perkembangan lesi displastik kanker tanpa perbedaan yang signifikan antara berbagai kelas displasia ( 15,23 ) . Konsisten dengan temuan sebelumnya, hasil kami tidak menunjukkan perbedaan dalam ekspresi EGFR antara displastik dan non - displastik epitel .Dalam penelitian ini , lidah atau dasar mulut dianggap situs berisiko tinggi untuk leukoplakia . Pernyataan ini konsisten dengan penelitian sebelumnya ( 1,2 ) . Perbedaan yang ditemukan di EGFR positif antara leukoplakia dari situs tinggi dan berisiko rendah . Ekspresi EGFR lebih sering pada lesi dari risiko tinggi dibandingkan dengan daerah berisiko rendah . Studi lain ( 6 ) menunjukkan bahwa leukoplakia di lokasi oral berisiko tinggi dipamerkan perubahan molekul yang lebih maju ( hilangnya heterozigositas - LOH ) daripada yang disarankan oleh temuan histologis . Penelitian ini memperkuat hasil penelitian ini molekul .Ekspresi EGFR dikaitkan dengan riwayat merokok dan secara signifikan diregulasi dalam paru-paru karsinoma sel skuamosa ( 24 ) . Merokok tembakau adalah yang terkuat faktor risiko independen untuk leukoplakia , dan penelitian menunjukkan bahwa ada hubungan dosis-tergantung jelas untuk rokok ( 4-5 ) Menariknya , ekspresi EGFR tidak bervariasi dalam leukoplakia dari perokok dan non - perokok . Karena beberapa laporan menunjukkan bahwa merokok tembakau menginduksi beberapa ligan EGFR dan kemudian mengarah ke stimulasi EGFR ( 25,26 ) , kami merekomendasikan bahwa topik ini harus diselidiki lebih lanjut .Peningkatan proliferasi sel di leukoplakia oral telah dilaporkan dalam studi sebelumnya ( 20-21 , 27-28 ) dan telah dikonfirmasi oleh hasil ini . Meskipun Ki - 67 nilai LI tidak berkorelasi dengan EGFR positif yang sesuai atau dengan kehadiran displasia , penelitian ini dikonfirmasi ekspresi suprabasal diperpanjang Ki - 67 di leukoplakia ( 20 ) . Demikian juga, meskipun ada perbedaan dalam Ki - 67 LI terkait dengan displasia ditemukan , indeks ini cenderung lebih parah epitel displastik .The CDK inhibitor p27 memainkan peran penting dalam penangkapan G2 dengan mengikat dan menghambat cyclin G1 ( kompleks CDK ) dan mengatur negatif perkembangan melalui G1 dan S fase dari siklus sel . Mengurangi tingkat dari p27 telah dilaporkan di sejumlah tumor manusia dan telah dikaitkan dengan perilaku histologis agresif ( 29 ) . Dalam penelitian ini , 23 ( 48 % ) dari leukoplakia negatif untuk p27 .Penurunan ekspresi p27 di leukoplakia lisan dibandingkan dengan epitel normal mulut telah dijelaskan dalam studi sebelumnya ( 21 , 29-30 ) tetapi peran EGFR dalam pengurangan ini belum dieksplorasi . Tingkat p27 terutama diatur melalui mekanisme pasca-transkripsi , termasuk ubiquitin - proteosome - dimediasi proteolisis . Mayoritas p27 pada sel tumor diatur oleh degradasi ubiquitin ( 18 ) , dan upregulation p27 telah dikaitkan dengan downregulation skp2 melalui ErbB - 2 atau EGFR inhibisi ( 16,18,31 ) .Dalam sampel ini ada perbedaan yang signifikan antara p27 positif dan negatif leukoplakia . Sebagian besar leukoplakia p27 negatif EGFR positif . Penelitian sebelumnya telah menunjukkan bahwa gefitinib ( ZD1839 , Iressa ) , EGFR tirosin kinase inhibitor , menyebabkan pertumbuhan penangkapan " in vitro " bertepatan dengan upregulation p27 ( 16-18 ) Hasil kami konsisten dengan temuan ini dan menyarankan EGFR yang diberikannya peran dalam pengendalian proliferasi sel dalam OL melalui p27 , tapi tidak meningkatkan Ki - 67 .Hubungan antara p27 dan displasia juga diamati pada lapisan epitel parabasal . Ekspresi p27 cenderung berkurang di hadapan displasia , yang sesuai dengan temuan sebelumnya ( 21,30 ) . Hal ini menunjukkan bahwa perubahan dalam ekspresi p27 mungkin mendahului tahap invasif tumorigenesis lisan dan mencerminkan perubahan dalam kontrol pertumbuhan sel displastik .Kesimpulannya ekspresi EGFR sering terjadi pada leukoplakia oral, terutama pada mereka lesi yang terletak di dasar mulut dan lidah . Asosiasi p27 dengan EGFR waran penyelidikan tambahan , dan , di masa depan, memungkinkan untuk pilihan pengobatan baru untuk leukoplakia parah melalui inhibitor EGFR .