Asisten Laboratorium Biomedik Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta2010

Definisi

Metode Konsentrasi protein Spesifisitas Reaksi imunologis Antigen dan antibodi Reaksi enzimatis

Istilah

λ = 450nm Protein = antigen dan antibodi ELISA reader HRP atau AP ABTS atau OPD atau TMB atau pNPP OD

Fungsi

Determinasi konsentrasi protein/ glikoprotein (p53, IL-10, IL-6, IL-2, IFN-γ, dll.)

Determinasi aktifitas ensim (misal : CuZn-SOD).

Determinasi afinitas antibodi terhadap antigen, dalam produksi dan seleksi MoAb.

Jenis ELISA

1. Sandwich ELISA- Polystyrene well telah dilapisi

monoklonal antibodi- sampel adalah antigen- Ditambah antibodi lagi yang

polyclonal dan sudah dilabel enzim- Diberikan substrat enzim- Produk berwarna

HRP/AP

Substrat ensimProduk

kromogenik

Fase solid

Antibodi ke-1

Antibodi ke-2

berlabel ensimAntigen

Ensim HRP/ AP

2. Competitive ELISA- Polystyrene well sudah dilapis antibodi

monoklonal- Tuangkan sampel yaitu antigen yang

belum diketahui- Tuangkan immunogen sebagai

kompetitor yang sudah dilabel enzim- Tuangkan substrat- Produk hasilkan warna

Perbedaannya?

Di grafik yang akan didapat! Kurva sumbu x adalah konsentrasi

protein dan sumbu y adalah nilai OD

OD

Konsentrasi

standart

sandwich

OD

Konsentrasi standart

competitive

Sandwich ELISA Competitive ELISA

1. Memerlukan 2 jenis Ab.

2. Ab ke 2 berkonjugat Ensim.

3. Tidak terjadi kompetisi perikatan antigen, karena tidak memakai kompetitor.

4. Kurva standart : Sigmoid

1. Satu jenis Ab.

2. Immunogen berkonjugat ensim

3. Kompetisi antara immunogen dan antigen teruji

4. Kurva standart :inversi dari bentuk kurva Sandwich ELISA

KIT ELISA Toxoelisa IgG dan IgM Alat: Elisa reader, printer, gelas

ukur, mikropipet,micro tip, glove, pemanas air/incubator thermostat, multichanel micropipette, beaker glass, cawan petri, log book, alat tulis dan marker, masker

Bahan: kit ELISA Toxolisa (kontrol negatif, kontrol positif, calibrator,well,TMB,wash buffer), aquades steril

Prosedur

Persiapan Encerkan semua 1:40 menggunakan

diluent (5mikroliter sampel + 200mikroliter diluent)

Encerkan wash buffer 20x dgn aquades (1ml wash buffer + 19ml aquades)

100μl sampel, NC, PC, kalibrator, dan diluent sbg blanko 10

detik

Inkubasi 37o C, 30 menit

Wash buffer 4x buang, aquades 1x buang

100ul conjugate, 10 detik

Inkubasi 37o C, 30 menitWash buffer 4x

buang, aquades 1x buang

100ul TMB, 10 detik100 ul stop solution

Baca pada absorbansi panjang gelombang 450nm

Pengawasan mutu

Absorbansi blanko harus <0,250 Absorbansi cut off calibrator ≥0,250 Indeks untuk NC dan PC hrs dalam

range tertera pada COA

Interpretasi hasil

Index Toxo IgG/IgM <0,9 = Negatif Index Toxo IgG.IgM 0,9-0,99 =

equivocal Index Toxo IgG/IgM ≥1,00 = Positif

Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih