BAB III METODE PENELITIAN 3.1 Jenis Penelitian Penelitianiniadalahpenelitiankualitatifdenganmetodedeskriptifyaitu denganmendeskriptifkanataumemberigambarantentanghygienesanitasidan uji kandungan bakteriologis Escherichia coli pada es buah yang dijajakan dipasar jajan Kota Gorontalo. 3.2 Lokasi dan Waktu Penelitian Berikut ini adalah lokasi dan waktu penenelitian : 3.2.1Lokasi Penelitian LokasipengambilansampeldipasarjajanKotaGorontaloyaituseluruh pedagangesbuahsebanyak6(enam)pedagang,danujikeberadaanbakteriE. coli dilaksanakan pada laboratorium jurusan kesehaatan masyarakat UNG. 3.2.2Waktu Penelitian Waktu penelitian dilaksanakan pada 28 Mei 9 Juny 2012. 3.3 Objek Penelitian Objek dalam penelitian ini adalah es buah yang dijual oleh pedagang kaki limadipasarjajanKotaGorontalosebanyak6pedagang.Selainmelakukan pemeriksaanlaboratorium,penelitijugamelakukanobservasidanwawancara mengenai hygiene sanitasi pada pengolahan makanan dan minuman. 3.4 Teknik Pengumpulan Data Padapenelitianinimenggunakanteknikpengumpulandatamenggunakan data primer, data primer adalah data yang diperoleh dari hasil penelitian, berupa : a)Data hasil observasi langsung ke lokasi menggunakan lembar obsevasi danmengadakanwawancaralengsungkepadapenjual/pembuates buah. b)Datahasilpemeriksaanlaboratoriummengenaiadatidaknyadan jumlah E. coli yang terkandung dalam es buah. 3.5 Definisi Operasional 1.Esbuahmerupakansebuahhidanganyangmengandungberbagaimacam buah-buahanyangdisediakansesuaiselera.Biasanyakomposisibuah-buahan yang terkandung adalah buah papaya, nangka, apel, alvokat, melon danlainsebagainyasesuaiselera,lalumencampurkannyadengankuah yang diberi sirop (sop) dan dicampurkan dengangula pasir juga susu cair dan bongkahan es batu 2.Esbuahmerupakansalahsatuusahakecildandijajakantanpakemasan khususyangberadapadapadasuatulokasipenjualanyangdkhususkan oleh pemerintah yaitu pasar jajan Kota Gorontalo. 3.Hygienesanitasipengolahanmakanandanminumanadalahpengendalian terhadaptempat/bangunan,peralatan,orang,danbahanmakanan,yang diukur melalui observasi dan wawancara terhadap responden yaitu pemilik warungesbuahmengenaiaspek-aspekhygienesanitasipengolahanes buahdipasarjajanKota GorontaloTahun 2012yang disesuaikan dengan KepmenkesRINo.942/Menkes/SK/IIV/2003apakahmemenuhisyarat atau tidak memenuhi syarat. 4.Pengolahan makanan dan minuman adalah proses pengubahan bentuk dari bahan mentah menjadiyang siap saji. Pengolahan makanan dan minuman yangbaikadalahyangmengikutikaidahhygienesanitasimakanan pengolahan makanan. 5.Pemeriksaan E. coli adalah pemriksaan jumlah E. coli dalam minuman es buahyangmerupakanindikatorpencemarandalamminumanesbuah tersebut. Memenuhi syarat bakteriologis apabila, jika E. coli dalamminumantersebutsesuaidengansyaratKepmenkesRI No.907/Menkes/SK/VII/2003 yaitu 0 dalam 100 ml sampel.6.KandunganE.colidalamesbuahadalahbanyaknyaE.coliyang ditemukan pada minuman es buah yang merupakan indikator pencemaran, sesuaiKepmenkesRINo.907/Menkes/SK/VII/2003.Memenuhisyarat apabila 0 per 100 sampel (negatif), tidak memenuhi syarat apabila 0 per 100 ml sampel (positif). 3.6 Prosedur Penelitian Prosedurkerjadalampenelitianiniterdiridariduatahapanyaitusebagai berikut : 3.6.1Pengambilan Sampel dan Pengiriman Kelaboratorium a)Mempersiapkanwadahsampel(berupabotolkaca)sebanyak6(enam) buah b)Wadah tersebut kemudian disterilisasi kedalam oven dengan suhu 160selama 2 jam. c) Memasukkan es buah kedalam wadah sebagai sampel. d)Botol sampel diberi nomor kode dengan menggunakan spidol. e)Kemudian semua sampel dimasukkan kedalam satu tempat. f)Selanjutnyasampeldibawakelaboratorium,sampelharussampai dalam waktu tidak lebih dari 2 jam. 3.6.2Peralatan dan Bahan Berikutiniadalahalat-alatdanbahan-bahanyangdigunakandalam penelitian: 1.Alat alat yang digunakan : Wadahkhususuntukpengambilansampel(botolkaca),tabungreaksi, tabung durham, pipet 10 ml, cawan petri, gelas ukur, gelas kimia, jarum ose, rak tabung reaksi, inkubator, autoclave, hot plate, vortex, neraca digital, Bunsen. 2.Bahan bahan yang digunakan : LB(lactossabroth)EMBA(EosinMethilynBlueAgar),aquadessteril, alcohol 70 %, dan kapas steril 3.7 Cara Pemeriksaan Laboratorium PemeriksaanakandilakukandenganmetodeMostProbableNumber (MPN)yaitu dengan3.7.1Uji Penduga Media yang digunakan adalah Laktosa Broth (LB) : Cara Pemeriksaan : a.Menyiapkan9tabungreaksiyangmasing-masingberisimediaLaktosa Brothsebanyak1,17gryangtelahdilarutkankedalamaquadessebanyak 90 ml. Tabung disusun pada rak tabung reaksi dan diberi tanda. b.Larutantersebutdipanaskandiataskomporlistrik(HotPlate)sambil diaduk rata 10-15 menit,. c.Memasukkan tabung durham dalam posisi terbalik kedalam tabung reaksi. d.Kemudian memasukkan kedalam Autoclave dengan suhu 120C selama 15 menit. e.Mengencerkanbahanpemeriksaan(sampel)yaitudenganmemblender buahdankuahesbuahmenjadisatu,kemudiantuangkembalidalam masing-masing wadah kaca. f.Mengambil bahan pemeriksaan (sampel yang telah diencerkan) yang telah disiapkan dengan pipet. g.Kemudiandarimasing-masingsampelsebanyak100ml,diambil1ml untukdiencerkankedalamtabungpengenceran10 yangtelahberisi aquadessterilsebanyak9ml,setelahitudaritabungpengenceran10 diambil1mluntukdiencerkankedalamtabung10 yangtelahberisi aquadessterilsebanyak9ml,kemudiandaritabungpengenceran10 diambil1mluntukdiencerkankedalamtabung10 yangtelahberisi aquadessebanyak9ml. pengenceranmenggunakan9seritabung,yaitu3 tabunguntukpengenceran10 ,danseterusnyasampai10 .Darihasil pengenceran10 ,10 ,dan10 masing-masingdiambil1mldan diinokulasikan kedalam tabung reaksi yang berisi LB dan tabung durham. h.Semuatabungreaksidiinkubasikanpadasuhu34C-37Cselama2x24 jam. i.Setelah1x24jamdiperiksaadatidaknyapembentukangaspadatabung durhamdenganmencatatsemuatabungyangmenunjukkanperagian Lactosa(pembentukangas),danbilaterbentukgaspadatabung dilanjutkan dengan Uji Penguat. j.Apabilaujidalamwaktu1x24jamtidakmembentukgas,dimasukkan kembalikeinkubatorpadasuhu37Cselama24jam.Bilaterbentukgas padatabungdurham,halinimenunjukkanpositifE.colimakauji dilanjutkan dengan Uji Penguat. 3.7.2 Uji Penguat Media yang digunakan adalah EMBA (Eosin Methilyin Blue Agar). Uji ini untuk menegaskan hasil positif dari Uji Penduga. Cara pemeriksaan : a.Tiap-tiap tabung penduga yang positif, dipindahkan 1 ose kedalam tabung penguat yang berisi EMBA. b.Tabungpenguatdiinkubasikanpadasuhu37Cselama24jamuntuk memastikan adanya E.coli. c.Pembacaandilakukanselama2x24jamdenganmelihatjumlahtabung EMBA yang menunjukkan positif gas. d.Pembacaan dari Uji Penguat dilakukan dengan menghitung jumlah tabung yangmenunjukkanadanyagaspadasemuatabungyangdiinkubasikan padasuhu37C.AngkayangdiperolehdicocokkandengantabelMPN dengan rumus : MPN Sampel = Nilai MPN Tabel 1/faktor pengenceran ditengah. 3.8 Aspek Pengukuran Aspekpengukuranadalahmelihatgambaranhygienesanitasipengolahan esbuahdipasarjajanKota.Jikasalahsatupertanyaandariobservasihygiene sanitasipengolahantidaksesuaidenganKepmenkesRINo. 942/Menkes/SK/VII/2003tentangpersyratanhygienesanitasipengolahan makanan jajanan, maka tahap tersebut tidak memenuhi syarat kesehatan. Observasidilakukandenganmenggunakanlembarobservasiberupa pernyataanyangyangmenyajikan2(dua)kategorijawaban,yaituyadan tidakdenganmengobservasihygienesanitasipengolahanminumanesbuah kepada konsumen dan pengukuran akan menggunakan 2 (dua) skor yaitu : 1.Yang termasuk kategori Ya (a) skornya= 12.Yang termasuk kategori tidak (b) skornya= 0Dengan standar :> 50= Memenuhi syarat< 50= Tidak Memenuhi Syaratmerupakankategoridanstandaryangsesuaidenganketentuandari Kepmenkes RI No.942/Menkes/SK/VII/2003. 3.9 Analisis Data Datayangakandiperolehdarihasilobservasihygienesanitasipengolahn minumanesbuahyangtelahdiolahdanakandianalisissecaradeskriftif, kemudian akan disajikan dalam tabel distribusi frekuensi dan dinarasikandengan datahasilpemeriksaanbakteriologisesbuahyangdiperolehdaripemeriksaan laboratoriumdanibandingkandenganKepmenkesRINo. 907/Menkes/SK/VII/2002tentangsyaratsyaratdanpengawasankualitasair minum.ApabilaterdapatjumlahE.colilebihdari0dalam100mlsampelair maka tidak memenuhi syarat.