Uji karakter penghasilan Hidrogen Sulfida (H2S)10. Uji karakter penghasilan Hidrogen Sulfida (H2S)a.Alat Tabung reaksi, jarum inokulasi dan bunsen.b.Bahan kultur bakteri umur 24 - 48 jam dan media SIM agar (Sulfide-Indole-Motility)Cara Kerja: Diambil kultur bakteri dengan ose kemudian diinokulasikan secara tusukan pada media SIM agar (semisolid) kemudian diinkubasikan pada suhu 37oC selama 24 48 jam. Reaksi positif menghasilkan H2S bila terbentuk warna hitam disepanjang daerah tusukan. Motilitas bakteri dapat diamati dengan melihat karakter pertumbuhan kultur disepanjang daerah tusukan, apabila pertumbuhan tampak menyebar maka mikroba tersebut bersifat motil dan jika pertumbuhannya hanya tampak didaerah bekas tusukan saja maka mikrobia tersebut tidak motil.LAMPIRANA. Media Nutrient Broth (NB) (Cappucino & Sherman, 1987) Komposisi perliter:1. Pepton: 5.0 g 2. Beef extract: 3.0 gSeluruh komponen dicampur merata, pH diatur 7.0. Sterilisasi dengan otoklaf 121oC selama 15 menit. Jika hendak membuat medium padat (Nutrient Agar) ditambahkan 1,5% agar.B. Media Pati Agar (Cappucino & Sherman, 1987) Komposisi per liter:Pepton: 5.0 gBeef extract: 3.0 g = NA Agar: 15 g Pati (soluble): 2.0 gSeluruh komponen dicampur merata, pH diatur 7.0 kemudian disterilisasi dengan otoklaf 121oC selama 15 menit. C. Media Fermentasi Karbohidrat (Glukosa cair, Laktosa cair, Sukrosa cair) (Jutono et al., 1980)Komposisi per liter (Sukrosa cair):Beef extract: 3.0 gPepton: 5.0 gSukrosa: 5.0 gSemua bahan dicampur merata. pH diatur 7.0 kemudian ditambahkan indikator phenol red 1,6 % sebanyak 1cc dan masukkan tabung durham. Sterilisasi dengan otoklaf 121oC selama 15 menit. Untuk membuat media laktosa cair dan glukosa cair maka ditambahkan laktosa atau glukosa sesuai kebutuhan.Media Tryptone Broth. (Cappucino & Sherman, 1987) Komposisi per liter: Trypton: 10.0 gBeef extract: 3.0 g Seluruh komponen (13 gram) dilarutkan dalam 1 liter akuades dan dicampurkan hingga merata. pH diatur 7,2 kemudian dimasukkan erlenmeyer dan disterilisasi dengan otoklaf pada temperatur 121oC selama 15 menit.E. Media BCPM (Bromocresol purple milk) (Jutono et al., 1980) Ada 2 macam media yang dapat digunakan:1. Susu segar (bebas lemak): 1000 mlBromocresol purple 1.6%: 1.0 ml2. Skim milk, dehydrated: 100 gBromocresol purple 1.6%: 1.0 ml Akuades: 1000 mlSterilisasi pada suhu 100oC selama 20 menit, diulangi 3 kali berturut-turut dengan waktu selang 24 jam.F. Media KaseinKomposisi per liter:Skim milk : 100 gNB: 13.0 gAgar: 15.0 gSterilisasi skim milk diflask terpisah, kemudian diambil 1 ml skim milk steril secara aseptis dan ditambahkan medium padat yang sudah distrilkan (121oC, 15) kedalam petridish selanjutnya dirotate agar merata, dibiarkan memadat.Media Gelatin Agar (Claus & Balkwill, 1989) Komposisi per liter:Pepton: 10.0 gBeef extract: 3.0 gGelatin: 12.0 gAgar: 15.0 gSeluruh komponen dicampurkan hingga merata. pH diatur 7,2 kemudian dimasukkan erlenmeyer dan disterilisasi dengan otoklaf pada temperatur 121oC selama 15 menit.H. Media Nitrate Broth (Cappucino & sherman, 1987)Komposisi per liter:Pepton: 5.0 gBeef extract: 3.0 gPotassium nitrate (KNO3): 5.0 gSeluruh komponen (15 gram) dilarutkan dalam 1 liter akuades dan diampurkan hingga merata. pH diatur 7,2 kemudian disterilisasi dengan autoklaf pada temperatur 121oC selama 30 menit. REFERENSICappuccino, J. G. & N. Sherman. Microbiology: A Laboratory Manual. 1987. The Benjamin/Cummings Publishing Company. USAClaus. G. W. & D. Balkwill. 1989. Understanding Microbes: A Laboratory Textbook for Microbiology. W. H. Freeman and Company. New York.Jutono., Joedoro S., S. Hartadi, S. Kabirun S., Soehadi D. & Soesanto. 1980. Pedoman Praktikum Mikrobiologi Umum (untuk perguruan tinggi) Departemen Mikrobiologi Fakultas Pertanian. UGM. Yogyakarta.Sembiring, L. 2002. Sistematika Mikrobia: Petunjuk Praktikum untuk Mahasiswa S-1.. Laboratorium Biologi. Fakultas Biologi. Universitas Gadjah Mada. Yogyakarta.