UJI AKTIVITAS IMUNOMODULATOR EKSTRAK ETANOL DAUN …eprints.unwahas.ac.id/1561/1/cover.pdf · 6....
Transcript of UJI AKTIVITAS IMUNOMODULATOR EKSTRAK ETANOL DAUN …eprints.unwahas.ac.id/1561/1/cover.pdf · 6....
i
UJI AKTIVITAS IMUNOMODULATOR EKSTRAK ETANOL DAUN
KEDONDONG ( Spondias pinnata (L.F) Kurz ) TERHADAP ANTIBODI
IMUNOGLOBULIN G PADA MENCIT BALB/C YANG DIINDUKSI
VAKSIN HEPATITIS B
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat dalam
mencapai derajat Sarjana Farmasi
Program Studi Ilmu Farmasi Fakultas Farmasi
Universitas Wahid Hasyim
Semarang
Oleh:
Rita Febrianti Lidya Putra
135011097
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS WAHID HASYIM
SEMARANG
2018
ii
iii
SURAT PERNYATAAN
Yang bertanda tangan di bawah ini saya :
Nama : Rita Febrianti Lidya Putra
NIM : 135011097
Judul Skripsi : Uji Aktivitas Imunomodulator Ekstrak Etanol Daun Kedondong
( Spondias pinnata (L.F) Kurz ) Terhadap Antibodi
Imunoglobulin G Pada Mencit Balb/C Yang Diinduksi Vaksin
Hepatitis B
Menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya yang pernah diajukan
untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu perguruan tinggi dan sepanjang
pengetahuan saya, juga tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah ditulis
atau diterbitkan orang lain, kecuali yang secara tertulis diacu dalam naskah ini dan
disebutkan dalam daftar pustaka.
Demikian surat pernyataan ini saya buat untuk dapat digunakan sebagaimana
mestinya.
Semarang, 10 September 2018
Rita Febrianti Lidya Putra
iv
MOTTO
Setiap kesulitan dan setiap kegagalan membawa manfaat yang sepadan (atau
bahkan lebih besar) dari rasa sulit yang harus kita tanggung.
Kesulitan adalah kesempatan untuk meraih hal-hal yang lebih baik dan suatu
batu loncatan untuk sebuah pengalaman yang lebih hebat.
“sesungguhnya sesudah kesulitan ada kemudahan, maka apabila kamu telah
selesai (dari suatu urusan), kerjakanlah dengan sungguh-sungguh dan hanya
kepada Tuhanmulah kamu berharap”
(Q.S. Al – Insyirah: 6-8)
Kupersembahkan untuk :
Almamaterku sebagai wujud terimakasihku
Keluargaku sebagai wujud hormatku
v
KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum Wr. Wb.
Puji syukur senantiasa penulis panjatkan kehadirat Allah SWT yang telah
melimpahkan rahmat dan hidayah-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan
penelitian serta penyusunan skripsi yang berjudul “Uji Aktivitas Imunomodulator
Ekstrak Etanol Daun Kedondong (Spondias pinnata (L.F) Kurz) Terhadap
Antibodi Imunoglobulin G Pada Mencit Balb/C Yang Diinduksi Vaksin Hepatitis
B” sebagai syarat dalam mencapai gelar Sarjana Farmasi di Fakultas Farmasi
Universitas Wahid Hasyim Semarang.
Penulis menyadari bahwa skripsi ini tidak dapat terwujud tanpa bantuan,
bimbingan, dukungan dan dorongan semangat oleh semua pihak, oleh karena itu
dengan segala kerendahan hati penulis mengucapkan banyak terima kasih kepada:
1. Aqnes Budiarti, S.F. M.Sc., Apt., selaku dekan Fakultas Farmasi Universitas
Wahid Hasyim Semarang.
2. Maria Ulfah, S.Farm., M.Sc., Apt., selaku dosen pembimbing pendamping
terimakasih atas segala bimbingan dan perhatian selama penelitian dan
penulisan skripsi ini.
3. Drs. H. Ibrahim Arifin, M.Sc., Apt dan Ririn Lispita W, S.Farm., M.Si. Med.,
Apt selaku dosen penguji atas segala masukan dan koreksinya.
4. Seluruh Dosen Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang atas
ilmu yang diberikan kepada penulis.
5. Laboran Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang.
vi
6. Pimpinan dan staf Laboratorium Parasitologi, Fakultas Kedokteran
Universitas Gadjah Mada Yogyakarta yang telah membantu pelaksanaan uji
aktivitas imunomodulator terhadap antibodi imunoglobulin G.
7. Teman-teman seperjuangan baik dalam praktek maupun dalam penyusunan
skripsi : Penni Dwi Royani, Dempo Awang dan Muhammad Saiful Mu’min
terimakasih atas dukungan dan kerjasamanya selama ini.
8. Teman-teman angkatan 2013 Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim
Semarang, terima kasih atas canda tawa dan solidaritas yang luar biasa
sehingga membuat hari-hari semasa kuliah lebih berarti. Semoga sukses untuk
kalian semua.
9. Teman-teman : Ulfa Madu, Lina Sharfina, Erika Indah, Indira Kinasih, Vitri
Sari, Nilam Fauziah, Kartikaningsih dan Dwi Ratna terimakasih atas bantuan
dan kepedulian yang luar biasa.
10. Semua pihak yang telah membantu penyelesaian skripsi ini yang tidak dapat
penulis sebutkan satu-persatu.
Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari kesempurnaan. Untuk
ini segala kritik dan saran yang membangun sangat penulis harapkan demi
perbaikan di masa mendatang. Semoga karya ini dapat bermanfaat begi semua
pihak.
Wassalamu’alaikum Wr. Wb.
Semarang, 10 September 2018
Penulis
vii
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ........................................................................................ i
SURAT PERNYATAAN ................................................................................. iii
KATA PENGANTAR ...................................................................................... v
DAFTAR ISI ..................................................................................................... vii
DAFTAR TABEL ............................................................................................. xi
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................ xii
DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................... xiv
INTISARI .......................................................................................................... xv
ABSTRACT ....................................................................................................... xvi
BAB I. PENDAHULUAN ................................................................................ 1
A. Latar Belakang Masalah ................................................................. 1
B. Perumusan Masalah ......................................................................... 2
C. Tujuan Penelitian ............................................................................. 3
D. Manfaat Penelitian ........................................................................... 3
E. Tinjauan Pustaka .............................................................................. 3
viii
1. Kedondong (Spondias pinnata (L.F) Kurz) ................................. 3
a. Klasifikasi ................................................................................ 4
b. Morfologi ................................................................................. 4
c. Kandungan Kimia .................................................................... 5
d. Khasiat Tanaman ..................................................................... 6
2. Sistem Imun ................................................................................. 6
a. Sistem Imun Non Spesifik ....................................................... 6
b. Sistem Imun Spesifik ............................................................... 7
3. Antibodi ........................................................................................ 7
4. Imunoglobulin G .......................................................................... 8
5. Imunomodulator ........................................................................... 9
6. ELISA (Enzym Linked Immunosorbent Assay) ............................ 10
7. Uji Kandungan Kimia .................................................................. 11
8. Levamisol ..................................................................................... 11
9. Vaksin Hepatitis B ....................................................................... 12
F. Landasan Teori ................................................................................. 13
G. Hipotesis .......................................................................................... 13
ix
BAB II. METODE PENELITIAN .................................................................. 14
A. Desain Penelitian .............................................................................. 14
B. Variabel Penelitian ........................................................................... 14
C. Bahan dan Alat Penelitian ................................................................ 14
1. Bahan Penelitian ........................................................................... 14
2. Alat Penelitian .............................................................................. 15
D. Jalannya Penelitian .......................................................................... 16
1. Ethical Clearence ......................................................................... 16
2. Determinasi Tanaman .................................................................. 16
3. Pengumulan Bahan ....................................................................... 16
4. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Kedondong .............................. 17
5. Pengelompokan Hewan Uji .......................................................... 18
6. Kriteria Inklusi dan Ekslusi .......................................................... 19
7. Perlakuan Hewan Uji ................................................................... 20
8. Uji Aktivitas Imunomodulator ..................................................... 22
a. Pembuatan Larutan Uji ............................................................ 22
b. Persiapan Hewan Uji dan Pengambilan Serum Uji ................. 23
x
c. Uji Aktivitas Imunoglobulin G dengan Metode ELISA .......... 23
9. Uji Kandungan Kimia .................................................................. 26
E. Analisis Hasil ................................................................................... 26
BAB III. HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN ............................. 28
A. Determinasi Tanaman ................................................................... 28
B. Pembuatan Serbuk Daun Kedondong ........................................... 28
C. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Kedondong ............................... 29
D. Persiapan Hewan Uji dan Pengambilan Serum ............................ 30
E. Uji Aktivitas Imunoglobulin G ...................................................... 32
F. Uji Kandungan Kimia ................................................................... 42
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN ......................................................... 46
A. Kesimpulan ................................................................................... 46
B. Saran ............................................................................................. 46
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 47
LAMPIRAN ....................................................................................................... 52
xi
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel I. Nilai Signifikansi dari Analisa Mann Whitney Hari ke-14 ................. 35
Tabel II. Nilai Signifikansi dari Analisa Mann Whitney Hari ke-35 ................. 37
Tabel III. Nilai Signifikansi dari Analisa Mann Whitney Hari ke-46 ................ 39
Tabel IV. Hasil Uji Kandungan Kimia .............................................................. 42
xii
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Daun Kedondong .............................................................................. 5
Gambar 2. Skema Proses Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Kedondong ........... 18
Gambar 3. Skema Proses Uji Aktivitas Imunoglobulin G dengan Metode
ELISA .............................................................................................. 24
Gambar 4. Serbuk Simplisia Daun Kedondong ................................................. 29
Gambar 5. Ekstrak Etanol Daun Kedondong ..................................................... 30
Gambar 6. Reaksi TMB dengan Metode ELISA ............................................... 33
Gambar 7. Grafik Nilai OD Berbagai Seri Konsentrasi Pada Waktu
Pengambilan Serum Hari ke-14 ....................................................... 34
Gambar 8. Grafik Nilai OD Berbagai Seri Konsentrasi Pada Waktu
Pengambilan Serum Hari ke-35 ....................................................... 36
Gambar 9. Grafik Nilai OD Berbagai Seri Konsentrasi Pada Waktu
Pengambilan Serum Hari ke-46 ....................................................... 38
Gambar 10. Grafik Perbandingan Nilai OD Hasil dari ELISA Reader Pada
Panjang Gelombang 450nm Terhadap Antibodi IgG
xiii
Berdasarkan Waktu Pengambilan Serum ...................................... 41
Gambar 11. Hasil Uji Polifenol .......................................................................... 42
Gambar 12. Reaksi Polifenol dengan FeCl3 ....................................................... 43
Gambar 13. Hasil Uji Alkaloid dengan Pereaksi Dragendroff .......................... 43
Gambar 14. Reaksi Alkaloid dengan Pereaksi Dragendroff .............................. 44
Gambar 15. Hasil Uji Alkaloid dengan Pereaksi Mayer .................................... 44
Gambar 16. Hasil Uji Flavonoid ........................................................................ 45
Gambar 17. Reaksi Flavonoid dengan HCl dan Logam Mg .............................. 45
xiv
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Surat Keterangan Determinasi Tanaman Kedondong ................... 52
Lampiran 2. Surat Keterangan Ethical Clearence ............................................. 54
Lampiran 3. Surat Keterangan Telah Melakukan Penelitian di Laboratorium
Jurusan Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan
Alam Universitas Negeri Semarang .............................................. 55
Lampiran 4. Surat Keterangan Telah Melakukan Penelitian di Laboratorium
Biologi Farmasi Fakultas Universitas Wahid Hasyim Semarang . 56
Lampiran 5. Surat Keterangan Telah Melakukan Penelitian di Laboratorium
Parasitologi Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah Mada
Yogyakarta .................................................................................... 57
Lampiran 6. Data Perhitungan Sampel Uji ........................................................ 58
Lampiran 7. Hasil Analisa SPSS 16 for windows ............................................. 59
xv
INTISARI
Antibodi berperan dalam perlawanan melawan mikroorganisme yang
masuk ke dalam tubuh. Saat tubuh mengalami ketidakseimbangan, tubuh
memerlukan suatu senyawa yang dapat meningkatkan antibodi. Senyawa
flavonoid, polifenol dan alkaloid dapat meningkatkan antibodi. Tujuan penelitian
ini adalah mengetahui aktivitas imunomodulator ekstrak etanol dalam antibodi
IgG pada mencit balb/c yang diinduksi vaksin hepatitis B.
Ekstrak etanol daun kedondong dimaserasi dengan pelarut etanol 96%.
Dosis konsentrasi ekstrak etanol daun kedondong yang digunakan 5, 10 dan 20%
secara p.o selama 46 hari dan vaksinasi dilakukan pada hari ke-7, 28 dan 43.
Kontrol positif yang digunakan levamisol dengan dosis 0,45mg/20gBB secara p.o.
Analisis Optical Density (OD) IgG pada hari ke 14, 35 dan 46 menggunakan uji
statistik Friedman dan Mann Whitney.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun kedondong
memiliki aktivitas meningkatkan antibodi IgG pada konsentrasi 5, 10 dan 20%
hari ke 14, 35 dan 46 serta mengandung flavonoid, alkaloid dan polifenol.
Kata kunci : IgG, Optical Density ( OD ), Flavonoid, Alkaloid, Polifenol
xvi
ABSTRACT
Antibodies play a role in resistance against microorganisms that enter the
body. When the body experiences an imbalance, the body needs a compound that
can increase antibodies. Flavonoids, polyphenols and alkaloids can increase
antibodies. The purpose of this study was to determine the immunomodulatory
activity of ethanol extract in IgG antibodies in balb / c mice induced by hepatitis B
vaccine.
Ethanol extract of kedondong leaves was macerated with 96% ethanol.
The doses of the concentration of ethanol extract of kedondong leaves used were
5, 10 and 20% p.o for 46 days and vaccination was carried out on days 7, 28 and
43. Positive control was used by levamisol at dose of 0.45mg / 20gBB by p.o.
Analysis of Optical Density (OD) IgG on days 14, 35 and 46 using Friedman and
Mann Whitney statistical tests.
The results showed that the ethanol extract of kedondong leaves had an
activity of increasing IgG antibodies at concentrations of 5, 10 and 20% on days
14, 35 and 46 and contained flavonoids, alkaloids and polyphenols.
Keywords: IgG, Optical Density (OD), Flavonoids, Alkaloids, Polyphenols