BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar belakang

Isolasi mikroorganisme mengandung arti proses pengambilan mikroorganisme

dari lingkungannya untuk kemudian ditumbuhkan dalam suatu medium di

laboratorium(Sarles,1956). Proses isolasi ini menjadi penting dalam mempelajari

identifikasi mikrobia, uji morfologi, fisiologi, dan serologi (Soetarto,2010).

Sedangkan pengujian sifat-sifat tersebut di alam terbuka sangat mustahill untuk

dilakukan (Pelczar,1986).

Prinsip kerja isolasi bakteri cukup sederhana yakni dengan menginokulasikan

sejumlah kecil bakteri pada suatu medium tertentu yang dapat menyusung kehidupan

bakteria. Sejumlah kecil bakteri ini didapat dari bermacam-macam tempat tergantung

dari tujuan inokulasi. Dalam kajian mikrobiologi yang berhubungan dengan sumber

bakteri adalah mikrobia tanah, air, makanan dan udara (Talaro,1999). Pemahaman

mengenai bakteri yang diinokulasikan merupakan hal yang wajib. Inokulasi bakteri

termasuk pula di dalamnya adalah prinsip untuk membuat lingkungan medium

menjadi semirip mungkin dengan medium aslinya (Suharni,1999). Pemahaman ini

meliputi: (Soetarto,2010)

1. Sifat dan jenis mikrobia yang akan diisolasi.

2. Tempat hidup/atau asal mikrobia tersebut

3. Medium yang sesuai untuk pertumbuhan.

4. Cara inkubasi mikrobia.

5. Cara menanam mikrobia.

Perlakuan yang tidak sesuai terhadap isolat mikrobia dapat mengakibatkan

perkembangan kultur mikrobia hasil isolasi terhambat. Sebagai contoh apabila yang

1

diisolasi adalah bakteri acidofil namun dikembangkan dalam medium yang netral

maka pertumbuhan bakteri tidak akan maksimal atau malah akan mati (Talaro,1999).

Teknik dalam menginokulasi bakteri memiliki beberapa variasi metode misalnya

metode goresan (streak plate), metode taburan (pour plate), dan metode apusan

(surface plate). Pemilihan teknik ini didasarkan pada tujuan penelitian/percobaan

(Pelczar,1986).

Apabila ingin mendapatkan kultur murni suatu mikrobia yang digunakan

adalah metode streak plate, karena hasil akhir metode ini adalah berupa kumpulan

sel-sel yang semakin jarang pada ujung streak sehingga dapat diambil bakteri pada

jumlah seluler (satu sel). Selain itu bakteri yang didapat seharusnya merupakan

bakteri yang memang ingin dibiakkan di kultur tersebut dengan kata lain bukan

bakteri kontaminan, sebab yang diambil/dicuplik adalah koloni bakteri yang berada di

atass tr eak yang dibuat dan bukan di luars tr eak. Kelebihan metode ini adalah dapat

segera diketahui adanya kontaminasi. Sedangkan kekurangannya metode ini sulit

dilakukan dan hanya dapat digunakan untuk menumbuhkan bakteri aerob saja.

(Burrrow,1959).

Metode kedua adalah pour plate. Metode ini dilakukan dengan

menginokulasikan sejumlah bakteri ke dasar cawan baru kemudian medium agar cair

dimasukkan dan dibiarkan memadat. Metode ini cocok digunakan apabila kita ingin

menguji apakah suatu koloni bakteri merupakan bakteri yang aerobik, anaerob

fakultatif, ataukah anaerob obligat. Pengujian ini dapat terjadi karena hasil akhir

metode pour plate adalah berupa pertumbuhan bakteri pada dasar medium, tengah

medium, dan pada permukaan medium. Bakteri yang terdapat pada dasar medium

mungkin adalah bakteri anaerob obligat, sedangkan bakteri yang tumbuh pada bagian

tengah medium adalah bakteri anaerob fakultatif, dan bakteri yang tumbuh pada

permukaan adalah bakteri aerob walaupun perlu pengkajian lebih lanjut mengenai hal

ini (Black,1999). Kekurangan metode ini adalah sulit menentukan kontaminan dan

kerapatan mikrobia karena jarak antar koloni terlalu rapat.

2

Metode yang ketiga adalah surface plate. Metode ini dilakukan dengan

menginokulasikan sejumlah bakteri pada medium dan diratakan pada bagian

permukaan medium dengan menggunakandr ygals ki. Metode ini cocok digunakan

apabila ingin mengetahui bentuk koloni alami dari suatu bakteri. Kelebihan teknik ini

adalah mudah dilakukan dan mudah menghitung kerapatan mikrobia.

Kekurangannya sulit mengetahui kontaminasi, untuk mengetahuinya perlu perlakuan

kontrol.

B. Tujuan

Tujuan dari pratikum ini adalah untuk mengetahui cara memisahkan mikroba

dari caampurannya sehingga didapat kultur murni, mengetahui macam-macam koloni

bakteri dan jamur, sehinga dapat membedakan antara koloni jamur dan bakteri dari

bentuk, ukuran, dan bentuk tepi koloninya

3

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

Isolasi mikroba berarti memisahkan satu jenis mikroba dari biakkan campuran

menjadi biakan murni. (populasi sel yang semuanya berasal dari satu sel individu)

(Lim, 1998).

Mikroorganisme dibiakkan dilaboratorium pada bahan nutrien yang disebut

medium. Banyak sekali medium yang tersedia, macamnya yang dipakai bergantung

pada beberapa faktor salah satu diantaranya ialah macam organisme yang akan

ditumbuhkan (Volk, 1993)

Tehnik biakkan murni dapat dilakukan dengan :

1.Metode piringan goresan (streak-platemetod)

Medium agar steril dicairkan, didinginkan pada suhu 450C, dimana dalam cawan petri

steril dan dibiarkan sampai menjadi padat.

2.Metode piringan tuangan (pour-plate metod)

Pertama kali mengadakan piaraan biasanya diperoleh dari piaraan campuran,

piaraan pertama disebut primary culture dan sifatnya murni. Piaraan semacam ini

dapat disimpan tetapi harus diadakan peremajaan dengan memindahkannya ke

medium baru yang disebut piaraan turunan (Sub-culture) yaitu piaraan yang diperoleh

dari piaraan pertama (Dwidjoseputro, 1992).

Persyaratan utama bagi isolasi dan kultivasi fage ialah harus adanya kondisi

optimum untuk pertumbuhan organisme inangnya (Waluyo, 2008).

Sebelum diinokulasi tangan dan tempat kerja disemprot dengan alkohol

dengan menggunakan metode aseptik, jarum inokulasi disterilkan dengan

membakarnya, dengan api sampai jarum tersebut pijar (Pradika, 2008).

Bakteri dari kata latin bacterium (jamak, bacteria) adalah kelompok

organisme yang tidak memiliki membran inti sel. Organisme ini termasuk ke dalam

domain prokariota dan berukuran sangat kecil (mikroskopik), serta memiliki peran

besar dalam kehidupan di bumi.Beberapa kelompok bakteri dikenal sebagai agen

4

penyebab infeksi dan penyakit, sedangkan kelompok lainnya dapat memberikan

manfaat dibidang pangan, pengobatan, dan industri Struktur sel bakteri relatif

sederhana tanpa nukleus/inti sel, kerangka sel, dan organel-organel lain seperti

mitokondria dan kloroplas Hal inilah yang menjadi dasar perbedaan antara sel

prokariot dengan sel eukariot yang lebih kompleks (wahyu, 2010).

Bakteri dapat ditemukan di hampir semua tempat di tanah, air, udara, dalam

simbiosis dengan organisme lain maupun sebagai agen parasit (patogen), bahkan

dalam tubuh manusia. Pada umumnya, bakteri berukuran 0,5-5 m, tetapi ada bakteri

tertentu yang dapat berdiameter hingga 700 m, yaitu Thiomargarita. Mereka

umumnya memiliki dinding sel, seperti sel tumbuhan dan jamur, tetapi dengan bahan

pembentuk sangat berbeda (peptidoglikan). Beberapa jenis bakteri bersifat motil

(mampu bergerak) dan mobilitasnya ini disebabkan oleh flagel. Selain itu jenis

bakteri tertentu dapat membentuk tubuh istirahat yang disebut endospora. Endospora

adalah tubuh kecil yang tahan lama (panas, zat kimia), terbentuk dalam sel dan

mampu tumbuh menjadi organisme vegetatif yang baru jika lingkungan

menguntungkan (Putri, 2011).

Fungi adalah nama regnum dari sekelompok besar makhluk hidup eukariotik

heterotrof yang mencerna makanannya di luar tubuh lalu menyerap molekul nutrisi ke

dalam sel-selnya. Fungi memiliki bermacam-macam bentuk. Awam mengenal

sebagian besar anggota Fungi sebagai jamur, kapang, khamir, atau ragi, meskipun

seringkali yang dimaksud adalah penampilan luar yang tampak, bukan spesiesnya

sendiri. Kesulitan dalam mengenal fungi sedikit banyak disebabkan adanya pergiliran

keturunan yang memiliki penampilan yang sama sekali berbeda. Fungi

memperbanyak diri secara seksual dan aseksual (Madigan, 2005).

Peranan jamur dalam alam sangat besar, ada yang merugikan, berbahaya dan

ada yang menguntungkan. Spesies jamur yang nonpatogen meliputi spesies yang

melakukan perombakan bahan organik dalam tanah, perusak kayu dan bahan lain.

Penyebaran jamur di alam sangat luas. Jamur terdapat dalam tanah, buah-buahan,

dalam air, bahan organik, bahan makanan, sebagai saprofit atau parasit pada tanaman,

5

hewan dan manusia. Spora jamur beterbangan diudara dan spora tersebut akan

berkecambah menjadi sel vegetatif jika jatuh di tempat yang memungkinkan untuk

hidupnya.Walaupun jamur dapat dilihat, namun masing-masing sel adalah

mikroskopik. Jamur tersusun atas benang-benang sel yang disebut hifa. Jika jamur

tumbuh, hifa saling membelit untuk membentuk massa benang yang disebut miselium

yang cukup besar untuk dilihat dengan mata (wahyu, 2010).

Isolasi mikroba dapat dilakukan dengan dua cara yaitu cara penggoresan dan

cara penaburan (Dwidjoseputro, 1992).

1. Isolasi mikroba dengan cara penggoresan

Tujuan utama dari penggoresan ini adalah untuk menghasilkan koloni-koloni

bakteri yang terpisah dengan baik dari suspensi sel yang pekat. Cara ini lebih

menguntungkan bila ditinjau dari sudut ekonomi dan waktu, tapi memerlukan

ketrampilan yang diperoleh dengan latihan. Penggoresan yang sempurna akan

menghasilkan koloni yang terpisah. Ada beberapa teknik goresan, antara lain :

a.Goresan T

Cara kerja antara lain bagi cawan menjadi 3 bagian menggunakan spidol

marker, inokulasi daerah 1 dengan streak zig-zag, panaskan jarum inokulan dan

tunggu dingin, kemudian lanjutkan streak zig-zag pada daerah. 2. Cawan diputar

untuk memperoleh goresan yang sempurna, dan lakukan hal yang sama pada daerah

3.

b.Goresan kuadran

Hampir sama dengan goresan T, namun berpola goresan yang berbeda yaitu

dibagi empat. Daerah 1 merupakan goresan awal sehingga masih mengandung

banyak sel mikroorganisma.Goresan selanjutnya dipotongkan atau disilangkan dari

goresan pertama sehingga jumlah semakin sedikit dan akhirnya terpisah-pisah

menjadi koloni tunggal.

c.Goresan sinambung

-Sentuhkan inokolum loop pada koloni dan goreskan secara kontinu sampai

setengah permukaan agar

6

-Jangan pijarkan loop, lalau putar cawan 1800C lanjutkan goreskan sampai habis.

-Goreskan sinambung umumnya digunakan bukan untuk mendapatkan koloni

tunggal, melainkan untuk peremajaan ke cendawan atau medium baru.

2.Isolasi mikroba dengan cara penaburan

Cara penaburan (pour plate) merupakan cara yang kedua di samping penggoresan

untuk memperoleh biakan murni dari biakan campuran mikroba. Cara ini berbeda

dari cara penggoresan dimana media agar diinokulasi dalam keadaan tetap cair yaitu

pada suhu 450C, dan demikian pula koloni-koloni akan berkembang di seluruh media,

tidak hanya pada permukaan.

7

BAB III

METODE PRAKTIKUM

Isolasi mikroorganisme

1.Jarum ose disiapkan

2.Diambil botol media dan cawan petri berisi biakan murni. Cawan petri tersebut

dipegang ditangan kiri dan ose di tangan kanan.

3.Dipanaskan ose dengan api bunsen sampai pijar. Digerakan naik turun agar alat

ini steril.

4.Diangkat sumbat botol, kemudian dipanaskan mulut tabung dengan bunsen

bolak-

balik sebanyak 2 kali.

5.Jarum ose digoreskan dengan motode gores untuk biakan bakteri dan untuk

biakan

cendawan hanya di titikkan saja pada media.

6.Panaskan kembali mulut tabung reaksi dan tutup lagi dengan disumbat.

7.Inkubasi isolat selama 3 hari kemudian diamati pertumbuhannya dan

morfologinya.

8

Pengamatan Morfologi Mikroorganisme

1. Siapkan isolat bakteri dan jamur.

2.Amati koloni bakteri dan jamur dengan mata telanjang yang meliputi warna, bentuk

koloni,

ukuran diameter koloni, penampakan (mengkilat atau suram), kemudian foto atau gambar

koloni bakteri dan jamur tersebut.

3.Lakukan pengamatan morfologi koloni bakteri dan jamur di bawah mikroskop yang

meliputi warna, bentuk koloni, ukuran diameter koloni, penampakan (mengkilat atau

suram).

4. Foto atau gambar koloni jamur dan bakteri tersebut.

5. Buatlah tabel pengamatan.

9

BAB IV

ALAT DAN BAHAN

Alat

Cawan petri steril

Tabung reaksi

Pipet volume

Vortex

Lampu bunsen

Medium agar tegak

Cotton bud steril

Cling warp

Bahan

Tanah steril

Air steril

10

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

Hasil

A. Isolasi mikroorganisme dari udara dan lingkungan

No. Sumber Bakteri Jamur Keterangan 1. Lingkungan udara Ada - 35 koloni2. Nafas manusia Ada - 26 koloni3. Lingkungan (kulit) Ada - 3 koloni

B. Isolasi bakteri dari sample tanah

Sumber isolat Itensitas

pertumbuhan

Jenis

mikroorganisme

Keterangan

Cawan 10-5 Inkubasi 2x24jam Bakteri

Khamir

60 koloni

2 koloniCawan 10-6 Inkubasi 2x24jam Bakteri

Khamir

2 koloni

6 koloniCawan 10-7 Inkubasi 2x24jam Bakteri 2 koloni

C. Morfologi koloni bakteri

11

NO. Pengamatan Cawan 1

(khamir)

Cawan 2

(bakteri)

Slant

(bakteri)1. Bentuk koloni Tidak teratur Tidak teratur Tidak teratur2. Ukuran koloni - - -3. Pigmentasi koloni Kuning Putih Kuning4. Elevasi koloni Flat Flat Flat5. Tepi koloni Gelombang

halus

Gelombang

halus

Gelombang

halus6. Permukaan koloni Halus Halus Halus7. Konsistensi koloni Mudah di

ambil

Mudah di

ambil

-

8. Emulsifibilitas koloni Larut Larut -9. Bau koloni Bau

menyengat

Berbau Berbau

Pembahasan

Dari praktikum isolasi media yang telah dilakuakan menunjukan bahwa

isolasi yang dilakukan berhasil. Pada media nutrient agar (NA) ditumbuhi oleh

bakteri sedangkan pada media potato dextrose agar (PDA) ditumbuhi jamur. Namun

adapula hasil isolasi media yang mengalami kegagalan. Kegagalan dari isolasi

tersebut di karenakan pada media tersebut telah terkontaminasi oleh bakteri lain,

sehingga mengalami persaingan untuk memperoleh nutrisi untuk pertumbuhan.

Teknik isolasi yang dilakukan pada praktikum ini untuk median PDA yaitu

dengan dengan hanya dititikan saja pada media sedangkan nutrient agar (NA)

dengan metode isolasi goresan sinambung. Adapun teknik isolasi media potato

dextrose agar (PDA) dan nutrient agar (NA) ini dilakukan dengan cara pertama-tama

jarum ose disiapkan, diambil botol media dan cawan petri berisi biakan murni. Cawan

petri tersebut dipegang ditangan kiri dan ose di tangan kanan. Dipanaskan ose dengan

api bunsen sampai pijar. Digerakan naik turun agar pemanasan yang terjadi hingga

12

batas jarum, ose didinginkan selama 30 detik untuk mencegah mikroba mati. Dibuka

cling warp cawan petri dan dipanaskan dengan api bunsen, diambil biakan bakteri

atau jamur dengan ujung jarum ose. Pada botol diangkat sumbat botol terseut,

kemudian dipanaskan mulut tabung dengan bunsen bolak-balik sebanyak 2 kali.

Jarum ose digoreskan dengan motode gores untuk biakan bakteri dan untuk biakan

cendawan hanya di titikkan saja pada media tersebut. Panaskan kembali mulut tabung

reaksi dan tutup lagi dengan disumbat.

Dari hasil pengamatan pada hari ke 3 setelah dilakukannya isolasi jamur

tampak jamur tersebut sudah mulai berkembang dengan ukuran 5,3 cm, warna

koloninya putih, penampakannya seperti kapas, dan tepiannya seperti berbenang-

benang sedangkan bakteri untuk 3 hari setelah isolasi tampak berkembang dengan

warna koloninya tampak putih, penampakannya licin seperti berlendir, dan tepiannya

tak beraturan.

Dari praktikum yang telah dilakukan dapat diketahui perbedaan antara jamur

maupun bakteri. Jamur merupakan organisme eukariotik yang pada umumnya

multiseluler atau bersel banyak. Tubuh jamur tersusun dari komponen dasar yang

disebut hifa. Hifa membentuk jaringan yang disebut miselium, miselium menyusun

jalinan semu menjadi tumbuh buah. Hifa adalah struktur menyerupai benang yang

tersusun dari dinding berbentuk pipa. Warna koloninya putih, penampakannya seperti

kapas, dan tepiannya seperti berbenang-benang sedangkan bakteri adalah organisme

uniselluler dan prokariot serta umumnya tidak memiliki klorofildan berukuran renik

(mikroskopis). Struktur bakteri terbagi menjadi dua yaitu struktur dasar (dimiliki

oleh hampir semua jenis bakteri) meliputi dinding sel, membran plasma, sitoplasma,

ribosom, dna, dan granula penyimpanan dan struktur tambahan (dimiliki oleh jenis

bakteri tertentu) yang meliputi kapsul, flagelum, pilus, fimbria, klorosom, vakuola

gas dan endospora. Bakteri umumnya melakukan reproduksi atau berkembang biak

secara aseksual (vegetatif) dengan membelah diri. Dapat diketahui warna koloninya

tampak putih, penampakannya licin seperti berlendir, dan tepiannya tak beraturan.

13

BAB V

KESIMPULAN

1.Isolasi merupakan cara untuk memisahkan atau memindahkan mikroba tertentu dari

lingkungan, sehingga diperoleh kultur murni atau biakan murni.

2.Biakan murni ialah kultur yang sel-sel mikrobanya berasal dari pembelahan dari

satu sel tunggal atau pun menumbuhkan suatu biakan yang mana di dalamnya hanya

14

terdapat bakteri atau jamur yang kita butuhkan tersebut tanpa adanya kontaminasi

dari mikroba lain.

3.Isolasi mikroba dapat dilakukan dengan dua cara yaitu cara penggoresan dan cara

penaburan.

4.Mikroorganisme dibiakkan dilaboratorium pada bahan nutrien yang disebut

medium.

DAFTAR PUSTAKA

Anonim. 2011. Media Tumbu Bakteri. Sumber: http://antiserra.wen.su/alkes.html.

Diakses pada jam 11.30, 22 Nopember 2011.

Dwidjoseputro, D. 1992. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta: Imagraph.

15

Hadioetomo, R. S. 1993. Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek. PT Gramedia,

Jakarta.

Lim, D. 1998. Microbiology. WCB McGraw-Hill. Missouri.

Madigan. 2005 MT. Brock Biology of Microorganisms (edisi ke-Edisi ke-12). San

Francisco: Pearson Benjamin Cummings. hlm. hlm. 2.

Pradika. 2008. Isolasi mikroorganisme. Http://ekmon-saurus.blogspot.com.

Diakses pada tanggal 8 Desember 2011.

16