UJI AKTIVITAS ANTIFUNGI FRAKSI ETANOL

HASIL REFLUKS DAUN SIRIH HIJAU (Piper betle L.)

DARI BEBERAPA DAERAH ZONA IKLIM PANAS (0-

700 MDPL) DI BALI TERHADAP FUNGI Candida

albicans ATCC 10231 MENGGUNAKAN METODE

DIFUSI DISK

Skripsi

NI PUTU CAHYANI PRATIWI A.

1208505090

JURUSAN FARMASI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS UDAYANA

2016

KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan kehadapan Tuhan Yang Maha Esa, Ida Sang

Hyang Widhi Wasa, karena berkat rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan

skripsi yang berjudul “Uji Aktifitas Antifungi Fraksi Etanol Hasil Refluks

Daun Sirih Hijau (Piper betle L.) dari Berbagai Daerah Penghasil Daun Sirih

Hijau di Bali terhadap Fungi Candida albicans ATCC 10231 dengan

Menggunakan Metode Difusi Disk”. Skripsi ini diajukan sebagai syarat untuk

memperoleh gelar sarjana farmasi (S.Farm) di Jurusan Farmasi Fakultas

Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.

Penulisan skripsi ini tentunya tidak terlepas dari dukungan dan bantuan

dari berbagai pihak, baik secara langsung maupun tidak langsung. Oleh karena itu

penulis ingin menyampaikan rasa terima kasih yang sebesar-besarnya kepada:

1. Tuhan Yang Maha Esa atas segala kekuatan yang diberikan sehingga

penulis dapat menyelesaikan penulisan skripsi ini.

2. Drs. Ida Bagus Made Suaskara, M.Si selaku Dekan Fakultas Matematika

dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.

3. Dr. rer. nat. I Made Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt., selaku Ketua Jurusan

Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas

Udayana.

4. Ni Luh Putu Vidya Paramita, S.Farm., M.Sc., Apt., selaku dosen

pembimbing I yang telah membantu dan membimbing dalam penyusunan

skripsi ini.

5. A.A. Gede Rai Yadnya Putra, S.Farm., M.Si., Apt., selaku dosen

pembimbing II yang juga telah membantu dan membimbing dalam

penyusunan skripsi.

6. Kedua orang tua penulis, I Made Ardana dan Ni Made Darmayanti, yang

telah membantu proses pencarian sampel dan tak pernah henti memberikan

dukungan, doa, dan semangat.

7. Tim Penelitian P. betle yaitu Dewi, Utik, Dein, Suastini, Pebri, Budi,

Sulys yang telah menjadi teman diskusi dan berbagi suka-duka dalam

menyusun skripsi ini.

8. Teman Giri Kencana yaitu Eling, Gek In, Dwi, Coktik, dan Nila yang telah

menjadi teman suka-duka sejak awal kuliah dan tak pernah henti memberi

support dan doa.

9. Teman terdekat penulis, I Wayan Yoga Sumantara yang telah memberikan

dukungan, doa, dan semangat dalam penyusunan skripsi ini.

10. Semua pihak yang tidak bisa penulis sebutkan satu per satu.

Penulis menyadari sepenuhnya bahwa skripsi ini masih sangat jauh dari

sempurna. Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran yang bersifat

membangun dari semua pihak demi karya yang lebih baik di masa yang akan

datang.

Denpasar, Mei 2016

Penulis

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL ..................................................................................... i

LEMBAR PENGESAHAN ...........................................................................ii

KATA PENGANTAR.................................................................................. iii

DAFTAR ISI.................................................................................................iv

DAFTAR ISTILAH.......................................................................................ix

DAFTAR SINGKATAN ...............................................................................x

DAFTAR TABEL ........................................................................................xi

DAFTAR GAMBAR ...................................................................................xii

ABSTRAK .................................................................................................xiii

BAB I. PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang ........................................................................1

1.2 Rumusan Masalah ...................................................................4

1.3 Tujuan Penelitian.....................................................................5

1.4 Manfaat Penelitian...................................................................5

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Tinjauan Umum tentang Daun Sirih Hijau .............................6

2.1.1 Klasifikasi.........................................................................6

2.1.2 Deskripsi ..........................................................................7

2.1.3 Kandungan kimia .............................................................7

2.2 Karakteristik Fungi Candida albicans ....................................8

2.2.1 Klasifikasi ........................................................................8

2.2.2 Morfologi..........................................................................9

2.2.3 Media pertumbuhan .......................................................10

2.2.3.1 Media sabaroud dextrose agar (SDA) ..............10

2.2.3.2 Media sabaroud dextrose broth (SDB) .............11

2.3 Candidiasis ............................................................................11

2.4 Terapi Candidiasis.................................................................13

2.5 Aktivitas Daun Sirih Hijau sebagai Antifungi ......................15

2.6 Metode Ekstraksi dengan Refluks .........................................16

2.7 Metode Uji Aktivitas Antifungi dengan Difusi disk .............17

BAB III. METODE PENULISAN

3.1 Rancangan Penelitian ............................................................20

3.2 Lokasi Penelitian ...................................................................20

3.3 Obyek Penelitian ...................................................................21

3.3.1 Daerah penghasil sirih hijau di Bali ..............................21

3.3.2 Jamur C. albicans ATCC 10231 ...................................21

3.4 Bahan Penelitian ....................................................................21

3.4.1 Bahan fraksinasi ............................................................21

3.4.2 Bahan skrining fitokimia ...............................................21

3.4.3 Bahan uji antifungi ........................................................22

3.5 Alat Penelitian .......................................................................22

3.6 Variabel Penelitian ................................................................22

3.6.1 Variabel bebas ...............................................................22

3.6.2 Variabel terikat ..............................................................23

3.6.3 Variabel terkendali ........................................................23

3.7 Batasan Operasional Penilitian .............................................23

3.8 Prosedur Penilitian ................................................................24

3.8.1 Determinasi tanaman .....................................................24

3.8.2 Pengambilan dan preparasi sampel ...............................24

3.8.3 Penetapan susut pengeringan serbuk simplisia ............. 24

3.8.4 Pembuatan fraksi etanol daun sirih hijau ...................... 25

3.8.5 Penetapan susut pengeringan fraksi etanol ....................25

3.8.6 Skrining fitokimia fraksi etanol daun sirih hijau ...........26

a. Pembuatan larutan uji skrining fitokimia ................. 26

b. Pemeriksaan alkaloid ................................................26

c. Pemeriksaan flavonoid...............................................26

d. Pemeriksaan saponin..................................................27

e. Pemeriksaan tanin dan polifenol ...............................27

f. Pemeriksaan glikosida............................................... 27

g. Pemeriksaan steroid dan triterpenoid ........................28

3.8.7 Pembuatan kontrol positif flukonazol ...........................28

3.8.8 Peremajaan C. albicans .................................................28

3.8.9 Pembuatan suspensi C. albicans ....................................28

3.8.10 Pemilihan konsentrasi terbaik ..................................... 29

3.8.11 Uji aktivitas antifungi difusi disk ................................29

3.9 Analisis Data .........................................................................30

3.10 Skema Kerja ........................................................................32

BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Determinasi Tanaman ...........................................................33

4.2 Pengambilan dan Preparasi Sampel ......................................34

4.3 Susut Pengeringan Serbuk Simplisa dan Ekstrak ..................35

4.4 Pembuatan Fraksi Etanol Daun Sirih Hijau ..........................37

4.5 Skrining Fitokimia ................................................................39

4.6 Pemilihan Konsentrasi Terbaik .............................................41

4.7 Uji Aktivitas Antifungi .........................................................42

BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan ...........................................................................49

5.2 Saran ......................................................................................49

DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................50

LAMPIRAN.................................................................................................58

DAFTAR ISTILAH

Patogenesis : Mekanisme penyebab penyakit

Resistent : Katagori dimana isolat/mikroba tidak dapat dihambat oleh

konsentrasi yang telah ditentukan.

Intermediate : Katagori dimana isolat/mikroba dapat dihambat dengan

konsentrasi tertentu secara minimal.

Suspectible : Katagori dimana isolat/mikroba dapat dihambat dengan

konsentrasi tertentu secara maksimal.

Hifa : Elemen terkecil jamur yang berbentuk benang-benang

filamen dan merupakan bentuk vegetatif/fase pertumbuhan

jamur

Miselium : Kumpulan hifa yang membentuk jalinan

Blastospora : Spora aseksual pada sel ragi yang berbentuk tunas/kuncup

Pseudomiselium : Sel-sel tunas khamir yang memanjang dan tidak melepaskan

diri dari sel sel induknya

Blastokonidia : Pembentukan konidia melalui proses pertunasan

Klamidokonidia : Spora aseksual bersel satu dan berdinding tebal biasanya

bulat yang dihasilkan dari ujung sel-sel hifa

Oportunistik : Kesempatan yang dimiliki oleh organisme yang biasanya

tidak menyebabkan penyakit pada orang dengan sistem

kekebalan tubuh yang normal, tetapi dapat menyerang

orang dengan sistem kekebalan tubuh yang buruk.

Pradifusi : Tahapan awal sebelum proses difusi

DAFTAR SINGKATAN

AIDS : Acquired Immuno Deficiency Syndrome

HIV : Human Immunodeficiency Virus

ATCC : American Type Culture Collection

SSP : Sistem Saraf Pusat

SDA : Sabaroud Dextrose Agar

SDB : Sabaroud Dextrose Broth

CFU : Colony Forming Unit

MIC : Minimum Inhibitory Concentration

LSD : Least Significant Differences

ABSTRAK

Candida albicans adalah jamur yang paling sering menyebabkan infeksioportunistik pada manusia. Kandungan kimia yang terdapat pada daun sirih hijau(Piper betle L.) dipengaruhi oleh tempat tumbuh dan iklim. Tujuan dari penelitianini untuk mengetahui aktivitas antifungi dari fraksi etanol hasil refluks daun sirihhijau dari beberapa daerah dengan zona iklim panas (0-700 MDPL) di Bali danuntuk mengetahui apakah terdapat perbedaan kandungan kimia pada setiap fraksitersebut.

Uji aktivitas antifungi dilakukan dengan metode difusi disk. Sampel yangdigunakan adalah delapan fraksi etanol hasil refluks daun sirih hijau (P. betle L.)dari beberapa daerah dengan zona iklim panas (0-700 MDPL) di Bali dengankonsentrasi 200 mg/mL dan kontrol positif flukonazol. Uji pendahuluan untukmengetahui perbedaan kandungan kimia dilakukan dengan uji skrining fitokimia.Analisis data dilakukan analisis deskriptif dengan mengklasifikasikan diameter zonahambat berdasarkan CLSI dan analisis ANOVA-One Way taraf kepercayaan 95%serta uji LSD.

Berdasarkan hasil penelitian menunjukkan terdapat tiga daerah yang memilikiaktivitas yang berbeda signifikan (P<0,05) dan lima daerah lainnya tidakmenghasilkan aktivitas yang berbeda signifikan (P>0,05). Delapan fraksi etanoldari beberapa daerah tersebut menghasilkan diameter zona daya hambat denganukuran yang beragam namun menurut CLSI seluruh diameter zona hambattersebut termasuk dalam kategori intermediate. Berdasarkan hasil skriningfitokimia kandungan kimia yang terdapat pada delapan fraksi etanol dari beberapadaerah adalah flavonoid, tanin dan polifenol, glikosida, dan steroid. Sehingga,tempat tumbuh daun sirih hijau yang berbeda secara kualitatif tidakmempengaruhi keberadaan kandungan kimianya namun diduga kadarnya yangberbeda-beda menyebabkan aktivitas antifungi yang dihasilkan juga berbeda-beda.

Kata kunci : Candida albicans, Piper betle (L.), Antifungi, Refluks, Fraksi Etanol,Difusi Disk

ABSTRACT

Candida albicans is a fungus that most often cause opportunistic infections inhumans. The chemical constituents present in Piper betle L. leaves of the familyPiperaceae strongly influenced by the growing and climate. The purpose of thisstudy to know the antifungal activity of ethanol fraction results reflux P. betle L.leaves from some areas with a high climate zones (0-700 masl) in of Bali and tofind out if there are diferences in the chemical constituents of each fraction.

Antifungal activity test performed by disk diffusion method. The samples areeight ethanol fraction results of reflux from P. betle L. leaves collected from someareas with a high climate zones (0-700 masl) in Bali with a concentration of 200mg/mL and positive control used fluconazole 1024 µg/mL. A preliminary test totell the difference of the chemical content of a test screening was donewith phytochemicals. Data analysis was conducted by classifying the descriptiveanalysis of inhibition zone diameter by CLSI and One Way ANOVA analysis -level of 95 % as well as LSD.

Based on the research results indicate that there are three areas that havedifferent activity significantly (P < 0.05) and five other areas does not producesignificantly different (P > 0.05). According to the Clinical and LaboratoryStandards Institute eight ethanol fraction from some of the areas produce theinhibitor of diameter zone in the intermediate category. Based on the results ofphytochemical screening, chemical content contained in eight fractions of ethanolfrom some areas are flavonoids, tannins and polyphenols, glycosides, and steroids.

Thus, a betel leaf green grow qualitatively different does not affect the existenceof its chemical content but suspected the levels of different causes antifungalactivity generated also varies.

Keyword : Green betel leaf, Piper betle L., ethanol fraction, reflux, Candidaalbicans, Difusi disk