Tamizaje de bacterias

productoras de lipasas

•Quince (15) cepas aisladas de la Antártica fueron facilitadas por el Instituto de Investigación Polar de Korea (KOPRI)

•Estas cepas fueron cultivadas a 25 °C por 48 horas en placas de Agar Tricaprilin 1%

1x de solución de goma arábica(Fuente de

carbohidratos)

1% de triptona(Fuente de proteínas)

0.5% de extracto de levadura(Fuente de vitaminas)

0.5% de NaCl(carácter selectivo)

1.5% de agar(Medio físico)

Agar Tricaprilin 1%

Solución Stock de goma arábica

•Volumen: 10x•10% (peso/volumen) de goma arábica•200 mM NaCl (Balance osmótico y transporte)

•50 mM CaCl2 (Estabiliza el medio)

•Cepas que produjeron un halo de hidrolisis grande fueron inoculadas en 5 ml de caldo de Luria-Bertani (LB) y se incubaron a 20°C por 48 horas con agitación de 200 rpm.Caldo LB

• 1% de triptona• 0.5% de extracto de levadura• 1% de NaCl

•Se centrifugaron estos cultivos a 6000 x g durante 10 min a 4°C

•Se separaron los sobrenadantes•Se determino la actividad enzimática de las lipasas mediante el ensayo de la actividad hidrolitica en el p-nitrofenil caprilato