Triger Elektroforesis

28

description

trigger elektroforesis materi kuliah fakultas kedokteran

Transcript of Triger Elektroforesis

  • Suatu proses yang digunakan untuk memisahkan makro molekul (protein dan asam inti )yang berbeda ukuran dan bentuk

  • 2. DNA , RNA , PROTEINDNA : asam nukleat yang mengandung materi genetik dan berfungsi untuk mengatur perkembangan biologis seluruh bentuk kehidupan secara seluler.Asam Ribonukleat : senyawa yang nerupakan bahan genetik dan memainkan peran utama dalam ekspresi genetik.Protein : senyawa organik kompleks berbobot molekul tinggi yang merupakan polimer dari monome-monomer asam amino yang dihubungkan satu sama lain dengan ikatan peptida

  • 3. AMFOTER , ISOELECTRIC POINT , DENATURASIAmfoter : suatu zat yang dapt bersifat asam dan juga dapat bersifat sebagai basa ex : AIR . Air adalah zat amfoter yang khas. Reaksi antara dua molekul air menghasilkan ion hidronim dan ion hidroksida Isoelectric point : pH tertentu dimana molekul atau permukaan tidak membawa jaring muatan listrik (positif atau negatif)

  • Denaturasi : kerusakan enzim karena panas kenaikan suhu , pH ekstrim dan juga logam-logam berat.

  • 4. Macam-Macam ElektroforesisElektroforesis dengan Kertas Saringmemisahkan komponen molekular DNA/RNA hidrolisis

    Elektroforesis Gel Kanjimemisahkan protein-protein serum manusia

  • Polyacrilamide Gel Electrophoresis (PAGE)memisahkan campuran DNA/RNA atau protein dengan ukuran lebih besar

    Pulse-Field Gel Electrophoresis (PFGE)memisahkan campuran DNA berukuran super besar misalnya DNA kromosom

  • Elekroforesis WilayahAda berbagai factor yang mempengaruhi laju perpindahan elektroforesis wilayah. Factor-faktor yang mempengaruhi pergerakan ion adalah mobilitas ion, tipe resolusinya, macam larutan buffernya, pH yang digunakan, kuat ion zat terlarut, temperature, ada atau tidaknya fenomena elektrolisis atau elektroosmosis.

  • Elektroforesis Tirai (Elektroforesis Kontinyu)Elektroforesis kontinyu yaitu suatu elektroforesis yang dilakukan secara kontinyu. Suatu tirai dari kertas saring digunakan yang mana terendam dalam larutan buffer.. Kedua ujung kertas saring dalam bentuk alur tercelup dalam dua ruang elektroda. Dengan pemberian tegangan, partikel zat terlarut mulai bergerak dan komponen terpisahkan dalam berbagai permukaan

  • 5. KOMPONEN PENTINGBak/Chamberwadah buffer dan penopang gel agaroseGel Agaroseuntuk memisahkan protein atau asam nukleatSampelAgarose PlatePower SupplyLarutan BufferZat Warnamengikuti pergerakan fragmen DNA

  • 6. Peranan Penting Elektroforesis dalam Dunia Kedokteranmenentukan komposisi protein suatu produk makananspektrometri massa, PCR, kloning, sekuensing DNA, atau immuno-blottingkemurnian proteinmenganalisis protein plasma dalam darah

  • 7. Faktor-Faktor yang Mempengaruhi ElektroforesisFaktor yang paling penting adalah panjang molekul DNA, lebih kecil molekul perjalanan lebih jauh. Tapi konformasi molekul DNA jugafaktor. Untuk menghindari masalah ini molekul linear biasanya dipisahkan, biasanya DNA fragmen dari pembatasan mencerna, PCR DNA linearproduk, atau RNA.

  • Meningkatkan konsentrasi agarosa gel mengurangi migrasikecepatan dan memungkinkan pemisahan molekul DNA yang lebih kecil. Semakin tinggitegangan, semakin cepat bermigrasi DNA. Tapi tegangan dibatasi olehfakta bahwa memanaskan dan akhirnya menyebabkan gel mencair.

  • Konformasi dari plasmid DNA yang belum dipotong dengan enzim restriksi akan bergerak dengan kecepatan yang berbeda (paling lambat untuk tercepat): dicuri atau membuka bundar, linearised, atau supercoiled plasmid.

  • Voltagevoltage berperan sebagai pemanas, semakin tinggi voltage maka semakin cepat pergerakan & semakin panas, ini menyebabkan gel agarosa cairBufferutk menstabilkan ph, berpengaruh pada pergerakan krn memberi muatan pd senyawa (smkn bsr muatan, smkn cpt)

  • Lingkungan denaturasikeadaan denaturasi, terutama pada protein. Jika tdk di denaturasi, mk pergerakan gel smkn lambat. Denaturasi ds DNA dilakukan dg Urea, jika ss mk pergerakan gel smkn cpt

  • Perbedaan potongan fragmenjika bentuknya atau potongan fragmen semakin besar, mk pergerakan gel juga semakin lambat

  • 8. Perbedaan antara Agarose gel dengan PolyacrylamideAgarose gel

    PolyacrylamidePori2 lbh bsrTrbuat dr acrylamyde yg di polymerase dl agr tid brbahaya krn mngandung neurotoxic

  • 9. Serum Protein Elektroforesis Protein Serum terdiri dari berbagai ragam partikel yang berbeda kecepatan pada medan listrik sehingga akan terpisah dan sebagai hasilnya akan terbentuk beberapa pita atau daerah

  • 10. Elektroforesis Asam NukleatDNA atau Deoxyribo Nucleic Acid merupakan asam nukleat yang menyimpan semua informasi tentang genetika. DNA inilah yang menentukan jenis rambut, warna kulit dan sifat-sifat khusus dari manusia.

  • 11. Southern Blot , Northern Blot dan Weatern BlotSouthern bLotSouthern blot pertama kali dikemukakan oleh Southern (1975). Teknik ini mentransfer DNA ke kertas NC dengan menggunakan prosedur aliran pelarut. Caranya yaitu dengan menempatkan gel elektroforesis ke kertas matriks yang direndam buffer dan berada di atas sesuatu seperti spons yang telah dibasahi dengan buffer. Membran tersebut diletakkan di atas gel dan ditumpuk pula beberapa kertas peresap di atasnya. Buffer kemudian akan mengalir pelan-pelan ke membran, demikian pula dengan gel yang membawa molekul ke kertas membran, sementara gelnya diserap oleh kertas peresap.

  • Fragmen DNA yang spesifik dideteksi dengan menggunakan pelacak. Pelacak biasanya merupakan DNA yang dimurnikan dan bisa ditandai dengan aktifitas spesifik radionukletida. Lokasi sinyal yang terlihat setelah autradiografi membuat kita dapat menentukan ukuran dari fragmen DNA tersebut.

  • Northern BlotTekniknya sama dengan Southern Blot, namun menggunakan kertas DBM dan biasanya mendeteksi RNA.

  • Western BlotTeknik ini pertama kali dibuat oleh W. Neal Burnette dan dinamai western blot sebagai olok-olokan terhadap tekini southern blot yang pertama kali ditemukan.Western blot merupakan teknik untuk mendeteksi protein spesifik pada sampel jaringan yang homogenat ataupun dari suatu ekstraksi berdasarkan kemampuan protein tersebut berikatan dengan antibodi. Teknik ini menggunakan gel elektroforesis untuk memisahkan protein berdasarkan panjang polipeptida atau berdasarkan struktur 3D-nya. Protein tersebut kemudian ditransfer ke sebuah membran, biasanya nitroselulosa atau PVDF, dimana mereka kemudian akan dilacak dengan menggunakan antibodi yang spesifik kepada protein target.

  • Western blot dapat mendeteksi suatu protein dalam kombinasinya dengan sangat banyak protein lain, dapat memberikan informasi mengenai ukuran dan ekspresi protein tersebut.

  • Perbedaan dari Southern Blot, Northern Blot dan Western Blot terletak pada fungsi. Fungsi Southern blot untuk mendeteksi DNA, Northern Blot untuk mendeteksi RNA dan Western Blot untuk mendeteksi proteinProbe atau pelacak, western blot pakai antibodi, Southern Blot dan Northern Blot pakai cDNA

  • 12. Orang Tua Bayi XBayi X merupakan anak dari pasangan H1 dan B1 Karena fragmen DNA bayi X memilki kesamaan dengan fragmen Pasangan H1 dan B1 pada :fragmen ukuran 2 sama dengan B1Fragmen ukuran 6 sama dengan H1Fragmen ukuran 8 sama dengan B1

  • Orang Tua Bayi YBayi Y merupakan anak dari pasangan H2 dan B2Karena fragmen Dna bayi Y menyerupai fragmen Dna pasangan H2 dan B2Fragmen 7 sama dengan H2Fragmen 5 sama dengan B2Fragmen 3 sama dengan B2