Asupan terus menerus dari senyawa polifenol yang mengandung kakaobubuk mengurangi kerentanan oksidatif LDL dan memiliki menguntungkanefek pada plasma konsentrasi HDL-kolesterol pada manusia

ABSTRAKLatar Belakang: bubuk kakao kaya akan polifenol seperti catechin dan procyanidins dan telah terbukti dalam berbagai model untukmenghambat oksidasi LDL dan atherogenesis.Tujuan: Kami memeriksa apakah asupan jangka panjang cocoa powdermengubah profil lipid plasma pada subyek manusia normocholesterolemic dan agak hiperkolesterolemia.Desain: Dua puluh lima mata pelajaran secara acak untuk menelanbaik 12 g gula / d (kelompok kontrol) atau 26 g coklat bubuk dan 12 ggula / d (kakao kelompok) selama 12 minggu. Sampel darah dikumpulkansebelum studi dan 12 minggu setelah asupan minuman tes. Plasmalipid, LDL kerentanan oksidatif, dan stres oksidatif kemihpenanda diukur.Hasil: Pada 12 minggu, kami mengukur perpanjangan 9% dari baselinetingkatan dalam jeda waktu oksidasi LDL pada kelompok kakao. Iniperpanjangan pada kelompok kakao secara signifikan lebih besar daripadapengurangan diukur pada kelompok kontrol (? 13%). Sebuah signifikanpeningkatan yang lebih besar dalam kolesterol HDL plasma (24%) diamati padakelompok kakao dibandingkan pada kelompok kontrol (5%). Korelasi negatif diamati antara konsentrasi plasma kolesterol HDL dan LDL teroksidasi. Pada 12 minggu, ada penurunan 24% dalamdityrosine dari konsentrasi awal pada kelompok kakao. IniPenurunan pada kelompok kakao secara signifikan lebih besar daripada penurunan pada kelompok kontrol (? 1%).Kesimpulan: Ada kemungkinan bahwa peningkatan konsentrasi HDL-kolesterol dapat berkontribusi pada penekanan oksidasi LDL danbahwa zat polifenol yang berasal dari cocoa powder dapat berkontribusi ketinggian kolesterol HDL

PENDAHULUANBukti menunjukkan thatoxidation LDL memiliki peran patogenikdalam perkembangan aterosklerosis (1). Serapan teroksidasiLDL oleh makrofag dan sel-sel otot polos mengarah pada pembentukan garis-garis lemak, eventin kunci aterosklerosis dini. inilesi vaskular mengumpulkan sejumlah besar lemak, sepertiester kolesterol. Selain itu, LDL teroksidasi menginduksi ekspresi molekul adhesi dalam monosit, seperti sel vaskularadhesi molekul-1 dan adhesi antar molekul-1, danjuga meningkatkan produksi faktor pertumbuhan dengan otot polos

Bahan BahanBubuk kakao disiapkan oleh pemanggangan, retak, dan mengompresi difermentasi dan dikeringkan biji kakao yang diimpor dari Ekuador. Komposisi umum dari bubuk kakao adalah sebagai berikut(Unit / 100 g): 23,0 g protein, 11,5 g lemak, 23,1 g karbohidrat,26,9 g serat, 7,7 g mineral, 377 mg epicatechin, 135 mg katekin,158 mg procyanidin B2, 96.1 mg procyanidin C1, 2192 mgtheobromine, dan 470 mg kafein. The catechin, epicatechin,procyanidin B2, dan procyanidin konten C1 dalam bubuk itudianalisis dengan metode HPLC (11). Reagen lain yang digunakan dalampenelitian adalah produk komersial yang tersedia dari analisis danKelas HPLC.Mata PelajaranDua puluh lima subjek laki-laki Jepang yang sehat berpartisipasi dalamstudi. Studi ini disetujui oleh dan dilakukan di bawahpedoman komite etik Rumah Sakit Tomisaka, daninformed consent diperoleh dari masing-masing mata pelajaran sebelumdimulainya penelitian. Semua subjek tubuh yang normalberat badan dan perokok tanpa bukti penyakit kronis.Tak satu pun dari subyek dikonsumsi? 25 mL alkohol / d atau mengambilobat lain, antioksidan, atau suplemen vitamin. Penelitian inikelompok memiliki rata-rata (? SEM) usia 38? 1 y, berat badan rata-rata64? 1 kg, dan indeks massa tubuh rata-rata (BMI) dari 22,1? 0,2 kg / m2.Rentang konsentrasi plasma total, LDL, dan kolesterol HDL dalam mata pelajaran yang 4.65- 6.41 mmol / L, 2,46-4,92 mmol / L,dan 0,75-2,60 mmol / L, masing-masing.

Desain eksperimentalSubyek dibagi menjadi 2 kelompok sesuai dengan BMI, danTotal plasma, LDL, dan HDL cholesterolconcentrations dankemudian diperintahkan untuk mengkonsumsi salah satu minuman pengujian berikut harianuntuk 12 minggu: 12 g gula pasir / d (kelompok kontrol) atau campuran dari 26 g kakaobubuk dan 12 g gula / d (kelompok kakao). Kakao bubuk adalahdikonsumsi sebagai minuman setelah penambahan air panas, denganminuman tes yang dikonsumsi dua kali setiap hari: sebelum tengah hari danselama sore hari. Pada awal dan pada 12 minggu, subyek berpuasaselama 12 jam, dan kemudian sampel darah dikumpulkan dari vena cubiti menengah ke dalam tabung yang berisi EDTA-2Na. Padawaktu yang sama selama penelitian, sampel urin 24-jam dikumpulkandari 0900 sehari sebelum pengumpulan darah sampai 0900 darihari koleksi. Berat badan, tekanan darah, dan denyut jantungjuga diukur pada awal dan akhir penelitian. Rumahpengiriman makanan dibuat untuk setiap mata pelajaran untuk memastikan bahwamakanan yang sama dikonsumsi dalam 3 d sebelum koleksisampel darah dan urin. Selain itu, untuk mempertahankan normaldiet, subyek menyimpan catatan makanan lengkap seluruhstudi. Catatan makanan 3-d dianalisis dengan Excel FoodFrequency Questionnaire (Kenpakusha, Tokyo, Jepang) pada hari-hari1-3, 26 -28, 54 -56, dan 80-82 dari setiap periode diet. Itusubjek juga diminta untuk menghindari semua produk kakao lainnya danuntuk memimpin gaya hidup yang biasa mereka selama penelitian.Plasma kerentanan oksidatif LDLPlasma kerentanan oksidatif LDL diukur sebagai lagwaktu produksi diena terkonjugasi yang dibentuk oleh generator radikal. Jeda waktu yang ditentukan dengan menggunakan metode yang dijelaskansebelumnya (16, 17). LDL diisolasi dari plasma dengan kerapatan singlespin gradien sentrifugasi (417 000? G, 40 menit, 4 C)dengan menggunakan ultrasentrifus (Optima TLX, Beckman Instruments,Inc, Palo Alto, CA). Kepadatan gradien diatur pada 1 mLplasma dengan penambahan 0,325 g kalium bromida. Konsentrasi protein dari fraksi LDL diukur dengan menggunakanMicro BCA uji protein reagen kit (Pierce, Rockford, IL),segera diikuti dengan uji oksidasi LDL. TerpencilSampel LDL diencerkan dengan phosphate-buffered saline (PBS;pH 7.4) dengan konsentrasi 100? g protein LDL / mL, diikutidengan inkubasi selama 250 menit pada suhu 37 C dengan generator radikal2-2'-azobis (4-metoksi-2,4-dimethylvaleronitrile) (200? Mol /L). Pembentukan diena terkonjugasi dipantau terus menerus setiap 3 menit dengan perubahan absorbansi pada 234 nm denganpenggunaan spektrofotometer (DU800; Beckman Instruments Inc,Palo Alto, CA). Jeda waktu dalam reaksi ini, dinyatakan dalam menit, memberikan penilaian oksidasi LDL dan dihitung dengan menentukan titik persimpangan baseline danfase propagasi kurva absorbansi.Lipid plasma dan LDL oksidatifPlasma VLDL-, LDL, dan HDL-cholesterolconcentrations diawal dan pada 12 minggu diukur oleh elektroforesis cepatpemindaian sistem otomatis (Helena Laboratories, Saitama, Jepang) dengan menggunakan agarosa-gel elektroforesis (18). Triasilgliserol diuji dengan teknik laboratorium standar (BMLInc, Tokyo, Jepang).Antibodi monoklonal mAb-4E6 digunakan untuk mengukurkonsentrasi LDL teroksidasi dalam plasma pada awal dan pada 12 minggu(19). Pengujian ini dilakukan dengan menggunakan tersedia secara komersial immunosorbent assay enzim-linked (ELISA) kit (Mercodia teroksidasi LDL ELIZA, Mercodia AB, Uppsala, Swedia),sesuai dengan instruksi produsen.Kemih penanda stres oksidatifVariabel-variabel berikut diukur sebagai penanda kemihstres oksidatif pada awal dan pada 12 minggu: 8-okso-7,8-dihidro-2'-deoxyguanosine, N?- (Hexanoyl) lisin, dityrosine, bromotyrosine,dan dibromotyrosine. Urine 8-okso-7,8-dihidro-2'-deoxyguanosineKonsentrasi diukur dengan menggunakan tersedia secara komersialELISA kit (8OHdG cek, JaICA; Nikken SEIL Co, Shizuoka,Jepang) sesuai dengan instruksi dari pabriknya, sedangkan kuantifikasi OFN?- (Hexanoyl) lisin dalam urin dilakukan dengan menggunakankromatografi cair-spektrometri massa tandem (LC-MS) seperti yang dijelaskan sebelumnya (20). Kuantifikasi bentuk modifikasi teroksidasitirosin juga dilakukan dengan menggunakan kromatografi cairtandem mass spectrometry LC-MS (Y Kato, N Dozaki, T Nakamura, et al, observasi tidak diterbitkan, 2004).Catechin kemih dan epicatechinJumlah catechin dan epicatechin dalam sampel urindikumpulkan pada awal dan pada 12 minggu dianalisis dengan LC-MSsesuai dengan metode yang telah dijelaskan sebelumnya (21, 22). Laporan-laporan ini sebelumnya menunjukkan bahwa tertelan catechin dan epicatechin yang