INTERAKSI ANTIGEN-ANTIBODI

Riyani Wikaningrum

Bagian Mirobiologi

Fak. Kedokteran Univ. Yarsi

Pendahuluan

Ikatan antara Ag dan Ab bersifat spesifik Ikatan Ag dan Ab in vitro dipakai dalam diagnosis pemeriksaan serologi

Tujuan: Mendeteksi Ag (suatu patogen) dengan memakai Ab

yang telah diketahui Mendeteksi Ab dengan memakai Ag yang telah

diketahui

Contoh: Penentuan serotipe bakteri Penentuan Ab terhadap infeksi virus Herpes adanya

Ab spesifik dalam serum penderita

Pendahuluan (lanj)

Macam:

Presipitasi

Aglutinasi

Pengikatan komplemen

Syarat agar interaksi Ag-Ab in vitro ini dapat terihat Cross-lingking antara molekul Ag dan Ab

Cross-lingking Ag-Ab

No Cross-linking

Aglutinasi

Reaksi Ab dengan Ag berupa partikel atau yang diikatkan pada partikel

Partikel yang dapat dipakai:

Sel darah merah Hemaglutinasi

Latex Latex agglutination

Bakteri Koaglutinasi

Pemeriksaan semikwantitatif

Dapat menentukan Titer

Agglutination

Latex Agglutination

Interpretasi Tes Serologi

Kenaikan titer pemeriksaan serum akut dan

konvalesen >= 4x Infeksi baru

IgM

IgG

HEMAGGLUTINATION

Hemaglutinasi

Negatif aglutinasi

1/2

1/4

1/8

1/1

6

1/3

2

1/6

4

1/1

28

1/2

56

1/5

12

Positif aglutinasi

Hemagglutination

Treponema pallidum hemagglutination test (TPHA)

Tes spesifik untuk deteksi antibodi terhadap T. pallidum

Ag T. pallidum diikatkan pada permukaan SDM

Hambatan Hemaglutinasi

Virus yang mempunyai hemaglutinin akan menghemaglutinasi SDM

Apabila hemaglutinin virus ini diikat oleh antibodi spesifiknya, maka kemampuan hemaglutinasinya terhambat Tes Hambatan Aglutinasi

Pada pemeriksaan dilakukan titrasi virus yang akan dipakai

Pemeriksaan serum akut dan konvalesen

Hemagglutination Inhibition

Slide Agglutination

Presipitasi

Ab berikatan dengan Ag yang terlarut

Cross-link antara Ag-Ab akan membentuk endapan

Contoh:

Presipitasi tabung

Presipitasi Agar Tes Elek

Radial Immunodiffusion

Presipitasi tabung

REAKSI PRESIPITASI

CONTOH. PERCOBAAN ELEK - OUCHTERLONY

KUMAN DIFTERI

ANTITOKSIN

DIFTERI

Presipitasi

Gel Immunodifussion

Gel Immunodifussion

Immuno - Electrophoresis

Pengikatan Komplemen

Prinsip Kompleks Ag-Ab mengaktifkan komplen

Untuk melihat adanya ikatan Ag-Ab dipakai indikator Sistem hemolitik atau amboseptor Sel darah Merah dan hemolisin

Ag + Ab (serum pos) + C Tidak hemolise

Ag + Ab (serum neg) + C Hemolise

Complement Fixation

Ag mixed with test serum to be assayed for Ab Standard amount of complement is added

Erythrocytes coated with Abs is added

Amount of erythrocyte lysis is determined

Ag

Patients

serum

Ag No Ag

Ag

Methodology

POSITIF NEGATIF

REMMING

P K P K

P K

lisis lisis lisis

tidak

lisis

tidak

lisis

tidak

lisis

HASIL REAKSI PENGIKATAN KOMPLEMEN

P: Percobaan (tes)

K: Kontrol

Complement Fixation Test

CFT Pos CFT Neg

Immunoassay

Untuk melihat adanya ikatan Ag-Ab, salah satu komponen dilabel.

Label bisa berupa:

Radioaktif Radioimmunoassay

Enzim Enzyme-immunoassay; Immunohistochemistry

Fluorescein Immunoflurescens

Labeled Ab Test

Prinsip ada 2 macam:

Direct label langsung diikatkan pada Ag atau Ab

Indirect kompleks Ag-Ab diikatkan dengan Ab yang dilabel

Metode indirect dipakai untuk meningkatkan sensitivitas pemeriksaan

IFA

Immunofluorescence

Assay

ELISA (Enzyme-Linked Imunosorbent Assay)

Ag (Ab) difiksasi pada permukaan micrititer plate

Enzim yang dipakai

horseradish peroksidase

Alkaline phosphatase

ELISA

Immunobloting

Memakai prinsip Ag atau Ab diresapkan pada suatu kertas (nitroselulose)

Tes sampel diteteskan pada kertas kompleks Ag-Ab diditeksi dengan metode antibodi yang dilabel

Contoh:

Western-blot test

Immunobloting for Dengue IgG/IgM

Ag/A

b level

Day

IgM IgG

Typical Serologic Course

Symptom

NS1 Ag

DAY -7 -6 -5 -4 -3 -2 -1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

Antibody Bite

NS1 Ag

ACUTE INFECTION

CONVALESCENCE STAGE

Incubation

SD Dengue NS1Ag & IgG/IgM

NS1 Ag for early acute phase samples (day 1 ~ 5)

IgG/IgM Ab for early convalescence phase samples

(after day 5 ~ 14)

Ag/A

b level

Day

NS1 Ag

IgM

IgG

Ag/A

b level

Day

NS1 Ag

IgM

IgG

1 2 3 5 7 10 12 1 2 3 5 7 10 12

SD Dengue NS1Ag+Ab Combo

NS1 Ag + Ab Combined test

Ag/A

b level

Day

NS1 Ag

IgM

IgG

Simultaneous detection of Dengue NS1 Ag and IgG/IgM Ab test together !

It will be perfect to diagnosis of dengue infection from acute to convalescent stage !

1 2 3 5 7 10 12

Test Procedure

Western blot

analysis for HIV