Characterization of salicylic acid-responsive, Arabidopsis Dof domain proteins: overexpression of...

11
Characterization of salicylic acid-responsive, Arabidopsis Dof domain proteins: overexpression of OBP3 leads to growth defects Hong-Gu Kang 1 and Karam B. Singh 1,2, * 1 Department of Molecular, Cell and Developmental Biology, University of California Los Angeles, 405 Hilgard Avenue, Los Angeles, CA 90095-1606, USA, and 2 CSIRO, Plant Industry, Private Bag PO, Wembley, WA 6014, Australia Received 12 October 1999; revised 5 January 2000; accepted 5 January 2000. *For correspondence (fax +61 8 9387 8991; e-mail [email protected]). Summary Dof proteins are unique to plants and contain a single zinc ®nger DNA-binding domain called the Dof domain. OBP1, an Arabidopsis Dof protein, was previously isolated through an interaction with OBF4, an ocs element-binding protein. Two additional Dof proteins, called OBP2 and OBP3, were isolated through homologous screening. All three OBP proteins contain transcriptional activation domains in their C-terminal region. While no signi®cant differences were found between the OBP proteins in terms of their DNA and protein-binding properties, tissue-speci®c RNA expression patterns were found. The RNA expression levels of all three OBP proteins increased following treatment with auxin, salicylic acid (SA) or cycloheximide, although the level of induction varied among the different proteins and in the tissues tested. These results suggest that even though they have similar DNA binding and protein±protein interaction properties, the different OBP proteins are likely to have distinct functions in speci®c parts of the plant. There is a good correlation between the expression of the OBP proteins and the ocs element, a stress-response element which is also induced by auxin, SA and cycloheximide. To begin to analyze the function of the OBP proteins, transgenic lines overexpressing OBP3 were generated. These plants showed a severe growth defect with altered root development and yellowish leaves. The severity of the growth defects correlated with OBP3 expression levels and in some cases led to death, suggesting that some Dof proteins play important roles in plant growth and development. Introduction A detailed knowledge of plant gene regulation is required in order to understand plant growth and development. Emphasis has been placed on analyzing the roles of transcription factors in plants, as transcriptional control is a primary level of gene regulation (see Schwechheimer et al., 1998; Singh, 1998 for recent reviews). One class of transcription factors unique to plants are a novel type of zinc ®nger protein called Dof (DNA binding with one ®nger) proteins (reviewed by Yanagisawa, 1996). Dof proteins contain a highly conserved 52 amino acid region called the Dof domain which contains a single CX 2 CX 21 CX 2 C-type zinc ®nger motif. Dof proteins have been isolated in monocotyledon and dicotyledon species as a result of screens for DNA binding proteins to speci®c promoter elements (De Paolis et al., 1996; Kisu et al., 1998; Yanagisawa and Izui, 1993), by protein±protein interaction screening (Zhang et al., 1995) or by sequence homology (De Paolis et al., 1996; Mena et al., 1998; Shimofurutani et al., 1998; Vicente-Carbajosa et al., 1997; Yanagisawa, 1995). The zinc ®nger in the Dof domain is essential for DNA binding as speci®c mutations in cysteine residues within the zinc ®nger abolish DNA binding, as do the zinc chelators, EDTA and phenanthroline (De Paolis et al., 1996; Kisu et al., 1998; Mena et al., 1998; Yanagisawa, 1995). Binding sites for Dof proteins contain either AAAG or AAGG. For example, the tobacco NtBBF1 binds the ACTTTA sequence in the rolB promoter (De Paolis et al., 1996); the Arabidopsis OBP1 target sequence includes an ACTTTT core (Chen et al., 1996); the maize Dof1 recognizes a CCTTTT motif (Yanagisawa and Izui, 1993); and the maize PBF and barley BPBF bind to a CTTTA motif present in a The Plant Journal (2000) 21(4), 329±339 ã 2000 Blackwell Science Ltd 329

Transcript of Characterization of salicylic acid-responsive, Arabidopsis Dof domain proteins: overexpression of...

�������������� � �������� ������� �� ���� ������� � �� ����� ������ � �������� �� � ���� ���� ��� �� ������

!���"# $���% ��� $���� �& '����%�(�)���������� � � ��� ��� �� �� ���� ����� �� ��� ��������� � �� ����� �� ��� ��� ��� �� ���� ������

�� ��� ��� �� �� �!�"�"� �#�� ��$�#%&'� ( �� %������� (������ ��� ('� )��* ��� )� "���� ������ ��

�������� �� ���� ����� ������ � ����� � ����� ������� � ����� � �������� �� ���������� ���� � � ! �"!# !���� �$%��& '����()*��%� ���� ����+�

'#�����

�� ������ ��� #��*#� � ����� ��� ������ � ����� ��� +���� �,��������� ����� ������ ��� ��

�����& ���%� �� ������� � �� ������� � �����# �� � ����� ���#�� �� ���������� ��� ��-.� ��

� ��������������� ������& / ��������� �� ������ � ������ ���( ��� ����� ��� � ����� ���#��

����# ��������& ��� ����� ��� ������ ������ ���� ��������� ��������� ����� �� �����

���������� �����& 0���� � ����+���� ���������� ��� �#�� ��� ��� ��� ��� ������ �� ���� �

����� �,� ��� �������������� �������� � �� #�� ����+� 1,� ����� �� ������� ��� �#��& /�� 1,�

����� �� ����� � ��� ����� ��� ������ ������ �� ��� ��� ��������� ��� �#���� �������� ���� 2'�3

� ������������� ����#�� ��� ����� � ���#���� ������ ���� ��� ��������� ������ ��� �� ��� �� #�

�� ���& /�� � �� #�� #��� � ���� ���� ��#�� ���� ���� ������ �,� ������� ��� ������4������

���������� �������� � ��� ��������� ��� ������ ��� ��5��� � ���� �� ����� �#����� �� ����+� ���� �

��� �����& /���� � � �� ��������� ��� ��� ��� ����� �� � ��� ��� ������ ��� ��� � ��������

� ��� ��� �� � ������� ���� � �� ���#��� �� �#���� '� ��� ������������& / ����� � ������

��� �#����� � ��� ��� ������ � ���� ����� ���� �������� ��� ���� ��� ���������& /�� � �����

� �� � ����� �� �� ������ ��� ������� �� ���������� ��� ���� � � ����� & /�� ������� � ���

�� �� ������ ��������� ��� ���� ����� �� ����� ��� �� �� �� � ��� � ������ #��� ���� ����

�� �� ������ ���� �������� ��� �� ����� �� �� ��� ����������&

6����#����

, ����&�� '��-&��(� �� �&�� (��� �(�&���� �� �.�� ��

�� � �� � ���� ���� �&�� ( �-) ��� ����&��%���

/%�)���� )�� ���� �&���� �� ���&�0��( )� �&�� ��

���� ����� ���� � �� �&���1 �� ���� ������& ��� �&

�� � � �%� � &���& �� (��� �(�&���� ���� 2�)-��))��%�

�� � �1 ���!� 2��()1 ���! �� ���� ����-�+� �� �&��� ��

���� ����� ���� � ���.�� � �&��� � � � ����& ��� ��

0��� 3�(� � ���� ��&&�� 4�� �45, ������( -�) ���

3�(� + � ����� � ����-�� �� 6���(���-�1 ��� +� 4��

� ����� ������ � )�()&� ����� ��� �� �%��� ����

�(��� ��&&�� )� 4�� ��%��� -)��) ������� � ���(&�

78�78��78�7$��� 0��� 3�(� %���� 4�� � ����� )���

���� ���&��� �� %������&���� ��� �����&���� �������

�� � ���& �� �� ���� �� 45, ������( � ����� � �����3�

� �%�� �&�%��� �4� 9��&�� �� � �1 ��� � :��� �� � �1 ���!�

6���(���-� ��� ;0��1 ���"+1 �� � ����<� ���� ��� �����

�� �����( �=)��( �� � �1 ����+ � �� ��.����� )�%�&�(�

�4� 9��&�� �� � �1 ��� � >��� �� � �1 ���!� 2)�%��� ����

�� � �1 ���!� ?�����$7� ��@��� �� � �1 ���#� 6���(���-�1

����+�

A)� 0��� 3�(� �� )� 4�� ��%��� �� �������& �� 45,

������( �� �����3� %������ �� ������� ������� -�)��

)� 0��� 3�(� ���&��) 45, ������(1 �� �� )� 0���

�)�&�� �1 /4A, ��� �)����) �&��� �4� 9��&�� �� � �1

��� � :��� �� � �1 ���!� >��� �� � �1 ���!� 6���(���-�1

����+� B�����( ���� �� 4�� � ����� ������ ��)� ,,,C

� ,,CC� �� ���%�&�1 )� ������ 5BB�� ����� )�

,7AAA, ��.����� �� )� � � � �%�� �4� 9��&�� �� � �1

��� +� )� , ��������� B9� � (� ��.����� ���&���� ��

,7AAAA �� � �7)�� �� � �1 ��� +� )� %��0� 4��� ���(��0��

� 77AAAA %��� �6���(���-� ��� ;0��1 ���"+� ��� )� %��0�

9B� ��� �� &�� B9B� ���� � � 7AAA, %��� � ���� �� �

+,� ( �� -��� �����+ (%�D+1 "��<""�

����� B&��'-�&& 2������ E� "��

��%�� �� ���� �� �(� � ���� (��� � �%�� � ��

�� ��&� �>��� �� � �1 ���!� ?�����$7� ��@��� �� � �1 ���#+�

6���(���-� ��� 2�)%�� �����+ )��� �� �� %�� � 45,

������($��� ��&����� �� ��� %��0� 4�� � �����1 ���

����� )� �&& )� ��&���� ���� )�� �� ,,,C �� �

��.����� -�) ��%� &�%��� �� ����� �� )� F��'��(

��.������� A)� 4��$������( ���� �� )� �� ��& � �&�%��

(���� � � �%�� �� �� ������� %$�����3� ��� ������

�>��� �� � �1 ���!+1 -)�&� %����� �� )� 4��$������( ���

�� )� � � � �%�� ���� ����� ��� ������ �� �����&

%� ���%� ��� �����&� ����� �B��%��� �� � �1 ����+� A)�

4��$������( ��� -�� �&�� �)�-� � �� �%�� �� �� )�

����� ������� �� )� � � � �%�� �B��%��� �� � �1

����+� 4�� � ����� )��� ���� �)�-� � )��� ���� ��$

����& ������ -�) )� %��0� 4��� ��� �� &�� 9B� � �����

��&� � ������ ���� �����1 -)�&� )� %��0� 4���

� ����� ��� �� �� � ���� ������& �� ���� �>��� �� � �1

���!� 6���(���-� ��� 2)���1 ���!+�

;� )�� ��� -� ���� ��� )� ���&���� ��� �)� ��� �0$

���� �� -� ��- , ��������� 4�� � ����� ��&&�� B9�

��� B9"� G� �&�� �� �� %�� �� )� ������ �� B9�1

-)��) -�� ���&��� � ������&� �=)��( �� � �1 ����+� G)�&�

)� B9 � ����� �)�-�� ��%�&� � ���� 45, ������(1

� ����<� ���� ��� ����� ��� ���� ����� ��������

� ��� ���1 )�� )�� ������ �����$�����3� ��� ������

��� �� ��� �������� ��� �� ��&&�-��( �)�%���& ��$

%���� G� ���� ��� � ���� �&� �� ��� ( �-) ��

���(���� , ��������� ��� �����( B9" � )�() &���&�1

��((����( ��%� 4�� � ����� �&�� �%�� �� �&�� �� �&��

( �-) ��� ����&��%���

1� #��

'�(� *� �� � � ���� � � �� ����!������

������ � ���*������

A� ��� %��� �� �)� 4�� � ����� �&��� � B9� ���� ��

, ���������1 -� �� �� %�� 2��)� � �&� ���&���� ����(

)� 4�� ��%��� �� B9� �� )� � ���� ���� � �� %�@�

����� ��� � ��%�� �� %��� ����� -� � ����&��

) ��() )�� ���&���� ���� �� �)�-�+1 ��������( )�

B9� ��&��(� � � (��� ��%�&� �� , ��������� ���

� �%���( �� � &��' �� )�%�&�(���� G� �� ����� ��

, ��������� �45, &�� � � -�) � �� ��� �� B9� )�

�������� )� 4�� ��%���1 ��� ���&��� D� ������ �&����1

-� �� -)��) -� � ����%&� ��&���� ��� ��&&�� B9� ���

B9"� A)� ������� �%��� ���� ��.������ �� )� B9�

�B9�1 B9� ��� B9"+ � � �)�-� �� ��(� � ���+� A)�

B9� )��� � ��%�&� ��0� ���#<� D �%��� �����+ ��� )�

4�� ��%��� ������ �� ��(� � ��+ �� &����� ��� )�

5$� %����� A)� )�%�&�(� �%��( )� B9� �� � ��&�

&�%��� � )� 4�� ��%���� A)� B9� )��� � ��%�� ��

��� ����( ���� �� )� � � )�()&�()�� �� ��(� � ���+� ,

�� ���$ ��) ��%��� �� &����� @�� 7$� %���& � )� 4��

��%��� �� ��) B9� ��� B9�1 -)�&� �� ���� �(���$ ��)

��%��� �� � ���� �� B9��

G� ��%�� �� )� B9� -�) )� ��&&$&��() , ���������

4�� ��.������ ����&��&� �� )� �������1 �� -�&& ��

���&��)�� 4�� � ����� � �% �)� �&���� A)� �&�����)��

-��#�� %& 4������ �%��� ���� ��.������ �� )� B9� ��� �)�&�(����� �&�����)��� �� 4�� � ��������+ A)� ������� �%��� ���� ��.����� �� )� &��(�� ���� �����(� �%� �� ���) B9� A)� ��.������ � � �&�(��� -�) ����� � )� 4����%��� �� ���) B9 � ����� A)� 4�� ��%��� �� �����1 ��� �%��� ���������� ��� �%��( �&& )� B9� �� )� 4�� ��%��� � � �������� �� ����� ��'� A)� ��������� ��%�� � �� B9� ��� B9" � � ,����!� ���,����!�!1 ��������&�� 2� ���$ ��) ��%���� �� B9� ��� B9� � ����� &����� ,� ���� �(���$ ��) ��%��� �� B9� �� �)�-� �� ��&����+ 9)�&�(����� ��%�� ���� �� )� ���&��)�� 4�� � ���� ��.������ ��-�&& �� ��� �����&��)��1 ��&&$&��() , ��������� 4�� ��.������ �� )��������� ,&�(�%��� -� � %��� �� 7EH2A,E8 ��! ����( )� �����&�� �%�� � ��� ���&����( �������� -�) (���� A)� ���� �( �% -��)�� � �-� ����( 9,H9 �D����1 - ��� �� 4���� 2-���� �+� ,����������%�� � �� )� 4�� � ����� ���� � � �� ��&&�-�I B9�1 8!����� ,4��1,B��#� D� ,4��1 ,B��#� �� B9�1 ,����!� � B9"1 ,����!�!� 4��"18#��"�� 9B�1 H!��"�� B9B�1 ,�������� G9B�1 ,�����!D� 4�� 1,��D"�""� 5BB��1 ,������D� ,BB��1 ,���D���� 5BB���1 8�#�D�� 4���18 �# � 4���1 8#��"D� ,B91 4D�� � J99B�$��1 ,��#���"� J99B�$��1,��#���D�

""� ��!.� /�� �� /���� �0 #��,

� B&��'-�&& 2������ E�1 +,� ( �� -��� � �����+1 (%� "��<""�

�%��( )��� � ����� �� �)�-� �� � ���� �( �% �� ��(� �

���+� G� ��� �� 3�� ��� ��(��3��� )�%�&�(� ��-���

��� �� )� B9 � ����� ��� )� �)� 4�� � ����� ������

)� 4�� ��%���1 ����� ��-��� )� �� &�� B9B� ���

-)�� G9B�� ,� �)�-� �� ��(� � ���+1 B9� -�� �&���&�

�&��� � )� , ��������� ,4�� ��� ,4�� � �����1

-)�&� B9� ��� B9" -� � %� � �&���&� �&��� � )�

%��0� 4��" � ����� ;�� ����(&�1 )� , ��������� 4��

� ����� � � �� ������ ) ��()�� )� ���� �( �%1

��������( )� )�� %�� )��� ��������&&� ���� (�� � ��

�� &� ���&����� � �%� �����

'�(� ,��� ������� ������!�����1� &2� �3������

������� �� ��� �������� � ��3�� �� ��� �� ���� ��

��� ,�3�����

A)� �5, ��� ������ ��� �� �� )� B9� -� � ���&�0��

�� �A<97� �� ��� ����� �� ������ ���&��� � �% $-��'$

�&� , ��������� �&���� ,� �)�-� �� ��(� � �1 -� ���� ���

������ ��� ������ ��� �� �� ���) B9� G)�&� B9� -��

��� ����� � � ��%�&� &���& �� �&& )� ������ ����1 B9�

��� ������ -�� )�() �� ��) &����� ��� ���1 ��� B9"

��� ������ -�� )�()�� �� ����

B9� -�� ���&��� ) ��() ��� ����� -�) B� � �$

���� )� ���� � )� ��� �&�%�� �=)��( �� � �1 ����+�

2���� )� ��� �&�%�� �� ��������� � ����� ��� ��&���&��

���� �2,+1 -� ���� -)�)� )� �5, &���&� �� )� B9�

�������� � ����� � 2, ��%��� ,� �)�-� �� ��(� �

"��+1 �&& )� B9� �)�- � ��������& ������� � ����� ���

2, ��%�� �� )� ��� �� , ��������� ����&��(�� ;� )�

�� ��& �� � �� )� �&�� )� � -�� � �%�&& �������� �� )�

B9�1 �&)��() �� �)� ���� �%��� )� 2, �������� ��

B9� )�� ���� %� � ��������&� A)� �������� �� B9�

��� ������ -�� �� ���� � ������&� �=)��( �� � �1 ����+1

�&)��() -� )��� ����� )� -�) )� �A<97� �����1 �&�()

(���%�� 45, ����%������ ��� ����� � �)��(�� �� �5,

��� ������ �� (���� ���) �� )� B9� -)��) � �

��� ����� � &�- &���&�� A)� ��� ���� �� B9 ��� ������

�� )� ��� -�� ���� ��� �� �� &� �� ") ��� ����� � 2,

��%��1 ��� ����� ��������&&� �� )1 ��� �%����� �

)��� )�() &���&� � ��)� �� )��� ���� �%���1 )�

-��#�� (& ,��&���� �� )� �����$�����3� �5, ��� ������ ��� �� �� )�B9���5, -�� ���&��� � �% ��� ����� �� ������1 F�-� ��+1 &��� �E+1 �� ��+��� ��% �2+1 � �% $-��'$�&� , ��������� �&���� �A<97� ���&���� -���� �� %�� ����( �����3� � �%� � �� ���) (���� .#+"1 -)��) ����� ����� )�()� �� ���1 ��� �!���&�� -� � ���� �� ��� �&��

-��#�� �& ,��&���� �� B9 �5, &���&� ��&&�-��( ��%�� -�) �����1 2,��� D$J$B,���+ /�()$���$�&� ����&��(� -� � ����� �� � � ��) %����% �%��'+1 � %����% )� �������� ����� ���� �>+ � 2, ���� �>+ �� )� �%���������� �)+���+ /�()$���$�&� ����&��(� -� � ����� �� � � ��) %����% �%��'+1 � %����% )� �������� 2, � D$J$B,1 �� 2, ���&�(��1 � )������� ���� �������� ��>+ �� )��� ��) ��+ ��� ��+1 �5, -�� )�� ���&��� � �% )� �� ��& �� � � ������ ���&�0�� ����( �A<97� ��� � �%� � �����3� �� ���) (���� .#+"1-)��) �� ������� �� ������� � ����� ��� 2,1 ��� �$���&�� -� � ������ ��� �&��

���*������ �� ���������� ������ ""�

� B&��'-�&& 2������ E�1 +,� ( �� -��� � �����+1 (%� "��<""�

��� ������ �� )� .#+" (��� )� �� ��������� � �����

��� 2, -�� ���� �� � ������� ��� �& �7)�� �� � �1 ��� +�

G� �&�� ���� )� ��� ������ �� �$���&�� ���(� � "�+ ���

���.���� ���� �� �)�-�+ �� &�����( ��� �&�� G)�&� )�

��� ������ �� )��� (���� ��%��� ��� )� )� � � �

%��� ����� ����� �� &�����( &���&� ��-��� ��%� &����1

)� ��� ������ �� ��) (���� -�� ����� � �� �� �����$

���� � ����� � 2, ��%��1 �� ��� �� � )� B9� ���

.#+"� G� �&�� ���� �� ������� 2, ���&�(��1 D$)�� ���$

���0��� ���� �D$J$B,+1 � ��� �� )� 2, �������� �� B9

��� ������ �� �����3�� ,� �)�-� �� ��(� � "��+1 D$J$B,

������ ��&� � �%�&& �������� �� )� ��� ������ �� )�

B9� �� ��%�� �� � )� ��� ���� ���� ��� -�) 2,�

A� ��� %��� -)�)� )� �������� �� B9 ��� ������

�.�� �� �� � � ���� ���)����1 -� ���� � � ����

���)���� ��)���� 1 ���&�)���%���� �� )��� ������ -�

���&�0�� B9 ��� ������ �� )� -)�&� ����&��(�

7��&�)���%��� ��%�� &�� � �� ��� ���� �� )� ��� ��$

���� �� )� B9� �� �)�-� �� ��(� � D� 7��&�)���%���

��%�� ��&&�-�� �� ����� ��%�� ��� �� (��� B9

��� ������ &���&� )� -� � ��(��3���&� ����� �� � �%

���&�)���%��� ��%�� �&��� ���(� � D1 ��%�� � &���� �

�� ��� D+� ,� �)�-� �� ��(� � D1 -� ����� )� )�

��� ������ �� )� .#+" (��� -�� �&�� ������� ��&&�-��(

���&�)���%��� ��%���

'�( ������ ,��� ���� �� �2� �� �����!*����

���������

G� �� )� �)� ��� �0�� )� B9� �� ���&�0��( )�� 45,

��� � ����$������( � ��� ��� � ����� �� )��� ������

)� B9� -� � ��� ��� ����� �� 4�,����,�� � � �� C2A

-��#�� .& 7��&�)���%��� ������� B9 ��� �������/�()$���$�&� , ��������� ����&��(� -� � �������� -�) ��+ � -�)���<+ ���&�)���%��� �"�� �>+ �� � )1 )�� �������� �� �� ��������& " )-�) ������+ � -�)�� �%��'+ ����> �1D$4� �5, -�� )�� ���&��� � �%-)�&� ����&��(� ��� ���&�0�� ����( �A<97� ��� � �%� � �����3� �� ���) (���� .#+" ��� �!���&�� -� � ���� �� ��� �&��

-��#�� 7& 7�%�� ���� �� )� 45, ��� � ����$������( � ��� ��� �� )�B9����+ 7�%�� ���� �� )� 45,$������( � ��� ��� �� )� B9 � ����� � )�,,CC -�&�$��� �G+ ��� ,,CC %��� �>�+ ��.������ � �% )� 7�>?"�2 � �%�� � E���&�� ,,CC G �&�(����&����� �� )� ���� ����&�&���� �<��+ ��� &���&�� ,,CC >� �&�(����&����� �� )� &�-� ����&�&���� ��<��+ -� � ����1 ��� )� �������� �� )� � �� � ���� � ��������� �� � 3&&�� � �-� E���� � ��� �� ������ ��&� )� � �� � ����E���� � ��� �" ������ ��( C2A� E���� " ��� �D1 ��� �#1 ��� � ��� �������� � �( �� )� �������� B9 � ���� -�) -���&� ��� �%��� �����) ��&&�-��( &������+ &�(����&����� ��.������ �� )� ,,CC G ��� >� � ����� A)�%���� ������� �� )� ,,CC >� � ��� � � ���� &�������+ 7�%�� ���� �� )� � ����$������( � ��� ��� �� )� B9�� E���&��B�DJ>: � ���� ��� ����� �� 40 � � -�� �������� -�) � �( C2A � ��( �� ���) C2A<B9 ������ � ���� �� "�%��1 ��&&�-�� �� )� ��������� (&��)���� �(� ��� ������ A)� B�DJ>: � ���� )� ����� � )�(&��)���� �(� ��� ����� �&��� � -�) ��)� C2A �&��� �+ � C2A<B9������ � ����� �&���� "<�+ -�� �� �3�� ��� ���&�0�� �� 242<9,C/1 ���)� &���&�� B�DJ>: � ���� -�� )�� ������ �� ��� ����( ��)��A)� ������� �� )� &���&�� B�D � ����� �D� '4� �� ��0�+ �� �������� ���� ���� � �-� >�&���&� ��0�� �'4�+ � � �)�-� �� )� �()� E��� �1 ��� ����� &��� �1 C2A� &���� "<�1 C2A<B9�1 C2A<B9� ��� C2A<B9"� ������

""� ��!.� /�� �� /���� �0 #��,

� B&��'-�&& 2������ E�1 +,� ( �� -��� � �����+1 (%� "��<""�

������ � ������ ,� �)�-� �� ��(� � ���+1 )� B9� -� � �&&

��&� � ���� � )� ,,CC �&�%�� �� )� 7�>? "�2

� �%�� � , ��%�� �� �� ��� ����� -� � ���� ���1

��� �� �� � ����%�&�� ��(����� �� )� ������ � �����

-�) ) �%���1 ��� ������� )� � ��� ������� -� ,,CC

%����� 5��� �� )� B9� ���&� ���� � � %��� �� ���� ��

)� ,,CC �&�%�� )� ������� � ��� %����� �� ���) ��

)� ,,CC %����1 ��%��� ���( )�� �����3��� �� )��

�&�%��� A)� B9� -� � �&�� ��&� � ���� � )� 7AAA

�&�%�� � �% )� ���*������ .#+" � �%�� �7)�� �� � �1

��� + �� � ��%�&� ���)��� ���� �� �)�-�+�

4�� � ����� )��� ���� �)�-� � ��� �� -�) �����3�

�=;9 � ����� �?�����$7� ��@��� �� � �1 ���#� =)��(

�� � �1 ����+1 �� J>C � ����1 ��� �)� 4�� � �����

�6���(���-�1 ���#+� A� �� �� B9� ��� B9" ��� �&��

��� �� -�) B�D1 -� ���� � C2A ��&&$��-� ������ ,�

�)�-� �� ��(� � ���+1 ��) B9� ��� B9" -� � ��&� �

��� �� -�) &���&�� B�D� G� �&�� ����� )� B9� ���

B9" ��� ��%�&�� )� ������( �� B�D � )� ��� �&�%��

�� )� .#+" � �%�� ���� �� �)�-�+1 �� � ������&�

���� ��� �� B9� �7)�� �� � �1 ��� +�

� '�(� ���� ����������� �������� ����� �

�,��� �!������ ����

G� ���� -)�)� )� B9� )��� ���� ������& ������

����( � ������ ������ �� )��� ���� �%��� -� �&�� �$

�� ��� �� ���� ��%�������� �� ��� � ��� ������

���� ��� ��� � ���&��� � ��� �� � �% �� � ������$

���� ��&&�� G� 3 � ���� )� ���� ������& �������� ��

)� B9� ��� ����� � �% )� 7�>? "�2 � �%�� � �� )�

��� � ���� ���1 -� &��'�� ���(&� � %�&�%� �0�� 4��$

������( ���� � �% )� 7�>? "�2 � .#+" � �%�� � �

%���%�& � �%�� ��� )� &����� ��� ��� � (����

,&)��() � ��(� �� ��������� -� � ���1 -� -� � ��

��&� � ��� � ��(��3��� ����������� �� )� ��� �

���� ��� -�) ��� �� )� B9� ���� ���� �� �)�-�+�

G� �&�� ���� )� ������ � ����� �)�-� �� ��(� � ��+1 ��

-)��) )� ��&&$&��() � 5$� %���& ��&����� �� )� B9�

-� � ����� � )� C,ED 45,$������( ��%���1 ���

���� ������& �������� -�� %���� �� �� � ��� �

���� �� -�) 3�� ������ �� )� C,ED$������( ��� ��$

� ��% �� � %���%�& � �%�� ��� )� &����� ��� (���� ,�

�)�-� �� ��(� � ��+1 -� ����� )� )� ��&&$&��() C,ED<

B9 ������ � ����� )��� ���� &�-� �����������

������ )�� )� C,ED$������( ��%��� �&���1 )� -��

���� �� � ��(���� ��� �&1 �� -)��) �� )�� ����� )�� �

&�- &���& �� ���� ������& ������� ;� ��� ��1 )� C,ED<

B9�5 ������ � ����� -�) 5$� %���& ��&����� -� �

��&� � ��������� )� ��� ������ �� )� ��� � (���1

��� )� &���& �� ����������� -�� ��%�&� � )� ����

-�) )� C,ED<?9� ������ � ���� ���� �� � �������

��� �&�

'����3������ � '�(5 ������ ��6� �,���� � � ��

��7�, �� ���� ����

G� ������� ��� �� (����� ���� �%��� �� � �� �

���&�0� )� ������� �� )� B9 � �����1 ��� �����&&�

������� �� B9" -)��) �)�-�� � ��������& �������� ��

��� ��&&�-��( �����1 2, � ���&�)���%��� ��%��� A�

����� (���$��$������� %���� �� B9"1 -� (��� ���

-��#�� 8& ,��&���� �� )� ���� ������& ������ �� B9� ����( � ��������������+ ���� � ��� ������ ���� ���� C�$E��1 -)��) ������� 3�� �������� )� C,ED 45,$������( ��� &��'�� � � %���%�& �&�� � �%�� ��� )�&����� ��� (���1 -�� ���� �� )� ��� � � A)� ������ ���� ��� -� ���� ����� � �% )� 7�>? "�2 � �%�� �"�2+ ��� ������ )� C,ED45,$������( ��%��� �C,ED<4B+ ����� -�) )� ��&&$&��() �C,ED<B9�<"+ � 5$� %���&$ ������ B9 � ����� �C,ED<B9��<�"+� A)� 4����%��� �� �)�-� �� � 3&&�� ���� C,ED ��� C,ED<?9� -� � ���� ����� �&����+ A ���� ������& �������� �� C,ED<B9 ������ � ����� �� �� �� ���&�� ��&&�� A)� C�<E�� ��� � ���� �� -�� �� �������� -�)�� ���� ������ (���� ��� �� � � ���&����

���*������ �� ���������� ������ """

� B&��'-�&& 2������ E�1 +,� ( �� -��� � �����+1 (%� "��<""�

���(���� �&��� ��� ��� �����( B9" ���� )� ��� �&

�� )� 7�>? "�2 � �%�� � ,&)��() ������� ��&� ����

-�� ������� �� (��� ���( B9" ���(���� �&���1 -�

� �((&�� � (��� �� %��� �&��� ��� ��� ) �� �����

�� ����� %���� ���&��� �� &�����

2���� �� )� &���� ��1 D1 �1 1 ! ��� ��+ )�� �� � ���� �

������ �� )�� ( �-) ��� ����&��%��1 ��� �� )� %��

���� � ���� ) �� �� )��� &���� �D1 ��� ��+ ��� �� �� ����

������ )� ����( ����&��( ��(�� A-� ���������� &����

-�) )� ���� � �)������� �� ��� �+ � � �)�-� �� ��(� �

#��<�+� A)��� �&��� �)�-�� ( �-) ��� ����&��%���&

������ �� )� �� ��& �� � �� )� �&�� �� ��) ����&��(�

���(� � #�1�+ ��� %�� � �&��� ���(� � #�1�+� A)� ���$

(���� ����&��(� )�� ��&&�- �� &����� ��� -� � �%�&&�

)�� -�&�$��� �&��� ���(� � #�1�+� , )� %�� � ��(� )�

���(���� �&��� )�� � �������� ( �-) ������ ���

��(��3���&� ��-� &����� )�� -�&� ��� ���(� � #�1�+�

>� ���� 1 )�� ��' � %��)� &��(� � �� ����

��%�� �� � )� -�&� ���1 ��� �� %��) &��� ����� G�

�&�� ���&��� &���� )� ��)����� ��� %����� �)�������

�&���� #1 �� ��� ��+ � %�&� �)������� �&���� �1 " ��� �+�

A� ��� %��� �� � �� �&���� ������ ��-��� )�

���� �� �� )� �)������� ���� ��� ��� )� ���(���

-��#�� 9& 9)������� �� ���(���� �&��� ��� ��� �����( B9"���<�+ 9)������� �� -�&�$��� �&��� ��1 �+ ��� -� B9" ��� ��� ������&���� �&��� �1 � ��� �� &��� �1 � ��� �+ � )� ��$��� ��(� ��<�+ ��� )� $-��' ��(� ��<�+� B� K �%% �� �<�1 � �% �� �<���(+ ,��&���� �� B9" �5, &���&� �� B9" ��� ��� ������ &����� �5, -�����&��� � �% �� B9" ���(���� &���� ( �-� �� >2 ��&�� %����% -�)'���%���� �� ��<� ����� �A<97� -�� �� �� %�� ����( � �%� ��%�������� )� -� � �����3� �� )� B9" ���(���1 &���&�� ��B9"����+1 � �� )� ��& B9" ��� ������1 &���&�� B9"1 �� -)��) ������) ����(����� ��� ���(��� ��� ������ -� � %���� ��� E��� 7 �� ���� �&��� '���%����$ ������ &��� -)��) -�� ���� �� � -�&�$��� ��� �&�� )�� ���� �%��� �$���&�� -�� ���� �� � ��� �& �� �.��& &�����(�

-��#�� :& ,&� �� �� ����&��%�� �� B9" ��� ��� �����( �&������<�+ ��� �)������� �� -�&�$��� , ��������� ��+ ��� -� B9"��� ��� �����( &���� �&��� �1 �� &��� �1 �+� A)� ���� �� � � � �% )� %��$�� ��� �� ���) �� �� ��$���$�&� �&��� ( �-� �� >2 ��&�� %����%�B� K ���%%���+ ��� &��()� -� � %���� �� � ��� # �3&&�� �� +1 ��� �� ��)���� �� +��� ��� �D ����� �� + �� -�&�$��� ��� ���(���� �&��� ( �-� �� >2��&�� %����%� A)� ��� �(� ��24+ � �% %� � )�� �� ����&��(� �� ���)�%� ���� �� � ������� G1 , ��������� -�&� ���� 71 � '���%����$ ������ &��� ���� �� � ��� �&� � ��� �1 B9" ��� ��� ������ &�����

""D ��!.� /�� �� /���� �0 #��,

� B&��'-�&& 2������ E�1 +,� ( �� -��� � �����+1 (%� "��<""�

��� ������ &���&1 -� ���� �A<97� � ���&�0� )� &���&� ��

'�(5 �5, �� �� �� )� ���(���� &����� �� )���

���� �%��� -� ���� � �%� ��%�������� )� �&&�-��

�� � %���� � ��)� ��& '�(5 ��� ������ � @�� )�

���(��� ��� ������� ,� �)�-� �� ��(� � #�(+1 �&& )� &����

)� �)�-�� )� ���� � �)������� ��1 �1 ! ��� ��+ )��

)�() ��� ������ �� )� ���(���1 -)�&� )��� -�) ��)�

��� %����� �)������� �&���� #1 �� ��� ��+ � %�&�

�)������� �&���� �1 " ��� �+ )�� ��(��3���&� &�-� &���&�

�� ��� ������� A) �� &���� -�) ���&� �)��(�� �� ( �-)

��1 " ��� �� ��� �� �)�-�+ )�� � ��� ���� �� ��& '�(5

%����(� ��� �� ������&� ���(��� ��� ������1 �� )���

��� � ��$���� ������1 -)��) -� � � �� ��&� ������(�$

��(� A)��� ���&� ��%��� �� � � ��( �� �&����

��-��� )� ���� �� �� )� �)������� ��� )� ���(���

��� ������ &���&1 ��������( )� )� �)������� ���� ���

���&�� � �% ��� ������ �� )� B9" ���(����

G� �&�� ���%���� �� ����&��%�� ��� %� �)�&�(� ��

-� B9" ��� ��� ������ &���� �� ��� �+ -�) ���� �

( �-) ������� ,� �)�-� �� ��(� � !1 )� -� &���� )��

������ �� %� �)�&�(��� ���&����( �)� � ��� �����

�� )�� � ���(� � !�1�+� A)� �� &��() �� )� -� &���� -��

%���� �� � #1 �� ��� �D���� ��� (� %������ ��� �����

� �� ��(��3���&� �)� � )�� -�&�$��� �&��� ���(� � !�+�

G� ���� � ��%�� �� �� �&��� '���%����$ ������

���(���� &���� � ��� %��� �� )� �� ����� �� ��

( �-) �� � ���$�����3� �)������ ���� ��(� � !� �� ��

���%�&�+1 �� ��� �� 3�� ��� �)��(� �� ( �-) �� �

%� �)�&�(��G� �&�� ���%���� B9" ��� ��� ������ &����

-�) �%�&� ( �-) ����� �� )� �� ��& �� � �� )� �&��1 ���

����� ��&� � �&�() ������� �� �� ( �-) ���� ��

�)�-�+1 ��%��� ���( )� )� �� ������ �&�� �� �&���

-�) )� ��� ������ &���& �� )� B9" ���(����

�� �# ��

;� )�� ��� -� ���� ���� )� �)� ��� �0���� �� ) ��

, ��������� 4�� � �����1 ��&&�� B9�1 B9� ��� B9"1

)� ��&��( � � 0��� 3�(� � ���� ��%�&� ���.�� � �&����

A)� )�%�&�(� �%��( )� B9 � ����� -�� &�%��� � )�

�� �%��� ���� 4�� ��%���� A)� B9 � ����� )�� ��%�&�

� ���� 45,$������( � ��� ��� ��� -� � ��&� � ��� ��

-�) B�D1 � �=;9 ���� ����� ���� � 2���� )� ��&�

��.����� �� ��%%�� ��-��� )� B9� �� )� 4��

��%���1 )�� %�� �� � %�&���������& ��%��� ��������&�

�� ������( � ��) 45, ��� � ������ � ���&� �����

)� 3����(� �� 6���(���-� ����#+ -)� ����� )� )� 4��

��%��� �� �������& �� 45, ������( �� %��0� 4�� � �����1

�� -�&& �� �� )�� ��� ����� -�) �� J>C � ���� ���

�)� 4�� � ������ A)�� %�&���������& ���� � �� � 0���

3�(� ��%��� )�� ���� ���� �� �)� � ������ ��

���%�&�1 �� )� ���� �� )� C,A,$� � ����1 ��� �� )�

0��� 3�(� %���� %������ ��) 45,$������( ���

� ����<� ���� ��� ����� �B&���& �� � �1 ���!+�

2�%�&� � ���� � ��� ��� ���� )� .������ -)�)� )�

B9 � ����� ���%���� )� � )��� ��%�&� � ������

��������� G� ����� ����� �� �����$�����3� ��� ������

��� �� �� )� B9�1 ����� ��( )� �������&�� )� )��

)��� ������ ��������� 9��$ ���&�����& %���3������

%�� �&�� )�&� (��� �� �����3��� �� )� B9��

6���(���-� ��� 2)��� ����!+ �)�-�� )� )� ���$

�������� ������ �� )� %��0� 4��� � ���� -�� ��)�����

�� ���&��� �� �� �� ( �����( � ���&���� 9 ����<

� ���� ��� ������ ���&� �&�� )�&� �� (��� ���( �����3$

���1 -)��) ���&� �� ��(%���� �� )� �� �����$�����3�

��� ������ ��� �� ���&��( �� ����� �� ���&� �� �����$

�����3� ���� ����� ���� �� �� ���%�&�1 %��0� 9B�

��� ��� -�) ��.���1 � �=;9 � ����1 �� ���� ��

��� �� -�) ���)� %��0� �=;9 � ���� ��&&�� J9�

�?�����$7� ��@��� �� � �1 ���#+� B�) 9B� ��� ��.��� � �

��� ����� ��&� �� )� ������� %1 ��� )� �����3�

��� ����� ��-��� )��� � ����� ����� � � � �)�� ��

)� ��� ������ �� � ��%�� �� ������� %$�����3� (�����

,&)��() -� ��� �� ��� ��� ����� ���� �� )� ��� �����

��-��� )� B9� ��� B�D � ����1 � -��&� ��

��� ����( � �� ����� �� B�LAC, ��%�&� � ����� ��

)�� B9$������( ��3����� ��� � ����� )��� ������

� ���� ,(������ ���L� ���(������ ��� ������ ��-���

0��� 3�(� ��� �=;9 � ����� )��� ���� '��-� �� ��%�

�%� �� ���%�& ��&& ( �-) ��� ����� ������� �2�)�M &� ���

/����1 ����+�

6���(���-� ��� 2)��� ����!+ )��� �)�-� )� )�

%��0� 4��� � ���� ��� ������� �� � ���������

) ��() %�&�%� �0�� 4��$������( ���� � �% )� 7�>?

"�2 � �%�� � )� � �%�� �� )� %��0� 7D �)���)�$

���&�� ���� �� ����&��� (���1 -)�&� %��0� 4��� ���

������� �� � �� ���� �� 4��� ������������ A)� �� &��

4�� � ����1 B9B�1 )�� �&�� ���� �)�-� � �� � ���� ��$

��� ������ ����( � � ��� � �(%�� � �% )� �!,����

� �%�� ��� B9B� ����������� -�� ���&��)�� �� �

-�$���� %����� �� )� 4��$������( ��� �>��� �� � �1

���!+� 2�(��3��� ����������� � �% ��� � (����

��������( ���(&� � %�&�%� �0�� 4��$������( ���� � �%

��)� )� 7�>? "�2 � �%�� � )� .#+" � �%�� -��

�� ���� ��� -�) )� B9 � ������ A)� � � � � ��%�� ��

������&� ���&������� �� )��� ���&�1 ���&����( ���'$

( ���� � ��&�%� ��� � ����(����� 4�� � �����1 )�

�������&�� )� )� 4�� ���� ���� -� � �� ���(��0�� ��

)� B9� �� �� � ��&&�1 ���L� )� )��� � ����� � � ��

���� ������& ������ �� J�-��� 1 5$� %���& ��&�����

�� )� B9� ����� -�) )� C,ED 45,$������( ��%��� )��

���� ������& ������ ��%��� ���( )� )� B9� ���$

��� ��� � %� � ����������� ��%���� �� )� 7$� %���&

-�$)� �� �� )� � ����� G� )��� �� ����� ���

��(��3��� )�%�&�(� -�) ��� '��-� �������� ��%����

�� )��� �(���� ��%�&� � )� ���� ��� �� %��0� 4���

�6���(���-� ��� 2)���1 ���!+� ;�� ����(&�1 )� ��&&$

&��() B9 � ����� ����� � )� C,ED 45,$������(

���*������ �� ���������� ������ ""�

� B&��'-�&& 2������ E�1 +,� ( �� -��� � �����+1 (%� "��<""�

��%��� -� � �� ��&� � ��������� )� ��� � (���1

�����( )� �������&�� )� )� ��&��� �(����1 ���&����(

)� 4�� ��%���1 )��� � �(�&�� � �&���+� ,&� �����&�1 ��

)�� ����� )� 5$� %���& ��&��� B9 � ����� %�� ��

��(��3���&� %� � ���&� )�� )� ��&&$&��() � �����

-)�� ����� � )� C,ED 45,$������( ��%����

,� ��� ����( 3����( -�� )� � ��( �� �&����

��-��� )� �5, ��� ������ ��� �� �� ��%� �� )�

B9� ��� )� ������ �� )� ��� �&�%��� �� �&�%���1

-)��) � � �&�� ��%��%�� ��� �� � �� ��$� ����1 � �

����� �� ��) ��)�(�� ��� �&�� � �%�� � -)� � )��

����� �������� �� ����� ��� 2, �:�% �� � �1 ���D� E�� ���

E�%1 ���D� N�� �� � �1 ���D� H&%���� �� � �1 ���D� =)��( ���

2��()1 ���D+� ;� , ���������1 )� ������ �� )� ���

�&�%�� �� ������� � ����� ��� 2, �� )�()�� �� )�

��$�� �(��� �7)�� ��� 2��()1 ����� =)��( ��� 2��()1

���D+� �� �&�%��� )��� �&�� ���� ����� � �� �������

�� ������� ����� ��� 2, ���&�(���1 �&)��() )� �������

2, ���&�(��� -� � �� �� �������� �� 2, ��� � ��$��&�

)�()� ������ ���� -�� �.�� �� � (��� � %���%�&

������� �H&%���� �� � �1 ���D+� 2�%�&� &�1 -� ����� )�

)� ������� 2, ���&�(��1 D$J$B,1 ���&�� �� ��&� � �%�&&

�������� �� B9 ��� ������ ��%�� �� � 2,�

A)� �������� �� B9 ��� ������ �� ����� �� ��� ����(

����� �)� 4�� � ����� )��� �&�� ���� &��'�� � ������

,B9 ����� � )� � �%�� �� )� ���� ��� �������

(���1 ���� ����� �� -)��) �� �� �(�&��� �� ����� �:���

�� � �1 ���!+� 5BB� ����� � � ��� �� )� � � � �%�� )�

�� �%�� �� �� �������� �� � � ��� ������ �� ����� ��

-�&& �� ��� ������ �� )� �����& %� ���% ��� �����&�

�����1 ��) �(���� �� )� �&�� -)� � ����� �&���

�%�� �� �&�� �B��%��� �� � �1 ����+� J�-��� 1 �����

��%�� ��� �� ������ )� ��� ������ �� )��� (����

�B��%��� �� � �1 ����� :��� �� � �1 ���!+1 �&)��() )�

������� �� 5BB� ��� ,B9 � ����� -�� ���� �� &�����

��� � ���1 ��������&�1 -)�&� -� ���� ��� � ��������&

�������� �� B9 ��� ������ �� ����

A)� �������� �� B9 ��� ������ ��� ��� �&�%��

������ �� )� �&�� ������� ��(��&1 2,1 �� �&�� ��� ����(

�� )� � �� � � ��( &��' ��-��� )� ��� �&�%�� ��� )�

�&�� ������� �������� �� ���%�&�1 )� , ��������� (&!�

(��� � �%�� )�� ���� �)�-� � ������ � ��.����� )�

���%�&�� �� �� �� ��� �&�%�� ��� -)��) �������� ��

�� 2,$ ��������� �&�%�� �� )� (&!� � �%�� �E���&

�� � �1 ���!+� ;� �������1 )� , ��������� 59�� � ����1

-)��) �� �%�� �� �� )� 2,$�������&� ��� ������ �� )�

, ��������� (&!� (���1 )�� ���� �)�-� � ��� ��

�����3��&&� -�) B�LAC, ��%�&� %�%�� � )� ���(��0�

)� ��� �&�%�� �=)��( �� � �1 ����+� A)� �������� �� B9

��� ������ �� 2, ����� )� �������&�� )� ��%� 4��

� ����� �&�� � �&� �� )� �&�� ������� ��������

A)� ��� �&�%�� �� �&�� ��&� � ������ � @��

���&�)���%��� ��%�� �E�� ��� E�%1 ���D� N�� �� � �1

���D+1 �� )� ��%��� ���( )� � ��( �� �&����

��-��� )� �5, ��� ������ ��� �� �� )� B9 � �����

��� )� ������ �� )� ��� �&�%��� , )�� ��(� )�

%��)����% �� -)��) ���&�)���%��� ������� )� ��� ��$

���� �� )� B9 � ����� �� ���&�� 1 �� �������� ��

���&�)���%��� ��%�� �� ���� � )�&&%� ' �� �%%�����

�� &� (���� ������� �� ������� � � �� ���&� ��%�&���

�� �������&�� �� )� ���&�)���%��� ������ )� ���&����

�� � &���&� �� ���� � ����1 �&)��() �)� �������&����1

���) �� � �)��(� �� )� ����&�� �� )� B9 �5,� ���L� �

� ��� �������1 ����� �� �&�� ���

���� �� (����� ��� ���)�� ������� � �&�� �� �%�� $

�� �&� �� �&�������( )� ������� �� �����3� �&��

���� ����� ���� �� , ��(� �� �)������� -� �

���� ��� �� �&��� ��� ��� �����( B9"1 ���&����(

�� ��� ( �-) �� ��) ��� ��� �� ��& �� � �� )� �&��

)� �� )� %�� ���� � ����� &�� � ���)� 2�%� �� )�

&���� -�) )�() ��� ������ �� )� ���(��� ( �- ������$

��&&� %� � �&�-&� � �% )� ����&��( ��(� ��� )�� ��&&�-

3 � &�����1 ��((����( )� B9" �� � � ������� �� &� ��

, ��������� ����&��%��� G)�&� )� %�&���&� %��)��$

��%� ���� &���( )� ( �-) ������ �%��� � �� ��� $

%����1 �� ������ ��%��� �� )� %�@� ( �-) ���

����&��%���& �)��(�� ���� �� )� ���& �� ��� ��� ��$

���( � 4�� � ���� �� �&���� ,&)��() )� &� (� ��%�� ��

�)������� �)��(�� %�� ��((�� )� B9" ��� ��� ��$

���� )�� �&��� ���� ������ �� , ��������� ( �-)1 -�

����� �&� �� )� )��� �)��(�� � � )� ���& �� ��� �

� ���� �� ��%�� �� ����� )� ���� �� �� &� ��

����&��%��� ; -�&& �� ��� ����( � ��� �� ��� ��� ������

�� ��� �� )� �)� , ��������� 4�� � �����1 � 4��

� ����� �� �)� �&���1 ����� ��%�&� �)�������� �� )�

������ ����( �������&� � �%�� � � ��� ��� ��� ��

(����� ���� ��� �� )� B9 � �����1 ����&�� -�)

��-� ��& ��- (���%�� ��� ���)�� � ������� � (�

(����1 %�� )�&� �� �&�������( )�� ���������+�

;����������� �����#��

%� ��� � '�( ��2�� �� �2� ��8���� �� ����

, �45, &�� � � ���� ���� � �% �5, ���&��� � �% "$-��'$�&�&����� �� ���*������ �,� ��� ������� 7�&�%���+ �&��� -���� ����� -�) � ����%$� �%�� B9� 5$� %���& � �(%�� ��<��� ��+� ��� ��� �&�.��� -� � �� ����� � ���7 ����( )�� ���0$���� ��� -��)��( ��������� ���� ���� �� =)��( �� � � ����"+�A)� 45, ��.������ �� )� B9 �45, �&���� -� � ��� %��������( ����� � � ����� �� �2�%� ��' �� � �1 ��!�+�

( �� ������� �� ��7�, ������ �� ��������� 7��,

��3�� #� �� ��� ,�3�����

���*������ �,� ��� ������� 7�&�%���+ �����1 �� ��&�0�� � D�7�� �����1 -� � �� �&�0�� -�) #�O �)���& �� ��%��1 � ��� ������&���� ���� 1 ��� ( �-� �� >2 �2�(%�+ %����% � ������&���� ���&� 9&��� -� � ( �-� � ���7 -�) � ���&��() ��� )� �� ���&���� �� �����$�����3� ��� ������ ��� ��1 &�����1

"" ��!.� /�� �� /���� �0 #��,

� B&��'-�&& 2������ E�1 +,� ( �� -��� � �����+1 (%� "��<""�

��%�1 F�-� � ��� ��� -� � ��&&���� � �% $-��'$�&� �&���( �-� �� ���&� �� )� �����1 2,1 D$J$B, ��� ���&�)���%��� ��%���1 , ��������� ����&��(� -� � ( �-� �� >2 ��&��%����% �� !����� A)� �&��� ��� �� ������( �(� -� � ���������� �&���� �� >2 &�.��� %����% ��������( �1D$4 �2�(%�+1 2,�2�(%�+1 D$J$B, �2�(%�+ ���L� ���&�)���%��� �2�(%�+� ,�� )� ��� �� ��� �%� )� -)�&� ����&��(� � )� �� ��& �� �L ���-� � ��&&���� ��� � �0�� �� &�.��� �� �(�� � �� � �5,���&�����

&2� �� ��� �� &+9(�& �� ����

A��& �5, -�� ���&��� � �% ����&��(� ����( )� 9� ��� �� ��(�� �C�� � 2���%1 ;���+1 ���� -�) ���� �� �����$� ��45��� �9 �%�(�+ � "#�7 �� ��%��1 ��� ��� �3�� -�) )�9� ��� �� ��(��� �45, -�� ���)���0�� �� ���� ���� �=)��(��� 2��()1 ���D+� ,&& 97� ������� -� � �� �� %�� -�) �������&��( �%�� �� � �� ��71 ��� ��� A�. ��&�%� ��� ����)� +1)� ����� � ������ �� )� ����&�� 1 D �%�& �� �5A9 ��� � ��� ��� �%� � ����%�& ���)+ �� � 3��& ��&�%� �� �� �&� A)� � �%� ��� ����� �� )� �A<97� � � &���� ��&�-�

B9�$�� ���$CCCCC7,A,AC,,,77A,,7CC7CA,,7,C$"�+B9�$"� ���$CCCCC,C7A7A7,AAAC,CAC,CAAA777C$"�+B9�$�� ���$CCCCC7,A,ACCCACC,A7C,ACC7CC,C,$"�+B9�$"� ���$CCCCC,C7A7A7,77CC,C7CA7AC,A,,,$"�+B9"$�� ���$CCCCC7,A,ACCACC,,7CAC7A7CC,A7C$"�+B9"$"� ���$CCCCC,C7A7AA,C,,AC,C,C,ACC77AC$"�+C2A $�� ���$7777CA7C,A,AC,C,C7$"�+C2A $"����$C,C,C,CCCA7,7A,7AC7AA7ACC$"�+�$���&��$�� ���$7CACC,A7,7,C7,,A,7,C,C77$"�+�$���&��$"� ���$77A77AC7,7AA77,7AA7CA7AA7$"�+52$� $"� ���$C,77CC7,,7,CC,AA7$"�+

A� ���&�0� )� ��� ������ �� )� B9" ���(��� �� )� ���(����&����1 B9"$��1 � (���$�����3� � �%� ��� 52$� $"�1 � � �%� �� )� �B; ���� 1 -� � ���� �� �A<97� ���&����� ,�� �� ���&�� ��97�1 �� �& �� �&�.��� -� � �� �� �� ���O �(� ��� (�&1 ����� �� � � ��&�� %�%� ���1 ��� � ���� -�) )� �� ��$������( ����%&� � �%�� "�9$&���&�� � ���� ,%�&�3������ ����� -� � �%�(�� ����( � 2� % !D� �)���)��%�(� �>�&���&� 4���%��+�

(�������� � ����*��� ������� �� ���������

����� �� �����9����� *���� �������

, )�� %���&� '����� �J>:+$�((�� B�D � ���� �B�D$J>:+-�� ��� ��� ����� �� � (&��)���� 2$ ����� ��� �C2A+ ������� ����1 �� ���� ���� �=)��( �� � �1 ����+� A)� �� �� ���) B9� ���� -�� �&���� ��� �C/8$�A �9)� %����+ ��� ��� ��� ������� � C2A ������ � ���� �� 40 � �� �� ���� ���� �=)��( �� � �1 ����+�A� �%��� )� C2A ��%���1 )� ������ � ����� -� � ���� -�)) �%��� �2�(%�+ �,�����& �� � �1 ���D+� A)� &���&��( �� B�D$J>:1 (�& �� ����� ����� ��� � ����<� ���� ������( ������-� � �� �� %�� �� ���� ���� �=)��( �� � �1 ����+

�2� �������� ���� � �,� ������� �����

A)� ��� � ���� �� �C�$E��+ ������� �� 3�� �#%� ���� C,ED45,$������( ���� �>� �� � �1 ��!!+ &��'�� � )� 7�>? "�2 �<D� ��!+ %���%�& � �%�� 1 )� &����� ��� �����( ��.����� �������&��� ���)���� ��&������&���� ��.������ C�$E�� -��

���� ���� �� �������( )� C,ED$������( ���� � �% �C�/DA�A���� �� � �1 ��� + ��� �&����( )� � �(%�� ��� )� (��; ����� ;; ���� �� �4����7 ���((� ��� 7) �����&�1 ��!#+�,&& C,ED ������ ���� ��� �������� )� C,ED 45,$������(

��%��� ��%��� ����� �<�D+ ����� ��$� �%� -�) )� B9 ��&&$&��()L ������ ��� � )� #! �%��� ���� �������� ��%��� ��)� ��� ��%�&�� �� �� ?9� �A���� �� � �1 ��� +� ,&& )� C,ED������� -� � ��� ����� ����( )� 7�>? "�2 � �%�� 1 )� ���&�����& ��)���� � �% ������ %����� �� �� �� &���� 1 ���� ����&��� ���)��� ��&������&���� ��.����� �� ���� ���� ��H&%���� �� � � ����#+� 97� -�� ���� � �� ����� � ��� �������� )� "� ��� �� )� C,ED 45,$������( ��%��� �� )� ������ ���� �� ��������( ��&� )� C,ED$45,$������( ��%���� A)� ������ C,ED<B9 ������ ���� ��� ������ �� )� ��&&�-��(�%��� ���� ��� ����� �� ���) B9I B9� � �<�D�+1 B9� � �<��#+1 ��� B9" � �<� D+�

����� ���� ��� � ��������� �� ��������� �����

A)� ���&���� �� �� � � ���&��� � �% D$���$�����&� ������������ ��&&� ��� �����.��� �&�� ��� ���� ��� &����� ��������� -� � �� ���� ���� �7)�� ��� 2��()1 ����+� /&�� �$�� ����� -� � �� �� %�� �� ��&���� ����( D���& � ���&���%���� -�) ��( 45, �� ���) ���� ��� �� ���) ���� ��1 -�����������&� ( �-� � ���&�� � ��� ����� -� � ����1 ��� )� ���&� ��� �(�� ��24+�

.������ �� �� ���� � �������� ���*������

����3������� '�(5

A)� CH2 � �(%�� �� �B;��� �7&����)+ -�� ��&���� -�) )��� � �(%�� �� B9" ��(���� �� � )��� ���J; ��� #��; ����� )� �� ��� "� ����1 ��������&�1 � (��� ��� � �B;$B9"� �B;$B9" -�� ����� %�� ��� ���*�������� ���������� � ���,�� � ��� )�� ��� �0 �,� ��� ������� 7�&�%���+ ����( )�� � ��� ����� %���� %�)�� �B��)�&� �� � �1 ���"+� 2����-� � �� �&�0�� -�) #�O �)���& �� ��%��1 � ��� �� ����&�������� ��� �&��� �� �� >2 %����%1 ��� '���%����$ ����������&��(� -� � ��&���� �-��'� ��� (� %������� 9�����& ���(���� &���� -� � )�� ����� �� � ���&� A� ���3 % )����) &��� ������� )� ��� �� ��� ���� ��1 97� -�) � �%� �B9"$�� ��� 52$� $"� -� � �� �� %�� ��� ��.�����1 ��������+� �� )��� 97� �������1 (���%�� 45, -�� ���&��� � �%)� ������& &���� �� )�%�(���0��( ��� ����( &��� �� ��/������ � ��� ��������( A/52 ����� ���%> A ��<J7& !��1���%> /4A,1 ���%> 5�7&1 ���O 242+ -�) �%�� ��� ���(�����,�� ) �� ����� �� ����� %���� -� ���&��� �� B9"��� ��� ������ &����1 �&)��() )� ��%�� �� ���������� &����%�� �� &��� �� ��%� �&��� ���� � )� A� ��(�1 ��� )� �&���� �% )� ������ ��� )� � ����� �� ����� %���� )��� �� ������ ���� �� 2��)� � �&� ���&���� � ��� %��� -)�)� )��� � ���������� &����� A� �)��' �� )� ���(���� &���� � )� A���(� �)�-� �� ��(� �� # ��� ! � � ���������� &����1 -���(���� (���%�� 45, ���&��� � �% )� B9" ���(���� &����-�) ���;;;1 ��� �� �� %�� (���%�� 2��)� � �&� ���&���� ������ ���� �� =)��( �� � � �����+ ����( )� (��; � �(%�� �� )�59A;; (��� � �% �B;��� �� � � ����, ��������� -�&�$��� ��� ���(���� ����� -� � (� %�����

�� >2 ��&�� %����%1 ��� )� �)������� �� )� �� ��& �� � ��� ��� -� � ���� ��� ��� �� ����P ( �-)� A)� ����&��(� -� �)�� ����� �� � ����&���� ���& ��� ( �-� �� �� ��������&D-��'� �� � �� � ���� �� )� �)������� �� %�� � �&���� ���&��() %���� �%��� -� � �� �� %�� �� ����&��(� ( �-�

���*������ �� ���������� ������ ""#

� B&��'-�&& 2������ E�1 +,� ( �� -��� � �����+1 (%� "��<""�

�� ���&&� �� >2 %����%1 ��� �� � %� � ����&��(� �� ���) �%����� -� � ���� � ����� )� ��� �(� ��24+ �� &��()�

��5� ���������

G� )��' 4 /&���� A���� �� )� �45, &�� � �1 4 4����& C�&&�� �� )� �� � ���������� ��&& &���1 4 � >�'� 7� �� ��� A�% C��&���&��� �&��%��� ���� �� )� ������ �����1 ���� ���� ��� 4 2����������� �� )� �)�&�(���� ���&����1 ��� /�-� � 7)�� ���4����& :�% �� )�� ��������� �� (��� ���( 45, ���� ��� ��� ���(���� �&���� G� �� ���&� &� ��� ����� )�&� � �% 4 G��.���( 7)�� �� %��������( )� �� � ��&& &���1 �� ���������-�) ��%� �� )� 45,$������( ������ ��� )�&���& ��%%��� ��)� �5, ��� ������ ������� G� �&�� )��' �)� %�%�� � �� )�2��() &�� �� )�&���& ������������ J�:� -�� ����� �� �� �� �� �:� ��� (��� �%�� � ����� �& ��&&�-�)��� A)�� -� ' -������� �� �� �� �� ( ��� � �% )� 5�����& ;������ �� J��&)����$C>D#!�"+ ��� )� H2 4��� %�� �� ,( ���&� � � :�B�2��� $"����$"� �+�

1��������

�# #���� -&<&� ������ 1&� $��� ��� 1&;&� <��� �&�&� '�������=&"&� '����� =&�& ��� '��#��� $& ���� ����D+ ������ (��� � �� ��� �� �� ��� 5�- 6� 'I ��)� G�&�� ��� 2����

��#����� $&� �� ���� � �&� � ������� �& ��� "#�������� "& �����+A)� 45, ������( ��� �� )� 4�� � ���� 5BB�� �� �������& �� �����$�����3� ��� �����$ �(�&��� ��� ������ �� )� � �����(��� �� �&���� ( �� �� 1 %%1 "�"<"""�

�������� ,&� ;��� � =& ��� ���������� "& ����"+ % � ����( ����� ��% %������ (��� ����� �� ��3& ���� �� ���&���*������ �,� ��� �&���� �0 &0 ����0 #��0 #��0 %%%!:��1 �%81���D<�����

������ "&� ,�5�>���� /&� ;�5���� 1&� <������� <& ��� ��5��� '&!&����!+ 7�/B$������( � ���� ����� ��� -�) ���� ��������� C,A,$� ��� �� �.�� �� �� � �) ��� ����� ��������(��0 2�� ����0 #��0 �#�1 ?71 �� �<�� �

����� 0& ��� '����� $&�& �����+ A)� �����1 )�� �(�� �� �������� ��&���&�� ���� ������� ��� ������ �� )� , ��������� .#+"� �%�� �� %������ �� �� �� �� ��� �&�%��� ( �� -0 %?1 #< ##�

����� 0&� ���� "& ��� '����� $&�& ���� + A)� � �%�� �� � J��$�������&�1 , ��������� (&��)���� 2$ ����� ��� (��� ��������&���&� &��'�� B�$ ��� B9�$������( ����� ( �� -0 %@1 ���<� �

�� ���� � �&� '�������� '&� �� �� ���� � A&� � ������� �& ��������� 6& ���� + , �&B �(�&�� � ���� ��&��(� � � ��- �&����� ���(&� 0��� 3�(� �&�� � ������ ( �� -0 %@1 ���<��"�

$��� B&� �#�5���� $&� � ��� <&�& ��� ��� "& ����D+ , ���&�������� ��% �&�%�� �� �������& �� )� ����&��� ���)��� ��+� �%�� ������� ( �� � 0 �� 0 (.1 ���<��#�

$� #� B&� ��� /&� '����#�#����� ,&� '##5�� <& ��� ; �5�� <&����!+ 7)� ��� �0���� ��� ��� ������ �� � ��- �&��� �� 0���3�(� � ���� )� ����� � ��&���� �(��� �� ���� ��� �������(���� ( �� �� (,��� 0 �?1 ���D<�� D�

A����� ;&� !������ �&� /����� A&� C5�� � '&� 1��� � =& ��� 0���� ;&����!+ ��������& ���&���� �� �(�&�� � ��.������ ��� �&&��(9�$� (��� ��� ������ �� , ���������� ( �� -0 %81 ��"<�""�

A�#� D&=& ��� A��� ;& ����D+ A-� ������( ���� �� )� �&�� ���� ����� ���� ,2�$� ��� ������ � ����� ��%��� �� ���(���� ������� -0 �� 0 �,��0 (8?1 !< #��

<�� =&� ��������� ;&� !#� =&� ������ A& ��� ��� ���� <& ���!!+

6��� ������ � ��%�&�� �&�� (��� ��� ������� 2�����1 ��.1 "�< ""�

<���� <&� E������������> �� =&� '������� 1&=& ��� �������� �&����!+ ,� ������� %$�����3� 4� � ���� � �% �� &��1 )�()&������ ��� �� -)��1 ����� � ��� ������� ���� ����� � �%)� � �&�%��$��� �� � ����� B$)� ���� � �%�� �� �� &��������� %� ( �� -0 %81 �"< ��

F��� D&-&� !�#��#�� A&� !������ �&<& ��� ��#�� ,&!& ����D+;%%����� �� &� ���� ����� �������� �� ��&���&�� ���� ��� )����&�F�-� %����� �� �� ��$� �&�%��� ( �� �� 1 81 ! "<!#D�

1��� � �&�& ��� ���� ���� � <&=& ���!#+ E����� ��� ��� � (���������� �� �&�� (��� ��� ������ ������� 2�� 0 ����� &��0 %71!����

'����5� =&� <������ � /& ��� -��� ��� ;&-& ���!�+ � ��� ��� ��; � ��*����� ���� 1 ��� ���0 7�&� 2� ��( J� �� I7�&� 2� ��( J� �� E��� �� � 9 ����

'��#G ��� 1& ��� ;��� � 1&<& �����+ 7 ���$����&��( �� ��(��& ��������� ��)-���I 0��� 3�(� %��� &������ 0���� �+���� .���0 91 "##<"!��

'�� ���������� �&� H#�����#� <& ��� ������ <&0& ����!+ 9&�� ���� ����� ���� ������� ��0 &��0 ( �� (,��� 0 .?1 ��#<����

'����#�#����� ,&� $� #� B&� '##5�� <& ��� ; �5�� <& ����!+��������& ���&���� �� )� 4�� ��%���1 � 0��� 3�(� 45,$������( ��%���1 �� � ��%�'�� 45,$������( � ���� ,B9�<�*� ����0 .�@1 ���<�� �

'����� $&�& ����!+ A ���� ������& �(�&���� �� �&���I )��%�� ���� �� ��%����� ��& ��� �&� ( �� (,��� 0 %%:1 ����<�����

/������ �&� ���� /&� !��� 1&� ��� '& ��� ������ <& ���� +B���)�%���& %��)����% �� ���� ������& �������� ��C,ED<?9� � ���, 4=�� 0 (9.1 �""<�D��

C��� �� /&� !����� "& ��� "#������� /&=& ����D+ A)� ��� �&�%���� )� ������� CJ�LD � �%�� �� ������� �� ��) ����� ���������� ����� ��� ��&���&�� ���� ���&�(���� ( �� � 0 �� 0 (81����<�� D�

C��� �� /&� <#������ =&� !����� "& ��� "#������� /&=& ����#+ ,��L;,, � ����� �� ��� ��� ������ �� ��� � (���� ��������(��� �& ��� )�()&� ����� ���)��� ����� ������� �&�%����( �� �� ?1 �� "<��#��

E������������> �� =&� < �� '&�&� ��� � � 1&A& ��� '�������1&=& ����#+ , %��0� 0���$3�(� � ���� ����� )� � �&�%�� ����� 0��� (��� � �%�� � ��� ��� ��� -�) )� ����� &������0���� ���� ������& ������ ��.���� (��0 2�� ����0 #��0�#�1 ?.1 # !�<# ���

B����� � �� '& �����+ , ����& 45,$������( ��%��� )� %���� % � ���(&� 0��� 3�(� %���� 2�� 0 ����� &��0 (�1 "D�"<"D���

B����� � �� '& ���� + 4�� 45,$������( � ����� ������ � ����&0��� 3�(� %���� +���� ( �� #��0 %1 ��"<��D�

B����� � �� '& ����#+ 4�� 45,$������( ��%���� �� �&�� ���� ����� ���� � ��� ���� � %�&��&� � ����<� ������� ������� 4��0 -0 ���,��0 (7@1 D�"<D���

B����� � �� '& ��� 6#�� $& ����"+ >�&���&� �&����( �� -� 45,$������( � ����� �� %��0� )� � � � ��� �&&� ����� �� ����� �� -�) )� ��%� ��.����� %���� -0 �� 0 �,��0 (8:1� ��!<� �" �

B����� � �� '& ��� '������� 1&=& �����+ 4��� ��� ��� ��%�&� ���%��( ���(����� ��.������ �� 4�� ���� ����� ���� ��( �� -0 %91 ���<��D�

B����� � �� '& ��� '����� =& ����!+ ;���&��%�� �� %��0� 4��0��� 3�(� � ����� �� �����$�����3� ��� &�()$ �(�&��� (������ ������� ( �� �� 1 %@1 #�<!��

H����� �& ��� '����� $&�& ����D+ �� �&�%�� � �%��

""! ��!.� /�� �� /���� �0 #��,

� B&��'-�&& 2������ E�1 +,� ( �� -��� � �����+1 (%� "��<""�

��.������ � � ������� �� ����� ��� ��&���&�� ���� ��, ���������� (��0 2�� ����0 #��0 �#�1 ?%1 ���#<�����

H����� �&� -���� 1&�& ��� '����� $&�& ����"+ ;��&���� ����)� ��� �0���� �� -� �&��� , ��������� ���$�&�%�� �=;9������( � ������ ( �� -0 .1 #��<#� �

H����� �&� ����� 0&� -���� 1&�&� �#G ������ <& ��� '����� $&�&�����+ ;�� ������ ��-��� ������ ���� �� 45, ������(

� ����� ��)���� ������( � ��� �&�%�� � �%�� ��.�������( �� �� 1 91 ��D�<�����

H����� B&� -��� 0&� $��5���� <&� A�� D& ��� ���� D& �����+;�� ����� �� 59�� -�) ����� &������ 0���� � ���� ���� ����� ���� � )� ���� ��.������ �.�� �� �� ��&���&������ �������� �� )� 9�$� (���� (��0 2�� ����0 #��0 �#�1 ?81 ��"< ��!�

,�������� ��%�� � ,����!� �B9�+ ��� ,����!�! �B9"+�

���*������ �� ���������� ������ ""�

� B&��'-�&& 2������ E�1 +,� ( �� -��� � �����+1 (%� "��<""�