Isolasi inhibitor angiotensin 1 converting enzim (ace) dari hidrolisat jeroan bandeng ,oleh mastori,...
-
Upload
mastori-rodin -
Category
Documents
-
view
230 -
download
0
Transcript of Isolasi inhibitor angiotensin 1 converting enzim (ace) dari hidrolisat jeroan bandeng ,oleh mastori,...
Isolasi Inhibitor Angiotensin 1-Converting Enzim (ACE) dari hidrolisat jeroan
bandeng
Chanos chanos Forsk.
USULAN PENELITIAN S1
Oleh: MASTORI
04/PN/177615/09995PEMBIMBING : 1. Dr. Ir. Ustadi, M.Sc.
2. Dr. Ir. Iwan Yusuf B.L. ,M.sc.
LETAR BELAKANGHIPERTENSI PENYAKIT ENDEMIK• 15-29% PENDUDUK DUNIA
MENDERITA• MENYERANG TARGET ORGAN UTAMA
PENGOBATAN • EFEK SAMPING• 1-2 BULAN
JEROAN BANDENG• LIMBAH BERPOTENSI SEBAGAI
HIDROLISAT• MENINGKATKAN NILAI TAMBAH
HIDROLISAT
TUJUAN
MENGETAHUI KEKUATAN INHIBITOR
• HIIDOLISIS PAPAIN• HIDROLISIS TRIPSIN
MENGISOLASI
• INHIBITOR ACE
METODOLOGIBAHAN Jeroan ikan
bandeng( Chanos chanos Forsk.)
ACE ( Angiotensin Converting Enzyme)
Substrat ACE (hippuryl-histidyl-leucine)
Buffer Sodium Borat, NaCl 0,5 M, HCl 1 M,
Etil Asetat Aquades, SP-Sephadex C25 (35x350
mm), SP-Spadedex G-25 (2,5 x
150 cm) enzim papain dan tripsin,
ALAT Tabung dan gelas
inkubasi, mikro pipet tabung reaksi, sentifuse, freez dray UV-Spectrofotometer, Inkubator kromatografi, Electroforesis SDS-PAGE, alat uji protein,
CARA KERJA
Jeroan bandeng dibersihkan dan direbus
Dihomogenkan diatur : HCl 1 /NaOH 1 N ( papain pH5,5 & tripsin pH8,5)
Tambahkan enzim ( papain & tripsin secara terpisah) 5% b/b protein
inkubasi 50 0
C 2jam papain& 35 0
C 2jam & diinaktivasi pada suhu didih air 10 menit
Dipisahkan & disaring , disentrifus 10 menit 110.000 rpm ( hidrolisat)
Preparasi hidrolisat
Pengujian inhitor ACEPencampuran dan inkubasi• 50 µ l sampel • 50 µ l larut ACE
( 25 munit/ml)• pre-inkubasi; 37
oC, 10 menit • 150 µ l substrat
( 8,3 mM HHl) Diinkubasi ;37 oC, 30’
ekstraksi• 250 µ l 1 M HCl • ekstrasi 0,5 ml
etil asetat• sentrifus ( 800
gravitasi, 15’• 0,2 ml supernatan
ke tabung ujiPengukuan absorbansi• Dievaporasi suhu
ruang 2 jam ( didalam vakum)
• Dilarutkan 1 ml aquades
• Diukur 228 UV-spectrophotometer
KONSENTRASI PENGHAMBATAN IC 50
Presentase penghambatan (%) = ([Ec – Es]/[Ec – Eb]) x 100
Es = absorbansi larutan test Ec = absorbansi larutan control Eb = absorbansi larutan blank IC50 diperoleh jika larutan test
menghambat 50% aktivitas ACE
Isolasi inhibitor ACE menggunakan kromatografi
berlapis Ion Exchange : Fasa tetap: SP-Sephadex
C25Fasa bergerak: buffer sodium borat 20 mM ( pH 4)Linier gradient NaCl (0-2 M)
Gel-filtration : fasa tetap: SP Sephadex G 25 fasa bergerak: aquades kecepatan aliran rata-rata 30 ml/ jam, setiap fraksi dalm tabung 5 ml.
Pengujianyangdilakukan dari fraksi yang
diperoleh Uji aktifitas inhibitor ACE Uji kadar protein Uji kemurnian protein
dengan elektroporesis ( SDS-PAGE )
Gambaran UMUM yang akan dilakukan
Jeroan Bandeng
hidrolisat
SP Sephadex C25
Fraksi-fraksi
SP Sephadex G25
Fraksi-fraksi
Uji Kemurnian Isolat
Uji inhibitor ACE (220nm)
Uji protein (280nm)
Uji Inhibitor ACE (220)
Uji protein (280nm)
Uji Inhibitor ACE (220)
Papain Tripsin
TERIMAKASIH