SKRINING FITOKIMIA DAN IDENTIFIKASI ALKALOID DARI CABOMBA FURCATA

ABSTRAK.Ekor Kucing (Cabomba furcata) adalah tanaman air yang mendominasi, yang dengan cepat berkembang biak di Danau Chini, Pahang, Malaysia. Jika dibiarkan tidak terkendali, prevalensi tanaman ini akan mengancam tanaman lain, seperti dengan menghambat pertumbuhan lotus (Nelumbo nicifera dan Nympae lotus). Hal ini juga diduga sebagai penyebab pencemaran di Danau Chini. Langkah-langkah untuk memberantas atau tanaman kontrol Cabomba furcata pertama memerlukan studi komprehensif konten fitokimia melalui metode skrining kimia, ekstraksi / fraksinasi dan analisis senyawa individu. Skrining fitokimia dilakukan pada ekstrak yang terdeteksi kandungan flavonoid, saponin dan kelompok alkaloid, tetapi tidak triterpen dan tanin. Hasil ekstraksi yang berbeda diperoleh dari berbagai bagian tanaman, dengan yield tertinggi (% g / g sampel) yang diperoleh sebelum dan sesudah fraksinasi alkaloid berasal dari daun (10,1%, 6,9%), diikuti oleh batang (9,6%, 4,5%) dan Bunga (0,8%, 0,5%). Identifikasi alkaloid dalam ekstrak C. furcata oleh TLC menunjukkan adanya nikotin, tomatine, tebain dan kina.

Keywords: Cabomba furcata; skrining kimia, alkaloid, kromatografiPendahuluanDanau Chini adalah danau alam terbesar kedua di Malaysia, dengan luas 202 hektar. Hal ini kaya flora dan fauna, dengan 288 spesies tanaman, 25 spesies tanaman air, 92 jenis burung dan 144 jenis ikan [1]. Baru-baru ini, keberadaan tanaman air telah terganggu oleh dominasi tanaman Ekor Kucing (Cabomba furcata), yang juga dilaporkan memiliki efek buruk pada beberapa aspek kualitas air. Tanaman ini merupakan gulma air yang memiliki kemampuan untuk tumbuh pesat. Hal ini telah menyebar ke seluruh danau, menjadi tanaman yang dominan dan salah satu kontributor polusi.Dominasi tanaman telah membahayakan populasi lotus (Nelumbo nicifera dan Nympae lotus), yang merupakan daya tarik bagi pengunjung [2]. Tanaman yang memiliki kemampuan untuk tumbuh dan berkembang menjadi posisi dominan biasanya menghasilkan senyawa yang menghambat pertumbuhan dan perkembangan tanaman lainnya. Hal ini dikenal sebagai efek alelopati [3]. Tanaman juga dapat menghasilkan senyawa yang bermanfaat bagi kesehatan dan kesejahteraan [4]. Misalnya, alkaloid dari tanaman seperti atropin, kodein dan nikotin secara luas digunakan dalam produksi obat [5].Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengidentifikasi fitokimia dalam C. furcata melalui screening kimia. Selain itu, penelitian ini bertujuan untuk mengetahui hasil ekstraksi dari daun, batang dan bagian bunga C. furcata, dan untuk mengidentifikasi jenis alkaloid yang ditemukan sebelum dan setelah fraksinasi.

MATERIAL DAN METODE Persiapan. Bahan baku yang digunakan adalah C. furcata dari Danau Chini. Pertama, sampel dicuci, dan kemudian dikeringkan dalam oven pada suhu 45oC sampai berat sampel konstan.

Seleksi pelarut.Sampel yang telah digiling dan dikeringkan, berat 10 gram, kemudian dimasukkan ke dalam ekstraktor soxhlet (Hamilton, Amerika Serikat) menggunakan 200 ml pelarut (metanol, air, metanol + air). Ekstraksi dilakukan selama 3 jam, dengan sampling 10 ml setiap 30 menit. Ekstrak yang dihasilkan dikeringkan menggunakan evaporator vakum (Heidolph, Jerman) pada 80 rpm dan 65oC (dengan pelarut metanol), 100oC (dengan air) dan 90oC (dengan air + methanol) untuk menentukan persentase yield ekstrak yang dihasilkan.

Skrining fitokimia UjiUji Flavonoid (Uji Mg). Dilakukan dengan beberapa tetes asam pekat klorida (HCl) dan 0,5 g magnesium logam (Mg) ditambahkan ke 5 ml ekstrak etanol (mengandung 1g dari sampel material). Perubahan warna merah muda atau merah / warna ungu akan menunjukkan adanya zat flavonoid dalam materi [6].Uji Saponin dilakukan dengan mengambil sebanyak 5 g dari irisan kecil bahan tanaman dan diekstraksi dengan metanol panas, kemudian dikeringkan dan diekstraksi lagi dengan eter. Bahan yang tidak larut dalam eter dikocok dengan kuat dengan air. Pembentukan buih statis akan menunjukkan konten saponin[7].

Gambar 2. reaksi uji saponin

Uji triterpen/ Steroid. Dilakukan dengan mengambil sebanyak 5 g irisan kecil bahan tanaman dan diekstraksi dengan etanol panas, kemudian dikeringkan dan diekstraksi lagi dengan eter. Ekstrak etanol diuji dengan asam sulfat atau asetat anhidrat (Burchad Lieberman). Perubahan warna Ungu, merah atau warna pink akan menunjukkan adanya triterpen / steroid[7].Uji alkaloid dilakukan dengan mengambil sebanyak 5-10 g irisan kecil sampel segar atau kering digiling dengan pasir. Setelah halus , ditambahkan 10 ml kloroform dan kemudian dikocok. Kemudian larutan sampel disaring dan ditambahkan larutan asam sulfat 2M (10 tetes) ke dalam tabung reaksi dan dikocok dengan kuat. Fase berair dipisahkan dengan hati-hati dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi dengan penambahan beberapa tetes bahan uji Meyer (solusi pottassiomercuri). Pembentukan larutan yang keruh akan menunjukkan adanya alkaloid [7].Uji Tannin. Dilakukan dengan 1 g ekstrak etanol diuapkan dan sisanya diekstraksi dengan 10 ml NaCl (9%). Kemudian disaring dan dibagi menjadi tiga bagian yang sama. Larutan natrium klorida (NaCl) telah ditambahkan ke bagian pertama, larutan gelatin (1%) ke kedua dan gelatin garam ditambahkan ke ketiga. Pembentukan endapan akan menunjukkan adanya tanin. Kemudian larutan FeCl3 ditambahkan ke ekstrak. Perubahan warna biru, biru tua, hijau atau warna biru-hijau akan menunjukkan adanya tanin.

Ekstraksi dan Fraksinasi. C. furcata yang telah digiling dan dikeringkan, beratnya mencapai 4g, lalu ditempatkan dalam Erlenmeyer dengan 40 ml pelarut metanol (10% asam asetat). Ekstraksi dilakukan dalam keadaan gelap dengan menutup Erlenmeyer dengan aluminium foil. Kemudian shaker selama 4 jam pada kecepatan 150 rpm pada suhu kamar (27oC) [8]. Ekstrak yang dihasilkan dipekatkan menggunakan evaporator vakum dengan kecepatan 55 rpm pada 55oC selama 10 menit. Setelah ekstrak terkonsentrasi, NH4OH ditambahkan setetes demi setetes sampai terjadi pembekuan dan terbentuk sedimen. Kemudian, sedimen dipisahkan menggunakan centrifuge pada kecepatan 3000 rpm selama 10 menit, dan kemudian dicampur dengan 1% NH4OH dan diencerkan dengan sedikit kloroform. Jika tidak terbentuk sedimen, alkaloid diekstraksi tiga kali dengan menggunakan kloroform (40 ml).Hasilnya dipekatkan menggunakan evaporator vakum pada kecepatan 55 rpm dan suhu 55oC selama 10 menit. Hasilnya kemudian dimasukkan kedalam oven pada suhu 45oC untuk mendapatkan ekstrak yang padat.

Identifikasi Alkaloid Jenis Menggunakan TLC. Analisis TLC dilakukan pada pelat silika gel G60. Jarak dari tempat/titik diukur untuk menghitung Rf. nilai Rf (faktor Retardation / faktor Retensi) menjelaskan rasio waktu relatif pada fase stasioner untuk waktu yang dihabiskan dalam fase mobile. Rf secara matematis dapat digambarkan dengan rasio dari jarak migrasi oleh zat ke jarak migrasi oleh pelarut. Nilai Rf diperoleh dengan perbandingan nilai referensi dapat ditunjukkan pada Tabel 1. Dari perbandingan ini, perkiraan awal dibuat untuk jenis alkaloid yang ada pada ekstrak C. furcata.

Tabel 1. Referensi untuk faktor retensi dari jenis alkaloid yang terdapat pada plat TLC [9]

HASIL DAN PEMBAHASAN Penentuan dari fitokimi pada C. furcataFlavonoidPerubahan warna merah muda terjadi sebentar, yang akan berubah menjadi warna coklat ketika asam klorida pekat dan bubuk Mg ditambahkan ke ekstrak metanol. Hal ini menunjukkan bahwa zat fitokimia dalam C. furcata mengandung flavonoid. Hasil yang diperoleh sejalan dengan hasil yang diperoleh Donald dan Donna [10]. Hasil ini menunjukkan karena C. furcata sebagai sumber potensial dari antioksidan.SaponinHasil uji saponin menunjukkan pembentukan buih permanen di dalam tabung. Hal ini menunjukkan bahwa C. furcata mengandung saponin, meskipun hasil yang berbeda diperoleh Watson dan Dallwitz (1992), yang menyatakan bahwa genus cabomba tidak mengandung saponin [11]. Perbedaan ini mungkin disebabkan fakta bahwa Watson dan Dallwitz (1992) tidak melakukan studi pada C. spesies furcata. Kandungan saponin dalam C. furcata sangat berguna karena mengandung senyawa yang mungkin bermanfaat bagi tubuh manusia seperti dengan membantu untuk mengurangi baik kolesterol dan risiko kanker, serta bertindak sebagai antioksidan.

Triterpen / steroid Senyawa bioaktif fitokimia dari triterpen / steroid tidak terdeteksi di C. ekstrak furcata karena tidak ada perubahan warna dalam ekstrak etanol diamati setelah penambahan asam sulfat.AlkaloidBukti dari kelompok alkaloid senyawa bioaktif fitokimia ditemukan di C. furcata, ditandai dengan kekeruhan dalam larutan ketika ditambahkan reagen Meyer. Hasil ini mirip dengan apa yang ditemukan dalam genus Cabomba [11] dan Nymphaeales [12].TanninKelompok tannin tidak terdeteksi di C. furcata karena tidak ada perubahan warna terjadi setelah penambahan MgCl3untuk ekstrak. Pada prinsipnya, hal ini tidak mungkin karena flavonoid, tannin yang yang telah mengalami kondensasi, terdeteksi dalam sampel. Kegagalan untuk mendeteksi tannin mungkin karena metode pengujian tidak menjadi cocok untuk mendeteksi tanin terkondensasi.Hasil Ekstrak Tabel 2 menunjukkan bahwa persentase ekstrak sebelum fraksinasi lebih tinggi dibandingkan setelah fraksinasi untuk ketiga jenis sampel (daun, batang, bunga). Hal ini karena sebelum fraksinasi, berbagai komponen lain dalam sampel furcata C. juga diambil, sedangkan setelah fraksinasi, hanya kelompok tertentu senyawa yang difraksinasi. Dalam penelitian ini, komponen spesifiknya adalah komponen alkaloid. Hal ini ditekankan oleh Silva et al. (1998) yang menyatakan bahwa jika kloroform digunakan selama fraksinasi, dapat bereaksi dengan campuran ekstrak untuk menghasilkan beberapa alkaloid, garam dan artefak lainnya [13]. Hal ini juga mengamati bahwa daun menghasilkan hasil tertinggi sebelum dan setelah fraksinasi, dan diikuti oleh batang dan bunga. Dengan demikian, berdasarkan hasil setelah fraksinasi, alkaloid sebagian besar terdapat dalam daun C.furcata.

Tabel2. Hasil sebelum dan setelah fraksinasi

Analisis TLC sebelum FraksinasiDari analisis TLC yang dilakukan pada daun, batang dan bunga, tidak terdapat alkaloid yang diperoleh sebelum fraksinasi. Hal ini mungkin disebabkan oleh komponen alkaloid belum dipisahkan dari komponen lain yang terkandung dalam sampel. Sebelum fraksinasi dilakukan, hasil yang diperoleh menunjukkan adanya semua komponen dalam sampel, tanpa menunjukkan setiap alkaloid tertentu. Ini mempersulit proses mendeteksi komponen alkaloid dalam sampel. Menurut Sarker et al (2005), sangat sulit untuk memisahkan komponen individu dari campuran minyak mentah yang hanya menggunakan satu langkah pemisahan [14].Faktor lain yang mungkin menyebabkan tidak terdeteksinya alkaloid yaitu bisa disebabkan oleh ketidaksesuaian dari Metode kromatografi yang digunakan. Hal ini karena terlalu banyaknya komponen dalam sampel, proses yang rumit dalam mengisolasi komponen yang akan dipelajari. Faktor-faktor lain seperti fase gerak yang digunakan, khususnya metanol / amonium hidroksida untuk kromatografi, mungkin juga tidak sesuai untuk mendeteksi keberadaan alkaloid sebelum fraksinasi.Analisis TLC Setelah Fraksinasi Bintik-bintik yang diperoleh pada pelat TLC sangat sensitif terhadap berbagai faktor, termasuk konsentrasi sampel, cara sampel dijatuhkan ke plat dan jenis pelarut yang digunakan. Konsentrasi ekstrak yang berbeda mempengaruhi jarak yang dihasilkan dari tempat dan mempengaruhi nilai Rf. Pertama harus mencatat konsentrasi yang diperlukan secara tepat untuk mendapatkan nilai Rf yang tepat. Dimana nilai Rf menunjukkan jenis alkaloid [15]. Dengan demikian, pengamatan yang berulang dilakukan untuk mengkonfirmasi jenis alkaloid yang sebenarnya yang ada dalam ekstrak. Reagen Iodoplatinate digunakan untuk referensi nikotin, tebain, kina dan tomatine alkaloid. Nilai Rf dan warna daroi spot kemudian dibandingkan dengan warna menurut Clarke [9] dan Waldi et al. [16], masing-masing.Penentuan nilai Rf untuk daun, batang dan ekstrak bunga setelah fraksinasi. Tabel 3 menunjukkan bahwa pada konsentrasi 0,005 g / ml, alkaloid jenis nikotin dapat dilacak. Pada konsentrasi 0,01 g / ml, alkaloid dari tebain, nikotin dan jenis kina dapat diidentifikasi, sedangkan pada konsentrasi 0.02g / ml, alkaloid nikotin, kina dan jenis tomatine dapat terdeteksi. Hal ini juga menunjukkan adanya nikotin dan tomatine di semua tiga konsentrasi pada daun dan batang C. furcata, sedangkan hanya jenis tomatine yang diidentifikasi dalam tiga konsentrasi pada bunga C. furcata.

Tabel 3. Analisis TLC dari ekstrak Setelah fraksinasi pada konsentrasi ekstrak yang berbeda

Tabel 3 menunjukkan bahwa alkaloid nikotin dan tomatine memiliki warna yang sama dengan warna referensi. Namun, keberadaan tempat di ekstrak bunga tidak menunjukkan kesamaan dengan warna referensi. Plat ini tidak sama dengan warna referensi, kemungkinian disebabkan karena kedua senyawa ini adalah hasil dari suatu proses pemisahan yang tidak lengkap. Observasi yang teliti dari analisis daun menunjukkan bahwa konsentrasi dari tebain dan kina diperoleh hanya pada konsentrasi 0,01 g / ml.

KESIMPULAN Pada penelitian ini bertujuan mengidentifikasi komponen alkaloid, flavonoid dan saponin dalam ekstrak C. furcata melalui pemeriksaan kimia. Analisis dengan KLT menunjukkan tidak ada alkaloid terdeteksi dalam ekstrak sebelum fraksinasi tapi setelah fraksinasi terdapat beberapa alkaloid seperti nikotin, tomatine, tebain dan kina yang diamati. Kehadiran alkaloid di ekstrak C. furcata menunjukkan bahwa tanaman ini memiliki potensi untuk obat farmasi, seperti nikotin dalam membantu untuk berhenti merokok dan tomatine sebagai agen agitator pengurangan steroid. Penelitian lebih lanjut sedang dilakukan untuk pemanfaatan C. furcata melalui bioaktivitas dan efek alelopati dari berbagai ekstrak yang diperoleh dengan perbedaan pelarut dan metode ekstraksi.

DAFTAR PUSTAKA1. M. Omar. Dampak Pembangunan Ekopelancongan dan Pertanian ke atas Kehidupan Komuniti Orang Asli. Sumber asli Tasik Chini Bangi: Universiti Kebangsaan Malaysia, (2005) p. 1332. H. Ainon, M. Ratuah, N.M. Mimi and M.T. Affendi. Water Quality of Chini Lake from theBacteria Aspect. Chini Lake Expedition 2004 Bangi: Universiti Kebangsaan Malaysia (2006)3. M.L. Hoffman, L.A. Weston, J.C. Snyder and E.E. Regnier. Separating the effects ofSorghum (Sorghun bicolor) and Rye (Secale cereale) root and shoot residues on weeddevelopment. Weed Sci. Vol. 44 (1996) p. 4024. P.M. Kris-Entherton, K.D. Hecker, A. Bonanome, S.M. Coval, A.M. Binkoski, K.F. HilpertA.E. Griel, D.L. Luthria, R. Biawas and S. Natarajan. Food Chem. Vol. 105 (2006) p. 325.5. Hesse, M.. Alkaloids: natures curse or blessing? Switzerland: University Zurich (2002)6. F. Mojab, M. Kamlinejad, N. Ghaderi and H. Reza. Vahidipour: Iranian Journal of Pharmaceuticals Research (2003) p. 77.7. Rasadah Mat Ali, Ahmad Abu Said and Azizol Abdul Kadir. Pembangunan Industri Tumbuhan ubatan: peranan agensi kerajaan, industri dan saintis. Prosiding konvensyen kebangsaan tumbuhan ubatan. (1995) p.167.8. H.P.S. Makkar, P. Siddhuruju, and K. Becker. Method in Molecular Biology Vol. 393 (2002)p. 107.9. E.G.C. Clarke. The forensic chemistry of alkaloids. The Alkaloids Vol XII New York: Academic Press (1970) p. 514.10. H.L Donald and J.S. Donna. American Journal of Botany Vol. 77(4) (1990) p. 453.11. L. Watson and M.J. Dallwitz. The families of flowering plants: descriptions,illustrations,identification and information retrieval (1992).12. W.S. Judd, C.S. Campbell, E.A.Kellogs, P.F. Stevens and M.J. Donoghue. Plants Systematic.A Phylogenitic Approach Vol. 2 (2002) p. 223.13. G.L. Silva, I.S. Lee and D.A. Kinghor. Natural Products Isolation. 2nd Ed, Methods in Biotechnology Vol 4 (1998) p. 123.14. S.D. Sarker, Z. Latif, and A.I. Gray. Natural Products Isolation, 2nd Ed. Methods in Biotechnology Vol 20 (2005) p. 323.15. Troubleshooting TLC. http://aquariumdatabase.cpm/Cabomba [21 September 2008]16. . Waldi, K. Schnackerz and F. Schnackerz and F. Munter. Journal of Chromatography Vol 6 (1961) p. 61