Kurkumin Merupakan Senyawa Polifenol Yang Dapat Ditemukan Pada Temulawak
UJI EFEK PENGHAMBATAN ENZIM XANTIN OKSIDASE ...Tanaman yang kaya akan kandungan tanin, flavonoid dan...
Transcript of UJI EFEK PENGHAMBATAN ENZIM XANTIN OKSIDASE ...Tanaman yang kaya akan kandungan tanin, flavonoid dan...
UJI EFEK PENGHAMBATAN ENZIM XANTIN OKSIDASE KOMBINASI
EKSTRAK ETANOL SARANG SEMUT (Myrmecodia armata DC.) DAN
EKSTRAK ETANOL DAUN SALAM (Syzygium polyanthum Wigh. Walp.)
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh:
Dany Kristianto
NIM: 148114168
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2018
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
i
UJI EFEK PENGHAMBATAN ENZIM XANTIN OKSIDASE KOMBINASI
EKSTRAK ETANOL SARANG SEMUT (Myrmecodia armata DC.) DAN
EKSTRAK ETANOL DAUN SALAM (Syzygium polyanthum Wigh. Walp.)
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh:
Dany Kristianto
NIM: 148114168
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2018
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
ii
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iii
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iv
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
v
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
vi
PRAKATA
Puji dan syukur penulis haturkan ke hadirat Tuhan Yesus Kristus atas
berkat, rahmat, dan penyertaan-Nya hingga penelitian dan penyusunan skripsi
dengan judul “Uji Efek Penghambatan Enzim Xantin Oksidase Kombinasi
Ekstrak Etanol Sarang Semut (Myrmecodia armata DC.) dan Ekstrak Etanol
Daun Salam (Syzygium polyanthum Wigh. Walp.)” dapat penulis selesaikan.
Penelitian ini merupakan bagian dari penelitian Dr. Erna Tri Wulandari, M.Si., Apt.
dengan nomor SK 025/LPPM/USD/IV/2017 dengan judul proposal “Efek
Penghambatan Enzim Xantin Oksidase Ekstrak Daun Sidaguri (Sida
rhombifolia L) dan Daun Salam (Eugenia polyantha Wight)”
Skripsi ini penulis susun untuk memenuhi salah satu syarat memperoleh
gelar Sarjana Farmasi (S.Farm) program studi Farmasi Universitas Sanata Dharma.
Selama proses penyusunan skripsi ini penulis sadar bahwa pembuatan skripsi ini
tidak lepas dari dukungan dan bantuan dari berbagai pihak. Oleh karena itu, pada
kesempatan ini penulis ingin menyampaikan terima kasih kepada:
1. Ibu Aris Widayanti, M.Sc., Ph.D., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
2. Dr. Erna Tri Wulandari, M.Si, Apt., selaku Dosen Pembimbing skripsi dan
selaku Dosen Pembimbing Akademik atas kesabaran, arahan, bimbingan,
semangat, serta dukungannya selama proses penelitian hingga penyusunan
skripsi ini.
3. Dr. Yustina Sri Hartini, M.Si.,Apt.,selaku Dosen Penguji yang telah memberi
kritik dan saran yang sangat membangun dalam penelitian ini.
4. Bapak Florentinus Dika Octa Riswanto, M.Sc., selaku Dosen Penguji yang
telah memberi kritik dan saran yang sangat membangun dalam penelitian ini.
5. Dr. Dewi Setyaningsih, Apt., selaku Kepala Penanggung Jawab Laboratorium
Fakultas Farmasi yang telah memberikan izin dalam penggunaan semua
fasilitas laboratorium untuk kepentingan penelitian.
6. Bapak Yohanes Wagiran, selaku laboran laboratorium Farmakognosi-
Fitokimia yang telah membantu selama penelitian.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
vii
7. Keluarga tercinta Bapak Waluyo dan Ibu Darsini serta Adik Febry Kurniawan
yang selalu memberikan semangat, doa, dan dukungan pada penulis.
8. Rekan seperjuangan penelitian dan satu bimbingan ini yakni Martin
Vincentius, Agnes Puspitasari, Wisnu Adji, Lalla Ragha, Christofel Adiwijaya,
Axel Kevin, dan Sheela Apriana, terima kasih atas semangat dan kerjasamanya
selama ini.
9. Teman-teman FSM D 2014 dan Keluarga Besar Farmasi 2014, terima kasih
atas kebahagiaan dan kebersamaan selama ini.
10. Teman-teman satu meja praktikum yakni Dismas, Wita, Sari, Kevin, Delpin,
dan Diana, terima kasih atas kebersamaan saat suka duka menjalani praktikum
maupun membuat laporan praktikum.
11. Rekan satu regu pencinta alam yakni Stepanus Sinung, Yeremia Dika,
Alfapetra, Silva, Hapsara, Yohanes Dinar. Terima kasih atas segala semangat,
kebersamaan dan kenangan selama sejak bangku SMA hingga saat ini.
12. Serta semua pihak yang telah banyak membantu penulis yang tidak dapat
penulis tulis satu persatu.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
viii
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ...........................................................................................i
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING .................................................ii
HALAMAN PENGESAHAN .............................................................................iii
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA .............................................................iv
PERNYATAAN PUBLIKASI ............................................................................v
PRAKATA ..........................................................................................................vi
DAFTAR ISI .......................................................................................................viii
DAFTAR TABEL ...............................................................................................x
DAFTAR GAMBAR ..........................................................................................xi
DAFTRA LAMPIRAN .......................................................................................xii
ABSTRAK ..........................................................................................................xiii
ABSTRACT ..........................................................................................................xiv
PENDAHULUAN ..............................................................................................1
METODE PENELITIAN ....................................................................................2
Alat dan Bahan Penelitian .........................................................................2
Determinasi Tanaman ................................................................................3
Pengumpulan Bahan ..................................................................................3
Pembuatan Ekstrak Etanol Tunggal...........................................................3
Pembuatan Ekstrak Etanol Kombinasi ......................................................4
Uji Efek Inhibisi Xantin Oksidase .............................................................4
Pembuatan Larutan ....................................................................................4
Pembuatan Larutan Dapar Fosfat pH 7,5 ..................................................4
Pembuatan Larutan Enzim Xantin Oksidase .............................................4
Pembutan Larutan Substrat Xantin ............................................................5
Pembuatan Larutan Standar Allopurinol ...................................................5
Penentuan Optimasi Panjang Gelombang Maksimum ..............................5
Pengujian Blanko .......................................................................................5
Pengujian Kontrol Blanko .........................................................................6
Pengujian Larutan Uji Sampel ...................................................................6
Pengujian Larutan Kontrol Sampel ...........................................................6
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
ix
Pengujian Larutan Uji Allopurinol ............................................................7
Pengujian Larutan Kontrol Allopurinol .....................................................7
Perhitungan Nilai IC50 ...............................................................................7
Analisis Data ..............................................................................................7
HASIL DAN PEMBAHASAN ...........................................................................8
Penyiapan Bahan .......................................................................................8
Uji Kandungan Flavonoid dengan Metode KLT .......................................9
Uji Efek Penghambatan Enzim Xantin Oksidase ......................................11
KESIMPULAN DAN SARAN ...........................................................................13
UCAPAN TERIMAKASIH ................................................................................13
DAFTAR PUSTAKA .........................................................................................14
LAMPIRAN .......................................................................................................16
BIOGRAFI PENULIS ........................................................................................33
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
x
DAFTAR TABEL
Tabel I. Hasil uji KLT flavonoid.......................................................................10
Tabel II. Perbandingan IC50 ekstrak etanol sarang semut-daun salam- kombinasi-allopurinol ...........................................................................12
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xi
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Hasil KLT ekstrak etanol sarang semut dan kombinasi dengan fase diam silika gel 60 F254 dengan fase gerak n-butanol-asam asetat-air (4:1:5), yang diukur pada panjang gelombang 254 nm dan 366 nm ......................................................................................10
Gambar 2. Simplisia daun salam .......................................................................20
Gambar 3. Simplisia sarang semut ....................................................................20
Gambar 4. Ekstrak etanol daun salam ...............................................................21
Gambar 5. Ekstrak etanol sarang semut ............................................................21
Gambar 7. Kurva Allopurinol Repetisi 1 ..........................................................23
Gambar 8. Kurva Allopurinol Repetisi 2 ..........................................................23
Gambar 9. Kurva Allopurinol Repetisi 3 ..........................................................23
Gambar 10. Kurva Ekstrak Etanol Tunggal Repetisi 1 .......................................25
Gambar 11. Kurva Ekstrak Etanol Tunggal Repetisi 2 .......................................25
Gambar 12. Kurva Ekstrak Etanol Tunggal Repetisi 3 .......................................25
Gambar 13. Kurva Kombinasi Repetisi 1 ..........................................................27
Gambar 14. Kurva Kombinasi Repetisi 2 ..........................................................27
Gambar 15. Kurva Kombinasi Repetisi 3 ..........................................................27
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat pengesahan Determinasi......................................................16
Lampiran 2. Certificate of Analysis Xanthine Oxidase ....................................18
Lampiran 3. Certificate of Analysis Xanthine ..................................................19
Lampiran 4. Certificate of Analysis Quercetin .................................................20
Lampiran 5. Simplisia Salam dan Sarang Semut ..............................................21
Lampiran 6. Ekstrak Etanol Daun Salam dan Sarang Semut ............................22
Lampiran 7. Data Uji Penghambatan Enzim Xantin Oksidase .........................24
Lampiran 8. Sertifikat CE & BU ......................................................................29
Lampiran 9. Uji Statistik ...................................................................................30
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiii
ABSTRAK Hiperurisemia adalah keadaan di mana terjadi peningkatan kadar asam urat darah di atas normal. Enzim yang berperan dalam sintesis asam urat adalah xantin oksidase (XO) yang mengkatalisis oksidasi hipoxantin dan xantin menjadi asam urat. Obat yang digunakan sebagai penghambat aktivitas enzim xantin oksidase salah satunya adalah allopurinol. Allopurinol bekerja mengurangi sintesis asam urat dengan cara menghambat aktivitas enzim xantin oksidase. Umbi sarang semut dan daun salam sering digunakan sebagai obat tradisional untuk asam urat.Tanaman tersebut diketahui memiliki kandungan flavonoid.
Penelitian dilakukan dengan determinasi tanaman salam dan tanaman sarang semut, pengumpulan daun salam dan umbi sarang semut, pembuatan simplisia, pembuatan ekstrak etanol sarang semut dan kombinasi ekstrak etanol daun salam dan ekstrak etanol umbi sarang semut, uji kandungan flavonoid, uji efek penghambatan enzim xantin oksidase dan analisis data.
Hasil uji efek penghambatan enzim xantin oksidase oleh allopurinol sebagai pembanding diperoleh nilai IC50 sebesar 0,168µg/mL, ekstrak etanol umbi sarang semut diperoleh nilai IC50 sebesar 21,55 µg/mL, sedangkan kombinasi ekstrak etanol daun salam dan ekstrak etanol umbi sarang semut diperoleh nilai IC50 sebesar 11,58 µg/mL. Dari hasil yang diperoleh dapat disimpulkan bahwa kombinasi ekstrak etanol daun salam dan ekstrak etanol umbi sarang semut lebih baik dibandingkan ekstrak etanol tunggal sarang semut dalam aktivitas penghambatan xantin oksidase namun tidak lebih baik bila dibanding dengan allopurinol.
Kata kunci: sarang semut, daun salam, xantin oksidase, ekstrak etanol
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiv
ABSTRACT
Hyperuricemia is a condition in which an elevated uric acid level is above normal level. The enzyme that plays a role in uric acid synthesis is xanthine oxidase (XO) which catalyzes the oxidation of hypoxanthine and xanthine into uric acid. Drugs used as inhibitors of xantin oxidase enzyme activity are allopurinol. Allopurinol works to reduce uric synthesis by inhibiting xanthine oxidase enzyme activity. Myrmecodia armata DC. and Syzygium polyanthum Wigh. Walp. is used as traditional medicine for gout. The plant is known to contain flavonoids.
The research was conducted by determination of Syzygium polyanthum Wigh. Walp. and Myrmecodia armata DC., preparation to simplicia form, ethanol extract of Myrmecodia armata DC. and combination of ethanol extract Syzygium polyanthumWigh. Walp. and of Myrmecodia armata DC., flavonoid content test, xantin oxidase enzyme inhibition effect and data analysis.
The result of inhibition effect of xanthine oxidase enzyme by allopurinol as comparator obtained IC50 value of 0.168 μg / mL, extract ethanol Myrmecodia armata DC. obtained IC50 value 21,55 μg / mL, and combination of etanol extract Syzygium polyanthumWigh. Walp. and ethanol extract of Myrmecodia armata DC. obtained IC50 value 11,58 μg / mL. From the results obtained can be concluded that the combination of ethanol extract Syzygium polyanthumWigh. Walp. and ethanol extract of Myrmecodia armata DC. is better than ethanol extract of Myrmecodia armata DC. in the activity of inhibition of xanthine oxidase but not better when compared with allopurinol.
Keywords: Myrmecodia armata DC., Syzygium polyanthum Wigh. Walp., xanthine oxidase, ethanol extract
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
1
PENDAHULUAN
Hiperurisemia adalah peningkatan kadar asam urat darah di atas normal.
Konsentrasi asam urat yang normal adalah 7,0 mg/dL untuk pria dan 6,0 mg/dL
untuk wanita. Hiperurisemia dapat terjadi karena peningkatan metabolisme asam
urat, penurunan pengeluaran asam urat urin atau gabungan dari keduanya (Sudoyo,
2009). Peningkatan kadar asam urat (hiperurisemia) dapat mengakibatkan
gangguan pada tubuh manusia seperti perasaan linu-linu di daerah persendian dan
sering disertai timbulnya rasa nyeri (Andry, 2009). Hiperurisemia yang
berkepanjangan dapat menyebabkan terjadinya gout. Gout merupakan penyakit
akibat adanya penumpukan kristal monosodium urat pada jaringan akibat
peningkatan kadar asam urat (Sudoyo, 2009).
Asam urat merupakan senyawa kimia hasil akhir dari metabolisme asam
nukleat atau metabolisme purin dalam tubuh. Berdasarkan penyelidikan bahwa
90% dari asam urat merupakan hasil katabolisme purin yang dibantu oleh enzim
guanase dan xantin oksidase (Shamley, 2005). Xantin oksidase (XO) mengkatalisis
reaksi hipoxantin dan xantin menjadi asam urat. Allopurinol adalah salah satu obat
sintetis yang digunakan untuk terapi asam urat. Allopurinol bekerja dengan cara
menghambat enzim XO. Dalam penggunaan allopurinol sebagai penurun asam urat,
allopurinol juga dapat menyebabkan efek samping seperti alergi, demam,
menggigil, leukopenia, gagal ginjal dan hati, dan ganggunan pencernaan (Dipiro et
al., 2008). Oleh karena itu agar terhindar dari efek samping dari allopurinol maka
perlu dicari alternatif pengobatan yang lebih aman dengan menggunakan obat
tradisional. Telah diketahui bahwa Indonesia memiliki kekayaan hayati yang
diantaranya berpotensi sebagai inhibitor xantin oksidase dan antigout, yaitu sarang
semut (Myrmecodia armata DC.) dan daun salam (Syzygium polyanthum Wigh.
Walp.).
Tanaman yang kaya akan kandungan tanin, flavonoid dan polifenol, dan
asam ellagat (Azmi et al., 2012) serta alkaloid dapat berperan sebagai obat untuk
penyakit gout dengan menghambat kerja enzim xantin oksidase. Flavonoid
berpotensi sebagai inhibitor xantin oksidase (Cos et al., 1998), saponin dan
polifenol juga memiliki kemampuan sebagai inhibitor xantin oksidase yang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
2
mekanisme inhibisinya belum diketahui. Uji penapisan kimia dari tumbuhan sarang
semut menunjukan bahwa tumbuhan tersebut mengandung senyawa aktif dari
golongan flavonoid. Ekstrak etanol daun salam mampu menurunkan kadar asam
urat tikus putih jantan galur wistar (Rattus norvegicus L.) yang diinduksi potasium
oksonat. Telah dilakukan sebelumnya penelitian pemberian ekstrak etanol 70%
umbi sarang semut (Hydnophytum moseleyanum Becc.) pada dosis 119 dan 179
mg/200 g bb dapat menurunkan kadar asam urat (p<0,05) tikus putih jantan yang
diinduksi kalium oksonat dengan efektivitas masing-masing 58,59 dan 46,37%
(Natasha, 2012). Penelitian sebelumnya juga menunjukan bahwa efek
penghambatan enzim xantin oksidase oleh kombinasi ekstrak daun sidaguri dan
rimpang jahe merah lebih baik bila dibandingkan dengan ekstrak tunggalnya (Rizki,
2016). Efek yang dimungkinkan muncul dari kombinasi ekstrak yang dilakukan
dapat berupa efek sinergis, aditif maupun antagonis (Bulusu, 2016).
Dalam penelitian ini, dilakukan penelitian untuk menentukan efek
penghambatan enzim xantin oksidase sarang semut dengan membandingkan IC50
ekstrak tunggal sarang semut dengan ekstrak kombinasi daun salam dan umbi
sarang semut untuk mengetahui efek tunggal maupun efek yang dihasilkan dari
kombinasi ekstrak etanol.
METODE PENELITIAN
Alat dan Bahan Penelitian
Bahan-bahan yang diperlukan yaitu umbi sarang semut yang diperoleh dari
Kecamatan Bomberay, Fakfak, Papua Barat, daun salam dari CV Merapi Farma, air
bebas CO2, KH2PO4 1 M, KH2PO4 1 M, HCl 1 N, dapar fosfat 0,05 M, NaOH 1 M,
DMSO, substrat xantin (Sigma Aldrich), allopurinol (Sigma Aldrich), enzim xantin
oksidase (Sigma Aldrich). Alat-alat yang digunakan adalah spektrofotometer UV-
Vis (Shimadzu), kromatografi lapis tipis (KLT), lempeng KLT silika gel GF254,
timbangan analitik (Mettler Toledo), rotary evaporator (Buchi), pH meter, vortex,
ultrasonic, mikrotube (Eppendorf), mikropipet (Socorex), dan alat gelas yang lazim
digunakan dalam penelitian (Pyrex).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
3
Determinasi Tanaman
Determinasi dilakukan terhadap tanaman sarang semut dan salam dilakukan
di laboratorium Biologi Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Gajah Mada
Yogyakarta.
Pengumpulan Bahan
Tanaman sarang semut diambil dari Papua pada bulan Mei 2017, tepatnya
Kecamatan Bomberay, Fakfak, Papua Barat. Tanaman sarang semut diambil dari
pohon induk yaitu pohon matoa. Sarang semut dipanen dari ujung pangkal
umbinya, kemudian dicuci dan dibersihkan dengan air mengalir untuk
menghilangkan pengotor. Sarang semut dipotong dengan ukuran sedang,
dibersihkan kembali dari pengotor, dikeringkan kembali selama 1-2 minggu di
bawah sinar matahari hingga kering yaitu jika dapat hancur ketika diremas dengan
tangan. Daun salam diambil dari CV Merapi Farma dengan spesifikasi berupa daun
segar, warna hijau, utuh tidak berlobang, bersih, daun keempat dari pucuk dan
keempat dari pangkal batang. Pencucian dilakukan terlebih dahulu untuk
menghilangkan kotoran yang menempel seperti debu dan serangga. Bagian daun
dipisahkan dari bagian tanaman lain yang terikut saat pengumpulan.kemudian
dicuci dengan air mengalir untuk menghilangkan kotoran yang melekat lalu
ditiriskan sampai sisa air menghilang.
Pembuatan Ekstrak Etanol Tunggal Sarang Semut
Umbi sarang semut dan daun salam dikeringkan dalam oven pada suhu 40ºC
sampai kering, dikatakan kering jika dapat hancur ketika diremas dengan tangan.
Umbi sarang semut dan daun salam yang telah kering kemudian diserbuk
menggunakan blender, lalu diayak dengan ayakan no.40 mesh. Ditimbang kurang
lebih 10 g serbuk kering sarang semut ditambah etanol 96% sebanyak 100 mL
kemudian dimaserasi sambil sekali-kali diaduk selama 24 jam, setelah itu disaring
dengan corong Buchner sampai diperoleh maserat . Maserasi dilakukan berulang–
ulang dengan pelarut yang sama sampai filtrat hasil maserasi jernih. Maserat yang
diperoleh dipekatkan menggunakan vacuum rotary evaporator pada suhu lebih
kurang 50oC sehingga diperoleh ekstrak kering etanol.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
4
Pembuatan Ekstrak Etanol Kombinasi Sarang Semut dan Daun Salam
Ditimbang kurang lebih 10 g serbuk kering daun salam ditambah etanol
96% sebanyak 100 mL kemudian dimaserasi sambil sekali-kali diaduk selama 24
jam, setelah itu disaring dengan corong Buchner sampai diperoleh maserat.
Maserasi dilakukan berulang–ulang dengan pelarut sama sampai filtrat hasil
maserasi jernih. Maserat yang diperoleh dipekatkan menggunakan vacuum rotary
evaporator pada suhu lebih kurang 50oC sehingga diperoleh ekstrak kering etanol.
Kemudian dengan perbandingan 1:1, ekstrak etanol kering sarang semut dan
daun salam dikombinasikan untuk pembuatan ekstrak etanol kombinasi.
Uji Efek Inhibisi Xantin Oksidase
Pengujian efek inhibitor xantin oksidase dilakukan pada ekstrak etanol
sarang semut dan kombinasi ekstrak etanol sarang semut dan daun salam . Prosedur
penelitian merujuk pada Owen et.al. (1999) dan Umamaheswari et.al. (2009).
Pembuatan Larutan
Pembuatan larutan meliputi pembuatan larutan dapar pH 7,5; pembuatan
larutan HCl 1 N; pembuatan larutan NaOH 2 N; pembuatan larutan enzim xantin
oksidase 0,1 U/mL; pembuatan larutan induk substrat xantin 1 mM; pembuatan
larutan seri substrat xantin 0,15 mM; pembuatan larutan uji ekstrak daun salam; dan
pembuatan larutan pembanding allopurinol.
Pembuatan Larutan Dapar Fosfat pH 7,5
KH2PO4 ditimbang 6,805 gram kemudian dilarutkan ke dalam 600 mL
Aquadest Bebas CO2 selanjutnya ditambahkan 18 mL larutan NaOH 2 N kemudian
dimasukkan ke dalam labu takar 1000 mL dan ditambahkan menggunakan
Aquadest Bebas CO2 dan di-adjust pH menggunakan NaOH 0,2 N atau HCl 0,2 N
sampai pH 7,5.
Pembuatan Larutan Enzim Xantin Oksidase
Label kemasan enzim xantin oksidase menunjukan perhitungan 0,8
unit/mg protein. Pembuatan konsentrasi larutan enzim 0,1 unit/mL.Total mg protein
adalahh 5,126 unit/6,408 mg protein. Enzim xantin oksidase ditimbang sebanyak
9,0875 mg, kemudian dilarutkan menggunakan dapar fosfat dimasukkan di dalam
labu takar 10,0 mL hingga batas tanda.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
5
Pembuatan Larutan Substrat Xantin
Substrat xantin 15,21 mg ditimbang kemudian dilarutkan menggunakan
beberapa tetes NaOH 0,2 N hingga larut dan dimasukkan dalam labu takar 100 mL
dan ditambahkan menggunakan Aquadest Bebas CO2. Larutan substrat xantin
dibuat dengan cara mengencerkan larutan induk hingga diperoleh larutan substrat
xantin dengan konsentrasi 0,15 mM.
Pembuatan Larutan Standar Allopurinol
Allopurinol sebanyak 10 mg ditimbang dan dilarutkan dengan beberapa
tetes NaOH 1 N kemudian dimasukkan ke dalam labu takar 10,0 mL dan diencerkan
dengan aquadest bebas CO2 sampai batas tanda sehingga didapatkan konsentrasi
1000 µg/mL. Standar allopurinol dibuat dengan cara mengencerkan larutan induk
sehingga didapatkan larutan standar allopurinol dengan konsentrasi 0,5; 1; 2,5; 5;
dan 10 µg/mL.
Penentuan Optimasi Panjang Gelombang Maksimum
Penentuan optimasi panjang gelombang dilakukan sebelum uji inhibisi
dengan tujuan untuk menentukan kondisi optimum dimana panjang gelombang
menghasilkan serapan maksimum. Penentuan optimasi panjang gelombang
dilakukan dengan mengambil larutan dapar fosfat 0,05 M sebanyak 3,9 mL
dimasukkan ke dalam tabung reaksi kemudian ditambahkan 2 mL larutan substrat
diinkubasi selama 15 menit. Kemudian ditambahkan 0,1 mL larutan xantin oksidase
digojok hingga homogen kemudian inkubasi selama 30 menit. Kemudian
ditambahkan 1 mL HCl 1 N untuk menghentikan reaksi. Kemudian optimasi
dilakukan menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 200-400 nm
dan didapatkan panjang gelombang 291,5 nm.
Pengujian Larutan Blanko
Sebanyak 3,9 mL larutan dapar fosfat 0,05 M diambil dan dimasukkan ke
dalam tabung reaksi dan ditambahkan dengan larutan substrat xantin sebanyak 2
mL, prainkubasi selama 15 menit. Kemudian ditambahkan larutan enzim xantin
oksidase sebanyak 0,1 mL dan diinkubasi pada suhu 30oC selama 30 menit. Reaksi
dihentikan dengan penambahan HCl 1 N sebanyak 1 mL, diukur serapannya pada
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
6
panjang gelombang 291,5 nm menggunakan spekrofotometer UV. Pengujian
dilakukan sebanyak 3 kali.
Pengujian Kontrol Blanko
Sebanyak 3,9 mL larutan dapar fosfat 0,05 M diambil dan dimasukkan ke
dalam tabung reaksi dan ditambahkan larutan substrat xantin sebanyak 2 mL,
dilakukan prainkubasi selama 15 menit. Kemudian ditambahkan 0,1 ml dapar fosfat
dan diinkubasi pada suhu 30oC selama 30 menit dan ditambahkan HCl 1 N
sebanyak 1 mL untuk menghentikan reaksi dan diukur serapannya pada panjang
gelombang 291,5 nm menggunakan spekrofotometer UV. Pengujian dilakukan
sebanyak 3 kali.
Pengujian Larutan Uji Sampel
Sebanyak 1 mL larutan uji dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan
ditambahkan dengan larutan dapar fosfat 0,05 M sebanyak 2,9 mL dan larutan
substrat xantin sebanyak 2 mL dilakukan prainkubasi selama 15 menit. Kemudian
ditambahkan 0,1 mL enzim xantin oksidase dan diinkubasi pada suhu 30oC selama
30 menit dan ditambahkan HCl 1 N sebayak 1 mL untuk menghentikan reaksi,
diukur serapannya pada panjang gelombang 291,5 nm menggunakan
spekrofotometer UV. Pengujian dilakukan sebanyak 3 kali.
Pengujian Larutan Kontrol Sampel
Sebanyak 1 mL larutan uji dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan
ditambahkan dengan larutan dapar fosfat 0,05 M sebanyak 2,9 mL dan larutan
substrat xantin sebanyak 2 mL dilakukan prainkubasi selama 15 menit. Kemudian
ditambahkan 0,1 mL dapar fosfat dan diinkubasi pada suhu 30oC selama 30 menit
dan ditambahkan HCl 1 N sebayak 1 mL untuk menghentikan reaksi, diukur
serapannya pada panjang gelombang 291,5 nm menggunakan spekrofotometer UV.
Pengujian dilakukan sebanyak 3 kali.
Pengujian Larutan Uji Allopurinol
Larutan standar allopurinol dimasukan 1 mL ke dalam tabung reaksi
kemudian ditambahkan dengan larutan dapar fosfat 0,05 M sebanyak 2,9 mL dan
larutan substrat xantin sebanyak 2,0 mL kemudian dilakukan prainkubasi selama
15 menit. Kemudian ditambahkan larutan enzim xantin oksidase sebanyak 0,1 mL
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
7
dan digojog hingga homogen diinkubasi pada suhu optimum selama 30 menit.
Reaksi dihentikan dengan penambahan HCl 1 N sebanyak 1 mL, diukur serapannya
pada panjang gelombang 291,5 nm menggunakan spekrofotometer UV. Pengujian
dilakukan sebanyak 3 kali.
Pengujian Larutan Kontrol Allopurinol
Larutan standar allopurinol dimasukan 1 mL ke dalam tabung reaksi
kemudian ditambahkan dengan larutan dapar fosfat 0,05 M sebanyak 2,9 mL dan
larutan substrat xantin sebanyak 2,0 mL kemudian dilakukan prainkubasi selama
15 menit. Kemudian ditambahkan larutan dapar fosfat 0,05 M sebanyak 0,1 mL dan
digojog hingga homogen diinkubasi pada suhu optimum selama 30 menit. Reaksi
dihentikan dengan penambahan HCl 1 N sebanyak 1 mL, diukur serapannya pada
panjang gelombang 291,5 nm menggunakan spekrofotometer UV. Pengujian
dilakukan sebanyak 3 kali.
Perhitungan Nilai IC50
Perhitungan % Aktivitas inhibitor xantin oksidase dapat dihitung dengan
rumus : % Inhibisi = (1-𝐵𝐵𝐴𝐴) x 100%
Keterangan :
A = absorbansi blanko – absorbansi kontrol blanko
B = absorbansi sampel – absorbansi kontrol sampel
Nilai IC50 dihitung menggunakan rumus persamaan regresi untuk
menentukan y = a + bx. Aktivitas inhibisi dinyatakan dengan Inhibition
Concentration 50% (IC50) yaitu konsentrasi sampel yang dapat menghambat kerja
enzim xantin oksidase sebanyak 50%. Nilai IC50 didapatkan dari nilai x setelah
mengganti y = 50.
Analisis Data
Data uji KLT yang didapatkan dibuat dalam bentuk tabel dan grafik, dan
selanjutnya hasilnya dideskripsikan. Data uji efek penghambatan enzim xantin
oksidase dihitung nilai absorbansi sampel yang didapatkan, persen inhibisi, setelah
didapatkan persen inhibisi kemudian dilanjutkan dengan menghitung nilai IC50
menggunakan metode regresi linear. Analisis Shapiro-Wilk digunakan untuk
melihat normalitas distribusi data dan data yang didapatkan terdistribusi normal
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
8
maka dapat dilakukan uji Anova satu arah dengan taraf kepercayaan 95% untuk
mengetahui apakah ada perbedaan data antar kelompok. Pada uji Anova satu arah
yang dilakukan didapatkan hasil nilai P < 0,05, yang selanjutnya dilakukan dengan
analisis Post-Hoc untuk dapat mengetahui bahwa kedua kelompok yang berbeda
bermakna. Hasil nilai P < 0,05 menunjukkan bahwa terdapat perbedaan rerata
bermakna antara dua kelompok data.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Penyiapan Bahan
Bahan yang digunakan pada penelitian ini berupa simplisia dari umbi sarang
semut dan daun salam. Umbi sarang semut diambil dari Papua pada bulan Mei
2017, tepatnya Kecamatan Bomberay, Fakfak, Papua Barat yaitu dari pohon matoa.
Sarang semut dipanen dari ujung pangkal umbinya. Daun salam diambil dari CV
Merapi Farma. Kedua bahan tersebut dideterminasi di Laboratorium Sistematika
Tumbuhan, Fakultas Biologi, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta. Determinasi
tanaman berfungsi untuk mengetahui dan memastikan jenis tanaman yang akan
digunakan pada saat penelitian secara detail dan lengkap serta dapat
dipertanggungjawabkan secara ilmiah. Hasil dari determinasi menunjukkan bahwa
tanaman yang diambil benar merupakan tanaman salam dan tanaman sarang semut.
Bagian yang digunakan untuk determinasi adalah keseluruhan bagian tanaman yang
meliputi akar, batang, dan daun. Daun salam yang dipilih dengan spesifikasi berupa
daun segar, warna hijau, utuh tidak berlobang, bersih, daun keempat dari pucuk dan
keempat dari pangkal batang. Pencucian dilakukan terlebih dahulu untuk
menghilangkan kotoran yang menempel seperti debu dan serangga. Tanaman
sarang semut dan daun salam dikeringkan dalam oven pada suhu 40ºC sampai
kering, dikatakan kering jika daun dapat hancur ketika diremas dengan tangan.
Selanjutnya umbi sarang semut dan daun salam yang telah kering kemudian
diserbuk menggunakan blender kemudian diayak.
Metode yang digunakan untuk ekstraksi serbuk simplisia daun salam dan
sarang semut menggunakan metode ekstraksi pelarut dingin yaitu maserasi.
Maserasi adalah proses pengekstrakan simplisia menggunakan pelarut dengan
beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruangan (kamar). Pada
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
9
proses pembuatan ekstrak, masing-masing bahan dilakukan secara terpisah.
Masing–masing ditimbang kurang lebih 10 g serbuk kering umbi sarang semut
maupun daun salam ditambah etanol 96% sebanyak 100 mL kemudian dimaserasi
sambil sekali-kali diaduk selama 24 jam, setelah itu disaring dengan corong
Buchner sampai diperoleh maserat. Maserasi dilakukan berulang–ulang dengan
pelarut sama sampai filtrat hasil maserasi jernih. Maserat yang diperoleh dipekatkan
menggunakan vacuum rotary evaporator pada suhu lebih kurang 50oC sehingga
diperoleh ekstrak kering etanol.
Uji Kandungan Flavonoid dengan Metode KLT
Uji kandungan yang dilakukan dengan metode Kromatografi Lapis Tipis
(KLT). Pemakaian KLT bertujuan untuk memisahkan dan mengetahui kandungan
senyawa pada ekstrak etanol yang telah dibuat. Standar pembanding yang
digunakan adalah standar quersetin yang merupakan flavonoid golongan flavonol
yang mempunyai gugus keto pada C-4 dan memiliki gugus hidroksi pada atom C-
3 atau C-5 yang bertetangga dari flavon dan flavonol. Quersetin membentuk
backbone bagi banyak flavonoid lain seperti rutin, hesperidin, naringenin, dan
tangeritin. Quersetin adalah flavonoid yang jumlahnya melimpah di alam
(Lakhanpal, 2007). Fase diam yang digunakan adalah silika gel 60 F254 dan fase
gerak yang digunakan n-butanol-asam asetat-air (4:1:5). Fase gerak berfungsi
sebagai pelarut pengelusi yang bergerak naik di fase diam. Hasil positif adanya
flavonoid pada elusi ditunjukkan dengan dengan adanya bercak berwarna kuning
terang pada panjang gelombang 366 nm dibawah sinar tampak. Pada 4 titik
penotolan sampel ditotolkan ekstrak etanol umbi sarang semut, ekstrak daun etanol
salam, ekstrak etanol kombinasi umbi sarang semut- daun salam, dan quersetin.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
10
Gambar 1. Hasil KLT ekstrak etanol sarang semut dan kombinasi dengan fase diam
silika gel 60 F254 dengan fase gerak n-butanol-asam asetat-air (4:1:5), yang diukur pada
panjang gelombang 254 nm (A) dan 366 nm (B). Keterangan : i = sarang semut, ii = daun
salam, iii = kombinasi sarang semut-daun salam, iv = quersetin.
Tabel I. Hasil uji KLT flavonoid
Panjang gelombang Sampel KLT Nomor bercak Rf
254 nm
i 1 0,93 ii 2 0,93 iii 3 0,93 iv 4 0,93
366 nm
i 5 0,67 6 0,93
ii 7 0,47 8 0,93
iii 9 0,67 10 0,93
iv 11 0,93
Berdasarkan hasil uji KLT pada ekstrak etanol umbi sarang semut dan
kombinasi dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol umbi sarang semut dan
kombinasi memiliki hasil positif yaitu mengandung senyawa flavonoid yang
ditandai dengan adanya bercak kuning. Dan hal tersebut diperkuat dengan adanya
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
11
banyak bercak yang muncul, tetapi terdapat bercak diantara ketiganya yang
memiliki nilai retardation factor (Rf) yang sama dengan standar quersetin yaitu
0,93. Rf yang didapat tersebut kurang ideal karena dapat dipengaruhi oleh
kelembaban, ketebalan layer, jarak elusi, dan temperatur lingkungan (Srivastava,
2011).
Uji Efek Penghambatan Enzim Xantin Oksidase
Pengujian efek penghambatan enzim xantin oksidase dilakukan
menggunakan spektrofotemetri pada panjang gelombang maksimum. Prinsip
pengukuran uji efek penghambatan enxim xantin oksidase adalah mengukur jumlah
asam urat yang terbentuk pada reaksi yang dikatalis oleh xantin oksidase (Rinayanti
et al, 2016).
Pengujian terdiri dari uji pendahuluan, pengujian blanko, pengujian
sampel,dan pengujian pembanding. Sebelum pengujian dilakukan, perlu adanya
optimasi panjang gelombang yang bertujuan untuk menetukan kondisi optimum
dan uji aktivitas xantin oksidase terhadap sampel. Optimasi dilakukan pada panjang
gelombang 200-400 nm, dan didapatkan hasil dari optimasi panjang gelombang
maksimum 291,5 nm. Pada penelitian yang dilakukan Ummamaheswari et al
(2007) yang menjadi acuan penelitian ini menunjukkan panjang gelombang
maksimum yang berbeda, yaitu pada panjang gelombang maksimum 290 nm.
Pengujian efek penghambatan enzim xantin oksidase menggunakan dapar
fosfat pH 7,5; suhu 30o C; waktu prainkubasi 15 menit dan inkubasi 30 menit;
konsentrasi substrat 0,15 mM (Iswantini, 2014).
Standar allopurinol digunakan dalam pengujian terhadap sampel dengan
menggunakan variasi konsentrasi yaitu 0,5; 1; 2,5; 5; dan 10 µg/mL yang
diencerkan menggunakan larutan induk dengan konsentrasi 1000 µg/mL. Dari hasil
pengujian diperoleh rata-rata nilai IC50 sebesar 0,168 µg/mL untuk memberikan
50% efek penghambatan terhadap aktivitas enzim xantin oksidase.
Pengujian efek penghambatan enzim xantin oksidase menggunakan
sampel ekstrak etanol sarang semut dan kombinasi ekstrak etanol umbi sarang
semut dengan ekstrak etanol daun salam dengan perbandingan 1:1. Konsentrasi
yang digunakan yaitu 10; 25; 50; 75; dan 100 µg/mL yang diencerkan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
12
menggunakan larutan induk dengan konsentrasi 100.000 µg/mL. Pengujian sampel
dilakukan dengan berbagai varian konsentrasi bertujuan untuk melihat pengaruh
konsentrasi sampel dalam peningkatan daya inhibisi. Dan untuk mengetahui
pengaruh inhibisi sampel tersebut pada aktivitas enzim, dilakukan pengujian
aktivitas enzim tanpa penambahan sampel (blanko).
Hasil pengukuran uji penghambatan enzim xantin oksidase ekstrak etanol
sarang semut diperoleh rata-rata nilai IC50 sebesar 21,552 µg/mL. Pada penelitian
sebelumnya diperoleh nilai IC50 ekstrak etanol daun salam sebesar 24,263 µg/mL
(Puspitasari, 2018). Dan untuk kombinasi ekstrak etanol sarang semut dan ekstrak
etanol daun salam diperoleh rata-rata nilai IC50 sebesar 11,582 µg/mL. Tabel II. Perbandingan IC50 ekstrak etanol sarang semut-daun salam-kombinasi-allopurinol
Sampel IC50 (µg/mL)
Sarang semut 21,552
Salam 24,263
Kombinasi sarang semut-salam 11,582
Allopurinol 0,168
Bila membandingkan hasil dari pengujian terhadap allopurinol yaitu rata-
rata nilai IC50 sebesar 0,168 µg/mL, rata-rata nilai IC50 kombinasi ekstrak etanol
umbi sarang semut dengan ekstrak etanol daun salam (rata-rata nilai IC50 sebesar
11,582 µg/mL) lebih kecil dibanding ekstrak etanol umbi sarang semut (rata-rata
nilai IC50 sebesar 21,552 µg/mL). Hasil tersebut menunjukan bahwa kombinasi
ekstrak etanol umbi sarang semut dengan ekstrak etanol daun salam memiliki efek
penghambatan yang lebih besar dibandingkan ekstrak etanol umbi sarang semut
dalam penghambatan aktivitas xantin oksidase.
Kombinasi menunjukan hasil yang lebih baik dikarenakan adanya efek
yang sinergis kandungan metabolit sekunder dalam ekstrak etanol umbi sarang
semut dan daun salam. Hasil analisis statistik dengan menggunakan uji one way
Anova menyatakan bahwa adanya perbedaan nilai IC50 antara dua kelompok
dengan nilai signifikansi 0,000 (P< 0,05) dan uji Post Hoc yang menunjukan nilai
IC50 antara dua kelompok tersebut berbeda bermakna.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
13
KESIMPULAN
Hasil penelitian uji efek penghambatan enzim xantin oksidase kombinasi
ekstrak etanol umbi sarang semut dan ekstrak etanol daun salam lebih baik
dibandingkan dengan ekstrak etanol umbi sarang semut terhadap penghambatan
xantin oksidase, yaitu dengan rata-rata nilai IC50 sebesar 11,582 µg/mL.
SARAN
Dapat dilakukan penelitian lebih lanjut yaitu dengan isolasi dan
identifikasi jenis senyawa flavonoid yang terdapat dalam ekstrak etanol umbi
sarang semut dan daun salam yang dapat menghambat enzim xantin oksidase dan
apakah senyawa tersebut berkontribusi terhadap penurunan kadar asam urat. Dapat
dilakukan juga penelitian uji efek penghambatan enzim xantin oksidase dengan
perbandingan kombinasi yang berbeda, seperti 2:1, 3:1, atau seterusnya dengan
harapan dapat menunjukan efek yang setara atau lebih baik dari allopurinol.
Ucapan Terimakasih
Penelitian ini dilaksanakan dengan pembiayaan dari Lembaga Penelitian
dan Pengabdian kepada Masyarakat Universitas Sanata Dharma dengan nomor
kontrak 070/Penel./LPPM-USD/IV/2017.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
14
DAFTAR PUSTAKA
Andry, Saryono, Arif Setyo Upoyo. 2009. Analisis Faktor–Faktor yang Mempengaruhi Kadar Asam Urat pada Pekerja Kantor di Desa Karang Turi, Kecamatan Bumiayu, Kabupaten Brebes. Jurnal Keperawatan Soedirman (The Soedirman Journal of Nursing), Volume 4 No.1 Maret 2009. Aru W, Sudoyo. 2009. Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam, jilid II, edisi V. Jakarta: Interna Publishing. Baughman D. C & Hackley, J. C. 2000. Azmi,S. et.al. 2012. Xanthine Oxidase Inhibitory Activity from Potential Malaysian Medicinal Plant as Remedie for Gout.International Food Research Journal,19(1): 159 – 165 Bulusu, K.C. et.al. 2016 . Modelling of compound combination effects and
applications to efficacy and toxicity: state-of-the-art, challenges and perspectives. Drug Discovery Today vol.21
Cos P et al. 1998. Structure-Activity Relationship and Classification of Flavonoids as Inhibitors of Xanthine Oxidase and superoxide Scavengers. JNat Prod 61:71-76.
Dipiro, J.T., et.Al. 2008. Pharmacotherapy: A Pathophysiologic Approach, Seventh Edition. Mc-Graw Hill. Iswantini D, Yulian M, Mulijani S, Trivadila, 2014, Inhibition Kinetics of Sida rhombifolia L Extract toward Xanthine Oxidase by Electrochemical
Method, Indonesian Journal of Chemistry.14 (1), 71 – 77 Lakhanpal P., Rai D.K. , 2007, Quercetin: A Versatile Flavonoid, Internet Journal
of Medical Update, Vol. 2 Liu X, Chen R, Shang Y, Jiao B, Huang C. 2008. Lithospermic acid as a novel
xanthine oxidase inhibitor has anti-inflammatory and hypouricemic effects in rats. Chem-Biol Interact. 176:137-142.
Maimun. 2007. Asam Urat dan Hiperuresemia. Majalah Kedokteran Nusantara Volume 40(1). Universitas Sumatera Utara.
Milian et al. 2004. Reactive Oxygen Species (ROS) Generation Inhibited by Aporphine and Phenanthrene Alkaloids Semi-Synthesized from Natural Boldine. Chem. Pharm. Bull.(6): 696-699.
Natasha, Y., 2012. Efek Pemberian Ekstrak Etanol 70% Umbi Sarang Semut (Hydnophytum moseleyanum Becc.) dalam Penurunan Kadar Asam Urat pada Tikus Putih Jantan. Skripsi. Universitas Indonesia.
Owen, P.L. adn Johns, T. 1999. Xantine oxidase inhibitory activity of northeastern NorthAmerican plant remedies used for gout. Journal of Ethnopharmacology 64, 149–160.
Puspitasari, A., 2018. Karakterisasi dan Identifikasi Kandungan Simplisia Daun Salam serta Uji Efek Penghambatan Enzim Xantin Oksidase (Eugena
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
15
Polyantha wight.). Skripsi. Universitas Sanata Dharma. Rizki, K. P. 2016. Pengaruh Pemberian Kombinasi Ekstrak Etanol Daun Sidaguri
(Sida rhombifolia L.) dan Rimpang Jahe Merah (Zingiber officinale) pada Mencit Jantan Hiperurisemia. Skripsi. Universitas Jember, Jember.
Shamley, D. 2005. Pathophysiology an Essential Text for the Allied Health Professions. USA: Elsivier limited. Sinaga, A.F, Bodhi, W, Colo, W.A, 2014, Uji Efek Ekstrak Etanol Daun Salam (
Syzygium Polyanthum ( Weight)) Terhadap Penurunan kadar Asam Urat Tikus Putih Jantan Galur Wistar Yang Diinduksi Potasium Oksanat, Pharmacon, 3(2), UNSRAT.
Simarmata, Y.B.C, Saragih, A, Bahri, S, 2014, Efek Hipourikemia Ekstrak Daun Sidaguri pada Mencit Jantan, Journal of Pharmacetics and Pharmacology, 1(1021-28.
Sowndhararajan K, Joseph JM, Rajendrakumaran D. 2012. In vitro xanthine oxidase inhibitory activity of methanol extracts of Erythrinaindica Lam. Leaves and stem bark. Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine S1415-S1417.
Srivastava, M.M. 2011. High-Performance Thin-Layer Chromatography (HPTLC). Springer-Verlag Berlin Heidelberg.
Sudarsono, Gunawan, D., Wahyuono, S., Donatus, I.A., dan Purnomo, 2002, Tumbuhan Obat II, Hasil Penelitian, Sifat-sifat dan Penggunaan, Pusat Studi Obat Tradisional, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta. Umamaheswari, M., Asokkumar, K., Sivashammugam, A. T., Kemyaraju, A.,
2009. In Vitro Xanthine Oxidase Inhibitory Activity of The Fractions of Erythrina stricta Roxb. Jornal of Ethnopharmacology, 124 :646-648.
Zuhra, dkk. 2008. Aktivitas Antioksidan Senyawa Flavonoid Dari Daun Katuk (Sauropus androgonus (L) Merr.). Jurnal Biologi Sumatera Vol. 3, No. 1.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
16
LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat pengesahan Determinasi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
17
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
18
Lampiran 2. Certificate of Analysis Xanthine Oxidase
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
19
Lampiran 3. Certificate of Analysis Xanthine
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
20
Lampiran 4. Certificate of Analysis Quercetin
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
21
Lampiran 5. Serbuk Simplisia Daun Salam dan Umbi Sarang Semut
Gambar 2. Simplisia daun salam
Gambar 3. Simplisia sarang semut
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
22
Lampiran 6. Ekstrak Etanol Daun Salam dan Umbi Sarang Semut
Gambar 4. Ekstrak Etanol Daun Salam Gambar 5. Ekstrak Etanol Umbi Sarang Semut
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
23
Lampiran 7. Data Uji Penghambatan Enzim Xantin Oksidase
a. Blanko (Enzim dan Substrat)
Repetisi
Absorbansi
BR-KR Blanko Blangko rata-
rata (BR) Kontrol Kontrol rata-rata
(KR)
1 0,616
0,638
0,151
0,152 0,486 2 0,664 0,152
3 0,634 0,152
b. Pembanding (Allopurinol)
Repetisi Konsentrasi (ppm)
Absorbansi %
Inhibisi IC50
(ppm) Regresi Linear Sampel
(s) Kontrol sampel (KS)
S-KS
1
0,5 0,306 0,060 0,246 49,383
0,201 y = 2,0811x + 49,581 r = 0,993
1 0,289 0,054 0,235 51,646 2,5 0,274 0,059 0,215 55,761 5 0,259 0,069 0,190 60,905 10 0,243 0,096 0,147 69,753
2
0,5 0,305 0,061 0,244 49,794
0,125 y = 2,0494x + 49,743 r = 0,996
1 0,289 0,055 0,234 51,852 2,5 0,275 0,059 0,216 55,555 5 0,259 0,068 0,191 60,699 10 0,243 0,096 0,147 69,753
3
0,5 0,305 0,059 0,246 49,383
0,179 y = 2,065x + 49,631 r = 0,994
1 0,289 0,056 0,233 52,058 2,5 0,275 0,058 0,217 55,349 5 0,259 0,069 0,190 60,905 10 0,243 0,097 0,146 69,969
Kontrol Blanko 0,152 Blanko 0,638 Rata-rata IC50 0,168
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
24
Gambar 7. Kurva Allopurinol Repetisi 1
Gambar 8. Kurva Allopurinol Repetisi 2
Gambar 9. Kurva Allopurinol Repetisi 3
y = 2,065x + 49,631r = 0,994
01020304050607080
0 2 4 6 8 10 12
% In
hibi
si
Konsentrasi
Konsentrasi Allopurinol Vs % Inhibisi
y = 2,0811x + 49,581r = 0,993
01020304050607080
0 2 4 6 8 10 12
% In
hibi
si
Konsentrasi
Konsentrasi Allopurinol Vs % Inhibisi
y = 2,0494x + 49,743r = 0,996
01020304050607080
0 2 4 6 8 10 12
% In
hibi
si
Konsentrasi
Konsentrasi Allopurinol Vs % Inhibisi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
25
c. Ekstrak etanol sarang semut
Repetisi Konsentrasi (ppm)
Absorbansi %
Inhibisi IC50
(ppm) Regresi Linear Sampel
(s) Kontrol sampel (KS)
S-KS
1
10 0,469 0,173 0,296 39,089
23,683 y = 1,0618x + 24,854 R = 0,978
25 0,453 0,185 0,268 44,863
50 0,427 0,193 0,234 51,847
75 0,399 0,235 0,164 66,261
100 0,374 0,284 0,090 81,483
2
10 0,460 0,173 0,287 40,954
22,410 y = 0,9217x + 29,345
R = 0,987
25 0,443 0,185 0,258 46,909
50 0,416 0,193 0,223 54,122
75 0,407 0,237 0,170 65,018
100 0,392 0,285 0,107 77,976
3
10 0,438 0,172 0,266 45,274
18,562 y = 0,8167x + 34,839 R = 0,980
25 0,424 0,186 0,238 51,030
50 0,412 0,194 0,218 55,141
75 0,398 0,239 0,159 67,280
100 0,391 0,284 0,107 77,979
Kontrol Blanko 0,152 Blanko 0,638 Rata-rata IC50 21,552
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
26
Gambar 10. Kurva Ekstrak Etanol Tunggal Repetisi 1
Gambar 11. Kurva Ekstrak Etanol Tunggal Repetisi 2
Gambar 12. Kurva Ekstrak Etanol Tunggal Repetisi 3
y = 1,0618x + 24,854R = 0,978
0,00%
20,00%
40,00%
60,00%
80,00%
100,00%
0 10 20 30 40 50
% In
hibi
si
Konsentrasi (ppm)
Konsentrasi Ekstrak Etanol Sarang Semut Vs % Inhibisi
y = 0,9217x + 29,345R = 0,987
0,00%
20,00%
40,00%
60,00%
80,00%
100,00%
0 10 20 30 40 50 60
% In
hibi
si
Konsentrasi (ppm)
Konsentrasi Ekstrak Etanol Sarang Semut Vs % Inhibisi
y = 0,8167x + 34,839R = 0,980
0,00%
20,00%
40,00%
60,00%
80,00%
100,00%
0 10 20 30 40 50 60
% In
hibi
si
Konsentrasi (ppm)
Konsentrasi Ekstrak Etanol Sarang Semut Vs % Inhibisi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
27
a. Kombinasi Ekstrak Etanol Umbi Sarang Semut dan Daun Salam
Repetisi Konsentrasi (ppm)
Absorbansi %
Inhibisi IC50
(ppm) Regresi Linear Sampel
(s)
Kontrol sampel (KS)
S-KS
1
10 0,285 0,106 0,179 63,166
9,883 y = 0,6954x + 56,874
R = 0,9984
25 0,260 0,123 0,137 71,813
50 0,240 0,131 0,109 77,570
75 0,225 0,150 0,075 84,570
100 0,207 0,166 0,041 91,562
2
10 0,285 0,109 0,176 63,787
10,951 y = 0,6934x + 57,594
R = 0,9979
25 0,261 0,124 0,137 71,811
50 0,239 0,139 0,100 79,424
75 0,222 0,150 0,072 85,188
100 0,210 0,170 0,040 91,770
3
10 0,282 0,111 0,171 64,812
13,913 y = 0,671x + 59,334
R = 0,9957
25 0,260 0,134 0,126 74,067
50 0,239 0,142 0,097 80,043
75 0,223 0,155 0,068 86,012
100 0,208 0,171 0,037 92,390
Kontrol Blanko 0,152 Blanko 0,638 Rata-rata IC50 11,582
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
28
Gambar 13. Kurva Kombinasi Repetisi 1
Gambar 14. Kurva Kombinasi Repetisi 2
Gambar 15. Kurva Kombinasi Repetisi 3
y = 0,6954x + 56,874R = 0,9984
0,00%
20,00%
40,00%
60,00%
80,00%
100,00%
0 10 20 30 40 50
% In
hibi
si
Konsentrasi (ppm)
Konsentrasi Kombinasi Ekstrak Etanol Vs % Inhibisi
y = 0,6934x + 57,594R = 0,9979
0,00%
20,00%
40,00%
60,00%
80,00%
100,00%
0 10 20 30 40 50
% In
hibi
si
Konsentrasi (ppm)
Konsentrasi Kombinasi Ekstrak Etanol Vs % Inhibisi
y = 0,671x + 59,334R = 0,9957
0,00%
20,00%
40,00%
60,00%
80,00%
100,00%
0 10 20 30 40 50
% In
hibi
si
Konsentrasi (ppm)
Konsentrasi Kombinasi Ekstrak Etanol Vs % Inhibisi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
29
Lampiran 8. Sertifikat CE & BU
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
30
Lampiran 9. Uji Statistik
Tests of Normality
Kelompok perlakuan
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-
Wilk
Statistic df Sig. Statistic
IC-50 (ppm) Allopurinol .274 3 . .944
Ekstrak etanol tunggal sarang semut .180 3 . .999
Kombinasi ekstrak etanol sarang semut dan ekstrak etanol daun salam .220 3 . .986
Oneway
Test of Homogeneity of Variances IC 50 (ppm)
Levene Statistic df1 df2 Sig. 2.744 2 6 .142
ANOVA
IC 50 (ppm) Sum of Squares Df Mean Square F Sig. Between Groups 956.422 2 478.211 534.580 .000
Descriptives IC 50 (ppm)
N Mean Std. Deviation Std. Error
95% Confidence Interval for Mean
Minimum Maximum Lower Bound
Upper Bound
Allopurinol 3 .16833 .039107 .022578 .07119 .26548 .125 .201
Ekstrak etanol tunggal sarang semut
3 24.27000 1.505623 .869272 20.52983 28.01017 22.740 25.750
Kombinasi ekstrak etanol sarang semut dan ekstrak etanol daun salam
3 5.69667 .644386 .372036 4.09592 7.29741 5.100 6.380
Total 9 10.04500 10.964653 3.654884 1.61682 18.47318 .125 25.750
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
31
Within Groups 5.367 6 .895
Total 961.789 8
Post Hoc Tests Multiple Comparisons
Dependent Variable: IC 50 (ppm)
(I) Group (J) Group
Mean Difference (I-
J) Std. Error Sig.
95% Confidence Interval Lower
Bound Upper Bound
Tukey HSD
Allopurinol Ekstrak etanol tunggal sarang semut
-24.101667* .772250 .000 -26.47114 -21.73219
Kombinasi ekstrak etanol sarang semut dan ekstrak etanol daun salam
-5.528333* .772250 .001 -7.89781 -3.15886
Ekstrak etanol tunggal sarang semut
Allopurinol 24.101667* .772250 .000 21.73219 26.47114
Kombinasi ekstrak etanol sarang semut dan ekstrak etanol daun salam
18.573333* .772250 .000 16.20386 20.94281
Kombinasi ekstrak etanol sarang semut dan ekstrak etanol daun salam
Allopurinol 5.528333* .772250 .001 3.15886 7.89781
Ekstrak etanol tunggal sarang semut
-18.573333* .772250 .000 -20.94281 -16.20386
LSD Allopurinol Ekstrak etanol tunggal sarang semut
-24.101667* .772250 .000 -25.99129 -22.21204
Kombinasi ekstrak etanol sarang semut dan ekstrak etanol daun salam
-5.528333* .772250 .000 -7.41796 -3.63871
Ekstrak etanol tunggal sarang semut
Allopurinol 24.101667* .772250 .000 22.21204 25.99129
Kombinasi ekstrak etanol sarang semut dan ekstrak etanol daun salam
18.573333* .772250 .000 16.68371 20.46296
Allopurinol 5.528333* .772250 .000 3.63871 7.41796
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
32
Kombinasi ekstrak etanol sarang semut dan ekstrak etanol daun salam
Ekstrak etanol tunggal sarang semut
-18.573333* .772250 .000 -20.46296 -16.68371
Tamhane Allopurinol Ekstrak etanol tunggal sarang semut
-24.101667* .869565 .004 -30.68231 -17.52102
Kombinasi ekstrak etanol sarang semut dan ekstrak etanol daun salam
-5.528333* .372721 .013 -8.32496 -2.73171
Ekstrak etanol tunggal sarang semut
Allopurinol 24.101667* .869565 .004 17.52102 30.68231
Kombinasi ekstrak etanol sarang semut dan ekstrak etanol daun salam
18.573333* .945539 .002 13.56904 23.57762
Kombinasi ekstrak etanol sarang semut dan ekstrak etanol daun salam
Allopurinol 5.528333* .372721 .013 2.73171 8.32496
Ekstrak etanol tunggal sarang semut
-18.573333* .945539 .002 -23.57762 -13.56904
Games-Howell
Allopurinol Ekstrak etanol tunggal sarang semut
-24.101667* .869565 .002 -29.21664 -18.98669
Kombinasi ekstrak etanol sarang semut dan ekstrak etanol daun salam
-5.528333* .372721 .008 -7.70676 -3.34991
Ekstrak etanol tunggal sarang semut
Allopurinol 24.101667* .869565 .002 18.98669 29.21664
Kombinasi ekstrak etanol sarang semut dan ekstrak etanol daun salam
18.573333* .945539 .001 14.33104 22.81562
Kombinasi ekstrak etanol sarang semut dan ekstrak etanol daun salam
Allopurinol 5.528333* .372721 .008 3.34991 7.70676
Ekstrak etanol tunggal sarang semut
-18.573333* .945539 .001 -22.81562 -14.33104
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
33
BIOGRAFI PENULIS
Penulis skirpsi yang berjudul “Uji Efek Penghambatan
Enzim Xantin Oksidase Kombinasi Ekstrak Etanol
Sarang Semut (Myrmecodia armata DC.) dan Ekstrak
Etanol Daun Salam (Syzygium polyanthum Wigh.
Walp.)” memiliki nama lengkap Dany Kristianto.
Penulis lahir di Wonosobo pada tanggal 23 September
1995 sebagai anak pertama dari dua bersaudara, dari
pasangan Waluyo dan Darsini. Penulis menempuh
pendidikan formal di TK Kristen Wonosobo (2000-
2002), SD Kristen 1 Wonosobo (2002-2008), SMP Negeri 1 Wonosobo (2008-
2011), SMA Negeri 1 Salatiga (2011-2014) dan kemudian melanjutkan kuliah di
Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada tahun 2014. Semasa
kuliah, penulis aktif dalam kegiatan fakultas, seperti Divisi Publikasi, Dekorasi, dan
Dokumentasi Pelepasan Wisuda (2015), seksi Acara Pharmacy Badminton
Tournament (2015), seksi Dana dan Usaha Pelepasan Wisuda (2016), Divisi
Publikasi, Dekorasi, dan Dokumentasi Pharmacy Badminton Tournament (2016),
dan asisten praktikum Farmakognosi Fitokimia (2017).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI