bahan tugas instrumen

8/8/2019 bahan tugas instrumen

http://slidepdf.com/reader/full/bahan-tugas-instrumen 1/12

Edvotek 100 Series. For 6 Gels (6 lanes per gel). Time Required: 45 min. Destaining is not

required. Results must be analyzed upon completion of electrophoretic separation and cannot

be stored overnight.

This kit demonstrates the basic procedures of agarose gel electrophoresis, including gel

casting, sample application, and separation, using a selected set of dyes that have different

properties and various rates of mobility during electrophoresis.

REQUIREMENTS: Horizontal gel electrophoresis apparatus; D.C. power supply;

visualization system (white light optional); automatic micropipet with tips; pipet pump or

bulb; 250ml flasks; hot gloves and safety goggles; distilled or deionized water; microwave

oven or hot plate; photodocumentation system (optional); balance; latex or vinyl gloves.

CONTENTS: Ready-to-load Dye Samples; Practice Gel Loading Solution; UltraSpec-

Agarose™ Powder; Concentrated 50x Electrophoresis Buffer; 1ml Pipet; 100ml Graduated



Packaging Cylinder; 10 Microtipped Transfer Pipets; Complete instructions, background

information, and study questions.

gambar skematik dari sampel instrument.the electrophesis kapiler yangdiperkenalkan pada sisi kanan dan kromatografi yang terdeteksi di sisi kiri



This is a schematic of the major components of a capillary electrophoresis

instrument. Different capillaries, buffers, and polarities are used in assays for

proteins, carbohydrates, DNA, electrolytes, and many other compounds of

biological interest.

ini adalah skema dari komponen-komponen utama dari alat elektroforesis

kapiler. kapiler yang berbeda, buffer, dan polaritas digunakan dalam tes untuk

protein, karbohidrat, DNA, elektrolit, dan senyawa lainnya kepentingan biologis.

Protein pertama kali dipisahkan dengan elektroforesis menurut biaya.

Isoelectrofocusing (IEF) dilakukan dengan sampel protein dengan setara untuk

ekstrak 8 400 bibit, sesuai dengan sekitar 150μg protein untuk semua sampel.

Protein dari berbagai ekstrak dipisahkan menggunakan gel strip membentuk

gradien pH non-linear amobil 3 sampai 10 (ImmobilineTM DryStrip pH 3-10 NL,

18 cm; Amersham Pharmacia Biotech). Strip yang direhidrasi selama 14 jam

pada 22 ° C dengan tiourea / buffer lisis yang mengandung urea 2% (v / v) Triton

X-100, 20 mM DTT dan protein ekstrak. EF dilakukan pada 22 ° C dalam sistem II

Multiphor (Amersham Pharmacia Biotech) selama 1 jam pada 300 V dan 7 jam

pada 3500 Protein V. kemudian dipisahkan berdasarkan ukuran. Sebelumdimensi kedua, strip gel diequilibrasi selama 2 x 20 menit dalam 2 x 100 ml

larutan yang mengandung 6 equilibrium urea M, 30% (v / v) gliserol, 2,5% (b / v)

SDS, 0,15 M bis- tris, dan HCl 0,1 M (gorg et al, 1987;. Harder et al, 1999.). DTT

(50 mM) ditambahkan ke dalam larutan equilibrium pertama, dan iodoacetamide

[4% (b / v)] untuk yang kedua (et al Harder, 1999.). Gel strip diequilibrasi

ditempatkan di atas gel poliakrilamida vertikal [10% (v / v) akrilamida, 0,33% (b /

v) diacrylamide piperarine, 0,18 M basis Trizma, 0,166 M HCl, 0,07% (b / v)

amonium persulfat, 0,035% (v / v)] Temed. Sebuah solusi denaturing [1% (w / v)

leleh rendah agarosa (Gibco BRL), 0,4% (b / v) SDS, 0,15 M bis-Tris, dan 0,1 M

HCl] telah dimuat di strip gel. Setelah solidifikasi agarosa, elektroforesisdilakukan pada 10 ° C dalam buffer (pH 8,3) yang mengandung 25 mM dasar



PAPER

ELECTROPHORESISElectrophoresis is another separation technique. It is based on the different

mobility of ions (molecules which are charged) in a support which is subjected to

an electric field. Ions run more or less quickly along the substrate according their

charge, size, shape, etc. According to the technique which is used, the apparatusconsists of two small basins which contain an electrolyte, a support (i.e.: filter

paper, cellulose acetate strips, polyacrylamide gel, or a capillary tube), an

electrical DC power supply and two electrodes. Electrophoresis is widely used to

separate substances such as amino acids, proteins, strands of DNA, etc. As in the

case of chromatography, people use different supports and solvents according to

the substances to be separated and the techniques used. C. L. Stong, on the

magazine "Scientific American" proposed an experiment on paper

electrophoresis (4).

1 - As shown by the figure 21, inspired by this article, place two little basins a

few cm (one inch) apart. Pour in the basins an electrolyte made of a teaspoon of table salt and another of baking soda in 300 ml(1 1/2 cups) of tap water. Place a

glass plate on the two basins and on it place a stripe of filter paper soaked with

the electrolyte. This stripe has to be immersed with each end in the electrolyte in

the basin for to complete the electrical circuit. With a pencil, draw a line across

the filter paper and place a little drop of blood on it. Cover the paper with a

second glass plate. Put an electrode into the electrolyte of each basin and apply

45V in direct current (from 4 to 8 Volt per cm). You can obtain this from 5, 9volt

batteries connected in series. With the passing of time, you should see 5 little

spots move toward the negative electrode. These spots are made of different

proteic components of the plasma: globulins (alpha, beta, gamma), albumin andfibrinogen. In reality, to make these substances better visible it is necessary use

http://www.funsci.com/fun3_en/exper1/exper1.htm#contents



a stain such as bromphenol blue. Lacking it, try red cabbage juice.

2 - Try also to separate the components of the substances already used in the

chromatography experiments and observe what it happens. Keep in mind that

some of these substances may not be ionic.

LOOK OUT!: Do not use high voltages for this experiment. Never touch the

electrodes, the electrolytes, or the paper stripe. Take care never to short out the

two electrodes. Finally, we recommend to insert a fuse on one of the two cables.

The fuse will break the circuit when there is too high a current. We suggest about

10 mA. At the end of the migration of the spots, remove the electrodes from the

basins and take off the cables from the batteries.

Elektroforesis merupakan teknik pemisahan. Hal ini didasarkan pada mobilitas

yang berbeda dari ion (molekul yang dibebankan) dalam dukungan yang terkena

medan listrik. Ion berjalan lebih atau kurang cepat sepanjang biaya substrat

menurut mereka, ukuran, bentuk, dll

Menurut teknik yang digunakan, aparatur terdiri dari dua cekungan kecil yang

mengandung elektrolit, dukungan (yaitu: kertas saring, strip asetat selulosa, gel

poliakrilamid, atau tabung kapiler), catu daya listrik DC dan dua elektroda.

Elektroforesis yang banyak digunakan untuk zat terpisah seperti asam amino,

protein, untai DNA, dll Seperti dalam kasus kromatografi, orang menggunakan

pelarut yang berbeda dan mendukung sesuai dengan zat untuk dipisahkan dan

teknik yang digunakan. CL Stong, di majalah "Scientific American" yang

diusulkan percobaan di elektroforesis kertas (4).

- Seperti yang ditunjukkan oleh, angka 21 terinspirasi oleh artikel ini, tempat dua

wastafel kecil beberapa cm (satu inci) terpisah. Tuang di cekungan elektrolityang terbuat dari satu sendok teh garam meja dan lain baking soda dalam 300

ml (1 1 / 2 cangkir) air keran. Tempatkan piring kaca pada dua cekungan dan di

atasnya tempat jalur dari kertas saring direndam dengan elektrolit. Jalur ini

harus direndam dengan setiap akhir dalam elektrolit dalam baskom untuk untuk

melengkapi rangkaian listrik. Dengan pensil, menggambar garis di kertas filter

dan tempat setetes kecil darah di atasnya. Tutup kertas dengan sebuah piring

kaca kedua. Masukkan elektroda ke masing-masing cekungan elektrolit dan

menerapkan 45V pada arus searah (4-8 Volt per cm). Anda dapat memperoleh

ini dari 5, baterai 9volt dihubungkan secara seri. Dengan berjalannya waktu,

Anda akan melihat 5 bintik kecil bergerak menuju elektrode negatif. Bintik initerbuat dari komponen yang berbeda proteic plasma: globulin (alfa, beta,

gamma), albumin dan fibrinogen. Pada kenyataannya, untuk membuat zat ini

terlihat lebih baik itu perlu, gunakan noda seperti biru bromphenol. Kekurangan

itu, mencoba jus kol merah.

2 - Coba juga untuk memisahkan komponen-komponen dari bahan yang telah

digunakan dalam percobaan kromatografi dan mengamati apa yang terjadi.

Perlu diingat bahwa beberapa zat-zat ini mungkin tidak ion.

LIHAT OUT: Jangan menggunakan tegangan tinggi untuk percobaan ini. Jangan

pernah menyentuh elektroda, elektrolit, atau kertas garis. Berhati-hatilah untuk

tidak pendek keluar dua elektroda. Akhirnya, kami sarankan untuk menyisipkan



sekering pada salah satu dari dua kabel. sekering akan mematahkan sirkuit

ketika ada yang terlalu tinggi saat ini. Kami menyarankan sekitar 10 mA. Pada

akhir migrasi tempat, lepaskan elektroda dari cekungan dan melepas kabel dari

baterai.

Elektroforesis

maka partikel itu akan menuju elektrode positif

Terjadinya Elektroforesis Terjadinya Elektroforesis Peristiwa Elektroforesis

Elektroforesis; Pintu Gerbang Penelitian

Biologi Molekular

Tuesday, May 19th, 2009 | 37 Comments Posted by yepyhardi

http://sciencebiotech.net/elektroforesis-pintu-gerbang-penelitian-biologi-molekular/#comments


http://sciencebiotech.net/author/admin/






Paper Electrophoresis. Image from www.funsci.com

Paper Electrophoresis. Image from www.funsci.com

Ternyata mereka menggunakan suatu peralatan yang dapat memisahkan komponen campuran

reaksi hidrolisis tadi, salah satunya yaitu nukleotida ‘siklik’ yang membawa pada kesimpulan

bahwa hidrolisis RNA terjadi melalui pembentukan intermediate posfat siklik. Peralatan itu

mereka namakan ‘elektroforesis‘, yang dibuat dari kertas saring Whatman nomor 3, sebuah

tangki kecil dan berbagai larutan penyangga (buffer ). Nukleotida yang sudah terhidrolisis

ditaruh di atas kertas saring, kemudian arus listrik dialirkan melalui kedua ujung alatelektroforesis.

Arus listrik yang dialirkan ini ternyata dapat memisahkan campuran kompleks reaksi tadi

menjadi komponen-komponennya, ini akibat adanya perbedaan minor antara struktur molekul

RNA yang belum terhidrolisis, zat antara (intermediate) dan hasil reaksi (nukleosida 2′-monoposfat dan nukleosida 3′-monoposfat ) yang menyebabkan mobilitas alias pergerakan

mereka pada kertas saring berbeda-beda kecepatannya. Karena pada akhir proses

elektroforesis komponen tersebut terpisah-pisah, mereka dapat mengisolasi dan

mengidentifikasi setiap komponen tersebut.

Elektroforesis Gel Kanji

Starch Gel Electrophoresis. Image from http://www.terrapub.co.jp

Starch Gel Electrophoresis. Image from http://www.terrapub.co.jp

Selanjutnya teknik elektroforesis dikembangkan untuk memisahkan biomolekul yang lebih

besar. Tahun 1955 Smithies mendemonstrasikan bahwa gel yang terbuat dari larutan kanji

dapat digunakan untuk memisahkan protein-protein serum manusia. Caranya yaitu dengan

menuangkan larutan kanji panas ke dalam cetakan plastik, setelah dibiarkan mendingin kanji

tersebut akan membentuk gel yang padat namun rapuh. Gel kanji berperan sebagai fasa diam

( stationary phase) menggantikan kertas saring Whatman pada teknik terdahulu.

http://lh5.ggpht.com/_qqJS-uiVmpI/ShOgy_UOq7I/AAAAAAAABt8/rS2ktDrGmn0/h0801_09l.jpg?imgmax=640

http://lh3.ggpht.com/_qqJS-uiVmpI/ShOgweoOUlI/AAAAAAAABt0/KccJKPySqXw/exper1_21.jpg?imgmax=640



Ternyata elektroforesis gel yang diperkenalkan Smithies memicu para ilmuwan untuk

menemukan bahan kimia lain yang dapat digunakan sebagai bahan gel yang lebih baik,

seperti agarosa dan polimer akrilamida. Dan penemuan elektroforesis gel kanji di awal karir

Smithies membawanya menerima hadiah nobel bidang kedokteran tahun 2007.

Polyacrilamide Gel Electrophoresis (PAGE)

Polyacrylamide Gel Electrophoresis (PAGE). Image from

www.siumed.eduPolyacrylamide Gel Electrophoresis (PAGE). Image from www.siumed.edu

Teknik elektroforesis gel makin berkembang dan disempurnakan, hingga 12 tahun kemudian

ditemukan gel poliakrilamida ( PAGE = Polyacrilamide Gel Electrophoresis) yang terbentuk

melalui proses polimerisasi akrilamida dan bis-akrilamida. PAGE ini sanggup memisahkan

campuran DNA/RNA atau protein dengan ukuran lebih besar.

Meskipun aplikasi elektroforesis makin berkembang luas, namun ternyata teknik ini masih

menyerah jika digunakan untuk memisahkan DNA dengan ukuran yang super besar, misalnya

DNA kromosom. Campuran DNA kromosom tidak dapat dipisahkan meskipun ukuran

mereka berbeda-beda.

Pulse-Field Gel Electrophoresis (PFGE)

Skema Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE)

Skema Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE)

Pertengahan 1980-an, Schwartz dan Cantor membeberkan ide cerdasnya untuk memisahkan

campuran DNA berukuran super besar menggunakan teknik yang dinamakan Pulse-field

Gradient Gel Electrophoresis (PFGE), yang menggunakan pulsa-pulsa pendek medan listrik

tegak lurus yang arahnya berganti-ganti. Teknik PFGE kini digunakan secara luas oleh para

ahli biologi dalam studi genotyping berskala masif, juga analisa epidemiologi molekular pada

patogen.

Keempat teknik di atas merupakan pintu masuk bagi penelitian-penelitian lainnya dalam

bidang biologi molekular yang kini berkembang sangat pesat. Sulit dibayangkan sebuah

laboratorium biologi molekular dapat menghasilkan sesuatu tanpa teknik elektroforesis.

Tanpa elektroforesis, DNA/RNA yang sedang kita teliti akan bercampur dengan kontaminan

yang tidak kita inginkan, sulit pula membayangkan cara mengetahui ukuran

http://lh3.ggpht.com/_qqJS-uiVmpI/ShOg05PUyII/AAAAAAAABuA/CcGyLaYcRCY/AMG410b.jpg?imgmax=640

http://lh3.ggpht.com/_qqJS-uiVmpI/Sht24QmqihI/AAAAAAAABwI/BCE11IRaeQg/PAGE.jpg?imgmax=640



DNA/RNA/protein yang lebih praktis selain dengan elektroforesis, bahkan teknik DNA

sequencing modern sekalipun sangat bergantung pada teknik elektroforesis ini. Terima kasih

kepada Markham dan Smith yang telah mencoba meneteskan RNA hidrolisat pada selembar

kertas saring dan memisahkannya dengan arus listrik.

bahan tugas instrumen

Documents

Transcript of bahan tugas instrumen