NATALIA SUMANTRI 10703048

PENENTUAN KADAR VITAMIN C DALAM BEBERAPA JUS BUAH-

BUAHAN MENGGUNAKAN METODE SPEKTROFLUOROMETRI DIBANDINGKAN DENGAN METODE IODIMETRI

PROGRAM STUDI SAINS DAN TEKNOLOGI FARMASI

SEKOLAH FARMASI INSTITUT TEKNOLOGI BANDUNG

2007

Pada kutipan atau saduran skripsi ini harus tercantum nama penulis dan lembaganya yaitu Sekolah Farmasi Institut Teknologi Bandung

PENENTUAN KADAR VITAMIN C DALAM BEBERAPA JUS BUAH-BUAHAN

MENGGUNAKAN METODE SPEKTROFLUOROMETRI

DIBANDINGKAN DENGAN METODE IODIMETRI

SKRIPSI

Karya tulis sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Sains dan Teknologi Farmasi dari Sekolah Farmasi Institut Teknologi Bandung ...

Juni 2007

Natalia Sumantri 10703048

Dr. Slamet Ibrahim Pembimbing Utama

Dr. rer.nat Rahmana Emran Pembimbing Serta

i

ABSTRAK

Telah ditentukan kadar vitamin C dalam jus buah-buahan secara spektrofluorometri

melalui pengukuran intensitas fluoresensi metilen biru yang menurun akibat adanya

vitamin C, pada panjang gelombang eksitasi 664 nm dan emisi 670 nm. Metode ini

memiliki perolehan kembali antara 90-120%, koefisien variasi 2,69 ─10,42% dan batas

deteksi 5,67x10-8 mol/L. Metode ini dipengaruhi oleh adanya logam berat, keasaman, dan

glukosa. Kadar vitamin C (%b/b) dalam beberapa jus buah-buahan seperti belimbing,

lemon, dan jeruk nipis berada dalam rentang 0,019±0,002 hingga 0,041±0,006%. Metode

spektrofluorometri untuk penentuan kadar vitamin C dalam jus buah-buahan telah

dibandingkan terhadap metode iodimetri.

ABSTRACT

Spectrofluorometric method has been applied for determination of vitamin C in fruits juice

based on measurement of decreasing fluorescence intensity of methylene blue due to its

reaction with vitamin C, at excitation of 664nm and emission of 670nm. This method had

the recovery of 90-120%, coefficient of variation of 2.69 ─ 10.42% , and limit of detection

of 5.67x10-8 mol/L. This method was influenced by the presence of heavy metals, acidity,

and glucose. The content of vitamin C (%b/b) in several fruits juice which were starfruit,

lemon, and lime were in a range of 0.019±0.002 to 0.041±0.006%. The

spectrofluorometric method for determination of vitamin C in fruits juice was compared to

iodimetric method.

ii

KATA PENGANTAR

Puji syukur kepada Tuhan atas segala berkat dan kasih karunia sehingga penelitian

dan penyusunan skripsi ini dapat diselesaikan. Buku ini disusun sebagai salah satu syarat

untuk menyelesaikan studi tingkat sarjana di Sekolah Farmasi, Institut Teknologi

Bandung.

Ucapan terima kasih disampaikan kepada Dr. Slamet Ibrahim sebagai pembimbing

utama dan Dr. rer. nat. R. Emran Kartasasmita sebagai pembimbing serta yang telah

memberikan bimbingan selama penyusunan skripsi ini. Ucapan terimakasih turut

disampaikan kepada seluruh dosen Sekolah Farmasi, beserta seluruh staf dan karyawan

atas bantuan dan izinnya untuk menggunakan sarana di Sekolah Farmasi dalam

menyelesaikan tugas akhir ini. Terimakasih kepada orang tua, keluarga besar serta semua

pihak yang tak dapat disebutkan satu-persatu atas doa dan dukungannya dalam

menyelesaikan skripsi.

Disadari bahwa skripsi ini masih jauh dari sempurna. Saran dan kritik yang

membangun untuk perbaikan skripsi sangat diharapkan. Semoga skripsi ini dapat

bermanfaat bagi perkembangan ilmu farmasi.

iii

DAFTAR ISI

4 HASIL PERCOBAAN DAN BAHASAN ……………………............................ 20

5 KESIMPULAN

5.1 Kesimpulan ................................................................................................ 29

6 RINGKASAN PENELITIAN …………………………………........................... 30

PUSTAKA …………………………………………………………............................... 32

Halaman

ABSTRAK ……………………………………………………………………………... i

KATA PENGANTAR ……………………………………………………………......... ii

DAFTAR TABEL ………………………………………………………........................ iv

DAFTAR GAMBAR …………………………………………………........................... v

PENDAHULUAN ……………………………………………………........................... 1

BAB

1 TINJAUAN PUSTAKA …………………………………………........................ 2

1.1 Vitamin C ......……………………………............................................... 2

1.2 Metilen Biru ......................……………………......................................... 5

1.3 Teknik Analisis Vitamin C......................................................................... 6

1.4 Metode Spektrofluorometri........................................................................ 6

1.5 Pengembangan Metode,Optimasi dan Validasi Metode Analisis………... 10

2 METODE PENELITIAN ……………………………………….......................... 14

3 PERCOBAAN ........................................... ……………………........................... 15

3.1 Bahan .......................................................................................................... 15

3.2 Alat...…...…………………………………………………........................ 15

3.3 Penentuan Kadar Vitamin C baku............................................................... 15

3.4 Penyiapan larutan........................................................................................ 16

3.5 Pengaturan Kondisi Pengukuran................................................................. 16

3.6 Penentuan Pengaruh Matriks Terhadap Pengukuran................................... 17

3.7 Validasi Metode........................................................................................... 18

3.8 Penentuan kurva kalibrasi........................................................................... 19

3.9 Pembuatan jus buah-buahan........................................................................ 19

3.10 Penetapan kadar vitamin C dalam jus buah-buahan.................................... 19

iv

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman1.1 Jumlah kebutuhan Vitamin C setiap hari ............................................................... 3

1.2 Kandungan Vitamin C dalam mg/100g buah-buahan ........................................... 5 4.1 Pengaruh pH dan waktu.......................................................................................... 22

4.2 Pengaruh glukosa dan waktu.................................................................................. 23

4.3 Pengaruh logam tembaga....................................................................................... 23

4.4 Pengaruh logam besi............................................................................................... 23

4.5 Pengaruh penambahan EDTA................................................................................ 24

4.6 Keseksamaan pengukuran Intensitas fluoresensi metilen biru pada berbagai konsentrasi vitamin C.............................................................................................

25

4.7 Keseksamaan pengukuran intensitas fluoresensi pada sampel............................... 26

4.8 Penentuan kecermatan dengan perolehan kembali (metodeiodimetri).............. 26

4.9 Penentuan kecermatan dengan perolehan kembali (metode spektrofluorometri).. 27

4.10 Penentuan kadar vitamin C dalam jus buah-buahan............................................... 28

v

DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

1.1 Rumus bangun Vitamin C ..................................................................................... 2

1.2 Rumus bangun metilen biru .................................................................................. 5

1.3 Reaksi Metilen biru dengan Asam askorbat.......................................................... 6

1.4 Skema Spektrofluorometer .................................................................................... 8

4.1 Spektrum UV metilen biru..................................................................................... 20

4.2 Kurva spektrum emisi metilen biru........................................................................ 20

4.3 Kurva spektrum eksitasi metilen biru..................................................................... 20

4.4 Kurva spektrum eksitasi dan emisi maksimum metilen biru ................................ 21

4.5 Kurva pengaruh waktu dan pH terhadap perubahan intensitas fluoresensi……... 21

4.6 Kurva kalibrasi penurunan intensitas fluoresensi metilen biru terhadap konsentrasi vitamin C ............................................................................................

24

1

PENDAHULUAN

Vitamin C merupakan vitamin yang larut dalam air yang memiliki peranan penting dalam

perbaikan jaringan tubuh dan proses metabolisme tubuh melalui reaksi oksidasi dan

reduksi. Vitamin C juga berperan sebagai antioksidan, mempercepat penyembuhan luka,

proses hidroksilasi hormon korteks adrenal, pembentukan kolagen, dan menurunkan kadar

kolesterol di dalam darah (Combc,1996). Vitamin C juga dapat mengurangi resiko kanker

dengan mengurangi kerusakan akibat radikal bebas yang dapat memicu kanker.

Berdasarkan pada pentingnya vitamin C bagi tubuh kita maka penggunaan jus buah-

buahan telah berkembang dengan pesat karena jus buah-buahan banyak mengandung

vitamin C. Penelitian ini difokuskan pada penentuan kadar vitamin C dalam jus buah-

buahan yang merupakan salah satu sumber vitamin C yang bermanfaat bagi tubuh.

Pada penelitian ini telah diterapkan metode spektrofluorometri untuk penentuan kadar

vitamin C pada jus buah-buahan menggunakan pereaksi metilen biru. Penentuan kadar

vitamin C menggunakan metode spektrofluorometri berdasarkan reaksi antara metilen biru

dengan vitamin C, membentuk asam dehidroakskorbat dan leuko-metilen biru yang tidak

berfluoresensi. Penurunan intensitas fluoresensi metilen biru menjadi leuko-metilen biru

sebanding dengan kadar vitamin C yang bereaksi dengan metilen biru. Metode

spektrofluorometri dibandingkan dengan metode iodimetri secara statistik menggunakan

uji t berpasangan.