UJI AKTIVITAS ANTIINFLAMASI TOPIKAL ISOLAT PC-2 … · Gambar 11. Isolasi senyawa Pc-2 dengan...

UJI AKTIVITAS ANTIINFLAMASI TOPIKAL ISOLAT PC-2 EKSTRAK

METANOL DAUN SIRIH MERAH (Piper crocatum Ruiz & Pav.) PADA

MENCIT DIINDUKSI KARAGENIN

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh :

Eugenia Clarisa Giastini Kerans

NIM : 138114172

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2016

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

i

HALAMAN JUDUL




SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh :

Eugenia Clarisa Giastini Kerans

NIM : 138114172

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2016


ii


iii


iv


v


vi

HALAMAN PERSEMBAHAN

“There are no secrets to success. It is the result of preparation, hard work, and

learning from failure.”

Saya persembahkan skripsi ini untuk:

Kemuliaan nama Tritunggal Maha Kudus dan Bunda Maria

Orang tua dan saudara-saudari saya

Keluarga besar Kerans-Sogen

Semua sahabat dan teman-teman

Serta Almamater tercinta, Universitas Sanata Dharma


vii

PRAKATA

Puji dan syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa atas segala berkat,

rahmat, serta penyertaan yang dilimpahkan sehingga penulis dapat menyelesaikan

skripsi yang berjudul “UJI AKTIVITAS ANTIINFLAMASI TOPIKAL

ISOLAT PC-2 EKSTRAK METANOL DAUN SIRIH MERAH (Piper

crocatum Ruiz & Pav.) PADA MENCIT DIINDUKSI KARAGENIN” sebagai

salah satu syarat untuk mendapatkan gelar sarjana Farmasi (S.Farm) Fakultas

Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

Penyeleseaian skripsi ini tentunya tidak lepas dari bantuan berbagai

pihak, baik secara langsung maupun tidak langsung. Oleh karena itu penulis

hendak mengucapkan terimakasih kepada:

1. Ibu Aris Widayati, M.Si., Ph,D., Apt. Selaku Dekan Fakultas Farmasi,

Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.

2. Ibu Dr. Yustina Sri Hartini, M.Si., Apt., selaku dosen pembimbing utama

atas segala bimbingan, waktu dan kesabaran yang telah diberikan untuk

memberi masukan, dukungan, saran, dan motivasi kepada penulis dalam

penelitian dan penyusunan skripsi ini.

3. Ibu drh. Sitarina Widyarini, MP. Ph.D., selaku dosen pembimbing

pendamping atas segala bimbingan, waktu dan kesabaran yang telah

diberikan untuk memberi masukan, dukungan, saran, dan motivasi kepada

penulis dalam penelitian dan penyusunan skripsi ini.

4. Ibu Dr. Erna Tri Wulandari, M.Si., Apt., selaku dosen penguji skripsi yang

telah banyak memberi ide, saran, dan masukkan yang membangun untuk

penelitian ini.

5. Bapak Christianus Heru Setiawan, M.Sc., Apt., selaku dosen penguji skripsi

yang telah banyak memberi ide, saran, dan masukkan yang membangun

untuk penelitian ini.

6. Ibu Agustina Setiawati M.Sc., Apt., dan Bapak Flotentinus Dika Octa

Riswanto, M.Sc., selaku dosen pembimbing akademik penulis atas

pendampingan, bimbingan, arahan serta dukungan kepada penulis selama

ini.

7. Ibu Dr. Dewi Setyaningsih S.Si., Apt., M.Sc. yang telah memberikan ijin

dalam penggunaan laboratorium dan fasilitas untuk menunjang penelitian.

8. Bapak Wagiran, Bapak Heru dan Bapak Parjiman selaku laboran atas segala

bantuan dan dukungan yang diberikan selama melakukan penelitian di

laboratorium.

9. Bapak Dominikus Saka Kerans dan alm. Mama Maria Lenny Sogen atas

segala cinta, doa, dukungan, dan motivasi bagi penulis serta selalu menjadi

sumber kekuatan dalam setiap proses perjalanan penulis hingga penyusunan

tugas akhir ini.


viii

10. Saudara dan saudari terkasih kakak Fransiscus Fiano Anthony Kerans,

kakak Anastasia Vivin Rimania serta keponakan tersayang Felicia Luh

Valdarina Kerans yang selalu setia mendukung, memberikan masukan,

menghibur, mendengarkan segala keluh kesah dan menyemangati penulis.

11. Teman-teman seperjuangan dalam penelitian Piper crocatum : Rafaella

Daramika Dwi Esti, Rianti Putri Kinanthi dan Ardini Angelina Papulung

atas segala dinamika, kebersamaan, canda tawa, dukungan serta semangat

selama proses penelitian berlangsung hingga penyusunan tugas akhir.

12. Sahabat-sahabat penulis dari bangku SMA Kiki, Cindy, Karina, Renata,

Mitha, Icha, Reni, Ayu dan Ani atas segala cinta kasih, kebersamaan, canda

tawa, dukungan dan doa bagi penulis.

13. Sahabat-sahabat penulis selama kuliah Dini, Elin, Keke, Nawa, Reni, Rosa,

Yose, Lela, Zita dan Cisca serta seluruh keluarga besar FSM D 2013, FKK

C 2013 dan tim PKMM Gelitik Asmara atas segala dinamika, kebersamaan,

dukungan, dan selalu menjadi tempat berbagi suka dan duka bagi penulis.

Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari sempurna, maka

penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak yang membangun

sehingga bisa membuat karya yang lebih baik. Penulis mohon maaf atas segala

kesalahan dan kekurangan yang terdapat dalam skripsi ini. Akhir kata, penulis

berharap penelitian ini dapat bermanfaat bagi semua pihak.

Yogyakarta, 12 November 2016

Penulis


ix

Daftar Isi

Halaman Judul ....................................................................................................... i

Persetujuan Pembimbing ....................................................................................... ii

Halaman Pengesahan ............................................................................................ iii

Pernyataan Keaslian Karya ................................................................................... iv

Lembar Pernyataan Persetujuan Publikasi Karya Ilmiah Untuk Kepentingan

Akademis .............................................................................................................. v

Halaman Persembahan .......................................................................................... vi

Prakata ................................................................................................................... vii

Daftar Isi................................................................................................................ ix

Daftar Tabel .......................................................................................................... x

Daftar Gambar ....................................................................................................... xi

Daftar Lampiran .................................................................................................. xiii

Abstrak ................................................................................................................. xiv

Abstract ................................................................................................................ xv

Pendahuluan .......................................................................................................... 1

Metode Penelitian.................................................................................................. 2

Hasil dan Pembahasan........................................................................................... 5

Kesimpulan ........................................................................................................... 9

Daftar Pustaka ............................................................................................... 10

Lampiran ............................................................................................................... 13

Biografi Penulis ..................................................................................................... 49


x

Daftar Tabel

Tabel 1. Rata-Rata AUC Total Tiap Perlakuan dan % Penghambatan Inflamasi

............................................................................................................... 7


xi

Daftar Gambar

Gambar 1. Hasil uji kemurnian dengan 4 sistem fase gerak deteksi menggunakan UV

254 nm dengan fase gerak (heksan : etil asetat (3 :1), kloroform : etil asetat

(9:1), heksan : aseton (3:1) dan kloroform : etil asetat (1:9) ......................... 6

Gambar 2. Struktur isolat Pc-1 dan Pc-2 senyawa neolignan dari ekstrak metanol sirih

merah (Piper crocatum Ruiz &Pav.) .............................................................. 9

Gambar 3. Daun sirih merah yang telah dikeringkan ..................................................... 13

Gambar 4. Ekstrak sirih merah ....................................................................................... 13

Gambar 5. Maserasi serbuk daun sirih merah menggunakan shaker .................. 14

Gambar 6. Pemekatan dengan vaccum rotary evaporator .................................. 14

Gambar 7. Fraksi-fraksi hasil fraksinasi dengan 5 sistem pelarut dari ekstrak

metanol daun sirih merah ................................................................. 15

Gambar 8. Alat yang digunakan untuk fraksinasi dengan metode VLC ............. 15

Gambar 9. Monitoring ekstrak metanol dengan standar menggunakan UV 254 nm

dengan metode KLT pada fase gerak kloroform : etil asetat (9:1) ... 16

Gambar 10. Monitoring fraksi dari ekstrak metanol dengan standar menggunakan

UV 254 nm dengan metode KLT pada fase gerak kloroform : etil

asetat (9:1). ....................................................................................... 16

Gambar 11. Isolasi senyawa Pc-2 dengan metode KLT preparatif dielusi dengan

fase gerak kloroform : etil asetat (9:1).............................................. 17

Gambar 12. Isolasi senyawa Pc-2 menggunakan metode KLT preparatif deteksi

pada UV 254 nm ............................................................................... 17

Gambar 13. Serbuk isolat Pc-2 yang didapat setelah isolasi ............................... 18

Gambar 14. Deteksi isolat Pc-2 yang telah diisolasi dengan serium (iv) sulfat .. 18

Gambar 15. Uji kemurnian dengan heksan : aseton (3:1) dilihat menggunakan uv

254 nm, uv 366 nm dan setelah di deteksi dan dipanaskan .............. 19

Gambar 16. Uji Kemurnian dengan kloroform : etil asetat (9:1) dilihat

menggunakan UV 254 nm, UV 366 nm dan setelah di deteksi dan

dipanaskan ........................................................................................ 19

Gambar 17. Uji kemurnian dengan kloroform : etil asetat (1:9) dilihat

menggunakan UV 254 nm, UV 366 nm dan setelah di deteksi dan

dipanaskan. ....................................................................................... 20


xii

Gambar 18. Uji kemurnian dengan heksan : etil asetat (3:1) dilihat menggunakan

UV 254 nm, UV 366 nm dan setelah di deteksi dan dipanaskan. .... 20

Gambar 19. Biocream yang digunakan diambil menggunakan spuit injeksi 10

ml ..................................................................................................... 21

Gambar 20. Biocream yang telah dicampur dengan isolat Pc-2 ......................... 21

Gambar 21. Uji homogenitas isolat Pc-2 menggunakan kaca preparat. .............. 22

Gambar 22. Mencit galur swiss yang telah dicukur bulu pada punggung........... 22

Gambar 23. Penyuntikan karagenin secara subkutan .......................................... 22

Gambar 24. Pengukuran tebal lipat kulit ............................................................. 23

Gambar 25. Pemberian krim isolat Pc-2.............................................................. 23


xiii

Daftar Lampiran

Lampiran 1. Daun dan Serbuk Sirih Merah ...................................................... 13

Lampiran 2. Ekstrak Daun Sirih Merah dan Alat yang Digunakan .................. 13

Lampiran 3. Fraksinasi Ekstrak Metanol Daun Sirih Merah dan Alat yang

Digunakan ........................................................................................... 14

Lampiran 4. Monitoring Hasil Ekstraksi dan Fraksinasi Daun Sirih Merah

Menggunakan Sistem KLT .......................................................... 17

Lampiran 5. Isolasi Senyawa PC-2 ................................................................... 18

Lampiran 6. Profil Kromatogram Hasil Uji Kemurnian Menggunakan 4

Sistem Fase Gerak ....................................................................... 19

Lampiran 7. Penyiapan Krim Isolat PC-2 ......................................................... 21

Lampiran 8. Uji Homogenitas Krim Isolat PC-2 .............................................. 22

Lampiran 9. Hewan Uji yang Digunakan ......................................................... 22

Lampiran10.Uji Aktivitas Antiinflamasi dengan Metode Pengukuran

Skinfold Thickness ........................................................................ 22

Lampiran 11. Ethical Clearance ....................................................................... 24

Lampiran 12. Surat Determinasi Tanaman Sirih Merah ................................... 25

Lampiran 13. Surat Keterangan Kalibrasi Jangka Sorong ................................ 26

Lampiran 14. Surat Keterangan Uji Statistik ................................................... 27

Lampiran 15. Data Perhitungan Uji Pendahuluan Karagenin AUC, Selisih

Tebal Lipat Kulit dan % PI .......................................................... 28

Lampiran 16. Data Uji Statistik ........................................................................ 36


xiv




Eugenia Clarisa Giastini Kerans, Yustina Sri Hartini,

Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta, Indonesia

Abstrak

Inflamasi merupakan respon fisiologis terhadap berbagai rangsangan

seperti infeksi dan cedera pada jaringan. Salah satu senyawa dari daun sirih merah

yang memiliki efek imunomodulator yaitu neolignan. Pada penelitian ini

neolignan diisolasi dari ekstrak metanol daun sirih merah untuk melihat ada

tidaknya aktivitas antiinflamasi topikal yang dimiliki. Isolasi dilakukan dengan

metode kromatografi lapis tipis preparatif kemudian dilakukan pemurnian

menggunakan kromatografi lapis tipis dengan 4 sistem fase gerak. Pengujian

aktivitas antiinflamasi topikal dilakukan pada hewan uji dengan metode

pengukuran skinfold thickness untuk melihat penurunan tebal lipat kulit pada kulit

punggung mencit yang diinduksi karagenin. Adanya aktivitas antiinflamasi dapat

dilihat dari persen penurunan tebal lipat kulit. Analisis data menggunakan

Shapiro-Wilk kemudian dilanjutkan dengan analisis One-Way ANOVA dengan

taraf kepercayaan 95%. Analisis dilanjutkan dengan uji Post Hoc dan test Scheffe.

Diperoleh nilai p<0,05 maka secara statistik diartikan perbedaan bermakna. Hasil

penelitian menunjukkan Isolat Pc-2 memiliki aktivitas antiinflamasi secara topikal

dilihat dari adanya penurunan tebal lipat kulit yang dilihat dari nilai AUC sebesar

14,72 ± 0,78 mm2.jam dan persen penghambatan inflamasi sebesar 43,77 %.

Kata kunci : Daun Sirih Merah, Isolat Pc-2, Antiinflamasi Topikal,

Neolignan, Skinfold Thickness


xv

Abstract

Inflammation is the response of physiological stimuli such as infection and

injury to the tissue. One of the compounds from the Red betel leaves have an effect

imunomodulator i.e. neolignan. On this study neolignan isolated from the methanol

extracts of the Red betel leaves to see whether or not there is topical activities of

inflammation. Isolations by the method of preparative thin layer chromatography and

purification is using thin layer chromatography system with 4 phases of motion.

Testing inflammation activities on topical by skinfold thickness method to see a

decrease in the thick skin on skin fold back induced by karagenin. The existence of

the inflammation activity can be seen from the skin fold thickness percent decrease.

Data analysis using the Shapiro-Wilk and then proceed with the analysis of one-way

ANOVA with a level of confidence of 95%. The analysis followed by a test Post Hoc

and Scheffe test. Retrieved value p<0.05 then statistically mean difference is

meaningful. The results showed Isolates the Pc-2 activity has a inflammation activity

topically as seen from the existence of a decrease in skin fold thickness seen from the

value of the AUC of 14.72 ± 0.78 mm2.hour and percent inhibition of inflammation

of 43.77 %.

Keyword : Red bettle leaves, Isolates Pc-2, Topical Antiinflamation, Neolignan,

Skinfold Thickness.


1

PENDAHULUAN

Inflamasi merupakan respon fisiologis terhadap berbagai rangsangan seperti infeksi dan

cedera pada jaringan. Inflamasi dapat terjadi secara lokal, sistemik, akut dan kronis yang dapat

menimbulkan kelainan patofisiologis. Pada proses inflamasi mediator endogen seperti

histamin, serotonin, bradikinin, prostaglandin dan sebagainya dilepaskan. Prostaglandin

merupakan substansi yang paling banyak memodulasi terjadinya respon sel dan jaringan salah

satunya inflamasi (Baratawidjaya, Karnen dan Iris, 2012).

Penggunaan obat antiinflamasi secara topikal terbukti lebih aman digunakan

berdasarkan suatu uji klinis yang dilakukan oleh Tugwell et al., 2002 yang membandingkan

penggunaan Obat Antiinflamasi Non Steroid (OAINS) yaitu diklofenak yang digunakan untuk

mengobati osteoartritis secara topikal dengan yang digunakan secara oral. Hasil penelitian

menunjukkan bahwa penggunaan secara topikal memiliki resiko efek samping lebih kecil

dikarenakan zat aktif yang dapat masuk ke sistemik lebih kecil jumlahnya dibandingkan

dengan penggunaan OAINS secara oral. Efek samping seperti pendarahan pada saluran cerna

dan dispepsia lebih kecil kemungkinan terjadi sedangkan efek samping yang dapat terjadi pada

penggunaan OAINS secara topikal dapat berupa iritasi minor pada daerah kulit yang diolesi.

Berbagai macam tanaman tradisional telah banyak digunakan untuk mengobati

inflamasi. Lebih dari 1000 spesies tanaman dengan genus Piper digunakan oleh masyarakat

sebagai obat tradisional. Sirih merah adalah salah satu spesies dengan genus Piper yang

memiliki daun keperakan merah. Di Indonesia, sirih merah digunakan sebagai tanaman obat

untuk mengobati berbagai penyakit, ekstrak metanol dilaporkan memiliki efek antiproliferatif

pada sel payudara manusia (T47D) (Wicaksono et al., 2009). Berdasarkan penelitian yang

telah dilakukan oleh Fitryani dkk, 2011, didapati bahwa ekstrak metanol daun sirih merah

memiliki aktivitas antiinflamasi yang diuji secara peroral pada tikus yang diinduksi

karagenin. Penelitian ini juga didasarkan pada penelitian efek imunnomodulator dua senyawa

neolignan hasil isolasi dari ekstrak metanol daun sirih merah (Hartini et al., 2014) dimana

komponen yang diisolasi dari senyawa neolignan ini yaitu isolat Pc-2. Isolat ini memiliki profil

imunomodulator dan menunjukkan kapasitas fagositosis makrofag. Pada penelitian ini juga

dikatakan bahwa isolat neolignan daun sirih merah yaitu isolat Pc-2 memiliki aktivitas

fagositosis makrofag yang relatif tinggi, akan tetapi tidak mempunyai produksi NO yang

berlebihan yang dikatalisis oleh enzim inducible nitric oxide synthase (INOS). Nitrit oxide

disintesis oleh banyak jenis sel yang terlibat dalam imunitas dan inflamasi. Hal ini juga

mengatur aktivitas fungsional, pertumbuhan dan kematian berbagai jenis sel kekebalan tubuh

dan peradangan termasuk makrofag, limfosit T, antigen-presentasi, sel mast, neutrofil dan sel-


2

sel pembunuh alami (Coleman, 2001). Berdasarkan penelitian-penelitian yang telah dilakukan

sebelumnya, maka peneliti tertarik untuk melakukan penelitian mengenai aktivitas

antiinflamasi dari isolat Pc-2 yang diisolasi dari ekstrak metanol daun sirih merah dan diuji

menggunakan mencit betina galur swiss yang terinduksi karagenin dengan metode pengukuran

skinfold thickness (Widyarini et al., 2001).

METODE PENELITIAN

Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah Pisau stainless steel, blender, neraca

analitik, maserator / orbital shaker, corong buchner, pompa vakum, vacuum rotary evaporator,

waterbath, ayakan, oven , mikropipet, alat-alat gelas yang lazim digunakan di laboratorium

analisis (pyrex), vortex mixer, sentrifuge, tabung sentrifuge, Kromatografi Vakum Cair (KVC),

cawan porselen, sintered glass buchner, klt, chamber Kromatografi Lapis Tipis (KLT), detektor

ultraviolet (UV) 254 nm dan 366 nm, vakum, aluminium foil, lempeng KLT Preparatif (KLT-

P), jarum, penyaring, pipa kapiler, pengaduk, oven, flakon, Gunting, alat pencukur bulu mencit,

spuit injeksi 1 ml, mortir dan stamper, neraca analitik, stopwatch, jangka sorong digital caliper

“wipro”.

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun sirih merah, metanol grade

teknis dan grade pro analisis (pa), akuades, ekstrak , fraksi, metanol 60%, silica gel 60, eter, n-

heksan, kloroform, etil asetat, metanol, fase gerak (kloroform:etil asetat (9:1), pelarut

kloroform:methanol (1:1), hewan uji berupa mencit swiss betina berumur sekitar 6-8 minggu

dengan bobot sekitar 20-30 gram, karagenin non gelling sebagai inflamatogen, NaCl 0,9%

sebagai pelarut karagenin, biocream® sebagai basis krim, veet® sebagai perontok bulu.

Spesifikasi daun sirih merah yang digunakan yaitu daun yang tidak terlalu tua dan

tidak terlalu muda, berwarna merah di bagian belakang daun dan hijau di permukaan daun.

Preparasi daun sirih merah dimulai dari pencucian, kemudian dirajang dan dikeringkan. Daun

sirih merah dibuat menjadi serbuk dan dilakukan pengayakan. Serbuk Daun sirih merah

kemudian disimpan pada suhu ruangan 25ºC.

Ekstraksi dilakukan dengan metode remaserasi dilakukan pada suhu ruangan dan

terlindung dari cahaya matahari langsung sambil sesekali dilakukan penggojogan secara

otomatis dengan menggunakan shaker, kemudian diuapkan dengan menggunakan vacuum

rotary evaporator. Lalu diuapkan kembali dengan menggunakan waterbath. Penguapan

dilakukan dengan tujuan untuk mendapatkan ekstrak kental.

Fraksinasi dilakukan dengan metode Vacuum Liquid Chromatography. Pelarut yang

digunakan berturut-turut 50 mL n-heksana, 50 mL kloroform, 50 mL kloroform, 50 mL etil


3

asetat, dan 100 mL metanol untuk mendapatkan fraksi I, II, III, IV, dan V. Hasil fraksinasi

dimonitoring dengan melihat profil KLT.

Proses isolasi dilakukan pada senyawa yang memiliki intensitas berpendar paling

besar saat dilihat menggunakan UV 254 nm dengan warna biru ungu. Senyawa Pc-2 tidak

tampak pada UV 366 nm, dan berwarna coklat pada deteksi dengan serium (IV) sulfat dan

pemanasan. Pada kromatrogram KLT dengan fase gerak kloroform : etil asetat (9:1). Fraksi dari

ekstrak metanolik daun sirih merah yang mengandung isolat Pc-2 dilarutkan dalam kloroform

: metanol (1:1) kemudian ditotolkan pada lempeng KLT-P, Hasil kerokan dikumpulkan,

dilarutkan dengan kloroform : metanol (1:1) kemudian disaring, diuapkan hingga didapat isolat.

Deteksi kebenaran dan kemurnian isolat dilakukan dengan sistem KLT 4 fase gerak.

Uji pendahuluan karagenin dilakukan terlebih dahulu dengan menggunakan 3

kelompok mencit, masing-masing kelompok terdiri dari dari 2 mencit. Kelompok 1, 2 dan 3

menggunakan konsentrasi karagenin berturut-turut yakni 1%, 2% dan 3%. Diantara 3

konsentrasi karagenin dipilih 1 konsentrasi karagenin yang paling optimal menginduksi edema.

Isolat Pc-2 yang didapat kemudian diambil dengan konsentrasi 100 µg/mL. Sebelum

diuji krim isolat Pc-2 dari ekstrak metanol dilakukan uji homogenitas (Panjaitan, Awaluddin

dan Djendakita, 2012). Isolat Pc-2 yang didapat kemudian diambil dengan konsentrasi 100

µg/mL. Sebanyak 1 mL Biocream® diambil menggunakan spuit lalu dicampur rata sehingga

didapat konsentrasi 100 µg/mL.

Hewan uji yang dibutuhkan sebanyak 25 ekor mencit betina galur swiss yang

berumur sekitar 6-8 minggu (2-3 bulan) dengan bobot sekitar 20-30 g. Kelompok perlakuan

terdiri dari 5 kelompok (kelompok kontrol negatif, kelompok kontrol Biocream®, kelompok

ekstrak metanol daun sirih merah dengan konsentrasi 100 µg/ mL, kelompok fraksi dari ekstrak

metanol daun sirih merah dengan konsentrasi 100 µg/ mL, dan kelompok konsentrasi isolat PC-

2 daun sirih merah dengan konsentrasi 100 µg/mL .

Pengujian aktivitas isolat Pc-2 dilakukan dengan menyiapkan krim ekstrak, krim

fraksi, krim isolat Pc-2 yang dioleskan pada area suntikan karagenin dengan luas area 2,25 cm2

kemudian diukur tebal lipatan kulit punggung mencit dengan jangka sorong digital setiap 1 jam

selama 6 jam untuk melihat penghambatan inflamasi.


4

Tata Cara Analisis Hasil :

1. Pengukuran tebal edema kulit punggung mencit

Analisis hasil dilakukan dengan mengukur ketebalan edema kulit punggung mencit

menggunakan jangka sorong digital.

2. Perhitungan AUC selisih tebal lipat kulit punggung mencit

Nilai selisih edema tiap jam diukur dan dihitung nilai AUC dengan rumus:

𝐴𝑈𝐶0−6 = ∑ [(𝑦𝑛−1 + 𝑦𝑛)(𝑥𝑛 − 𝑥𝑛−1)

2]

6

0

Keterangan :

AUC0-6 = area di bawah kurva dari jam ke-0 sampai jam ke-6 (cm2.jam)

yn-1 = luas area pigmentase pada jam ke-(n-1)(cm2)

yn = luas are pigmentase pada jam ke-n (cm2)

xn = jam ke-n (jam)

xn-1 = jam ke-(n-1) (jam)

(Ikawati, Supardjan, dan Asmara, 2007).

3. Menghitung presentase penghambatan inflamasi

Penghambatan inflamasi (%) = (𝐴𝑈𝐶0−6)0 − (𝐴𝑈𝐶0−6)𝑛

(𝐴𝑈𝐶0−6)0

Keterangan :

(AUC0-6)0 = AUC0-6 rata-rata kontrol negatif (mm2.jam)

(AUC0-6)n = AUC0-6 masing-masing mencit pada kelompok yang diberi

senyawa uji dengan konsentrasi sebesar n (mm2.jam).

(Ikawati, Supardjan, dan Asmara, 2007)

Data dianalisis dengan Shapiro-Wilk untuk melihat distribusi data normal atau tidak.

Apabila data terdistribusi dengan normal maka dilanjutkan dengan analisis One-Way

ANOVA dengan taraf kepercayaan 95%. Bila data tidak terdistribusi normal akan

dilanjutkan dengan analisis Kruskal-Wallis. Bila data terdistribusi normal, analisis

dilanjutkan dengan uji Post Hoc dan tes Scheffe dan uji Mann-Whitney untuk data yang

terdistribusi tidak normal (Dahlan., 2014).


5

HASIL DAN PEMBAHASAN

Berdasarkan investigasi secara fitokimia pada marga piper mengarah pada isolasi

suatu senyawa neolignan. Telah dilaporkan bahwa suatu senyawa neolignan yang diisolasi

dari daun sirih merah memlik aktivitas fagositosis makrofag dan efek imunomodulator

(Hartini et al., 2014).

Ekstraksi daun sirih merah dilakukan dengan metode remaserasi yang bertujuan agar

banyak senyawa yang tersari (Sarker, 2006). Ekstraksi dibantu dengan shaker untuk

meningkatkan kontak serbuk dengan pelarut kemudian diuapkan dengan rotary evaporator

pada suhu 60˚C untuk memisahkan pelarut dengan ekstrak. Kemudian diuapkan kembali

dengan waterbath pada suhu 60˚C untuk mendapatkan ekstrak kental. Hasil fraksinasi

dimonitoring dengan sistem KLT. Ekstrak yang digunakan berupa ekstrak kental dan

rendemen yang didapat yaitu 11,51 %. Ekstrak kental yang didapat dari proses ektraksi

kemudian ditimbang lalu dilanjutkan dengan proses fraksinasi menggunakan metode VLC.

Fraksinasi dilakukan dengan lima pelarut yang berbeda yaitu n-heksan, kloroform,

kloroform, etil asetat dan metanol. Setiap hasil dari fraksinasi kemudian di monitor

menggunakan metode KLT untuk melihat senyawa neolignan yang paling banyak. (Sarker,

2012). Dari hasil monitoring senyawa dengan KLT didapat fraksi etil asetat paling banyak

mengandung neolignan, dilihat dari intensitas senyawa yang berpendar pada UV 254 nm

lebih besar terdapat pada fraksi etil asetat ketika ditotolkan bersama dengan standar isolat

PC-2. Rendemen fraksi etil asetat yang didapat yaitu 35,39 %.

Isolasi dilakukan menggunakan metode KLT-P (Hossetman, 1986), dimana fraksi

etil asetat yang didapat dari proses fraksinasi kemudian di totolkan pada plat KLT lalu di

elusi menggunakan fase gerak kloroform : etil asetat (9:1). Uji kemurnian menggunakan 4

sistem fase gerak dilakukan untuk memastikan senyawa yang didapat benar dengan cara co-

KLT bersama standar. Nilai Rf yang didapat antara lain yaitu dengan fase gerak kloroform :

etil asetat (9:1) adalah 0,24 cm, nilai Rf fase gerak kloroform : etil asetat (1: 9) adalah 0,5

cm, nilai Rf fase gerak heksan :etil asetat (3:1) adalah 0,15 cm dan nilai Rf fase gerak heksan

: aseton (3:1) adalah 0,11 cm. Dari hasil uji kemurnian menggunakan sistem KLT 4 fase

gerak didapati bahwa isolat Pc-2 yang diisolasi murni karena ketika diisolasi bersama

dengan standar hanya terdapat 1 bercak yang berpendar berwarna ungu pada UV 254 nm

dan nilai Rf antara standar dan isolat PC-2 sama. Isolat PC-2 berpendar pada UV 254 nm

dan tidak berpendar pada UV 366 nm. Deteksi menggunakan serium IV sulfat lalu

dipanaskan menunjukkan adanya bercak berwarna coklat.


6

Gambar 1. Profil kromatogram hasil uji kemurnian dengan 4 sistem fase gerak, deteksi menggunakan

UV 254 nm dengan fase gerak (heksan : etil asetat (3 :1), kloroform : etil asetat (9:1), heksan : aseton (3:1)

dan kloroform : etil asetat (1:9). Bercak dari kiri ke kanan : isolat Pc-2 dan standar Pc-2.

Kontrol negatif

Kontrol negatif yang digunakan dalam penelitian ini yaitu karagenin sebagai

penginduksi inflamasi. Keuntungan menggunakan karagenin adalah tidak menimbulkan

bekas kerusakan, memberikan respon yang lebih peka terhadap obat antiinflamasi (Vogel,

2002). Konsentrasi karagenin yang digunakan yaitu 3 % dimana telah dilakukan uji

pendahuluan karagenin terlebih dahulu dengan konsentrasi 1%, 2% dan 3% dan dari uji

pendahuluan didapati konsentrasi 3% yang dapat memberikan edema optimal pada kulit

punggung mencit galur swiss. Dari data didapat AUC kontrol negatif paling besar yaitu

26,17 ± 1,18 mm2.jam dan data persen penghambat inflamasi kontrol negatif sebesar -0.02

± 4.50 %. Nilai negatif yang didapat dari hasil persen penghambatan inflamasi serta nilai

AUC yang besar menunjukkan bahwa karagenin dapat digunakan sebagai kontrol negatif

karena tidak memiliki aktivitas antiinflamasi.

Kontrol Biocream

Biocream digunakan sebagai kontrol karena digunakan sebagai pembawa dengan

mencampurkannya pada ekstrak, fraksi dan isolat dan tidak memiliki efek antiinflamasi.

Data AUC biocream yang didapat yaitu 29,41 ± 1,12 mm2.jam dan data persen

penghambatan inflamasi yang didapat yaitu -12.38 ± 4.27 %. Nilai AUC yang besar dan

persen penghambatan inflamasi yang negatif menunjukkan bahwa Biocream tidak memiliki

efek antiinflamasi.

Ekstrak metanol daun sirih merah konsentrasi100 µg/mL

Ekstrak dengan konsentrasi 100 µg/mL digunakan sebagai pembanding pada uji

aktivitas antiinflamasi isolat PC-2 untuk melihat aktivitas antiinflamasi yang paling besar


7

antara ekstrak, fraksi maupun isolat dengan konsentrasi yang sama. Dari penelitian data

AUC ekstrak yang didapat yaitu sebesar 15,65 ± 1,12 mm2.jam dan persen penghambatan

inflamasi yang didapat yaitu sebesar 40,19 ± 4.29 %. Penurunan tebal lipat kulit yang dilihat

dari data AUC dan persen penghambatan inflamasi menunjukkan bahwa ekstrak metanol

daun sirih merah dengan konsentrasi 100 mikrogram/mL memiliki efek antiinflamasi.

Fraksi dari ekstrak metanol daun sirih merah konsentrasi 100 µg/mL

Fraksi dengan konsentrasi 100 µg/mL digunakan juga sebagai pembanding pada uji

aktivitas antiinflamasi dan dari hasil penelitian didapat data AUC fraksi yaitu 21,76 ± 0,72

mm2.jam dan persen penghambatan antiinflamasi sebesar 16.86 ± 2.76 %. Penurunan tebal

lipat kulit dan persen penghambatan inflamasi dari fraksi menunjukkan adanya efek

antiinflamasi.

Isolat Pc-2

Kelompok isolat Pc-2 memiliki rata-rata nilai AUC 14,72 ± 0,78 mm2.jam dan persen

penghamabatan inflamasi sebesar 43,77 ± 2,99 %. Dapat dilihat bahwa isolat Pc-2 dengan

konsentrasi 100 µg/mL dapat memberikan efek antiinflamasi. Efek antiinflamasi yang paling

besar terlihat dari hasil AUC dan persen penghambatan inflamasi isolat Pc-2 dibandingkan

dengan ekstrak metanol daun sirih merah 100 µg/mL dan fraksi dari ekstrak metanol daun

sirih merah 100 µg/mL.

Tabel I. Rata-rata AUC total tiap perlakuan dan % Penghambatan Inflamasi

Kelompok Jumlah

(n)

Rata-rata AUC total

(x±SE) (mm2.jam)

Rata-Rata Persen

Penghambatan Inflamasi

(%)

Kontrol Negatif 5 26.18 ± 1.18 -0.02 ± 4.50

Kontrol Biocream 5 29.41 ± 1.12 -12.38 ± 4.27

Ekstrak Metanol daun Sirih Merah

100 µg/mL

5 15.65 ± 1.12* 40,19 ± 4.29*

Fraksi dari Ekstrak Metanol daun

Sirih Merah 100 µg/mL

5 21.76 ± 0.72 16.86 ± 2.76

Isolat Pc-2 5 14,72 ± 0,78 43,77 ± 2,99 (*)Hasil uji statistik Anova menunjukkan p>0,05 yang artinya data berbeda tidak bermakna.

Data kontrol negatif, biocream dan isolat Pc-2 dianalisis dengan Shapiro-Wilk dan

didapati data terdistribusi normal. Analisis One-Way ANOVA dilanjutkan dengan taraf

kepercayaan 95% kemudian dilanjutkan dilanjutkan dengan uji Post Hoc dan test Scheffe

Analisis dilakukan untuk mengetahui perbedaan bermakna ataupun tidak bermakna dari uji.

Isolat Pc-2 memiliki nilai p<0,05 maka secara statistik diartikan perbedaan bermakna

dibandingkan kontrol negatif dan kontrol biocream. Sedangkan data statistik isolat Pc-2

dibandingkan dengan ekstrak metanol daun sirih merah 100 µg/mL dengan fraksi dari


8

ekstrak metanol daun sirih merah 100 µg/mL menunjukkan adanya perbedaan bermakna

dengan fraksi namun berbeda tidak bermakna dengan ekstrak.

Isolat Pc-2 memiliki aktivitas antiinflamasi yang disebabkan karena neolignan

merupakan suatu senyawa turunan polifenol yang memiliki berbagai macam aktivitas

biologis salah satunya adalah antiinflamasi. Mekanisme kerja polifenol sebagai antiinflamasi

terbagi menjadi dua yakni dependent jalur asam arakhidonat dan independent jalur asam

arakhidonat. Pada jalur dependent, senyawa polifenol bekerja sebagai antiinflamasi dengan

cara menghambat proses transkripsi dari enzim siklooksigenase sehingga menghambat

aktivitas enzim siklooksigenasi yang memediasi lepasnya mediator inflamasi. Pada jalur

independent, polifenol bekerja dengan menurunkan regulasi dari ekspresi enzim INOS yang

berakibat pada penurunan produksi NO yang merupakan radikal bebas dan berperan dalam

proses inflamasi (Yoon and Baek, 2005).

Dari data statistik ANOVA didapat bahwa data isolat Pc-2 berbeda tidak bermakna

dibandingkan ekstrak metanol daun sirih merah 100 µg/mL dan berbeda bermakna degan

fraksi dari ekstrak metanol daun sirih merah 100 µg/mL. Hal ini dapat dipengaruhi oleh

banyaknya senyawa yang terkandung didalam ekstrak dapat menimbulkan efek sinergis

dimana senyawa-senyawa tersebut menyebabkan timbulnya efek antiinflamasi yang lebih

baik dibandingkan dengan yang hanya memiliki satu komponen senyawa aktif. Pada hasil

fraksi dari ekstrak metanol daun sirih merah dengan konsentrasi 100 µg/mL memiliki

aktivitas antiinflamasi paling kecil dapat disebabkan karena senyawa-senyawa didalam

fraksi yang saling berinteraksi dapat menimbulkan efek aditif sehingga menurunkan

aktivitas antiinflamasi dari senyawa lain (Deharo and Ginsburg, 2011).

Isolat Pc-2 memiliki aktivitas antiinflamasi yang lebih besar dibandingkan dengan

isolat Pc-1 yang dilihat dari besar nilai AUC isolat Pc-1 sebesar 17.15 ± 0.48 mm2.jam dan

persen penghambatan inflamasi sebesar 35.77 ± 1.80 % (Papulung, 2016).


9

Gambar 2. Struktur isolat PC-1 dan PC-2 senyawa neolignan dari ekstrak metanol daun sirih merah (Piper

crocatum Ruiz &Pav.) (Kustiawan, 2012).

Hal ini dapat disebabkan oleh adanya perbedaan struktrur dari kedua isolat yang

terletak pada perbedaan gugus yang dimiliki oleh kedua isolat, yakni isolat Pc-1 memiliki

gugus OC2H3 dan isolat Pc-2 memiliki gugus OH. Dimana gugus OH memiliki peran dalam

mekanisme dan aktivitas antioksidan. Salah satu mekanisme antioksidan adalah menekan

pembentukan Reactive Oxygen Species (ROS) melalui penghambatan enzim atau elemen

pengkelat yang berperan dalam meregenerasi radikal bebas. Adanya penghambatan dalam

pembentukan ROS ini dapat mencegah terjadinya proses inflamasi (Kumar and Pandey,

2013).

KESIMPULAN

Isolat Pc-2 memiliki aktivitas antiinflamasi dengan nilai AUC 14,72 ± 0,78

mm2.jam dan persen penghambatan inflamasi sebesar 43,77 %. Berdasarkan hasil penelitian

ini diperlukan penelitian lebih lanjut mengenai penentuan kadar isolat Pc-2, formulasi

sediaan isolat Pc-2 untuk melihat efek antiinflamasi secara topikal, peningkatan konsentrasi

isolat Pc-2 dan uji kemurnian isolat PC-2 dengan metode yang lebih sensitif.


10

Daftar Pustaka

Baratawidjaya, Karnen G., Rengganis I., 2012. Imunologi Dasar Edisi ke 10. Badan Penerbit

Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia; Jakarta. 469-475.

Borthakur, A., Bhattacharyya, S., Anbazhagan, A., N., Kumar, A., Dudeja, P. K., and

Tobacman, J. K., 2012, Prolongation of Carrageenan-induced Inflammation in Human

Colonic Epithelial Cell by Activation of an NFkB-BCL 10 Loop, Biochimica et

Biophysia Acta, 1822, 1300-1307.

Colegate, M., S., and Russel M., 2008, Bioactive Natural Product, 2nd ed., Taylor and Francis

Group, LLC., 37.

Coleman, J. 2001. ‘Nitric oxide in immunity and inflammation.’ International Immuno

Pharmacology.1: 1397-1406.

Dahlan, M. S., 2014, Statistik untuk Kedokteran dan Kesehatan, Epidemiologi Indonesia,

Jakarta, 92-135.

Deharo, E., and Ginsburg, H., 2011, Analysis of additivity and synergism in the anti-plasmodial

effect of purified compounds from plant extracts, Biomed Central Ltd., 1-5.

Evans, C. W., 2009, Trease and Evans : pharmacognosy, 16th, ed., Elsevier Risht’s

Departmenet, 260-261.

Fitriyani A. , Winarti, L., Muslichah S., dan Nuri, 2011, Uji antiinflamasi ekstrak Metanol daun

sirih merah (piper crocatum ruiz & pav ) pada tikus putih, Majalah Obat Tradisional,

16(1), 34-42.

Greenstein, B. And Adam, G., 2007, Concise Clinical Pharmacology, Pharmaceutical Press,

London, 92.

Grinberg, Nelu, 1990, Modern Thin Layer Chromatography, Marcell Dekker, Inc., New

York,.427.

Hartini, S. Y., Wahyuono, S., Widyarini, S., and Yuswanto, A., 2014, In vivo

Immunomodulatory Effect and Histopathological Features of Mouse Liver and Kidney

Treated with Neolignans Isolated from Red Betel (Piper crocatumRuiz & Pav) Leaf,

Trop J Pharm Res,; 13(10): 1610-1611.

Hartini, S. Y., 2014, Efek Imunomodulator Dua Senyawa Neolignan Hasil Isolasi dari Ekstrak

Metanol Daun Sirih Merah (Piper Crocatum Ruiz & Pav), Disertasi, Farmasi Gadjah

Mada, Yogyakarta, 72.

Houghton P.J., Amala R., 1998, Laboratory Handbook for the Fractionation of Natural

Extracts, 1 st ed, Chapman and hall, 54-55.


11

Hostettmann, K., Hostettmann, N., and Marston, A., 1986, Preparative Chromatography

Techniques, Application in Natural Product Isolation, New York, Springer-Verlag

Berlin Heidelberg, 50-60.

Ikawati, Z., Supardjan, A.M., Asmara, L.S., 2007, Pengaruh Senyawa Heksagamavunon-1

(HGV-1) Terhadap Inflamasi Akut Akibat Reaksi Anafilaksis Kutaneus Aktif Pada

Tikus Wistar Jantan Terinduksi Ovalbumin, Laporan Penelitian, Fakultas Farmasi

Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.

Kumar, S., and Pandey A. K., 2013, Chemistry and Biological Activities of Flavonoids: An

Overview, Hindawi Publishing Corporation, The Scientific World Journal, Volume

2013, 1-16.

Kuo, W. Ching-Yi,C. Tsong-long,H. Jih-Jung, C., 2013, Journal Phytochemistry, Elsevier,

153-160.

Kustiawan, P,M., 2012, Isolasi dan Identifikasi Senyawa Imunostimulan NonSpesifik In Vitro

dari Daun Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav.), Thesis, Program Pascasarjana

Fakultas Farmasi UGM, Yogyakarta.

Neal, M.J., 2005, At A Glance Farmakologi Medis, Edisi V. Penerjemah Juwalita Surapsari.

Jakarta: Penerbit Erlangga. Hal. 8-15.

Panjaitan, Ester N., Saragih, A., dan Purba D., 2012, Formulasi Gel Dari Ekstrak Rimpang Jahe

Merah (Zingiber officinale Roscoe), Journal of Pharmaceutics and Pharmacology, 2012

Vol. 1 (1): 9-20.

Papulung, A., A., Uji Aktivitas Antiinflmasi Topikal Isolat PC-1 Ekstrak Metanol Daun Sirih

Merah (Piper Crocatum Ruiz and Pav.) Pada Mencit Diinduksi Karagenin, Skripsi,

Universitas Sanata Dharma Yogyakarta, pp. 1-12.

Porth, Carol M., 2011, Essentials of Pathophysiology : Concepts of Altered Helath states, 3 rd

ed, China, Williams L. and Wilkins, 60.

Sarker, S., D., and Nahar, L., 2012, Natural Products Isolation, Natural products isolation,

Humana Press Inc 999 Riverview Drive, Suite 208 Tototwa, New Jersey, 323-329.

Sarker, S.D., Latif, Z., Gray, A. I., 2006, Methods in Biotechnology : Natural Products

Isolation, 2 nd ed, Humana Press : New Jersey, 7-8, 32.

Tugwell P.S., Wells G.A., Shainhouse J.Z., Equivalence study of a topical diclofenac solution

(pennsaid) compared with oral diclofenac in symptomatic treatment of osteoarthritis of

the knee: a randomized controlled trial. J Rheumatol. 2004;31(10):2002–2012.

Vogel, H.G., 2002, Drug Discovery and Evaluation Pharmacologycal Assays,Springer-Verley

Berlin, Deidelbarg, New York.


12

Wicaksono, B., D., Handoko, Y., A., Arung, E.,T., Kusuma, I., W., Yulia, D., Pancaputra, A.,

N., et al. Antiproliferative effect of metanol extract of Piper crocatum Ruiz & Pav

leaves on human breast (T47D) cells in vitro. Tropical Journal of Pharmaceutical

Research. 2009. 8:345-52.

Widyarini, Spinks, N., Husband, A., J., Reeve, V., E., 2001, Isoflavonoid Compounds from

Red Clover (Trifolium pratense) Protect from Inflammation and Immune Suppression

Induced by UV Radiation, Photochemistry and Photobiology, 74(3): 465–470.


13

Lampiran

Lampiran 1. Daun dan Serbuk Sirih Merah

Gambar a. Daun sirih merah yang telah dikeringkan

Lampiran 2. Ekstrak Daun Sirih Merah dan Alat yang Digunakan

Gambar a. Ekstrak sirih merah


14

Gambar b. Maserasi serbuk daun sirih merah menggunakan shaker

Gambar c. Pemekatan dengan vaccum rotary evaporator


15

Lampiran 3. Fraksinasi Ekstrak Metanol Daun Sirih Merah dan Alat yang

Digunakan

Gambar a. Fraksi-fraksi hasil fraksinasi dengan 5 sistem pelarut dari ekstrak metanol daun

sirih merah (kiri – kanan : fraksi n-heksan, fraksi kloroform, fraksi kloroform, fraksi etil

asetat, fraksi metanol).

Gambar b. Alat yang digunakan untuk fraksinasi dengan metode VLC


16

Lampiran 4. Monitoring Hasil Ekstraksi dan Fraksinasi Daun Sirih Merah

Menggunakan Sistem KLT

Gambar a. Monitoring ekstrak metanol dengan standar menggunakan uv 254 nm dengan

metode KLT pada fase gerak kloroform : etil asetat (9:1) (kiri – kanan : ekstrak 1, ekstrak

2, ekstrak 3, standar isolat Pc-1, standar isolat Pc-2).

Gambar b. Monitoring fraksi dari ekstrak metanol dengan standar menggunakan UV 254

nm dengan metode KLT pada fase gerak kloroform : etil asetat (9:1). (kiri – kanan : fraksi

1, fraksi 2, fraksi 3, fraksi 4, standar Pc-1, standar Pc-2).


17

Lampiran 5. Isolasi Senyawa PC-2

Gambar a. Isolasi senyawa Pc-2 dengan metode KLT preparatif dielusi dengan fase gerak

kloroform : etil asetat (9:1)

Gambar b. Isolasi senyawa Pc-2 menggunakan metode KLT preparatif deteksi pada UV

254 nm


18

Gambar e. Serbuk isolat Pc-2 yang didapat setelah isolasi

Gambar f. Deteksi isolat Pc-2 yang telah diisolasi dengan serium (iv) sulfat


19

Lampiran 6. Profil Kromatogram Hasil Uji Kemurnian Menggunakan 4 Sistem Fase

Gerak

(a) (b)

Gambar a. Uji kemurnian dengan heksan : aseton (3:1) dilihat menggunakan UV 254 nm,

UV 366 nm dan setelah di deteksi dan dipanaskan. Gambar a dan b (kiri -kanan) : standar

isolat Pc-2 dan sampel isolat Pc-2 yang diisolasi.

(a) (b)

Gambar b. Uji Kemurnian dengan Kloroform Etil Asetat (9:1) dilihat menggunakan UV

254 nm, UV 366 nm dan setelah di deteksi dan dipanaskan. Gambar a dan b (kiri -kanan) :

Standar Isolat Pc-2 dan Sampel Isolat Pc-2 yang Diisolasi.


20

(a) (b)

Gambar r c. Uji Kemurnian dengan Kloroform : Etil Asetat (1:9) dilihat menggunakan UV

254 nm, UV 366 nm dan setelah di deteksi dan dipanaskan. Gambar a dan b (kiri -kanan) :


(a) (b)

Gambar d. Uji Kemurnian dengan Heksan : Etil Asetat (3:1) dilihat menggunakan UV 254

nm, UV 366 nm dan setelah di deteksi dan dipanaskan. Gambar a dan b (kiri -kanan) :



21

Lampiran 7. Penyiapan Krim Isolat PC-2

Gambar a. Biocream yang digunakan diambil menggunakan spuit injeksi 10 ml

Gambar b. Biocream yang telah dicampur dengan isolat Pc-2


22

Lampiran 8. Uji Homogenitas Krim Isolat PC-2

Gambar a. Uji homogenitas isolat Pc-2 menggunakan kaca preparat.

Lampiran 9. Hewan Uji yang Digunakan

Gambar a. Mencit galur swiss yang telah dicukur bulu pada punggung

Lampiran 10. Uji Aktivitas Antiinflamasi dengan Metode Pengukuran Skinfold

Thickness

Gambar a. Penyuntikan karagenin secara subkutan


23

Gambar b. Pengukuran tebal lipat kulit

Gambar c. Pemberian krim isolat Pc-2


24

Lampiran 11. Ethical Clearance


25

Lampiran 12. Surat Determinasi Tanaman Sirih Merah


26

Lampiran 13. Surat Keterangan Kalibrasi Jangka Sorong


27

Lampiran 14. Surat Keterangan Uji Statistik


28

Lampiran 15. Data Uji Pendahuluan karagenin perhitungan AUC, Selisih Tebal

Lipat Kulit dan % PI

Uji Pendahuluan Karagenin 1%, 2%, 3%

Jam Ke - 1% 2% 3%

0 1.315 0.995 1.09

1 2.585 3.03 3.3

2 3.68 3.485 4.48

3 3.31 3.14 3.705

4 3.09 2.64 3.245

5 2.39 2.19 2.745

6 1.925 1.89 2.265

Kurva Uji pendahuluan Konsentrasi Karagenin

Data Kontrol Biocream

Kontrol Biocream

JAM KE- 1 2 3 4 5

0 1.07 0.69 0.75 0.70 0.67

1 5.43 4.04 5.38 4.30 4.81

2 6.35 5.51 6.26 5.16 5.29

3 6.56 5.76 6.44 5.84 5.87

4 5.60 4.56 5.75 5.14 5.30

5 5.20 4.01 5.26 4.92 5.12

6 4.43 3.85 4.81 4.54 4.88

0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

3.5

4

4.5

5

0 1 2 3 4 5 6 7

Ket

ebala

n K

uli

t M

en

cit

(mm

)

Jam ke-

Kons 1%

Kons 2%

Kons 3%


29

Selisih Tebal Lipat Kulit

JAM

KE- 1 2 3 4 5

Rata-

rata

0 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00

1 4.36 3.35 4.63 3.60 4.14 4.02

2 5.28 4.82 5.51 4.46 4.62 4.94

3 5.49 5.07 5.69 5.14 5.20 5.32

4 4.53 3.87 5.00 4.44 4.63 4.49

5 4.13 3.32 4.51 4.22 4.45 4.13

6 3.36 3.16 4.06 3.84 4.21 3.73

AUC

JAM

KE- 1 2 3 4 5

0 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00

1 3.25 2.37 3.07 2.50 2.74

2 5.89 4.78 5.82 4.73 5.05

3 6.46 5.64 6.35 5.50 5.58

4 6.08 5.16 6.10 5.49 5.59

5 5.40 4.29 5.51 5.03 5.21

6 4.82 3.93 5.04 4.73 5.00

AUC

total 31.89 26.15 31.87 27.98 29.17


30

Kontrol Negatif

JAM

KE 1 2 3 4 5

0 0.96 0.78 0.87 0.95 0.82

1 3.81 3.72 4.94 4.59 4.82

2 4.08 4.16 5.07 5.22 5.18

3 4.42 4.50 5.34 5.34 5.35

4 4.30 4.44 5.15 5.30 5.12

5 4.01 4.35 4.96 5.03 4.63

6 3.93 4.01 4.84 4.63 4.10


JAM KE 1 2 3 4 5 Rata-rata

0 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00

1 2.85 2.94 4.07 3.64 4.00 3.50

2 3.12 3.38 4.20 4.27 4.36 3.87

3 3.46 3.72 4.47 4.39 4.53 4.11

4 3.34 3.66 4.28 4.35 4.30 3.99

5 3.05 3.57 4.09 4.08 3.81 3.72

6 2.97 3.23 3.97 3.68 3.28 3.43

AUC

Jam/Mencit 1 2 3 4 5

0 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00

1 2.39 2.25 2.91 2.77 2.82

2 3.95 3.94 5.01 4.91 5.00

3 4.25 4.33 5.21 5.28 5.27

4 4.36 4.47 5.25 5.32 5.24

5 4.16 4.40 5.06 5.17 4.88

6 3.97 4.18 4.90 4.92 4.37

AUC

TOTAL 23.07 23.57 28.32 28.36 27.56


31

Ekstrak Metanol Daun Sirih Merah Konsentrai 100 µg/mL

Mencit/Jam 0 1 2 3 4 5 6

1 0.61 3.48 3.13 3.01 2.81 2.73 2.64

2 0.66 3.71 3.25 3.09 2.81 2.60 2.42

3 0.71 2.84 2.66 2.36 2.20 2.00 1.86

4 0.65 2.83 2.61 2.35 2.00 1.77 1.55

5 0.70 3.95 3.58 3.30 3.04 2.85 2.78


Jam/Mencit 1 2 3 4 5 Rata-Rata

0 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00

1 2.87 3.05 2.13 2.18 3.25 2.70

2 2.52 2.59 1.95 1.96 2.88 2.38

3 2.40 2.59 1.65 1.70 2.60 2.19

4 2.20 2.15 1.49 1.35 2.34 1.91

5 2.12 1.94 1.29 1.12 2.15 1.72

6 2.03 1.76 1.15 0.90 2.08 1.58

AUC

Jam/ mencit 1 2 3 4 5

0 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00

1 2.05 2.19 1.78 1.74 2.33

2 3.31 3.48 2.75 2.72 3.77

3 3.07 3.17 2.51 2.48 3.44

4 2.91 2.95 2.28 2.18 3.17

5 2.77 2.71 2.10 1.89 2.95

6 2.69 2.51 1.93 1.66 2.82

AUC 16.79 17.00 13.35 12.66 18.46


32

Fraksi dari Ekstrak Metanol Daun Sirih Merah Konsentrai 100 µg/mL

Mencit 0 1 2 3 4 5 6

1 0.91 4.26 3.95 3.74 3.42 2.92 2.50

2 0.62 4.16 4.05 3.79 3.56 3.20 3.13

3 0.88 4.84 4.62 4.35 4.10 3.90 3.81

4 0.88 4.35 4.16 3.95 3.70 3.51 3.18

5 0.84 4.63 4.35 4.05 3.84 3.48 3.07


Mencit/Jam 0 1 2 3 4 5 6

1 0.00 3.35 3.04 2.83 2.51 2.01 1.59

2 0.00 3.54 3.43 3.17 2.94 2.58 2.51

3 0.00 3.96 3.74 3.47 3.22 3.02 2.93

4 0.00 3.47 3.28 3.07 2.82 2.63 2.30

5 0.00 3.79 3.51 3.21 3.00 2.64 2.23

Rata-Rata 0.00 3.62 3.40 3.15 2.90 2.58 2.31

AUC

Jam 1 2 3 4 5

0 0.00 0 0 0 0

1 2.59 2.39 2.86 2.62 2.74

2 4.11 4.11 4.73 4.26 4.49

3 3.85 3.92 4.49 4.06 4.20

4 3.58 3.68 4.23 3.83 3.95

5 3.17 3.38 4.00 3.61 3.66

6 2.71 3.17 3.86 3.35 3.28

AUC Total 20.00 20.64 24.16 21.70 22.31


33

Isolat Pc-2

Mencit 0 1 2 3 4 5 6

1 0,87 3,75 3,48 3,29 2,88 2,32 2,03

2 0,69 3,01 2,71 2,59 2,25 1,96 1,34

3 0,87 3,55 2,61 2,38 1,95 1,7 1,35

4 0,74 3,08 2,78 2,45 2,33 1,91 1,35

5 0,82 3,56 3,19 2,95 2,57 2,30 1,99


Mencit/Jam 0 1 2 3 4 5 6

1 0 2,88 2,61 2,42 2,01 1,45 1,16

2 0 2,32 2,02 1,90 1,56 1,27 0,65

3 0 2,68 1,74 1,51 1,08 0,83 0,48

4 0 2,34 2,04 1,71 1,59 1,17 0,61

5 0 2,74 2,37 2,13 1,75 1,48 1,17

Rata-Rata 0 2,59 2,16 1,93 1,60 1,24 0,81

AUC

Jam/Mencit 1 2 3 4 5

0 0 0 0 0 0

1 2,31 1,85 2,21 1,91 2,19

2 3,62 2,86 3,08 2,93 3,38

3 3,39 2,65 2,50 2,62 3,07

4 3,09 2,42 2,17 2,39 2,76

5 2,60 2,11 1,83 2,12 2,44

6 2,18 1,65 1,53 1,63 2,15

AUC Total 17,17 13,54 13,30 13,60 15,98

Rata-Rata

AUC ± SE 14,72 ± 0,78


34

Rata – Rata Selisih Tebal Lipat Kulit

Kurva Rata-Rata Selisih Tebal Lipat Kulit Ekstrak 100 mikrogram/mL, Fraksi 100

mikrogram/mL dan Isolat PC-2

0.00

0.50

1.00

1.50

2.00

2.50

3.00

3.50

4.00

0 1 2 3 4 5 6 7

Series1 Series2 Series3

Jam ke-

Kontrol

Negatif

Kontrol

Biocrea

m

Ekstrak

100

µg/mL

Fraksi

100

µg/m

L

Isolat Pc-

2

0 0.00 0.00 0.00 0.00 0,00

1 3.50 4.02 2.70 3.62

2,59

2 3.87 4.94 2.38 3.40

2,16

3 4.11 5.32 2.19 3.15

1,93

4 3.99 4.49 1.91 2.90 1,60

5 3.72 4.13 1.72 2.58 1,24

6 3.43 3.73 1.58 2.31 0,81


35

Persen Inflamasi

Kontrol Negatif

Mencit

Auc

k.neg

Nilai

auc %PI

1 26.17 23.07 11.85

2 26.17 23.57 9.94

3 26.17 28.32 -8.22

4 26.17 28.36 -8.37

5 26.17 27.56 -5.31

Kontrol Biocream

Mencit

Auc

k.neg

Nilai

auc %PI

1 26.17 31.89 -21.86

2 26.17 26.15 0.08

3 26.17 31.87 -21.78

4 26.17 27.98 -6.92

5 26.17 29.17 -11.44

Ekstrak Metanol Daun Sirih Merah Konsentrai 100 µg/mL

Mencit Auc

k.negatif

Nilai auc %PI

1 26.17 16.79 35.84

2 26.17 17.00 35.04

3 26.17 13.35 48.99

4 26.17 12.66 51.62

5 26.17 18.46 29.46

Fraksi dari Ekstrak Metanol Daun Sirih Merah Konsentrai 100 µg/mL

Mencit AUC Kontrol Negatif

Nilai AUC

Fraksi % PI

1 26.17 20.00 23.60

2 26.17 20.64 21.14

3 26.17 24.16 7.69

4 26.17 21.70 17.09

5 26.17 22.31 14.76


36

Isolat Pc-2

Mencit

Ke-

AUC

Kontrol

Negatif

Nilai AUC

Isolat Pc-2 % PI

1 26,17 17,17 34,40

2 26,17 13,54 48,27

3 26,17 13,30 49,18

4 26,17 13,60 48,04

5 26,17 15,98 38,94

Lampiran 17. Uji Statistik

Data Statistik AUC Isolat PC-2 terhadap Kontrol Negatif dan Kontrol Biocream

Case Processing Summary

Kelompok

Cases

Valid Missing Total

N Percent N Percent N

AUC Kontrol Negatif Karagenin 5 100,0% 0 0,0% 5

Kontrol Biocream 5 100,0% 0 0,0% 5

Isolat PC-2 5 100,0% 0 0,0% 5


Kelompok

Cases

Total

Percent

AUC Kontrol Negatif Karagenin 100,0%

Kontrol Biocream 100,0%

Isolat PC-2 100,0%


37

Descriptives

Kelompok Statistic Std. Error

AUC Kontrol Negatif Karagenin Mean 26,1760 1,17730

95% Confidence Interval for

Mean

Lower Bound 22,9073

Upper Bound 29,4447

5% Trimmed Mean 26,2272

Median 27,5600

Variance 6,930

Std. Deviation 2,63251

Minimum 23,07

Maximum 28,36

Range 5,29

Interquartile Range 5,02

Skewness -,565 ,913

Kurtosis -3,140 2,000

Kontrol Biocream Mean 29,4120 1,11651


Mean

Lower Bound 26,3121

Upper Bound 32,5119


Median 29,1700

Variance 6,233


Minimum 26,15

Maximum 31,89

Range 5,74



38

Skewness -,203 ,913

Kurtosis -1,834 2,000

Isolat PC-2 Mean 14,7180 ,78273


Mean

Lower Bound 12,5448

Upper Bound 16,8912


Median 13,6000

Variance 3,063


Minimum 13,30

Maximum 17,17

Range 3,87


Skewness ,845 ,913

Kurtosis -1,844 2,000

Tests of Normality

Kelompok

Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk

Statistic Df Sig. Statistic Df

AUC Kontrol Negatif Karagenin ,300 5 ,159 ,784 5

Kontrol Biocream ,238 5 ,200* ,906 5

Isolat PC-2 ,339 5 ,062 ,815 5

Tests of Normality

Kelompok Shapiro-Wilka


39

Sig.

AUC Kontrol Negatif Karagenin ,060

Kontrol Biocream ,447

Isolat PC-2 ,108

Test of Homogeneity of Variances

AUC


40

Levene Statistic Df1 Df2 Sig.

1,177 2 12 ,342

ANOVA

AUC

Sum of Squares Df Mean Square F Sig.

Between Groups 596,118 2 298,059 55,106 ,000

Within Groups 64,906 12 5,409

Total 661,024 14

Post Hoc Tests

Multiple Comparisons

Dependent Variable: AUC

Scheffe

(I) Kelompok (J) Kelompok

Mean Difference

(I-J) Std. Error Sig.

Kontrol Negatif Karagenin Kontrol Biocream -3,23600 1,47089 ,131

Isolat PC-2 11,45800* 1,47089 ,000

Kontrol Biocream Kontrol Negatif Karagenin 3,23600 1,47089 ,131

Isolat PC-2 14,69400* 1,47089 ,000

Isolat PC-2 Kontrol Negatif Karagenin -11,45800* 1,47089 ,000

Kontrol Biocream -14,69400* 1,47089 ,000



Scheffe


41


95% Confidence Interval

Lower Bound Upper Bound

Kontrol Negatif Karagenin Kontrol Biocream -7,3362 ,8642

Isolat PC-2 7,3578 15,5582

Kontrol Biocream Kontrol Negatif Karagenin -,8642 7,3362

Isolat PC-2 10,5938 18,7942

Isolat PC-2 Kontrol Negatif Karagenin -15,5582 -7,3578

Kontrol Biocream -18,7942 -10,5938

Homogeneous Subsets

AUC

Scheffea

Kelompok N

Subset for alpha = 0.05

1 2

Isolat PC-2 5 14,7180

Kontrol Negatif Karagenin 5 26,1760

Kontrol Biocream 5 29,4120

Sig. 1,000 ,131

Data Statistik AUC Isolat PC-2 terhadap Ekstrak dan Fraksi Daun Sirih merah 100

µg/ml


Kelompok

Cases

Valid Missing Total

N Percent N Percent N


42

AUC Ekstrak Metanol PC 100

mikrogram/ml 5 100,0% 0 0,0% 5

Fraksi dari Ekstrak Metanol

PC 100 mikrogram/ml 5 100,0% 0 0,0% 5

Isolat PC 2 5 100,0% 0 0,0% 5


Kelompok

Cases

Total

Percent

AUC Ekstrak Metanol PC 100 mikrogram/ml 100,0%

Fraksi dari Ekstrak Metanol PC 100 mikrogram/ml 100,0%

Isolat PC 2 100,0%

Descriptives

Kelompok Statistic Std. Error


mikrogram/ml

Mean 15,6520 1,12357


Mean

Lower Bound 12,5325

Upper Bound 18,7715


Median 16,7900

Variance 6,312


Minimum 12,66

Maximum 18,46

Range 5,80



43

Skewness -,339 ,913

Kurtosis -2,498 2,000


PC 100 mikrogram/ml

Mean 21,7620 ,72174


Mean

Lower Bound 19,7581

Upper Bound 23,7659


Median 21,7000

Variance 2,605


Minimum 20,00

Maximum 24,16

Range 4,16


Skewness ,701 ,913

Kurtosis ,178 2,000

Isolat PC 2 Mean 14,7180 ,78273


Mean

Lower Bound 12,5448

Upper Bound 16,8912


Median 13,6000

Variance 3,063


Minimum 13,30

Maximum 17,17

Range 3,87



44

Skewness ,845 ,913

Kurtosis -1,844 2,000

Tests of Normality

Kelompok

Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk

Statistic Df Sig. Statistic Df


mikrogram/ml ,275 5 ,200

* ,888 5


PC 100 mikrogram/ml ,167 5 ,200

* ,963 5

Isolat PC 2 ,339 5 ,062 ,815 5

Tests of Normality

Kelompok

Shapiro-Wilka

Sig.

AUC Ekstrak Metanol PC 100 mikrogram/ml ,349

Fraksi dari Ekstrak Metanol PC 100 mikrogram/ml ,831

Isolat PC 2 ,108


45

Oneway

Notes

Output Created 17-NOV-2016 09:35:25

Comments

Input Data C:\Users\my asus\Documents\Data

Statistik Isolat PC-2.sav

Active Dataset Dataset1

Filter <none>

Weight <none>

Split File <none>

N of Rows in Working Data

File 15


46

Missing Value Handling Definition of Missing User-defined missing values are

treated as missing.

Cases Used Statistics for each analysis are based

on cases with no missing data for any

variable in the analysis.

Syntax ONEWAY AUC BY Kelompok

/STATISTICS HOMOGENEITY

/MISSING ANALYSIS

/POSTHOC=SCHEFFE ALPHA(0.05).

Resources Processor Time 00:00:00,02

Elapsed Time 00:00:00,96

Test of Homogeneity of Variances

AUC

Levene Statistic Df1 Df2 Sig.

1,830 2 12 ,203

ANOVA

AUC

Sum of Squares Df Mean Square F Sig.

Between Groups 146,371 2 73,185 18,327 ,000

Within Groups 47,920 12 3,993

Total 194,290 14


47

Post Hoc Tests



Scheffe


Mean Difference

(I-J) Std. Error Sig.

Ekstrak Metanol PC 100

mikrogram/ml


PC 100 mikrogram/ml -6,11000

* 1,26385 ,002

Isolat PC 2 ,93400 1,26385 ,766


PC 100 mikrogram/ml


mikrogram/ml 6,11000

* 1,26385 ,002

Isolat PC 2 7,04400* 1,26385 ,000

Isolat PC 2 Ekstrak Metanol PC 100

mikrogram/ml -,93400 1,26385 ,766


PC 100 mikrogram/ml -7,04400

* 1,26385 ,000



Scheffe


95% Confidence Interval

Lower Bound Upper Bound


mikrogram/ml

Fraksi dari Ekstrak Metanol PC

100 mikrogram/ml -9,6331 -2,5869

Isolat PC 2 -2,5891 4,4571


100 mikrogram/ml


mikrogram/ml 2,5869 9,6331

Isolat PC 2 3,5209 10,5671

Isolat PC 2 Ekstrak Metanol PC 100

mikrogram/ml -4,4571 2,5891


48


100 mikrogram/ml -10,5671 -3,5209

Homogeneous Subsets

AUC

Scheffea

Kelompok N

Subset for alpha = 0.05

1 2

Isolat PC 2 5 14,7180


mikrogram/ml 5 15,6520


PC 100 mikrogram/ml 5 21,7620

Sig. ,766 1,000


49

Biografi Penulis

Penulis skripsi yang berjudul Uji Aktivitas Antiinflamasi

Topikal Isolat Pc-2 Ekstrak Metanol Daun Sirih Merah

(Piper Crocatum Ruiz & Pav.) Pada Mencit Diinduksi

Karagenin merupakan anak kedua dari dua bersaudara

pasangan Dominikus Saka Kerans dan Maria Lenny Sogen

yang lahir di Kupang pada tanggal 15 Agusutus 1995

dengan nama lengkap Eugenia Clarisa Giastini Kerans.

Pendidikan formal yang telah ditempuh yaitu TK St. Maria

Goretti Kupan (1999-2001), SDK Don Bosco 1 Kupang

(2001-2007), SMPK St.Theresia Kupang (2007-2010),

SMAK Giovanni Kupang (2010-2013). Penulis kemudian

melanjutkan kuliah di Universitas Sanata Dharma (USD) Yogyakarta, Fakultas Farmasi

pada tahun 2013. Semasa berkuliah penulis cukup aktif di kegiatan kampus seperti

mengikuti kepanitiaan Donor Darah Jalinan Mahasiswa Kesehatan Indonesia (JMKI) pada

tahun 2014 menjadi seksi Dana dan Usaha (DDU), kepanitian Seminar Nasional

Interprofessional Health Care pada tahun 2014 menjadi seksi DDU, kepanitiaan Pelepasan

Wisuda pada tahun 2015 menjadi koordinator seksi DDU, mengikuti Unit Kegiatan

Fakultas (UKF) paduan suara fakultas Veronika periode 2014/2015, Tim Media Farmasi

pada tahun 2015 dan menjadi pengajar pada program USD Mengajar tahun 2016 melalui

tim GEMPITA (Generasi Muda Pintar dan Terampil). Salah satu prestasi yang pernah

diraih penulis ditingkat nasional yaitu Program Kreatifitas Mahasiswa bidang pengabdian

masyarakat dengan judul Gelitik Asmara (Gerakan Lingkungan Tanpa Jentik Sebagai

Upaya Pengatasan dan Pencegahan Demam Berdarah Bagi Anak Panti Asuhan Atap

Langit Yogyakarta) pada tahun 2016. Penulis juga pernah menjadi asisten dosen pada mata

kuliah praktikum farmakologi toksikologi pada tahun ajaran 2016 dan matakuliah

praktikum farmakognosi fitokimia pada tahun ajaran 2016.


UJI AKTIVITAS ANTIINFLAMASI TOPIKAL ISOLAT PC-2 … · Gambar 11. Isolasi senyawa Pc-2 dengan...

Documents

Transcript of UJI AKTIVITAS ANTIINFLAMASI TOPIKAL ISOLAT PC-2 … · Gambar 11. Isolasi senyawa Pc-2 dengan...