5/24/2018 Kelompok 4 - Elektroforesis

1/22

ELEKTROFORESIS

Disusun Oleh:

Kelompok IVBertha Dwi Julinta Lase NIM 121524024

Ainul Mardiah NIM 121524022

Fhizri Ayuningtyas NIM 121524031

Fauzi NIM 121524033Tarry Hayati Tamimi NIM 121524040

6/18/2014 1

5/24/2018 Kelompok 4 - Elektroforesis

2/22

6/18/2014 2

Pengertian dan Jenis

a. Pengertian

Elektroforesis adalah suatu teknik

pemisahan/analisis kualitatif suatu zat

dengan bantuan arus listrik.

Prinsip pemisahan dalam elektroforesis

didasarkan atas perbedaan migrasi komponen

pada fasa pendukung, karena adanya perbedaanmuatan dan massa molekul.

5/24/2018 Kelompok 4 - Elektroforesis

3/22

6/18/2014 3

Pengertian dan Jenis

Teknik Elektroforesis

Dibedakan atas Teknik

Konvensional Kapiler

Dibedakan atas Teknik

Frontal (moving boundary):tak berpendukung

Zonal :berpendukung

b. Jenis-jenis Teknik Elektroforesis

5/24/2018 Kelompok 4 - Elektroforesis

4/22

6/18/2014 4

Pengertian dan Jenis

T.E.F. konvensional :

Ukuran alat /jumlah cuplikan/fasa pembawacukup besar

Menggunakan arus listrik dengan tegangan

tidak terlalu besar ( beberapa puluh voltsaja)

Proses lama (lebih dari 0,5 jam)

Teknik Elektroforesis Konvensional dibagi menjadi 2yaitu:1. elektroforesis larutan (moving boundary electrophoresis)

2. elektroforesis daerah (zone electrophoresis).

5/24/2018 Kelompok 4 - Elektroforesis

5/22

1. Elektroforesis larutan (moving boundary electrophoresis)

Pada teknik elektroforesis larutan, larutan penyangga yang

mengandung makro-molekul ditempatkan dalam suatu kamartertutup dan dialiri arus listrik. Kecepatan migrasi dari makro-

molekul diukur dengan jalan melihat terjadinya pemisahan

dari molekul (terlihat seperti pita) di dalam pelarut.

2. Elektroforesis daerah (zone electrophoresis) adalah

menggunakan suatu bahan padat yang berfungsi

sebagai media penunjang yang berisi (diberi) larutanpenyangga.

6/18/2014 5

5/24/2018 Kelompok 4 - Elektroforesis

6/22

6/18/2014 6

Pengertian dan Jenis

T.E.F. kapiler :

Ukuran alat /jumlah cuplikan/fasa pembawa

sangat sedikit/kecil

Proses cepat (kurang dari 0,5 jam)

Pendukung:pipa kapiler terbuat dari gelas dengan

panjang bermeter-meter.

Elektrolit: larutan bufer

Memerlukan larutan elektrolit dan komponen cuplikan

sedikit (mikro).

5/24/2018 Kelompok 4 - Elektroforesis

7/22

6/18/2014 7

Kegunaan/Manfaat

Kegunaan / manfaat

Pemisahan dan analisis senyawa bermuatan

Pemisahan dan analisis makromolekul sepertiprotein, polisakarida, as. Nukleat

Pemisahan dan analisis campuran senyawa

bermuatan dan tak bermuatan ( untuk E.F.kapiler)

5/24/2018 Kelompok 4 - Elektroforesis

8/22

6/18/2014 8

Peralatan dan cara Kerja

Gambar Alat Elektroforesis

Senyawa tidak berwarna dapat

dilihat dengan paparan sinar UV

5/24/2018 Kelompok 4 - Elektroforesis

9/22

6/18/2014 9

Peralatan dan cara Kerja

Komponen utama alat

1. Larutan elektrolit

2. Zat pendukung

3. Elektroda

Adalah larutan pembawa komponen

umumnya bufer dengan pH tertentu.

tempat pemisahan terjadi, biasanya berupa

kertas (selulosa asetat, selulosa nitrat), gel

kanji, gel poliakrilamid, busa poliuretan,

agar-agar.

katoda dan anoda yang dihubungkan

Dengan arus listrik.

5/24/2018 Kelompok 4 - Elektroforesis

10/22

6/18/2014 10

Peralatan dan cara Kerja

Cara Kerja

1. Wadah dijenuhkan dengan larutan elektrolit

2. Cuplikan ditotolkan pada fasa pendukung

3. Pendukung dengan tootolan cuplikan dijenuhkan

dengan uap elektrolit.

4. Ujung-ujung pendukung dicelupkan ke dalam

elektrolit

5. Kedua elektroda dihubungkan

6. Pemisahan dimulai

7. Hasil pemisahan dihubungkan dengan detektor

untuk keperluan analisis kualitatif dan kuantitatif

5/24/2018 Kelompok 4 - Elektroforesis

11/22

6/18/2014 11

Pemisahan dengan Teknik Elektroforesis

Proses Pemisahan

Untuk Melihat Animasi Klik di sini!

5/24/2018 Kelompok 4 - Elektroforesis

12/22

6/18/2014 12

Pemisahan dengan Teknik Elektroforesis

Pada fasa

pendukung

Setelah

Melalui

detektor

5/24/2018 Kelompok 4 - Elektroforesis

13/22

6/18/2014 13

Pemisahan dengan Teknik Elektroforesis

Perhatikan migrasi komponen berikut ini pada waktu yang sama

Untuk Animasi Klik Di sini!

5/24/2018 Kelompok 4 - Elektroforesis

14/22

6/18/2014 14

Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

Faktor yang mempengaruhi pemisahan

dengan Elektroforesis Daerah

1. Kemobilan ion/partikel ():

2. Derajat onisasi

3. Pembentukan Kompleks Bermuatan

4. Konsentrasi larutan elektrolit

5/24/2018 Kelompok 4 - Elektroforesis

15/22

6/18/2014 15

Kelebihan/Kelemahan Teknik Elektroforesis

Kelebihan Teknik Elektroforesis

Mudah untuk molekul besar dan bermuatan.

Dapat digabungkan dengan kromatografi

(Lempeng tipis).

Lebih cepat dari kromatografi biasa.

Alat dan teknik sederhana.

5/24/2018 Kelompok 4 - Elektroforesis

16/22

6/18/2014 16

Kelebihan/Kelemahan Teknik Elektroforesis

Kelemahan Teknik Elektroforesis

Sulit untuk analisis kuantitatif, kecuali denganEF tidak berpendukung.

Kelemahan teknik ZEF dapat diatasi dengan

elektroforesis kapiler

Sukar mendeteksi konsentrasi rendah.

Sukar untuk senyawa tidak bermuatan.

5/24/2018 Kelompok 4 - Elektroforesis

17/22

6/18/2014 17

Teknik Elektroforesis Kapiler

Teknik Elektroforesis Kapiler

Karakteristik

Elektrolit: larutan bufer

Tegangan 10.00030.000 V.

Mekanisme berbeda dari EF konvensional.

5/24/2018 Kelompok 4 - Elektroforesis

18/22

6/18/2014 18

Teknik Elektroforesis Kapiler

5/24/2018 Kelompok 4 - Elektroforesis

19/22

6/18/2014 19

Teknik Elektroforesis Kapiler

5/24/2018 Kelompok 4 - Elektroforesis

20/22

6/18/2014 20

Beberapa Diagnostik Kesehatan YangMenggunakan Elektroforesis

1. Pemeriksaan Protein

Pemeriksaan protein elektroforesis merupakan pengukuran protein

dalam darah dengan menggunakan metode elektroforesis, yaitu

memisahkan protein berdasarkan sifat fisik protein itu sendiri (albumin,

alpha1-globulin, alpha2-globulin, beta-globulin, dan gamma-globulin)

Manfaat Pemeriksaan : Skrining, diagnosis dan evaluasi beberapapenyakit atau kondisi seperti hepatitis (autoimun), sirosis, inflamasi kronik,

abnormalitas alpha1-antitrypsin.

Persyaratan & Jenis Sampel : Serum 0.3 MlNilai Rujukan :Protein Elektroforesis(A/G rasio) : 1.39 - 2.23%,

Protein Elektroforesis(albumin) : 60.3 - 71.4% (4.6 - 5.4 g/dL),

Protein Elektroforesis(alfa-1) : 1.4 - 2.9% (0.1 - 0.2 g/dL),

Protein Elektroforesis(alfa-2) : 7.2 - 11.3% (0.5 - 0.85 g/dL),

Protein Elektroforesis(Beta) : 8.1 - 12.7% (0.6 - 1.0 g/dL),

Protein Elektroforesis(Gamma) : 8.7 - 16.0% (0.6 - 1.2 g/dL)

http://prodia.co.id/kimia/protein-elektroforesishttp://prodia.co.id/kimia/protein-elektroforesishttp://prodia.co.id/kimia/protein-elektroforesishttp://prodia.co.id/kimia/protein-elektroforesishttp://prodia.co.id/kimia/protein-elektroforesishttp://prodia.co.id/kimia/protein-elektroforesishttp://prodia.co.id/kimia/protein-elektroforesishttp://prodia.co.id/kimia/protein-elektroforesishttp://prodia.co.id/kimia/protein-elektroforesishttp://prodia.co.id/kimia/protein-elektroforesishttp://prodia.co.id/kimia/protein-elektroforesishttp://prodia.co.id/kimia/protein-elektroforesishttp://prodia.co.id/kimia/protein-elektroforesishttp://prodia.co.id/kimia/protein-elektroforesishttp://prodia.co.id/kimia/protein-elektroforesishttp://prodia.co.id/kimia/protein-elektroforesishttp://prodia.co.id/kimia/protein-elektroforesishttp://prodia.co.id/kimia/protein-elektroforesis

5/24/2018 Kelompok 4 - Elektroforesis

21/22

6/18/2014 21

Analisa Hb Elektroforesa meupakan pemeriksaan untuk

mendeteksi beberapa jenis Hb (S atau D; C atau E) secara

kualitatif atau semi-kuantitatif. Pemeriksaan ini juga

mampu memisahkan HbA dan HbA2.

Manfaat Pemeriksaan:Mendiagnosis hemoglobinopati danthalassemia, dan evaluasi kondisi anemia hemolitik.

Persyaratan & Jenis Sampel:1 mL Darah EDTA

Nilai Rujukan: HbA : 95-98%

HbA2 : 1,5-3,5%

HbF : 2,0%

2. Analisis Darah (Hb)

5/24/2018 Kelompok 4 - Elektroforesis

22/22

TERIMA KASIH

6/18/2014 22