UJI AKTIVITAS ANTIINFLAMASI TOPIKAL ISOLAT PC-1 DARI ... · neolignan daun sirih merah yaitu isolat...

UJI AKTIVITAS ANTIINFLAMASI TOPIKAL ISOLAT PC-1 DARI

EKSTRAK METANOL DAUN SIRIH MERAH (Piper crocatum Ruiz & Pav.)

PADA MENCIT DIINDUKSI KARAGENIN

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh :

Ardini Angelina Papulung

NIM : 138114171

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2016

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

i

HALAMAN JUDUL




SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh :


NIM : 138114171

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2016


ii


iii


iv


v


vi

HALAMAN PERSEMBAHAN

“ Percayalah kepada Tuhan dengan segenap hatimu, dan janganlah bersandar kepada

pengertianmu sendiri. Akuilah Dia dalam segala lakumu, maka Ia akan meluruskan

jalanmu.” AMSAL 3:5-6

“Do not pray an easy life, pray for the strength to endure a difficult one”_ Bruce Lee

Skripsi ini dipersembahkan

demi kemuliaan Allah Bapa, Putra dan Roh Kudus,

saya persembahkan pula kepada orangtua, saudara

dan seluruh keluarga saya beserta teman-teman

yang setia memberi dukungan dan selalu mendoakan


vii

PRAKATA

Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas berkat,

kasih dan penyertaanNya penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan judul

“ Uji Aktivitas Antiinflamasi Topikal Isolat Pc-1 dari Ekstrak Metanol Daun

Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav.) pada Mencit Diinduksi Karagenin”.

Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat dalam memperoleh gelar

Sarjana Farmasi (S.Farm.) Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

Penyusunan skripsi telah banyak melibatkan berbagai pihak baik langsung maupun

tidak langsung. Oleh karena itu, pada kesempatan ini, penulis ingin menyampaikan

terima kasih kepada:

1. Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta, Ibu Aris

Widayati, M.Si., Ph.D., Apt.

2. Pembimbing yang penulis hormati dan kagumi Ibu Dr. Yustina Sri

Hartini, M.Si., Apt dan Ibu drh. Sitarina Widyarini, MP. Ph.D yang selalu

memberi dukungan, nasehat, motivasi, bantuan sehingga skripsi dan

penelitian ini dapat selesai.

3. Penguji yang penulis hormati Ibu Dr. Erna Tri Wulandari, M.Si., Apt. dan

Bapak Christianus Heru Setiawan, MSc., Apt. yang telah memberikan

arahan, kritik dan saran sehingga penulisan skripsi ini dapat selesai.

4. Bapak Laboran Farmasi Sanata Dharma yang selalu membantu penulis,

sehingga penelitian dapat berjalan dengan baik.

5. Orangtua yang penulis hormati, kagumi dan sayangi, Bapak Markus

Papulung dan Ibu Agustina G.L.S beserta kakak Dodo T.Papulung dan

adik Dion S.M.Papulung yang setia mendoakan, memberi dukungan dan

selalu memotivasi penulis dalam keadaan suka dan duka.

6. Teman seperjuangan penulis “Skripsoy” Rafaella, Rianti, dan Eugenia

yang selalu setia mengingatkan, memberi semangat dan tidak kenal lelah


viii

sehingga penelitian dan penulisan skripsi ini dapat terselesaikan, semoga

kedepan skripsi ini dapat berguna untuk orang lain.

7. Teman “PSJ” Rosa, Kinanti, Reni, Noni, Yunita, Herlince, Yosephine,

Nawacatur, yang penulis kasihi. Terima kasih telah memberi dukungan,

selalu menemani dalam suka dan duka, semoga ke depan kita sukses

bersama.

8. Teman Meja 3 dan kelompok, Dea, Siska, Zita, Teti, Sakti, Willy yang

juga selalu membantu dan memberi dukungan kepada penulis.

9. Teman-teman SMA, Marnesiah, Citra, Novika, Mentari, Ekim, Dika,

Rizki, Batara, Danang, Deago, Castelein, Inayati, Arthur, Imanuel ceres,

terima kasih atas bantuannya dalam segala hal.

10. Teman-teman FSMD, FKKC, Farmasi 2013 USD, IKASKIBAR dan

KOMISI ANAK GKI GEJAYAN yang selalu memberikan doa dan

dukungannya.

Penulis menyampaikan rasa hormat dan terima kasih kepada setiap yang membantu

baik doa, dan dukungan, tanpa hal ini penulis tidak dapat menyelesaikan skripsi

dengan baik. Penulis menyadari bahwa dalam penulisan ini banyak yang kurang

sempurna, baik dari tata bahasa maupun isi dari skripsi ini, untuk itu penulis juga

memohon maaf dan selalu siap menerima kritik dan saran demi perbaikan skripsi ini.

Yogyakarta, 18 November 2016

Penulis



ix

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL .................................................................................................. i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ........................................................ ii

HALAMAN PENGESAHAN .................................................................................... iii

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA .................................................................... iv

LEMBAR PERSETUJUAN PUBLIKASI ................................................................. v

HALAMAN PERSEMBAHAN ................................................................................ vi

PRAKATA ................................................................................................................. vii

DAFTAR ISI .............................................................................................................. ix

DAFTAR TABEL ...................................................................................................... x

DAFTAR GAMBAR ................................................................................................. xi

DAFTAR LAMPIRAN .............................................................................................. xii

ABSTRAK ................................................................................................................. xiii

ABSTRACT ................................................................................................................. xiv

PENDAHULUAN ..................................................................................................... 1

METODE PENELITIAN ........................................................................................... 2

Rancangan Penelitian ................................................................................................. 2

Bahan.......................................................................................................................... 2

Alat ............................................................................................................................. 2

Proses Isolasi Senyawa Pc-1 ...................................................................................... 3

Uji Aktivitas Antiinflamasi ........................................................................................ 4

Analisis ....................................................................................................................... 4

HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................................................. 5

Isolasi Pc-1 ................................................................................................................. 5

Pengujian Antiinflamasi ............................................................................................. 8

KESIMPULAN DAN SARAN .................................................................................. 10

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................ 11

LAMPIRAN ............................................................................................................... 13

BIOGRAFI PENULIS ............................................................................................... 50


x

DAFTAR TABEL

Tabel I. Rata-rata AUC dan %PI kontrol dan isolat Pc-1 ....................................... 8

Tabel II. Rata-rata AUC dan %PI ekstrak, fraksi, dan isolat Pc-1 ............................ 9


xi

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Struktur neolignan Pc-1 ........................................................................ 6

Gambar 2. Hasil kromatogram ko-KLT isolat Pc-1 dengan fase gerak kloroform:

etil asetat (9:1) ...................................................................................... 7

Gambar 3. Hasil kromatogram uji kemurnian dengan KLT sistem 4 fase gerak pada

penampakan UV 254 nm ...................................................................... 7

Gambar 4. Daun sirih merah segar yang digunakan ............................................... 17

Gambar 5. Serbuk daun sirih merah ....................................................................... 17

Gambar 6. Pengadukan dengan bantuan shaker ..................................................... 18

Gambar 7. Penguapan pelarut dengan bantuan rotary evaporator .......................... 18

Gambar 8. Ekstrak kental daun sirih merah ........................................................... 19

Gambar 9. Hasil KLT pada UV 254 dan setelah penyemprotan serum IV sulfat .. 19

Gambar 10. Fraksinasi dengan bantuan KVC .......................................................... 20

Gambar 11. Hasil Fraksinasi (kiri-kanan); fraksi n-heksan, fraksi kloroform 1, fraksi

klorofom 2, fraksi etil asetat, fraksi metanol ........................................ 20

Gambar 12. Hasil KLT fraksi dibandingkan dengan ekstrak dan standar isolat pada

UV 254nm ............................................................................................. 21

Gambar 13. Elusi pada chamber dengan fase gerak Kloroform:etil asetat 9:1 ........ 22

Gambar 14. Hasil elusi yang terlihat pada UV 254 nm ............................................ 22

Gambar 15. Hasil elusi pada UV 366 nm ................................................................. 23

Gambar 16. Hasil pengerokan isolat daun sirih merah ............................................. 23

Gambar 17. Kristal Isolat Pc-1 yang didapatkan ...................................................... 24

Gambar 18. Hasil pencampuran krim isolat Pc-1 dengan biocream ........................ 25

Gambar 19. Uji homogenitas krim isolat Pc-1 ......................................................... 25

Gambar 20. Pengukuran kulit punggung mencit sebelum pengujian ....................... 26

Gambar 21. Edema yang dihasilkan dengan penyuntikan karagenin 3%................. 26

Gambar 22. Pengolesan krim isolat Pc-1 ................................................................. 27

Gambar 23. Pengukuran edema setiap 1 jam selama 6 jam setelah pemberian krim

isolat Pc-1 ............................................................................................. 27


xii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Surat Determinasi .............................................................................. 13

Lampiran 2. Surat Ethical Clearance ..................................................................... 14

Lampiran 3. Surat Kalibrasi Jangka Sorong ........................................................... 15

Lampiran 4. Surat Legalitas Analisa Statistika menggunakan SPSS .................... 16

Lampiran 5. Ekstraksi daun sirih merah ................................................................. 17

Lampiran 6. Fraksinasi ekstrak daun sirih merah .................................................. 19

Lampiran 7. Isolasi ekstrak daun sirih merah......................................................... 22

Lampiran 8. Pengujian antiinflamasi pada hewan uji ............................................ 25

Lampiran 9. Perolehan Data Hasil Uji Pendahuluan .............................................. 28

Lampiran 10. Hasil Uji Antiinflamasi ...................................................................... 29

Lampiran 11. Hasil Uji Statistika ............................................................................. 34


xiii




Ardini Angelina Papulung, Yustina Sri Hartini

Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta, Indonesia

ABSTRAK

Daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav) merupakan tanaman yang

banyak digunakan sebagai obat tradisional. Isolat Pc-1 dari daun sirih merah memiliki

aktivitas fagositosis makrofag yang tinggi, namun tidak memproduksi NO secara

berlebihan dimana NO merupakan salah satu tanda adanya inflamasi. Tujuan

penelitian ini ialah untuk mengetahui aktivitas antiinflamasi topikal isolat Pc-1 pada

mencit betina galur Swiss yang diinduksi karagenin. Jenis penelitian experimental

murni, dan dilakukan pengujian aktivitas antiinflamasi isolat Pc-1 secara topikal

pada mencit betina galur Swiss yang diinduksi karagenin. Metode edema digunakan

sebagai alat ukur aktivitas antiinflamasi dengan pengamatan ketebalan lipat kulit

mencit yang terlihat dari penurunan tebal lipat kulit punggung mencit (edema).

Kontrol yang digunakan ialah kontrol negatif dan kontrol biocream, pembanding

aktivitas antiinflamasi dengan ekstrak 100 µg/mL dan fraksi 100 µg/mL. Berdasarkan

uji statistik dengan ANOVA diketahui bahwa isolat Pc-1 100 µg/mL berbeda

signifikan dengan kontrol negatif maupun kontrol biocream dengan AUC 17.15±0.48

dengan % penghambatan inflamasi 34.45%. Ekstrak 100 µg/mL memiliki

%penghambatan inflamasi 40.19% dan fraksi 100 µg/mL memiliki %penghambatan

inflamasi 16.86%. Hasil penelitian disimpulkan bahwa isolat Pc-1 dari ekstrak

metanol daun sirih merah pada konsentrasi 100 µg/mL memiliki aktivitas

antiinflamasi topikal dengan daya penghambatan antiinflamasi sebesar 34.45%.

Kata kunci : daun sirih merah, antiinflamasi, isolat Pc-1, sediaan topikal


xiv

ABSTRACT

Red betel Leaf (Piper crocatum Ruiz & Pav) was plants that many people

used as traditional medicine. Pc-1 isolated from red betel leaf has high activities as

macrophage phagocytic, but not production NO significantly when NO is one of sign

inflammation. The purpose of this examination is to known the activity of topical

anti-inflammatory of isolate Pc-1 used male Swiss mice induced by carrageenan.

This examination was pure experimental, and tested the topical anti-inflammatory

activity of isolate Pc-1 used male Swiss mice induced by carrageenan. Edema

method used as tools for measured the anti-inflammatory activity with observed

miced skin fold thickness that visible with decreased of the skin fol thickness

(edema). Control used negative control and biocream control, comparator with anti-

inflammatory activity of extract 100 µg/mL and fraction 100 µg/mL. Based on the

ANOVA statistical analysis known that isolate Pc-1 100 µg/mL showed significant

difference between negative control and biocream control with AUC 17.15±0.48 and

% inflammatory inhibition 34.45%. Extract 100 µg/mL has % inflammatory

inhibition 40.19% and fraction 100 µg/mL has % inflammatory inhibition 16.86%.

Conclusion of this study to include, 100 µg/mL Pc-1 isolated from methanolic extract

from Red betel leaf has topical anti-inflammatory with % inflammatory inhibition

34.45%.

Keywords: Red betel leaf, anti-inflammatory, isolate Pc-1, topical formulation


1

PENDAHULUAN

Tanaman sirih merah dapat memperbaiki kondisi berbagai penyakit seperti diabetes

melitus, hepatitis, batu ginjal, radang mata, nyeri sendi dan berbagai penyakit lainnya (Utami

dan Puspaningtyas, 2013). Pada penelitian efek imunnomodulator dua senyawa neolignan

hasil isolasi dari ekstrak metanol daun sirih merah (Hartini et al, 2014) diketahui bahwa isolat

neolignan daun sirih merah yaitu isolat Pc-1 dan isolat Pc-2 memiliki aktivitas fagositosis

makrofag yang relatif tinggi, tetapi tidak mempunyai produksi NO (nitrit oksida) berlebihan

yang dikatalisis oleh enzim inducible nitric oxide synthase (INOS). Peningkatan ekspresi

INOS dalam jaringan, memperlihatkan adanya proses peradangan pada jaringan (Lukiati,

2012). NO meregulasi inflamasi eritema dan edema, serta meregulasi sintesis beberapa

mediator inflamasi dan beberapa fungsi sel inflamasi. NO disintesis dalam jumlah banyak

yang diaktivasi oleh makrofag sebagai vasodilator memodulasi respon vaskuler pada reaksi

inflamasi akut (Moilanen and Heikki, 1995). Pada isolat Pc-1 tidak terjadi produksi NO

berlebih oleh sebab itu, diduga mengindikasikan adanya aktivitas antiinflamasi.

Neolignan merupakan dimer dari lignan, dimana lignan merupakan salah satu subgroup

polifenol (non-flavonoid). Salah satu mekanisme polifenol sebagai antiinflamasi ialah

menghambat enzim pro-inflamasi, seperti siklooksigenase (COX), lipooksigenase (LOX), dan

inducible nitric oxide synthase (iNOS), melalui aktivasi peroxisome proliferators activated

receptor gamma (PPARγ). Polifenol menghambat eicosanoid yang membentuk enzim

fosfolipase A2, siklooksigenase, dan lipooksigenase menyebabkan penurunan konsentrasi

prostanoid dan leukotriene (Santangelo et al, 2007). Sediaan yang digunakan ialah sediaan

topikal dimana penggunaannya melalui rute kulit untuk menghasilkan efek lokal (Syamsuni,

2005), dimana efeknya langsung pada tempat dimana obat diberikan, sehingga obat tidak akan

berkurang karena adanya first pass effect di hepar, lebih nyaman dan praktis digunakan.

Metode yang digunakan ialah metode induksi edema yang dilakukan dengan pemberian

karagenin yang merupakan teknik yang umum digunakan untuk menginduksi inflamasi,

dengan hewan uji mencit betina galur Swiss yang diamati peningkatan ketebalan lipat kulit

punggung (skin fold thickness) dalam jangka pendek (Widyarini et al, 2001).

Tujuan utama dari penelitian ini ialah untuk mengetahui aktivitas antiinflamasi topikal

isolat Pc-1 dari ekstrak metanol daun sirih merah, dan diharapkan informasi ini dapat


2

digunakan untuk pengembangan obat jadi maupun sebagai landasan bagi penelitian

selanjutnya terkait formulasi, mekanisme aksi maupun modifikasi struktur dari isolat Pc-1.

METODE PENELITIAN

Rancangan Penelitian

Rancangan penelitian termasuk dalam jenis penelitian eksperimental murni. Variabel

bebas dalam penelitian adalah konsentrasi isolat Pc-1 ekstrak metanol daun sirih merah.

Variabel tergantung dalam penelitian adalah tebal edema kulit punggung mencit (mm).

Variabel pengacau terkendali dalam penelitian adalah tempat pengambilan daun sirih merah,

hewan uji (jenis kelamin, umur dan berat badan. Variabel pengacau tidak terkendali dalam

penelitian adalah patofisiologi mencit, pelepasan zat aktif isolat Pc-1

Bahan

Bahan yang digunakan ialah daun sirih merah (diambil 3 dari pangkal dan 3 dari ujung

tanaman) diperoleh dari kebun obat “MERAPI FARMA” daerah KM 21,5, Kaliurang,

Cangkringan, Sleman, Yogyakarta dengan spesifikasi daun yaitu berbentuk seperti jantung

dengan bagian atas meruncing, bertepi rata, dan permukaannya mengkilap. Warna daun bagian

atas hijau bercorak putih keabu-abuan dengan ruas-ruas merah, bagian bawah daun berwarna

merah hati cerah. Metanol grade teknis dan grade pro analisis (Emsure®) sebagai pelarut,

akuades, ekstrak metanol daun sirih merah dan fraksi daun sirih merah yang mengandung

isolat Pc-1 terbanyak, metanol 60%, silika gel 60, eter, n-heksan, kloroform, etil asetat,

metanol, fase gerak kloroform:etil asetat (9:1), pelarut kloroform:metanol (1:1), fase gerak

heksan:etil asetat (3:1), fase gerak heksan:aseton (3:1), fase gerak kloroform:etil asetat (9:2),

hewan uji yaitu mencit Swiss betina berumur sekitar 6-8 minggu dengan bobot sekitar 20-30

gram dalam kondisi sehat yang diperoleh dari Laboratorium Immuno Universitas Sanata

Dharma Yogyakarta, karagenin tipe I (Sigma Chemical co.) sebagai inflamatogen, NaCl 0,9%

sebagai pelarut karagenin, biocream® sebagai basis krim, dan veet® sebagai perontok bulu.

Alat

Alat yang digunakan untuk pembuatan ekstrak hingga isolat ialah pisau stainless steel,

blender, neraca analitik (Mettler Tolledo), orbital shaker (Innova TM

2100),corong Buchner,

pompa vakum (GAST USA), vacuum rotary evaporator (BUCHI), waterbath, ayakan No. 40,

oven, alat-alat gelas yang lazim digunakan di laboratorium analisis (Pyrex), tabung sentrifuge,


3

kromatografi vakum cair (KVC), cawan porselen, sintered glass Buchner, kromatografi lapis

tipis (KLT), HPLC, chamber KLT, UV 254nm dan 366nm, vakum, aluminium voil, lempeng

KLT preparatif, jarum, penyaring, pipa kapiler, pengaduk, oven, flakon. Alat yang digunakan

uji antiinflamasi pada mencit ialah gunting, alat pencukur bulu mencit, spuit injeksi 1 ml,

mortir dan stamper, neraca analitik, stopwatch, jangka sorong Digital (TORA) yang telah

dikalibrasi.

Proses Isolasi Senyawa Pc-1

Determinasi sampel daun sirih merah dilakukan di Fakultas Biologi UGM,Yogyakarta

dengan spesifikasi daun yaitu berbentuk seperti jantung dengan bagian atas meruncing, bertepi

rata, dan permukaannya mengkilap. Warna daun bagian atas hijau bercorak putih keabu-abuan

dengan ruas-ruas merah, bagian bawah daun berwarna merah hati cerah. Setelah diperoleh

hasil determinasi dan tanaman benar daun sirih merah, dilanjutkan preparasi tanaman. Daun

sirih merah dicuci dengan air mengalir, di sortasi basah, lalu dikeringkan, setelah itu di sortasi

kering, dan dibuat serbuk. Serbuk lalu dibuat menjadi ekstrak dengan pelarut metanol

menggunakan metode maserasi yaitu remaserasi dengan bantuan shaker. Hasil maserasi yang

didapatkan dibuat menjadi ekstrak kental dengan bantuan alat vacuum rotary evaporator.

Ekstrak kental yang didapatkan hingga bobot tetap dan dihitung rendemennya.

Ekstrak metanol daun sirih merah yang telah didapatkan lalu difraksinasi dengan

bantuan kromatografi vakum cair (KVC). Fraksinasi dilakukan dengan 5 pelarut yang

digunakan berturut-turut yaitu 50 ml n-heksan, 50 ml kloroform, 50 ml kloroform, 50 ml etil

asetat, dan 100 ml metanol untuk mendapatkan fraksi I, II, III, IV, dan V. Kandungan senyawa

hasil fraksinasi diperiksa dengan metode KLT menggunakan fase diam silica gel GF254 dan

fase gerak menggunakan kloroform : etil asetat (9:1) kemudian di deteksi dengan

menggunakan UV dengan panjang gelombang 254 nm.

Setelah diperiksa dengan KLT dan UV, dipilih fraksi yang memiliki profil yang sama

dengan standar Pc-1. Senyawa yang diisolasi adalah senyawa yang meredam UV 254 nm

dengan warna biru ungu, tidak tampak pada UV 366 nm, dan berwarna coklat pada deteksi

dengan serium (IV) sulfat dan pemanasan. Fraksi yang dipilih dilarutkan dalam pelarut

kloroform : metanol (1:1) kemudian ditotolkan pada lempeng KLT preparatif, lempeng dielusi

dalam bejana berisi fase gerak yaitu kloroform : etil asetat (9:1) kemudian dilihat dibawah UV

254 nm, bercak yang meredam ditandai dengan jarum, untuk kemudian dikerok. Hasil kerokan


4

dikumpulkan lalu dilarutkan dengan kloroform : metanol (1:1) kemudian disaring, diuapkan

pada suhu ruangan hingga didapatkan isolat berupa kristal, setelah itu dilakukan deteksi

kebenaran dan kemurnian senyawa aktif. Deteksi kebenaran dilakukan dengan ko-KLT

menggunakan standar pembanding hasil isolasi isolat Pc-1 yang dilakukan Hartini (2014), dan

deteksi kemurnian untuk membuktikan hanya satu senyawa yang didapatkan, dilakukan

dengan KLT 4 sistem fase gerak. Deteksi kemurnian digunakan dengan 4 sistem fase gerak

yang berbeda yaitu; kloroform:etil asetat (9:1); fase gerak heksan:etil asetat (3:1); fase gerak

heksan:aseton (3:1); fase gerak kloroform:etil asetat (1:9). Setelah diuji kemurnian,

selanjutnya dilakukan uji aktivitas antinflamasi isolat PC-1.

Uji Aktivitas Antiinflamasi

Persetujuan untuk uji terhadap hewan (Ethical Clearance) dilakukan di LPPT

Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta. Hewan uji yang dibutuhkan sebanyak 25 ekor mencit

betina galur Swiss. Tiap hewan uji yang telah disiapkan dibagi menjadi 5 kelompok.

Kelompok 1, yaitu kontrol negatif (karagenin), kelompok 2, yaitu kontrol basis krim

(Biocream®), kelompok 3, yaitu kelompok ekstrak metanol daun sirih merah dengan

konsentrasi 100 µg/ mL, kelompok 4, yaitu kelompok fraksi dari ekstrak metanol daun sirih

merah dengan konsentrasi 100 µg/ mL, kelompok 5, yaitu kelompok krim isolat Pc-1 dengan

konsentrasi 100µg/mL. Kelompok 1 diinjeksikan karagenin hasil uji pendahuluan secara

subkutan dan diukur edema yang muncul dengan jangka sorong digital setiap 1 jam selama 6

jam. Kelompok 2,3,4,5 setelah diinjeksikan karagenin dioleskan dengan bahan-bahan uji dari

tiap kelompok yang telah dibagi, pada area suntikan dengan luas area 2,25 cm2

kemudian

diukur tebal lipatan kulit punggung mencit dengan jangka sorong digital setiap 1 jam selama 6

jam untuk melihat penghambatan inflamasi.

Analisis

Analisis hasil dilakukan dengan mengukur ketebalan edema kulit punggung mencit

menggunakan jangka sorong digital, lalu dihitung AUC selisih tebal lipat kulit punggung

mencit dan persen penghambatan inflamasi.

a. Nilai selisih edema tiap jam diukur dan dihitung nilai AUC dengan rumus:

∑[

]


5

Keterangan :

AUC0-6= area di bawah kurva dari jam ke-0 sampai jam ke-6 (cm2.jam)

yn-1 = luas area pigmentase pada jam ke-(n-1)(cm2)

yn = luas are pigmentase pada jam ke-n (cm2)

xn = jam ke-n (jam)

xn-1 = jam ke-(n-1) (jam)

(Ikawati dkk., 2007).

b. Perhitungan presentase penghambatan inflamasi

Keterangan :

(AUC0-6)0 = AUC0-6 rata-rata kontrol negatif (mm.jam)

(AUC0-6)n = AUC0-6 masing-masing mencit pada kelompok yang diberi senyawa

uji dengan konsentrasi sebesar n (mm.jam).

(Ikawati dkk, 2007).

Data dianalisis dengan Shapiro-Wilk untuk melihat distribusi data normal atau tidak.

Apabila data terdistribusi dengan normal maka dilanjutkan dengan analisis One-Way ANOVA

dengan taraf kepercayaan 95%. Bila data tidak terdistribusi normal akan dilanjutkan dengan

analisis Kruskal-Wallis. Bila data terdistribusi normal, analisis dilanjutkan dengan uji Post

Hoc dan test Scheffe dan uji Mann-Whitney untuk data yang terdistribusi tidak normal.

Analisis dilakukan untuk mengetahui perbedaan bermakna ataupun tidak bermakna dari uji.

Apabila diperoleh nilai p<0,05 maka secara statistik diartikan perbedaan bermakna, sedangkan

p>0,05 secara statistik diartikan data tidak bermakna (Dahlan, 2014).

HASIL DAN PEMBAHASAN

Isolasi Pc-1

Ekstraksi dilakukan dengan metode maserasi. Maserasi merupakan salah satu metode

ekstraksi, dimana herbal dimasukkan ke wadah tertutup pada suhu dan waktu yang berbeda

(Cechinel-Filho, 2012). Dalam penelitian ini digunakan metode maserasi statis yaitu

remaserasi, dimana kontak herbal dan pelarut 4-5 hari pada suhu kamar dengan perendaman

agar pelarut dapat menembus dinding sel dan masuk dalam rongga sel yang mengandung zat


6

aktif sehingga zat aktif dapat larut karena adanya perbedaan konsentrasi di dalam dan luar sel,

hingga tercapai kesetimbangan. Remaserasi dilakukan untuk mengambil zat aktif yang

mungkin masih tertinggal setelah dilakukan maserasi awal. Pengadukan dengan bantuan

shaker bertujuan untuk mempercepat kontak pelarut dengan senyawa aktif. Rotary evaporator

digunakan untuk mempercepat penguapan pelarut metanol dengan prinsip perbedaan titik

didih, dimana pelarut dapat menguap dibawah suhu titik didihnya karena adanya pengaruh

tekanan. Pada penelitian didapatkan rendemen ekstraksi daun sirih merah sebesar 11,57%.

Fraksinasi dilakukan karena sulitnya menggunakan teknik pemisahan tunggal untuk

mengisolasi komponen spesifik dari campuran. Senyawa aktif dari ekstrak dipisahkan kedalam

beberapa fraksi tersendiri yang mengandung komponen dengan kepolaran sama atau ukuran

molekul yang sama (Sarker, 2006). Fraksinasi dilakukan dengan metode kromatografi vakum

cair berdasarkan perbedaan kepolaran dari tiap senyawa aktif. Rendemen fraksi daun sirih

merah didapatkan rendemen fraksi n-heksan sebesar 1.46%, fraksi kloroform I sebesar 1.72%,

fraksi kloroform II sebesar 5.49%, fraksi etil asetat sebesar 35.39%, fraksi metanol sebesar

35.18%. Isolat Pc-1 memiliki gugus asetil yang membedakannya dengan isolat Pc-2 yang

merupakan isolat neolignan lain dari daun sirih merah (Gambar 1).

Gambar 1. Struktur neolignan Pc-1 (Kustiawan, 2012)

Isolat Pc-1 paling banyak didapatkan pada fraksi etil asetat berdasarkan profil KLT

yang didapatkan, setelah itu fraksi dikerok lalu dilakukan deteksi kebenaran dengan ko-KLT.

Hasil ko-KLT dimana isolat Pc-1 yang didapatkan dibandingkan dengan standar Pc-1

menggunakan KLT, didapatkan Rf 0,40 dengan Rf standar 0.42 pada fase gerak

kloroform:etilasetat (9:1) (Gambar 2), dengan kristal berwarna putih, bercak meredam pada

UV 254nm berwarna biru ungu, tidak tampak dibawah sinar UV 366nm, dan berwarna coklat

pada deteksi dengan serium (IV) sulfat dan pemanasan. Dari hasil ini dapat diketahui bahwa

isolat yang didapatkan telah benar isolat Pc-1 karena sesuai dengan standar.


7

(A) (B)

Gambar 2. Hasil kromatogram ko-KLT isolat Pc-1 dengan fase gerak kloroform: etil asetat (9:1)

Keterangan: A. penampakan bercak pada UV 254 nm

B. penampakan bercak pada serium (IV) sulfat dan pemanasan

Setelah diketahui bahwa senyawa yang didapatkan benar, lalu dilakukan uji

kemurnian. Uji kemurnian dilakukan juga pada standar untuk membuktikan apakah senyawa

setelah di elusi dengan fase gerak yang berbeda memiliki nilai Rf yang sama. Hasil yang

didapatkan ialah dengan fase gerak kloroform:etil asetat (9:1) didapatkan Rf 0,42 pada standar

dan 0,40 pada sampel; fase gerak heksan:etil asetat (3:1) didapatkan Rf 0.06 pada standar

maupun sampel ; fase gerak heksan:aseton (3:1) didapatkan Rf 0.18 pada standar dan Rf 0,16

pada sampel; fase gerak kloroform:etil asetat (1:9) didapatkan Rf 0.60 pada standar maupun

sampel (Gambar 3).

(A) (B) (C) (D)

Gambar 3. Hasil kromatogram uji kemurnian dengan KLT sistem 4 fase gerak pada

penampakan UV 254 nm

Pc-1

Pc-1

Standar

Standar


8

Keterangan: Bercak sebelah kiri standar, bercak sebelah kanan Pc-1 yang didapatkan

A. Kloroform: etil asetat (9:1)

B. Kloroform: etil asetat (1:9)

C. Heksan : aseton (3:1)

D. Heksan: etil asetat (3:1)

Dari hasil uji didapatkan bercak hanya satu atau hanya terdapat 1 senyawa tunggal, dengan Rf

yang hampir sama dengan standar (±0.1) sehingga dapat diketahui bahwa isolat telah murni

secara KLT dengan 4 sistem fase gerak yang berbeda (Houghton dan Amala, 1998).

Pengujian Antiinflamasi

Uji pendahuluan dilakukan sebelum melakukan pengujian antiinflamasi untuk

menentukan konsentrasi optimal karagenin dimana terjadi penebalan lipat kulit punggung 2-3

kali dari tebal kulit normal dan mampu mempertahankan hingga jam ke-6 (Santoso, 2014) dan

didapatkan hasil pada konsentrasi karagenin 3%. Karagenin digunakan sebagai penginduksi

inflamasi dikarenakan inflamasi yang diinduksi akut, non-imun, dengan reprodusibilitas tinggi

dengan gejala utama ialah edema, yang diukur dalam penelitian ini dari penebalan tebal lipat

kulit punggung mencit. Pengukuran didasarkan pada rata-rata AUC total yang merupakan luas

daerah dibawah kurva, menunjukkan selisih dari tebal lipat kulit punggung mencit. Efek

antiinflamasi isolat Pc-1 ditunjukkan dengan semakin kecilnya nilai AUC (Taufik dkk, 2008)

berarti terdapat penurunan tebal lipat kulit punggung mencit, yang berbeda secara signifikan

bila dibandingkan dengan kontrol negatif dan kontrol biocream. Persen penghambatan

inflamasi dihitung dari rata-rata AUC yang didapatkan dan menunjukkan seberapa besar

kemampuan isolat Pc-1 dalam mengurangi tebal lipat punggung. Hasil yang didapatkan dapat

dilihat pada tabel I.

Tabel I. Rata-rata AUC total dan %PI Kontrol dan isolat Pc-1

Kelompok Jumlah (n) AUC ± SE % Penghambatan

Inflamasi

Kontrol negatif 5 26.18 ± 1.18 - 0.02%

Kontrol Biocream 5 29.41 ± 1.12 - 12.38%

Isolat PC-1 5 17.15 ± 0.48 * 34.45%

*) berbeda signifikan (p < 0,05)

Analisis statistik dilakukan dengan uji Shapiro-Wilk dan didapatkan seluruh data

terdistribusi normal, lalu dilanjutkan dengan One-Way Anova dengan uji Post Hoc dan


9

Tamhane karena didapatkan variansi yang tidak homogen (p < 0.05) terhadap data kontrol

negative, kontrol biocream dan isolat Pc-1. Analisis statistik menunjukkan bahwa kontrol

negatif dan kontrol biocream (pembawa) tidak berbeda secara signifikan dengan

% penghambatan inflamasi yang dihasilkan negatif sehingga dapat diketahui bahwa biocream

sebagai pembawa tidak mengakibatkan penurunan dari tebal lipat kulit mencit atau tidak

memberikan aktivitas antiinflamasi. Isolat Pc-1 konsentrasi 100 µg/mL berbeda signifikan

dengan kontrol negatif dan kontrol biocream dengan rata-rata persen inflamasi 34.45%

menandakan isolat Pc-1 memiliki aktivitas antiinflamasi secara topikal. Neolignan merupakan

salah satu derivat polifenol, walaupun mekanisme secara pasti dari neolignan belum diketahui,

beberapa penelitian mengemukakan bahwa neolignan memiliki aktivitas antiinflamasi. Pada

penelitian neolignan dalam spesies Magnolia diketahui bahwa beberapa neolignan

menghambat produksi PGE2 dalam makrofag dengan menghambat aktivitas COX-2

(Schuhly.W, et al. 2009). Penelitian neolignan pada Myristica fragrans Houtt (Cao, et al.

2015) dan neolignan baru yaitu Sasarindol dari Sassafras randaiense (Hou, et al. 2014)

diketahui bahwa neolignan dapat menghambat aktivitas iNOS dalam memproduksi NO

dengan RAW 264.7 yang distimulasi oleh lipopolisakarida. Penelitian neolignan dari Piper

fotokadsura, diketahui bahwa lignan menghambat produksi NO yang diaktivasi oleh

lipopolisakarida dan interferon gamma (Konishi.T, et al. 2005). Spektrum luas lignan dan

neolignan juga berhasil dilaporkan memiliki aktivitas antiinflamasi (Song dan Fisher, 1999).

Penelitian lain mengenai Magnolia officinalis, meneliti 5 macam tipe biphenyl neolignan dan

menemukan beberapa diantaranya berpotensi sebagai antiinflamasi (Kuo et al, 2012).

Pada penelitian ini, dilakukan juga perbandingan aktivitas antiinflamasi dari isolat Pc-1

konsentrasi 100 µg/mL dengan ekstrak konsentrasi 100 µg/mL dan fraksi konsentrasi

100 µg/mL daun sirih merah dan didapatkan hasil seperti pada tabel II.

Tabel II. Perbandingan rata-rata AUC total dan %PI ekstrak, fraksi, dan isolat Pc-1

Kelompok Kelompok Pembanding AUC ± SE % Penghambatan

Inflamasi

Isolat Pc-1 100 µg/mL

n= 5

Ekstrak 100 µg/mL

(n=5)

15.65 ± 1.12 40.19 %

Fraksi 100 µg/mL (n=5) 21.76 ± 0.72 * 16.86 %

*) berbeda signifikan (p < 0,05)


10

Hasil analisis yang didapatkan, isolat Pc-1 100 µg/mL berbeda signifikan dengan

fraksi 100 µg/mL, namun tidak berbeda signifikan dengan ekstrak 100 µg/mL dengan daya

penghambatan yang paling besar pada ekstrak, isolat, dan terkecil pada fraksi. Aktivitas dari

suatu senyawa aktif kadang-kadang memperlihatkan aktivitas yang besar pada saat

berinteraksi dalam ekstrak kasar karena adanya interaksi yang sinergi antarsenyawa aktif

(Deharo dan Ginsburg, 2011). Di dalam ekstrak daun sirih ditemukan berbagai macam

senyawa aktif yang bila saling berinteraksi secara sinergi akan memberikan aktivitas yang

lebih besar dibandingkan dengan suatu senyawa tunggal (isolat), salah satu contohnya

flavonoid dan neolignan yang berasal dari golongan yang sama yaitu polifenol. Hal ini

memungkinan adanya interaksi sinergi antarsenyawa aktif yang memberikan efek sinergi dan

mengakibatkan daya antiinflamasi pada ekstrak lebih besar dibandingkan isolat Pc-1 yaitu

40.19%, dengan adanya efek sinergi ini kemampuan dari suatu senyawa aktif lebih besar

dalam memberikan aktivitas. Di dalam tanaman yang memiliki berbagai senyawa aktif dapat

pula terjadi interaksi yang additif dimana beberapa senyawa aktif dapat memberikan efek yang

negatif atau berlawanan sehingga terjadi penurunan aktivitas (Mukherjee dan Houghton,

2009). Fraksi daun sirih merah juga memiliki berbagai senyawa aktif, yang dapat saling

berinteraksi dan kemungkinan satu atau beberapa senyawa aktif memberikan interaksi yang

additif mengakibatkan penurunan aktivitas antiinflamasi pada fraksi yaitu sebesar 16,86%

lebih kecil dibandingkan dengan ekstrak daun sirih merah dan senyawa tunggal Pc-1.

KESIMPULAN DAN SARAN

Isolat Pc-1 dari ekstrak metanol daun sirih merah memiliki aktivitas antiinflamasi topikal pada

konsentrasi 100 µg/mL dengan daya penghambatan antiinflamasi sebesar 34.45%.

Berdasarkan penelitian ini, akan lebih baik bila dilakukan penelitian lebih lanjut dengan

konsentrasi isolat Pc-1 yang lebih besar, beserta pengecekan kemurnian menggunakan metode

yang lebih baik seperti HPLC maupun GC, dan pencarian mekanisme kerja isolat Pc-1 secara

spesifik sebagai antinflamasi.


11

DAFTAR PUSTAKA

Cao,G., WeiXu., Xiu-Wei., Frank., and Fei,Li., 2015. New neolignans from the seeds of

Myristica fragrans that inhibit nitricoxide production, Food Chemistry., 1(173),

231-237.

Cechinel-Filho, V., 2012. Plant Bioactives and Drug Discovery Principles, Practice, and

Perspecives, John Wiley&Sons Inc, New Jersey, 366-367.

Dahlan, M,S., 2014. Statistik untuk Kedokteran dan Kesehatan, Jakarta, Epidemiologi

Indonesia, 92-135.

Deharo., Eric., and Hagai Ginsburg., 2011. Analysis of Additivity And Synergism in The

Anti-Plasmodial Effect of Purified Compounds From Plant Extracts, Malaria Journal.,

10(1), 5.

Hartini, Y, S., Subagus,W,. Sitarina,W., Agustinus, Y., 2014. In vivo Immunomodulatory

Effect and Histopathological Features of Mouse Liver and Kidney Treated with

Neolignans Isolated from Red Betel (Piper crocatum Ruiz & Pav) Leaf, Tropical

Journal of Pharmaceutical Research., 1(10), 1609-1614.

Hou, Y., Chang Hsun-Shuo, et al., 2014. Sassarandainol: a new neolignan and

anti-inflammatory constituents from the stem of Sassafras randaiense, Natural

Product Research., 1-6.

Houghton, J., and Amala, R., 1998, Laboratory Handbook for the Fractination Of Natural

Extracts, Chapman & Hall, London, 146.

Ikawati ,Z., Supardjan,A,M., Asmara, L,S., 2007. Pengaruh Senyawa Heksagamavunon-1

(HGV-1) Terhadap Inflamasi Akut Akibat Reaksi Anafilaksis Kutaneus Aktif Pada

Tikus Wistar Jantan Terinduksi Ovalbumin, Laporan Penelitian, Fakultas Farmasi

Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.

Konishi,T., Takao,K.. Akihiro,D., Susumu.K., 2005. Neolignans from Piper futokadsura and

Their Inhibition of Nitric Oxide Production, Chemical and Pharmaceutical Bulletin.,

53(1), 121-124.

Kuo, W., Ching-Yi,C., Tsong-long,H., Jih-Jung, C., 2013. Biphenyl-type neolignans from

Magnolia officinalis and their anti-inflammatory activities. Journal Phytochemistry.,

85(1), 153-160.

Kustiawan, P,M., 2012. Isolasi dan Identifikasi Senyawa Imunostimulan Non Spesifik In Vitro

dari Daun Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav.), Thesis, Program Pascasarjana

Fakultas Farmasi UGM, Yogyakarta.

Lukiati, B., Aulanni’am., Win,D., 2012. Profil Distribusi Inos Dan Kadar No Pankreas Tikus

Diabetes Melitus Hasil Induksi Mld-Stz Pasca Pemberian Ekstrak Etanol Temugiring

(Curcuma Heyneana), Jurnal Kedokteran Hewan., 6(2), 120.

Moilanen, Eeva., and Heikki, V., 1995. Nitric Oxide in Inflammation and Immune Response.

Annals of Medicine. Finland., 27, 359-367.

Mukherjee,P,K., and Houghton, P., 2009. Evaluation of Herbal Medicinal Product.

Pharmaceutical Press, London, 25.

Santangelo, C., Rosaria, V., Beatrice,S. Roberta, B., Carmela., Roberta, M., 2007.

Polyphenols, intracellular signaling and inflammation. Indirizzo per la

corrispondenza., 43 (4), 394-405.


12

Santoso,Y,I,K., 2014. Uji Antiinflamasi Ekstrak Etanol Daun Kemangi (Ocimum basilicum

L.) Topikal pada Edema Mencit Betina Galur Swiss Terinduksi Karagenin, Tesis,

Universitas Sanata Dharma.

Sarker,S,D. Zahid,L. Alexander, J,G., 2006. Natural Product Isolation, 2nd edition, Humana

Press, New Jarsey, 7-8.

Schuhly,W., S,I,Khan., and N,H, Fischer., 2009. Neolignans from North American Magnolia

Species with Cyclooxygenase 2 Inhibitory Activity. Inflammopharmacology., (17),

106-119.

Song, Q., and Fisher, N, H., 1999. Biologically Active Lignans and Neolignans from

Magnolia Species. Journal Of the Mexican Chemical Society. Mexico., (43), 211-218.

Syamsuni, H., 2005. Farmasetika Dasar dan Hitungan Farmasi. Jakarta. Penerbit Buku

Kedokteran EGC., 36.

Taufik,L., Nurahyanti., dan Arifah., 2008. Efek Antiinflamasi Ekstrak Patikan Kebo

(Euphorbia hirta L) Pada Tikus Putih Jantan. Pharmacon., (9), 1-5.

Utami,P., Desty,E,P., 2013. The Miracle of Herbs. PT. Agromedia Pustaka. Jakarta., 170.

Widyarini, S., Nicole, S., Alan,J,H., Vivienne, E, R., 2001. Isoflavonoid Compounds from

Red Clover (Trifolium pratense) Protect from Inflammation and Immune Suppression

Induced by UV Radiation. Photochemistry and Photobiology., 74(3), 465-470.


13

LAMPIRAN

Lampiran 1. Surat Determinasi


14

Lampiran 2. Surat Ethical Clearance


15

Lampiran 3. Surat Kalibrasi Jangka Sorong


16

Lampiran 4. Surat Legalitas Analisa Statistika menggunakan SPSS


17

Lampiran 5. Ekstraksi daun sirih merah

Gambar 4. Daun sirih merah segar yang digunakan

Gambar 5. Serbuk daun sirih merah


18

Gambar 6. Pengadukan dengan bantuan shaker

Gambar 7. Penguapan pelarut dengan bantuan rotary evaporator


19

Gambar 8. Ekstrak kental daun sirih merah

Gambar 9. Hasil KLT pada UV 254 dan setelah penyemprotan serum IV sulfat

Keterangan: E1 : Ekstrak replikasi 1

E2 : Ekstrak replikasi 2

E3 : Ekstrak Replikasi 3

Pc-1: Isolat Piper crocatum 1


20

Lampiran 6. Fraksinasi ekstrak daun sirih merah

Gambar 10. Fraksinasi dengan bantuan KVC

Gambar 11. Hasil Fraksinasi (kiri-kanan); fraksi n-heksan, fraksi kloroform 1, fraksi

klorofom 2, fraksi etil asetat, fraksi metanol


21

Gambar 12. Hasil KLT fraksi dibandingkan dengan ekstrak dan standar isolat pada UV

254nm

Keterangan : F1 : Fraksi n-heksan

F2 : Fraksi Kloroform 1

F3 : Fraksi Kloroform 2

F4 : Fraksi Etil asetat

F5 : Fraksi Metanol

Pc1: Piper crocatum 1

Pc2: Piper crocatum 2




22

Lampiran 7. Isolasi ekstrak daun sirih merah

Gambar 13. Elusi pada chamber dengan fase gerak Kloroform:etil asetat 9:1

Gambar 14. Hasil elusi yang terlihat pada UV 254 nm

Keterangan: Pc 1: Piper crocatum 1

Pc 2: Piper crocatum 2

Pc 2

Pc 1


23

Gambar 15. Hasil elusi pada UV 366 nm

Gambar 16. Hasil pengerokan isolat daun sirih merah


24

Gambar 17. Kristal Isolat Pc-1 yang didapatkan


25

Lampiran 8. Pengujian antiinflamasi pada hewan uji

Gambar 18. Hasil pencampuran krim isolat Pc-1 dengan biocream

Keterangan: Berwarna putih dan tersebar merata

Gambar 19. Uji homogenitas krim isolat Pc-1

Keterangan: Krim homogen terlihat secara visual tersebar rata dan tidak ada butiran-butiran

kasar


26

Gambar 20. Pengukuran kulit punggung mencit sebelum pengujian

Gambar 21. Edema yang dihasilkan dengan penyuntikan karagenin 3%


27

Gambar 22. Pengolesan krim isolat Pc-1

Keterangan: Dioleskan merata sesuai dengan luas area yang telah ditandai

Gambar 23. Pengukuran edema setiap 1 jam selama 6 jam setelah pemberian krim

isolat Pc-1


28

Lampiran 9. Perolehan Data Hasil Uji Pendahuluan

Jam Ke - Karagenin 1% Karagenin 2% Karagenin 3%

0 1.315 0.995 1.09

1 2.585 3.03 3.3

2 3.68 3.485 4.48

3 3.31 3.14 3.705

4 3.09 2.64 3.245

5 2.39 2.19 2.745

6 1.925 1.89 2.265

Dari hasil uji pendahuluan, dipilih konsentrasi karagenin 3% karena pada konsentrasi

ini edema dapat dipertahankan sekitar 2 kali lipat dari kulit punggung normal,

dibandingkan dengan konsentrasi karagenin 1% dan 2%.

0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

3.5

4

4.5

5

0 1 2 3 4 5 6 7Ket

ebala

n K

uli

t M

enci

t (m

m)

Jam ke-

Kurva Uji pendahuluan Konsentrasi

Karagenin

Kons 1%

Kons 2%

Kons 3%


29

Lampiran 10. Hasil Uji Antiinflamasi

1. Rata-rata Selisih Tebal Kulit

Jam

ke K. NEG K. BIO

Ekstrak

100µg

Fraksi

100 µg

Isolat Pc-1

100µg

0 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00

1 3.50 4.02 2.70 3.62 2.94

2 3.87 4.94 2.38 3.40 2.51

3 4.11 5.32 2.19 3.15 2.23

4 3.99 4.49 1.91 2.90 1.99

5 3.72 4.13 1.72 2.58 1.77

6 3.43 3.73 1.58 2.31 1.46

2. Data Kontrol Biocream

JAM KE- 1 2 3 4 5

0 1.07 0.69 0.75 0.70 0.67

1 5.43 4.04 5.38 4.30 4.81

2 6.35 5.51 6.26 5.16 5.29

3 6.56 5.76 6.44 5.84 5.87

4 5.60 4.56 5.75 5.14 5.30

5 5.20 4.01 5.26 4.92 5.12

0.00

1.00

2.00

3.00

4.00

5.00

6.00

0 2 4 6 8

Me

nci

t ke

-

Waktu

Kurva Selisih Tebal Lipat Kulit Punggung

Kontrol negatif

Kontrol Biocream

Ekstrak 100mikrogram/mL

Fraksi 100mikrogram/mL

Isolat Pc-1100mikrogram/mL


30

6 4.43 3.85 4.81 4.54 4.88

AUC

JAM KE- 1 2 3 4 5

0 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00

1 3.25 2.37 3.07 2.50 2.74

2 5.89 4.78 5.82 4.73 5.05

3 6.46 5.64 6.35 5.50 5.58

4 6.08 5.16 6.10 5.49 5.59

5 5.40 4.29 5.51 5.03 5.21

6 4.82 3.93 5.04 4.73 5.00

AUC Total 31.89 26.15 31.87 27.98 29.17

3. Data Kontrol Negatif

JAM

KE 1 2 3 4 5

0 0.96 0.78 0.87 0.95 0.82

1 3.81 3.72 4.94 4.59 4.82

2 4.08 4.16 5.07 5.22 5.18

3 4.42 4.50 5.34 5.34 5.35

4 4.30 4.44 5.15 5.30 5.12

5 4.01 4.35 4.96 5.03 4.63

6 3.93 4.01 4.84 4.63 4.10

AUC

Jam/Mencit 1 2 3 4 5

0 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00

1 2.39 2.25 2.91 2.77 2.82

2 3.95 3.94 5.01 4.91 5.00

3 4.25 4.33 5.21 5.28 5.27

4 4.36 4.47 5.25 5.32 5.24

5 4.16 4.40 5.06 5.17 4.88

6 3.97 4.18 4.90 4.92 4.37

AUC Total 23.07 23.57 28.32 28.36 27.56


31

4. Data Ekstrak 100µg

Mencit/Jam 0 1 2 3 4 5 6

1 0.61 3.48 3.13 3.01 2.81 2.73 2.64

2 0.66 3.71 3.25 3.09 2.81 2.60 2.42

3 0.71 2.84 2.66 2.36 2.20 2.00 1.86

4 0.65 2.83 2.61 2.35 2.00 1.77 1.55

5 0.70 3.95 3.58 3.30 3.04 2.85 2.78

AUC

Jam/ mencit 1 2 3 4 5

0 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00

1 2.05 2.19 1.78 1.74 2.33

2 3.31 3.48 2.75 2.72 3.77

3 3.07 3.17 2.51 2.48 3.44

4 2.91 2.95 2.28 2.18 3.17

5 2.77 2.71 2.10 1.89 2.95

6 2.69 2.51 1.93 1.66 2.82

AUC total 16.79 17.00 13.35 12.66 18.46

5. Data Fraksi 100µg

Fraksi

Mencit 0 1 2 3 4 5 6

1 0.91 4.26 3.95 3.74 3.42 2.92 2.50

2 0.62 4.16 4.05 3.79 3.56 3.20 3.13

3 0.88 4.84 4.62 4.35 4.10 3.90 3.81

4 0.88 4.35 4.16 3.95 3.70 3.51 3.18

5 0.84 4.63 4.35 4.05 3.84 3.48 3.07

AUC

Jam 1 2 3 4 5

0 0.00 0 0 0 0

1 2.59 2.39 2.86 2.62 2.74

2 4.11 4.11 4.73 4.26 4.49

3 3.85 3.92 4.49 4.06 4.20

4 3.58 3.68 4.23 3.83 3.95

5 3.17 3.38 4.00 3.61 3.66

6 2.71 3.17 3.86 3.35 3.28

AUC Total 20.00 20.64 24.16 21.70 22.31


32

6. Data isolat Pc-1

mencit/jam 0 1 2 3 4 5 6

1 0.96 3.57 3.48 3.08 2.80 2.63 2.30

2 0.88 4.18 3.51 3.11 2.92 2.66 2.32

3 0.72 3.41 2.97 2.78 2.58 2.37 2.24

4 0.75 3.72 3.22 3.05 2.78 2.48 2.19

5 0.84 3.95 3.54 3.30 3.02 2.86 2.39

AUC

Jam/Mencit 1 2 3 4 5

0 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00

1 2.27 2.53 2.07 2.24 2.40

2 3.53 3.85 3.19 3.47 3.75

3 3.28 3.31 2.88 3.14 3.42

4 2.94 3.02 2.68 2.92 3.16

5 2.72 2.79 2.48 2.63 2.94

6 2.47 2.49 2.31 2.34 2.63

AUC Total 17.19 17.98 15.59 16.72 18.29

7. Data Persen Inflamasi

a. KontrolNegatif

Mencit AUC K.NEG

NILAI

AUC %PI

1 26.17 23.07 11.85

2 26.17 23.57 9.94

3 26.17 28.32 -8.22

4 26.17 28.36 -8.37

5 26.17 27.56 -5.31

b. Kontrol Biocream

Mencit AUC K.NEG

NILAI

AUC %PI

1 26.17 31.89 -21.86

2 26.17 26.15 0.08

3 26.17 31.87 -21.78


33

4 26.17 27.98 -6.92

5 26.17 29.17 -11.44

c. Ekstrak 100µg

MENCIT

AUC

K.NEGATIF NILAI AUC %PI

1 26.17 16.79 35.84

2 26.17 17.00 35.04

3 26.17 13.35 48.99

4 26.17 12.66 51.62

5 26.17 18.46 29.46

d. Fraksi100µg

Mencit Ke- AUC Kontrol Negatif Nilai AUC % PI

1 26.17 20.00 23.60

2 26.17 20.64 21.14

3 26.17 24.16 7.69

4 26.17 21.70 17.09

5 26.17 22.31 14.76

e. Isolat Pc-1

MENCIT AUC K.NEGATIF NILAI AUC %PI

1 26.17 17.19 34.31

2 26.17 17.98 31.30

3 26.17 15.59 40.43

4 26.17 16.72 36.11

5 26.17 18.29 30.11


34

Lampiran 11. Hasil Uji Statistika

a. Ekstrak 100µg

Descriptives

Kelompok Statistic

Std.

Error

AUC Kontrol negatif Mean 26.1760 1.17730

95% Confidence

Interval for Mean

Lower

Bound 22.9073

Upper

Bound 29.4447

5% Trimmed Mean 26.2272

Median 27.5600

Variance 6.930

Std. Deviation 2.63251

Minimum 23.07

Maximum 28.36

Range 5.29

Interquartile Range 5.02

Skewness -.565 .913

Kurtosis -3.140 2.000

Kontrol biocream Mean 29.4120 1.11651

95% Confidence

Interval for Mean

Lower

Bound 26.3121

Upper

Bound 32.5119


Median 29.1700

Variance 6.233


Minimum 26.15

Maximum 31.89

Range 5.74


Skewness -.203 .913

Kurtosis -1.834 2.000

ekstrak Mean 15.6520 1.12357


35

100mikrogram 95% Confidence

Interval for Mean

Lower

Bound 12.5325

Upper

Bound 18.7715


Median 16.7900

Variance 6.312


Minimum 12.66

Maximum 18.46

Range 5.80


Skewness -.339 .913

Kurtosis -2.498 2.000

Tests of Normality

Kelompok

Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk

Statistic df Sig. Statistic df Sig.

AUC Kontrol negatif .300 5 .159 .784 5 .060

Kontrol

biocream .238 5 .200

* .906 5 .447

ekstrak

100mikrogram .275 5 .200

* .888 5 .349

*. This is a lower bound of the true significance.

ONE WAY ANOVA

Test of Homogeneity of Variances

AUC

Levene Statistic df1 df2 Sig.

.146 2 12 .865

ANOVA

AUC

Sum of

Squares df Mean Square F Sig.

Between

Groups 517.606 2 258.803 39.867 .000


36

Post Hoc Tests

Multiple Comparisons

Dependent Variable: AUC

Scheffe

(I) Kelompok (J) Kelompok

Mean

Difference

(I-J)

Std.

Error Sig.

95%

Confidence

Interval

Lower

Bound

Kontrol negatif Kontrol biocream -3.23600 1.61143 .176 -7.7280

ekstrak

100mikrogram 10.52400

* 1.61143 .000 6.0320

Kontrol biocream Kontrol negatif 3.23600 1.61143 .176 -1.2560

ekstrak


* 1.61143 .000 9.2680

ekstrak

100mikrogram

Kontrol negatif -10.52400* 1.61143 .000 -15.0160

Kontrol biocream -13.76000* 1.61143 .000 -18.2520



Scheffe


95% Confidence

Interval

Upper Bound

Kontrol negatif Kontrol biocream 1.2560

ekstrak 100mikrogram 15.0160

Kontrol biocream Kontrol negatif 7.7280

ekstrak 100mikrogram 18.2520

ekstrak 100mikrogram Kontrol negatif -6.0320

Kontrol biocream -9.2680

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

Within Groups 77.901 12 6.492

Total 595.507 14


37

Homogeneous Subsets

AUC

Scheffea

Kelompok N

Subset for alpha =

0.05

1 2

ekstrak

100mikrogram 5 15.6520

Kontrol negatif 5 26.1760

Kontrol biocream 5 29.4120

Sig. 1.000 .176

Means for groups in homogeneous subsets are

displayed.

a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.

a. STATISTIKA FRAKSI

Descriptives

Kelompok Statistic

Std.

Error


95% Confidence

Interval for Mean

Lower

Bound 22.9073

Upper

Bound 29.4447


Median 27.5600

Variance 6.930


Minimum 23.07

Maximum 28.36

Range 5.29


Skewness -.565 .913

Kurtosis -3.140 2.000

Kontrol biocream Mean 29.4120 1.11651

95% Confidence

Interval for Mean

Lower

Bound 26.3121


38

Upper

Bound 32.5119


Median 29.1700

Variance 6.233


Minimum 26.15

Maximum 31.89

Range 5.74


Skewness -.203 .913

Kurtosis -1.834 2.000

Fraksi 100

mikrogram

Mean 21.7620 .72174

95% Confidence

Interval for Mean

Lower

Bound 19.7581

Upper

Bound 23.7659


Median 21.7000

Variance 2.605


Minimum 20.00

Maximum 24.16

Range 4.16


Skewness .701 .913

Kurtosis .178 2.000

Tests of Normality

Kelompok




Kontrol biocream .238 5 .200* .906 5 .447

Fraksi 100

mikrogram .167 5 .200

* .963 5 .831



39

ONE WAY ANOVA


AUC

Levene

Statistic df1 df2 Sig.

1.855 2 12 .199

ANOVA

AUC

Sum of


Between

Groups 147.463 2 73.731 14.028 .001


Total 210.533 14

Post Hoc Tests



Scheffe


Mean

Difference (I-

J)

Std.

Error Sig.

95%

Confidence

Interval

Lower

Bound

Kontrol negatif Kontrol biocream -3.23600 1.44995 .125 -7.2778

Fraksi 100

mikrogram 4.41400

* 1.44995 .032 .3722

Kontrol biocream Kontrol negatif 3.23600 1.44995 .125 -.8058

Fraksi 100

mikrogram 7.65000

* 1.44995 .001 3.6082

Fraksi 100

mikrogram

Kontrol negatif -4.41400* 1.44995 .032 -8.4558

Kontrol biocream -7.65000* 1.44995 .001 -11.6918



Scheffe


95% Confidence

Interval


40


Homogeneous Subsets

AUC

Scheffea

Kelompok N

Subset for alpha =

0.05

1 2

Fraksi 100

mikrogram 5 21.7620


Kontrol biocream 5 29.4120

Sig. 1.000 .125


displayed.


b. STATISTIKA ISOLAT PC-1

Descriptives

Kelompok Statistic

Std.

Error


95% Confidence

Interval for Mean

Lower

Bound 22.9073

Upper

Bound 29.4447

Upper Bound

Kontrol negatif Kontrol biocream .8058

Fraksi 100 mikrogram 8.4558

Kontrol biocream Kontrol negatif 7.2778

Fraksi 100 mikrogram 11.6918

Fraksi 100 mikrogram Kontrol negatif -.3722

Kontrol biocream -3.6082


41


Median 27.5600

Variance 6.930


Minimum 23.07

Maximum 28.36

Range 5.29


Skewness -.565 .913

Kurtosis -3.140 2.000

Kontrol

biocream

Mean 29.4120 1.11651

95% Confidence

Interval for Mean

Lower

Bound 26.3121

Upper

Bound 32.5119


Median 29.1700

Variance 6.233


Minimum 26.15

Maximum 31.89

Range 5.74


Skewness -.203 .913

Kurtosis -1.834 2.000

Isolat Pc-1 Mean 17.1540 .48003

95% Confidence

Interval for Mean

Lower

Bound 15.8212

Upper

Bound 18.4868


Median 17.1900

Variance 1.152


Minimum 15.59

Maximum 18.29

Range 2.70


42


Skewness -.633 .913

Kurtosis -.325 2.000

Tests of Normality

Kelompok




Kontrol

biocream .238 5 .200

* .906 5 .447

Isolat Pc-1 .179 5 .200* .956 5 .778


ONE WAY ANOVA


AUC

Levene


4.348 2 12 .038

ANOVA

AUC

Sum of


Between

Groups 403.545 2 201.772 42.285 .000


Total 460.806 14

Post Hoc Tests




Mean

Difference (I-

J)

Std.

Error Sig.


43

Scheffe Kontrol negatif Kontrol

biocream -3.23600 1.38156 .104

Isolat Pc-1 9.02200* 1.38156 .000

Kontrol

biocream

Kontrol negatif 3.23600 1.38156 .104

Isolat Pc-1 12.25800* 1.38156 .000

Isolat Pc-1 Kontrol negatif -9.02200* 1.38156 .000

Kontrol

biocream -12.25800

* 1.38156 .000

Tamhane Kontrol negatif Kontrol

biocream -3.23600 1.62254 .225

Isolat Pc-1 9.02200* 1.27140 .002

Kontrol

biocream

Kontrol negatif 3.23600 1.62254 .225

Isolat Pc-1 12.25800* 1.21533 .000

Isolat Pc-1 Kontrol negatif -9.02200* 1.27140 .002

Kontrol

biocream -12.25800

* 1.21533 .000




95% Confidence Interval

Lower Bound Upper Bound

Scheffe Kontrol negatif Kontrol biocream -7.0872 .6152

Isolat Pc-1 5.1708 12.8732

Kontrol biocream Kontrol negatif -.6152 7.0872

Isolat Pc-1 8.4068 16.1092

Isolat Pc-1 Kontrol negatif -12.8732 -5.1708

Kontrol biocream -16.1092 -8.4068

Tamhane Kontrol negatif Kontrol biocream -8.1145 1.6425

Isolat Pc-1 4.6565 13.3875

Kontrol biocream Kontrol negatif -1.6425 8.1145

Isolat Pc-1 8.1275 16.3885

Isolat Pc-1 Kontrol negatif -13.3875 -4.6565

Kontrol biocream -16.3885 -8.1275


Homogeneous Subsets

AUC


44

Kelompok N

Subset for alpha =

0.05

1 2

Scheffea Isolat Pc-1 5 17.1540


Kontrol

biocream 5 29.4120

Sig. 1.000 .104

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.


c. STATISTIKA PERBANDINGAN EKSTRAK, ISOLAT, FRAKSI

Descriptives

Kelompok Statistic

Std.

Error

AUC Ekstrak

100mikrogram

Mean 15.6520 1.12357

95% Confidence

Interval for Mean

Lower

Bound 12.5325

Upper

Bound 18.7715


Median 16.7900

Variance 6.312


Minimum 12.66

Maximum 18.46

Range 5.80


Skewness -.339 .913

Kurtosis -2.498 2.000

Fraksi 100

mikrogram

Mean 21.7620 .72174

95% Confidence

Interval for Mean

Lower

Bound 19.7581

Upper

Bound 23.7659


Median 21.7000


45

Variance 2.605


Minimum 20.00

Maximum 24.16

Range 4.16


Skewness .701 .913

Kurtosis .178 2.000

Isolat Pc-1 Mean 17.1540 .48003

95% Confidence

Interval for Mean

Lower

Bound 15.8212

Upper

Bound 18.4868


Median 17.1900

Variance 1.152


Minimum 15.59

Maximum 18.29

Range 2.70


Skewness -.633 .913


Tests of Normality

Kelompok



AUC Ekstrak

100mikrogram .275 5 .200

* .888 5 .349

Fraksi 100

mikrogram .167 5 .200

* .963 5 .831

Isolat Pc-1 .179 5 .200* .956 5 .778


ONE WAY ANOVA


AUC


46

Levene


3.582 2 12 .060

ANOVA

AUC

Sum of


Between

Groups 101.370 2 50.685 15.102 .001


Total 141.644 14

Post Hoc Tests



Scheffe


Mean

Difference

(I-J)

Std.

Error Sig.

95%

Confidence

Interval

Lower

Bound

Ekstrak

100mikrogram

Fraksi 100

mikrogram -6.11000

* 1.15866 .001 -9.3399

Isolat Pc-1 -1.50200 1.15866 .455 -4.7319

Fraksi 100

mikrogram

Ekstrak


* 1.15866 .001 2.8801

Isolat Pc-1 4.60800* 1.15866 .006 1.3781

Isolat Pc-1 Ekstrak

100mikrogram 1.50200 1.15866 .455 -1.7279

Fraksi 100

mikrogram -4.60800

* 1.15866 .006 -7.8379



Scheffe


95% Confidence

Interval

Upper Bound


47

Ekstrak 100mikrogram Fraksi 100 mikrogram -2.8801

Isolat Pc-1 1.7279

Fraksi 100 mikrogram Ekstrak 100mikrogram 9.3399

Isolat Pc-1 7.8379

Isolat Pc-1 Ekstrak 100mikrogram 4.7319

Fraksi 100 mikrogram -1.3781


Homogeneous Subsets

AUC

Scheffea

Kelompok N

Subset for alpha =

0.05

1 2

Ekstrak

100mikrogram 5 15.6520

Isolat Pc-1 5 17.1540

Fraksi 100

mikrogram 5 21.7620

Sig. .455 1.000


displayed.


d. STATISTIKA PERSEN INFLAMASI

Descriptives

Kelompok Statistic

Std.

Error

PI kontrol negatif Mean -.0220 4.50025

95% Confidence

Interval for Mean

Lower

Bound -12.5167

Upper

Bound 12.4727

5% Trimmed Mean -.2178

Median -5.3100

Variance 101.261



48

Minimum -8.37

Maximum 11.85

Range 20.22


Skewness .565 .913

Kurtosis -3.140 2.000

kontrol biocream Mean -12.3840 4.26718

95% Confidence

Interval for Mean

Lower

Bound -24.2316

Upper

Bound -.5364

5% Trimmed Mean -12.5500

Median -11.4400

Variance 91.044


Minimum -21.86

Maximum .08

Range 21.94


Skewness .201 .913

Kurtosis -1.835 2.000

ekstrak 100

mikrogram

Mean 40.1900 4.29338

95% Confidence

Interval for Mean

Lower

Bound 28.2697

Upper

Bound 52.1103


Median 35.8400

Variance 92.166


Minimum 29.46

Maximum 51.62

Range 22.16


Skewness .339 .913

Kurtosis -2.499 2.000

fraksi 100 mikrogram Mean 16.8560 2.75951


49

95% Confidence

Interval for Mean

Lower

Bound 9.1944

Upper

Bound 24.5176


Median 17.0900

Variance 38.074


Minimum 7.69

Maximum 23.60

Range 15.91


Skewness -.699 .913

Kurtosis .177 2.000

isolat Pc-1 Mean 34.4520 1.83431

95% Confidence

Interval for Mean

Lower

Bound 29.3591

Upper

Bound 39.5449


Median 34.3100

Variance 16.823


Minimum 30.11

Maximum 40.43

Range 10.32


Skewness .634 .913



50

BIOGRAFI PENULIS

Penulis skripsi dengan judul “Uji Aktivitas Antiinflamasi

Topikal Isolat Pc-1 Dari Ekstrak Metanol Daun Sirih

Merah (Piper Crocatum Ruiz & Pav.) pada Mencit

Diinduksi Karagenin” memiliki nama lengkap Ardini

Angelina Papulung, anak kedua dari tiga bersaudara,

ayah Markus Papulung dan ibu Agustina. Saudara

perempuan Dodo Papulung dan saudara laki-laki Dion

Papulung. Penulis dilahirkan di Rantepao, 8 Februari

1996, Toraja Utara, Sulawesi Selatan.

Pendidikan formal yang telah ditempuh, ialah

TK Kristen Rantepao (1999-2001), SD Kristen Rantepao

5 (2001-2007). SMP Negeri 2 Rantepao (2007-2010),

SMA Kristen Barana’ (2010-2013), dan melanjutkan di Perguruan Tinggi Swasta

Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma Yogyakarta tahun 2013. Semasa

menempuh kuliah, penulis cukup aktif dalam berbagai kegiatan di dalam fakultas.

Penulis pernah berperan dalam kepanitiaan “Donor Darah JMKI 2015” sebagai divisi

acara, kepanitiaan “Sidang Terbuka Pengambilan Lafal Sumpah Apoteker 2016”

sebagai divisi acara, dan kepanitiaan “Kampanye Informasi Obat 2014” sebagai

koordinator volunteer. Penulis juga pernah bergabung sebagai anggota aktif UKF

PSF Veronika Farmasi 2014/2015 dan menjadi anggota Tim Media Farmasi BEMF

2014/2015. Penulis juga pernah berperan sebagai Asisten Praktikum Kimia Analisis

2015/2016, Asisten Praktikum Anatomi Fisiologi 2015/2016, dan Asisten Praktikum

Farmakognosi Fitokimia 2015/2016.


UJI AKTIVITAS ANTIINFLAMASI TOPIKAL ISOLAT PC-1 DARI ... · neolignan daun sirih merah yaitu isolat...

Documents

Transcript of UJI AKTIVITAS ANTIINFLAMASI TOPIKAL ISOLAT PC-1 DARI ... · neolignan daun sirih merah yaitu isolat...