Four Residues of the Extracellular N-Terminal Domain of the NR2A Subunit Control High-Affinity Zn 2+...

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hal-00115561, version 1 - 21 Nov 2006 Author manuscript, published in "N/P"

Transcript of Four Residues of the Extracellular N-Terminal Domain of the NR2A Subunit Control High-Affinity Zn 2+...

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0115

561,

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1 -

21 N

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±±±±@ 2[\:�@-@] Q 8 ±±±±

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±±±±P 2a9:-A-A�Y =�A

±±±±A D�@

±±±±A 2F �21�� 2�4 ± -4 ± 1H ,2 �M 1�4 ± V 2 � ± V 2H -1 M 1 � ± � 21 ±� 2b�:�8-8�c :�A

±±±±@ :-A

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±±±±: D-P

±±±±8 2[\: Q-Q Y =�D

±±±±: =-O

±±±±8 2_ �V � � 1 � ± 5 �d 2H -V^5 S 1 � ± V 2-2 ±� 2F �I �TS 1�1 ±

� 265 ± 1 2H ,I�K M 1^5e3f5 �d VH 2 � I M 1^5e3f5-5 �d IU 2 � � 1�K ± 4 2 ± 1 2H 2 �I M 1 � 3f5 �d 4R 2-2 S J R 2-2 �TS 1�2�3f5�1 �d 4H 2 � ghJ H 2 � 2-` 1�K ± 265 ±� 279A-P-D�; P Q ±±±± Q A-D

±±±±P �

H 2V^5 M 2�I�3f5-5 �d 4H 2V�2� 2�1 ± 2 ,2 ± a9A,<8�Y D�P±±±± Q Q A ±±±±

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hal-0

0115

561,

ver

sion

1 -

21 N

ov 2

006

½��

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hal-0

0115

561,

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1 -

21 N

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� ��5 5Z� � ±� ��5��� 5 0 �� ��� -�?J R 5 ,I S 2�� I ±

� �)K 5G�)2 ±� ��5 5G�)2 ±

� ��5 5Z� � ±� ��5��� 5 0 �� ��� -�?J _ ,2-2 � 4�� � ±

� � 1 5G� 1 ±� ��5 5G� � ±

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� � � 5G� 1 ±� ��5 5G� � ±

� �)2 5Z� K ±� � 2

��� 5 0 �� ��� -�?J � �1-1�` 2�� V ±� �)2 5G�)2 ±

� ��5 5G�)K ±� ��5 5Z� � ±

� ��5��� 5�J�� � K � U � ��� -� 0 � � � 1 ±

� � � 4 5G� � ±� � 2 � ��5�V ±

� � � 5Z� I ±� � 2��� 5�J � � K-I U � ��� �� 0 � � 1�V ±

� � � I 5G� � ±� � � � ,K ±

� � � �� 4 ±� � 1

k\lm�n�ovp p p?q �,�G���G�|�� ���� �\�Gs�r-�y�� ��G�|�� ��?�G,d%r-�)z�������?�G�� �� ���� ����(���,�����X�\�Gs 0 ����d| {z��,�?�G�d� �- ��X� #���������- ��� ��� � �X���������X� 0 �����?���������d���d|�� h�v�� ����GdXz9,��r-�� ��)���L����y ��Xr��?$tJ�2 � �|� ��J/4 � �|��' 0 �y �w ����{�� ��x�������� ��G�x����rf5 � �v ����������� � 5 ��� F� g�� �G�d.��|�Gd-d���d|!#$�!#�J�s������v����d-�y ��x����'L��( �w������?d��{s/st������� #��� z� ��X�es���L���G��w(������ ����,�+ #� �-���+�- ^st��Lr��)z-�������G�� ��)���� ����|���������*�Gs ��� 5 0 �� ��� ��?J H -4-4�� 0 w��x��w 0 ��u��}� ��X�����dv��v 0 �E���������#���)z��

hal-0

0115

561,

ver

sion

1 -

21 N

ov 2

006

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0.5 µA

B

[Zn2+], nM

100 101 102 103 104 105 106

rela

tive

curr

ent

0.0

0.5

1.0

A1

0.2 µA

A4A3

A2NR2Cwt

NR2A/C(553)

0.2 µA

NR2Awt

NR2C/A(564)

1 µA

10 s

*

*

*

*

NR2Awt

NR2Cwt

NR2C/A(564)

NR2A/C(553)

�����������

hal-0

0115

561,

ver

sion

1 -

21 N

ov 2

006

½��

NR2A'(∆N1a)

NR2A'(CN2)

NR2A'(CN3)

NR2A'(CN4)

NR2A'(∆N1-3)tr

NR2A'(∆N1b)

NR2A'(CN5)

NR2A'(CN6)

NR2C(AN1-4)

NR2Awt

NR2Cwt

NR2C/A(564)

NR2A/C(553)

NR2A'

Zn IC50 (M)

10-10 10-9 10-8 10-7 10-6 10-5LIVBP-like

LAOBP-likedomain

domain

�����������

hal-0

0115

561,

ver

sion

1 -

21 N

ov 2

006

½�¾

� ��� � � � 2A 26 AAEKGPPALNI AVLLGHSHDVTERELRNLWGPEQATGLPLDVNVVALLMNRTDPKSLI T 84 2B 27 RSQKSPPSI GI AVI LVGTSD- - EVAI KDAHEKDDFHHLSVVPRVELVAMNETDPKSI I T 83 2C 35 GAGQGEQAVTVAVVFGSSGPL- QTQARTRLTSQNFLDLPLEI QPLTVGVNNTNPSSI LT 92 2D 40 GGTGGARPLNVALVFSGPAYAAEAARLGPAVAAAVRSPGLDVRPVALVLNGSDPRSLVL 98 N1a/ N1b � ��� � � ↓ 2A 85 HVCDLMSGARI HGLVFGDDTDQEAVAQMLDFI SSQTFI PI LGI HGGASMI MADKDPTST 143 2B 84 RI CDLMSDRKI QGVVFADDTDQEAI AQI LDFI SAQTLTPI LGI HGGSSMI MADKDESSM 142 2C 93 QI CGLLGAARVHGI VFEDNVDTEAVAQLLDFVSSQTHVPI LSI SGGSAVVLTPKEPGSA 151 2D 99 QLCDLLSGLRVHGVVFEDDSRAPAVAPI LDFLSAQTSLPI VAVHGGAALVLTPKEKGST 157 ��� � � � 2A 144 FFQFGASI QQQATVMLKI MQDYDWHVFSLVTTI FPGYRDFI SFI KTTVDNSFVGWDMQN 202 2B 143 FFQFGPSI EQQASVMLNI MEEYDWYI FSI VTTYFPGYQDFVNKI RSTI ENSFVGWELEE 201 2C 152 FLQLGVSLEQQLQVLFKVLEEYDWSAFAVI TSLHPGHALFLEGVRAVADASYLSWRLLD 210 2D 158 FLQLGSSTEQQLQVI FEVLEEYDWTSFVAVTTRAPGHRAFLSYI EVLTDGSLVGWEHRG 216 N1b/ N2 � ��� � ↓ � � ����� � � �

2A 203 VI TLDTSFEDA- - KTQVQLKKI HSSVI LLYCSKDEAVLI LSEARSLGLTGYDFFWI V- - 257 2B 202 VLLLDMSLDDGDSKI QNQLKKLQSPI I LLYCTKEEATYI FEVANSVGLTGYGYTWI V- - 258 2C 211 VLTLELGPGGPRARTQRI LRQVDAPVLVAYCSREEAEVLFAEAAQAGLVGPGHVWLV- - 267 2D 217 ALTLDPGAGEAVLGAQ- - LRSVSAQI RLLFCAREEAEPVFRAAEEAGLTGPGYVWFMVG 273 � ��� � �

2A 258 PSLVSGNTELI PKE- - - - - - - - - FPSGLI SVSYDDWDYSLEARVRDGLGI LTTAASSML 307 2B 259 PSLVAGDTDTVPSE- - - - - - - - - FPTGLI SVSYDEWDYGLPARVRDGI AI I TTAASDML 308 2C 268 PNLALGSTDAPPAA- - - - - - - - - FPVGLI SVVTESWRLSLRQKVRDGVAI LALGAHSYR 317 2D 274 PQLAGGGGSGVPGEPLLLPGGSPLPAGLFAVRSAGWRDDLARRVAAGVAVVARGAQALL 332 N2/ N3 � � � � � ↓ ��� � 2A 308 EKFSYI PEAKASCYGQAEKPETPLHTLHQFMVNVTWDGKDLSFTEEGYQVHPRLVVI VL 366 2B 309 SEHSFI PEPKSSCYNTHEKRI YQSNMLNRYLI NVTFEGRNLSFSEDGYQMHPKLVI I LL 367 2C 318 RQYGTLPAPAGDCRSHPGPVSPAREAFYRHLLNVTWEGRDFSFSPGGYLVRPTMVVI AL 376 2D 333 RDYGFLPELGHDCRTQ- - NRTHRGESLHRYFMNI TWDNRDYSFNEDGFLVNPSLVVI SL 390 � ��� � � 2A 367 NKDREWEKVGKWENQTLSLRHAVWPRYKSFSDCEPD… 402 2B 368 NKERKWERVGKWKDKSLQMKYYVWPRMCPETE- EQE… 403 2C 377 NRHRLWEMVGRWDHGVLYMKYPVWPRYSTSLQPVVD… 412 2D 391 TRDRTWEVVGSWEQQTLRLKYPLWSRYGRFLQPVDD… 426

�����������

hal-0

0115

561,

ver

sion

1 -

21 N

ov 2

006

���

[Zn2+], nM

10-1 100 101 102 103 104 105 106

Rel

ativ

e C

urre

nt

0.0

0.5

1.0

NR2A-H44A

NR2A-H128S

NR2A-K233R

NR2A-E266S

NR2Awt

NR2Cwt

�����������

hal-0

0115

561,

ver

sion

1 -

21 N

ov 2

006

� �

pH

6 7 8

rela

tive

curr

ent

0.0

0.5

1.0

[Ni], µM

10 100 1000

rela

tive

curr

ent

0.0

0.5

1.0

A

B

�����������

hal-0

0115

561,

ver

sion

1 -

21 N

ov 2

006