7/21/2019 Analisa Pati Pada Nira

1/5

3.1 Prosedur Analisa Komponen Gula dengan HPLC (Suhardi, 1993)

Cara Kerja

Kolom : AMINEXHPX-87H, 300 mm x 7,8 mm resin ion eksklusi

Flow rae : 0,! ml"meni

#eekor : $I# %Reflective Index Detector& '!(

Mo)ile P*ase : A+uaes #mine)as Ion. aau A+ua)ies/

Konsenrasi Asam ul1a %H24& 0,0' N

Merk : e5kman

u*u : Max !06 enan ekanan oma saa oerasi 344 si

isem Elusi : Isokraik

9aku : '! meni

Preparasi Sampel

'/ amel iim)an se)anak ! ram an iina*kan ke alam a)un senri1us olieilen

se)anak !0 ml

2/ amel )e)as lemak iam)a*kan 20 ml 5amuran eanol a)solu:air %80:20&, animasukkan ke alam a)un senri1us, kemuian ianaskan alam enanas air aa su*u

806 selama 30 meni/ elain iu isenri1us enan ke5eaan minimum 2000 rm selama

'0 meni

3/ uernaan an iaa iam)a*kan laruan P)-asea '0; se)anak 2 ml/ Kemuian

isenri1us lai an iisa*kan suernaanna

4/ Enaan an iaa iam)a* 20 ml 5amuran eanol a)solu:air %80:20& iko5ok an

isenri1us, suernaanna ia)un enan suernaan an iaa se)elumna

!/ eksi '0 l

'0/ Per*iunan kaar ula iasarkan aa inerolasi ari kur=a sanar enan menunakan

reresi linier

Cara Kerja Ala!

'/ Pasan kolom sesuai enan komonen an akan ianalisa2/ iakan eluen %mo)ile *ase& H240,0' N, an akan iunakan alam )ool %eluen ela*

isarin enan keras sarin 0,4! m&

3/ Masukkan selan inle ari uni HP?6 ke alam )ool eluen

4/ Hiukan so konak ke sum)er arus )ereanan 220

!/ Hiukan uni ala %oma, eekor, an rekorer& enan menekan om)ol N

7/21/2019 Analisa Pati Pada Nira

2/5

(/ Aur roram %1low rae& sesuai an iininkan an *ilankan elem)un uara an eriku

alam selan

7/ Hiukan lamu eekor an aur an>an elom)an an iininkan

8/ erikan waku unuk konisionin samai ierole* aris asar %bare line& an raa

@/ unikkan samel %sua* isarin enan 1iler 0,4! m& kealam in>ekor or/ Paa saa

an )ersamaan ekan om)ol sar aa rekorer

'0/ #iamkan )e)eraa saa samai semua komonen an iininkan keluar ke alam

kromaoram i alam rekorer

''/ aninkan enan sanar an iin>eksikan enan =olume an sama enan =olume

samel

Cara "ema!i#an Ala!

'/ 6u5i kolom enan 5ara menalirkan eluen enan 1low rae 0,2 ml"meni selama '0 meni/

Kemuian kolom i5u5i enan eanol selama '0 meni enan 1low rae an sama/ Kolom

ileas kemuian isiman

2/ Maikan lamu eekor3/ Maikan oma

4/ Maikan uni HP?6 enan menekan om)ol FF

!/ 6a)u semua so konak enan sum)er arus

MEB#E ANA?IA PABI"AMI?CM PA#A AMPE? 6AI$: EPE$BI: NI$A BEC, NI$A

KE?APA, NI$A I9A?AN, DCI6E CAH s) na/

?akukan meoe analisa se)aai )eriku:

Prearasi samel:

'/ amel iim)an se)anak ! ram an iina*kan ke alam a)un senri1us olieilen

se)anak !0 ml

2/ amel )e)as lemak iam)a*kan 20 ml 5amuran eanol a)solu:air %80:20&, an

imasukkan ke alam a)un senri1us, kemuian ianaskan alam enanas air aa

su*u 806 selama 30 meni/ elain iu isenri1us enan ke5eaan minimum 2000 rm

selama '0 meni

3/ uernaan an iaa iam)a*kan laruan P)-asea '0; se)anak 2 ml/ Kemuian

isenri1us lai an iisa*kan suernaanna

4/ Enaan an iaa iam)a* 20 ml 5amuran eanol a)solu:air %80:20& iko5ok an

isenri1us, suernaanna ia)un enan suernaan an iaa se)elumna

!/ uernaan iakai unuk eneaan aau analisa ro1il ula %monosakaria ll&, enaaniakai unuk analisa ai"amilum/

(/ $esiu"enaan i5u5i )e)eraa kali enan aseon, enaan"resiu iuakan n

=a5uum o=en su*u 70 o6/ $esiu i*aluskan im)an 300 400 m an ilarukan

enan a+ua)ies '0 ml/

7/ 6amuran iii*kan enan waer)a* 4 >am/ eela* inin am)a*kan laruan )u11er

asea 0,3 ml an am)a*kan 0,4 ml ensim amilolukosiase %('00 uni"ml/ ima

7/21/2019 Analisa Pati Pada Nira

3/5

6*emi5al, / ?ouis& an )e)eraa ees oluene/ 6amuran i inku)asi aa 37 o6

selama 24 >am/

8/ 6amuran i i a*kan ke !0 ml la)u ukur se5ara kuaniai1 an iam)a*kan eanol

8!; samai aris )aas/

@/ 6amuran isarin enan w*aman !4'/ Filra se)anak 2! ml iuakan enan

=a5uum e=aoraor su*u 40 o6 samai ierole* 1ilrae 3 ! ml/

'0/ e)aikna 1ilrae isarin enan seeranka ala ulra1ilrasi/ Danan unakan keras

w*aman, aar umur kolom HP?6 )isa lama an kromaoram an ierole* le)i*

)aus/

''/ amel i in>eksikan aa mesin HP?6 unuk analisa ula an kaar ai alam samel

i *iun

'2/ Kaar ai i *iun %"'00 )a*an&

?uas area eak P? X =ol B# X kons/ B# %"'00 & X Boal resiu %m& X '/000

?uas area eak B# X =ol B? X P?/ resiu %m& X P? awal %& X !!

6aaan: P? samel. B# sanar. eak area luas ermukaan un5ak/

7/21/2019 Analisa Pati Pada Nira

4/5

A$AL%SA L&"AK '&$GA$ GC

Penukuran inka kerusakan lemak ilakukan menunakan ala sekro1oomeri C-=isi)le

enan laruan BA se)aai reaen em)enuk warna %meoe kolorimeri&/ Masin-masin

samel lemak se)elumna ianaskan alam ruan er)uka aa su*u ''0o6 selama 30 meni/

eela* inin, ke alam samel lemak iam)a*kan elaru n-*eksan an a+uaes enan

=olume an sama/ enawa raikal )e)as an i*asilkan ieksraksi enan 5oron isa* an

iisa*kan ari laisan lemak/ ?aruan Maloniale*i an i*asilkan akan )ereaksi enan

BA mem)enuk senawa komleks BA-M#A )erwarna mera* mua/ Inensias warna an

i*asilkan iukur aa an>an elom)an !32 nm an nilai a)sor)ansina se)anin enan

kaar raikal )e)as an i*asilkan %Moore K, e/al/, '@@8&/ Analisa komosisi asam lemak

enan u alir ','! m?"meni %#a=i F, anra P/, 200!&/ #eekor M an iunakan aala* Ele5ron

Muli1ier #ee5or %EM#& 70 Me/ Hasil analisis )erua sekrum massa i)aninkan enan

li)rar 9I??E'47 J NIB47 an eraa aa so1ware

7/21/2019 Analisa Pati Pada Nira

5/5

A$AL%SA ASA" A"%$ '&$GA$ HPLC

Prearasi amel

(0 miliram samel iam)a* 4 ml H6l ( M, kemuian ianaskan selama 24 >am enan su*u

''00 6/ elan>una *asil *irolisis ineralkan enan NaH ( M *ina '0 ml an isarin

enan keras sarin 9*aman 0,2 5/ 2! mikrolier samel iam)a* laruan PA

% ro*alale*i & se)anak 300 ? an iauk selama ! meni/ elan>una, 20 ? samel

imasukkan ke alam in>ekor K6KB/

Analisis amel

amel ianalisis enan menunakan kromaora1i 5air kiner>a ini %*imau ?6 '0& aa

1ase iam kolom ?i5ros*er L '00 $P '8 %'2! x 4 mm,! m &/ e)aai 1ase erak aala* Eluent

A : meanol : !0 mM narium asea : Beera*iro1uran %BHF& an Eluent :(! ; meanol/

Analisa ini ilakukan aa su*u 27 06 enan ke5eaan alir ' ml"meni sera ieeksi enan

eekor 1luorosen aa an>an elom)an 3(0 an 4(0 nm/ anar asam amino an

iunakan se)aai em)anin aala* asam asara, luama, serin, *isiin, lisin, arinin,

alanin, irosin, meionin, =alin, isoleusin, leusin, lisin, an 1enilalanin/Analisis 'a!a

#aa kromaoram asam amino *asil analisis K6KB ianalisa se5ara eskrii1/