LAPORAN KEGIATAN LABORATORIUM

SEMESTER GANJIL 2011/2012

I. Pendahuluan

Praktikum toksikologi dimaksudkan untuk memberikan pemahaman dan

pengembangan teknik dasar dalam analisis toksikologi tentang dasar-dasar analisis

serta melatih menginterpretasi data hasil analisis toksikologi. Praktikum ini memiliki

tujuan agar mahasiswa mampu dalam melaksanakan dan menerapkan pengetahuan

dan keterampilannya sesuai dengan keahliannya, mampu menerapkan ilmu dan

teknologi di bidang praktek analisis toksikologi secara professional, mampu

melaksanakan penampisan dan penerapan teknologi maju di bidang analisis

toksikologi, menggunakan alat-alat laboratorium untuk melakukan analisis

toksikologi, mampu bekerjasama dengan tenaga kesehatan lain nantinya,

membimbing dan membina mahasiswa tersebut untuk menjadi tenaga kesehatan yang

bertanggungjawab.

II. Jenis Kegiatan

No Kompetensi Substansi Kajian Mata Kuliah

SMT/KET.

1Mahasiswa mampu melakukan preparasi sampel darah dan urin

Preparasi sampel darah dan urin.

Praktikum Analisis

Toksikologi

Pemisahan sampel darah dan urin dari pengotor atau zat-zat yang tidak diinginkan (selain analit).

Perolehan plasma, serum, eritrosit dan whole blood dari sampel darah.

Pengamatan dan penanganan sampel urin.

2 Mahasiswa mampu melakukan penetapan kadar asam salisilat dalam sampel serbuk dengan titrasi asam-basa

Penetapan kadar asam salisilat dalam sampel serbuk dengan titrasi asam-basa.

Praktikum Analisis

Toksikologi

Pembakuan larutan asam dan basa.

Titrasi asam-basa (titrasi balik dan titrasi langsung).

Penetapan kadar asam salisilat dalam

sampel serbuk.3 Mahasiswa mampu

melakukan penetapan kadar parasetamol dalam tablet dengan menggunakan spektrofotometri UV-Vis.

Penetapan kadar parasetamol dalam tablet dengan menggunakan spektrofotometri UV-Vis

Praktikum Analisis

Toksikologi

Pembuatan kurva hubungan konsentrasi parasetamol dan absorbansi pada panjang gelombang maksimum.

Pembuatan persamaan regresi linier.

Penentuan kadar parasetamol dalam tablet dengan spektrofotometri UV-Vis dengan kurva kalibrasi dan persamaan garis regresi linier.

4 Mahasiswa mampu melakukan uji skrining senyawa golongan narkotika atau psikotropika pada darah atau urin pecandu narkoba dengan teknik immunoassay.

Uji skrining senyawa golongan narkotika atau psikotropika pada darah atau urin pecandu narkoba dengan teknik immunoassay

Praktikum Analisis

Toksikologi

Uji skrining senyawa golongan narkotika atau psikotropika pada darah atau urin pecandu narkoba dengan teknik immunoassay menggunakan striptest

Penginterpretasian hasil uji skrining dengan teknik immunoassay.

5 Mahasiswa mampu melakukan pemisahan obat-obat golongan amfetamin dan opiat dari sampel urin.

Uji Konfirmasi dan Metode pemisahan obat-obat golongan amfetamin dan opiat dari sampel urin

Praktikum Analisis

Toksikologi

Pengerjaan dan penyiapan sampel untuk ekstraksi cair-cair dan ekstraksi fase padat.

Ekstraksi obat-obat golongan amfetamin dan opiat dari sampel urin dengan ekstraksi cair-cair dan ekstraksi fase padat

6 Mahasiswa mampu melakukan uji konfirmasi senyawa golongan narkotika atau

uji konfirmasi senyawa golongan narkotika atau psikotropika pada urin pecandu narkoba

Praktikum Analisis

Toksikologi

Penyiapan plat KLT- spektrofotodensitometri.

psikotropika pada urin pecandu narkoba dengan metode KLT-spektrofotodensitometri.

dengan metode KLT-spektrofotodensitometri.

Pelatihan penggunaan alat spektrofotodensito-metri.

Analisis senyawa-senyawa golongan narkotika atau psikotropika berdasarkan hasil uji konfirmasi.

ANALISIS TOKSIKOLOGI

PREPARASI SAMPEL DARAH DAN URIN

Matakuliah : Praktikum Toksikologi

Pembimbing : Ni Made Widi Astuti, S. Farm., M.Si.

A.A.A. Mirah Widya Listyani, S. Farm., Apt.

Wayan Martadi Santika, S. Farm., Apt

Tujuan Umum :

Mahasiswa mampu melakukan preparasi sampel darah dan urin.

Tujuan Khusus :

Mahasiswa memisahkan atau menyingkirkan pengotor atau zat-zat yang tidak

diinginkan (selain analit) dari sampel darah dan urin.

Mahasiswa mampu memperoleh plasma, serum, eritrosit dan whole blood dari

sampel darah.

Mahasiswa mampu melakukan pengamatan dan menangani sampel urin.

I. Preparasi Sampel

Preparasi sampel adalah proses penyiapan sampel sebelum dilakukan analisis

yang bertujuan untuk memisahkan atau menyingkirkan pengotor atau zat-zat yang

tidak diinginkan (selain analit) sehingga didapat hasil yang valid (Flanagan, et al.,

2007).

1.1 Sampel Darah

Istilah darah diawali dari kata hemo atau hemato, yang berasal dari bahasa Yunani

haima yang berarti darah. Darah adalah cairan jaringan tubuh yang beredar melalui

arteri, kapiler, dan vena, terdiri atas dua bagian yaitu 55 % cairan interseluler (plasma)

dan 45 % unsur-unsur padat (sel darah). Volume darah secara keseluruhan kira-kira

merupakan satu per dua belas berat badan atau kira-kira 5 liter (Pearce, 2002).

Darah manusia berwarna merah, antara merah terang apabila kaya oksigen sampai

merah tua apabila kekurangan oksigen. Warna merah pada darah disebabkan oleh

hemoglobin yang mengandung besi dalam bentuk heme, yang merupakan tempat

terikatnya molekul-molekul oksigen (Anonim a, 2009).

Fungsi utama darah adalah mengangkut oksigen yang diperlukan oleh sel-sel di

seluruh tubuh. Darah juga menyuplai jaringan tubuh dengan nutrisi, mengangkut zat-

zat sisa metabolisme, hormon-hormon dari sistem endokrin, obat-obatan dan bahan

kimia asing ke hati untuk diuraikan dan ke ginjal untuk dibuang sebagai air seni

(Anonim a, 2009).

1.1.2 Komponen-komponen Darah yang dapat Dijadikan Sampel Analisis

a. Sel Darah Merah atau Eritrosit

Eritrosit berupa cakram kecil bikonkaf, cekung pada kedua sisinya, sehingga

dilihat dari samping nampak seperti dua buah bulan sabit yang saling bertolak

belakang. Dalam setiap millimeter kubik darah terdapat 5.000.000 sel darah. Jika

dilihat satu per satu warnanya kuning tua pucat, tetapi dalam jumlah besar kelihatan

merah dan memberi warna pada darah. Strukturnya terdiri atas pembungkus luar atau

stroma, berisi masa hemoglobin (Pearce, 2002). Dalam analisis toksikologi, sel darah

merah digunakan sebagai specimen dalam kasus keracunan carbon monoxide, cyanide

dan bahan volatile organic, logam berat, beberapa obat seperti chlortalidone, dan

acetazolamide, karena zat tersebut banyak berikatan dengan sel darah merah. Di

dalam darah, obat mungkin berada baik di dalam plasma atau sel darah merah.

Sampel plasma biasanya tidak bermanfaat pada kasus dimana obat yang terlibat

diketahui berada dalam sel darah merah (Karch, 1997).

b. Plasma

Plasma darah merupakan bagian cair darah berwarna kekuningan, terdiri dari

air, protein, elektrolit, karbohidrat, kolesterol, hormon dan vitamin (Anonim b, 2008).

Jumlah plasma darah dua pertiga dari berat darah. Plasma ini adalah koloid yang

terdiri dari 90% air dan 7% protein. Sepertiga bagian darah sisanya terutama terdiri

dari hemoglobin. Hemoglobin ini sebetulnya adalah protein yang paling banyak

terdapat dalam darah, kira-kira terdapat sebanyak 10% dalam darah, atau kira-kira

50% dari bahan kering darah. Protein plasma ini terdiri dari albumin (4-5%), globulin

(2-2.5%) dan fibrinogen (0,3-0,4%). Selain itu plasma mengandung garam anorganik

(0,9%) dan senyawa organik terlarut lainnya (2,1%) (Apriyantono, 2007).

Plasma lebih sering digunakan daripada serum pada analisis obat, karena dapat

disentrifugasi dengan segera, sedangkan pembentukan serum membutuhkan lebih

banyak waktu (Smyth, 1992).

c. Serum

Serum darah adalah cairan bening yang memisah setelah darah membeku. Plasma

darah berbeda dengan serum darah terutama pada serum tidak terdapat faktor

pembentukan fibrinogen. Jika darah tetap dibiarkan selama 15 menit pada suhu-kamar

dalam suatu tabung tanpa antikoagulan maka serum dan komponen darah lainnya

akan memisah (Flanagant, 2007).

1.2 Sampel Urin

Spesimen urin untuk kepentingan uji analisis biasanya dikumpulkan pada pagi

hari, malam hari ataupun dapat dilakukan kapan saja sepanjang hari. Sangat penting

untuk dilakukan pencatatan terhadap waktu pengambilan urin karena dapat digunakan

dalam penentuan laju produksi urin. Sampel urin acak biasanya ditambahkan

pengawet seperti asam hidroklorik 2 M.

Urin segar berwarna kuning atau kuning-hijau, namun pada penyimpanan

sebagai larutan yang bersifat asam warna urin akan berubah menjadi kuning-coklat

akibat terjadinya oksidasi dari urobilinogen menjadi urobilin. Sampel urin tahan

selama beberapa minggu jika disimpan pada suhu 2-80 C. Namun jika dibekukan (-200

C), sampel urin yang diasamkan akan tahan sampai jangka waktu yang panjang, tapi

sebelumnya dilakukan sentrifugasi terlebih dahulu (Flanagan et al., 2007)

Urin sangat berguna dalam skrining racun karena obat, racun dan metabolit

terdapat dengan konsentrasi yang lebih besar pada urin dibandingkan dalam darah.

Tabel 2.2 Senyawa yang terdapat pada urine

SenyawaJumlah yang disekskresikan

dalam gramN Amoniak 1,4 - 1,0Kalsium 0,005 - 0,4Kalium 1,0 - 5,0Magnesium 0,05 - 0,15Natrium 3,0 - 6,0Klorida 6,0 -9,0Fosfat (dihitung sebagai P) 0,7 - 1,5Sulfat 1,8 - 3,5Urea 20 - 30 Asam Urat 0,25 - 0,75Asam hipurat 0,1 - 1,0Kreatinin 0,5 - 1,8 Asam oksalat sampai 0,03

II. Bahan

Sampel darah

Urin

Buffer saline

EDTA

Asam Sitrat

Metanol

III. Alat

Spuit

Neraca analitik

Sendok tanduk

Kertas perkamen

pH meter

Ball filler

Lemari es/freezer

Pipet volume

Pipet tetes

Eppendorf

Tabung vial + penutup

Tabung sentrifugasi + penutup

Rak tabung reaksi + tabung

reaksi

Sentrifugasi

Tabung vortex

Vortex

IV. Cara kerja

4.1 Perlakuan pada Sampel Darah

1. Cara memperoleh plasma dari darah (prosedur ini dilakukan jika matriks yang

tersedia berupa darah segar)

- Darah segar diambil dengan pipet volume sebanyak 3-5 ml dimasukkan ke dalam tabung

reaksi.

- Dilakukan sentrifugasi dengan kecepatan 1500 rpm selama 15 menit hingga terbentuk

dua fase yaitu fase cair (bagian atas) dan fase padatan (bagian bawah). Fase cair yang

diperoleh dari hasil sentrifugasi ini disebut plasma.

- Fase cair diambil dengan pipet volume dipindahkan ke dalam eppendorf. Plasma

selanjutnya disimpan pada suhu 2-80C.

Skema kerja :

2. Cara memperoleh Serum dari Darah

- Darah sebanyak 3-5 ml diambil menggunakan pipet volume, dimasukkan ke dalam

tabung reaksi.

- Dibiarkan selama 15 menit pada suhu kamar tanpa penambahan antikoagulan.

- Bagian bening yang memisah dari padatan disebut serum. Bagian ini diambil dengan

pipet volume dan dipindahkan ke dalam tabung eppendorf.

3. Cara memperoleh sel darah merah (eritrosit) dari Darah

- Untuk memperoleh eritrosit, darah sebanyak 3-5 ml dimasukkan ke dalam tabung reaksi

dan ditambahkan antikoagulan sebanyak 2 mg per ml darah.

- Dilakukan sentrifugasi dengan kecepatan 3000 rpm selama 10 menit.

- Diperoleh tiga lapisan yaitu plasma (bagian atas), lapisan platelet (bagian tengah) dan

eritrosit (bagian bawah).

- Lapisan plasma, platelet dan sekitar 10 % dari bagian eritrosit dibuang.

- Eritrosit yang masih tersisa selanjutnya dicuci hati-hati dengan cairan isotonik (buffer

saline), gunanya untuk menghilangkan plasma yang mungkin masih tersisa dan melekat

pada eritrosit.

- Sel darah harus digunakan langsung atau disimpan dalam suhu dingin (2-8oC) untuk

mencegah terjadinya hemolisis.

4. Cara memperoleh Whole Blood

- Tabung ditambahkan dengan EDTA sebanyak 2 mg per mL darah. Selanjutnya darah

segar sebanyak 3-5 ml dimasukkan ke dalam tabung tadi.

- Tabung ditutup rapat dan disimpan pada suhu -20oC.

5. Pengendapan protein dari plasma darah

1. Plasma dimasukkan ke dalam tabung.

2. Tabung yang telah terisi plasma ditambahkan dengan metanol sebanyak 2 kali volume

plasma yang digunakan.

3. Dilanjutkan dengan sentrifugasi pada kecepatan 1500 rpm selama 15 menit pada tabung

tersebut.

4. Setelah selesai disentrifugasi, maka akan terlihat lapisan protein padatan (bagian bawah)

dan lapisan cair (fraksi bebas protein) di bagian atas.

5. Lapisan cairan diambil dan ditempatkan ke dalam tabung reaksi yang berlainan dan diberi

tanda.

4.2 Hal-hal yang perlu diamati saat penerimaan sampel urin

Kode Sampel :

Jenis Sampel :

Tanggal dan Waktu Pengambilan :

Tanggal dan Waktu Penerimaan :

Identitas Petugas :

Kondisi sampel saat diterima :

1. Warna :

(dilihat warna urin yang diterima)

2. pH :

(diukur dengan mencelupkan ph-meter strip, bandingkan perubahan warna yang terjadi

dengan gambar yang tertera pada box)

3. Volume :

(diukur dengan pipet volume)

4.3 Penanganan Sampel Urin

- Urin 5-10 ml dimasukkan ke dalam tabung ditambahkan asam sitrat sebanyak 2% b/v.

- Dilakukan sentrifugasi untuk menghilangkan endapan-endapan protein yang mungkin

terdapat dalam urin.

- Bagian cair diambil dan dipindahkan ke tabung lain untuk disimpan pada suhu 2-8oC (urin

dapat tahan selama sebulan) atau disimpan pada suhu -20oC (urin dapat bertahan hingga

bertahun-tahun karena dibekukan).

CATATAN: Untuk cara kerja di jurnal awal dibuat dalam bentuk bagan kerja y..jgn dibuat seperti penuntunKemudian disiapkan lembar (kertas kerja) untuk hasil pengamatan/hasil kerjaSiapkan untuk pretest untuk hari jumat y