Seminar Citta Devi Guntari

UNIVERSITAS INDONESIA

ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA TANIN DARI DAUN BELIMBING WULUH (Averrhoa bilimbi L) SERTA

AKTIVITAS INHIBISINYA TERHADAP ENZIM XANTHINE OKSIDASE

SEMINAR

CITTA DEVI GUNTARI

1006661222

FAKULTAS TEKNIK

PROGRAM STUDI TEKNOLOGI BIOPROSES

DEPOK

JANUARI 2014

HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS

Seminar ini adalah hasil karya saya sendiri, dan semua sumber baik yang dikutip maupun dirujuk telah saya nyatakan dengan

benar.

Nama : Citta Devi Guntari

NPM : 100666122

Tamda Tamgan :

Tanggal : 5 Januari 2014

ii

HALAMAN PENGESAHAN

iii

KATA PENGANTAR

Puji dan Syukur kepada Sang Triratna karena melalui perlindungannya

saya dapat menyelesaikan seminar ini dengan sebaik mungkin. Penulisan seminar

ini dilakukan dalam rangka memenuhi salah satu syarat untuk memperoleh gelar

Sarjana Teknik Program Studi Teknologi Bioproses pada Fakultas Teknik

Universitas Indonesia. Dalam penulisan seminar ini, saya banyak memperoleh

bantuan yang tak ternilai harganya dari berbagai pihak. Oleh karena itu, saya ingin

mengucapkan terimakasih kepada:

1. Ir. Rita Arbianti, M.Si., dan Dr. Tanian Surya Utami, S.T., M.T., selaku dosen

pembimbing yang telah menyediakan waktu, tenaga dan pikirannya untuk

mengarahkan dalam penyusunan seminar ini.

2. Segenap dosen Departemen Teknik Kimia, khususnya program studi Teknologi

Bioproses yang senantiasa mengajar dan membagikan wawasan tentang bidang

ilmu bioproses maupun hal lainnya yang bersifat lebih umum.

3. Bapak Gunawan dan Ibu Srihartini, selaku orang tua dan Prajna selaku adik

saya yang senantiasa memperhatikan dan memberikan semangat dan cintanya

kepada saya selama penyusunan seminar ini.

4. Kevin, yang senantiasa memberikan semangat dan perhatiannya selama

penyusunan seminar ini.

5. Mia Sari Setiawan selaku sahabat dan teman cerita segala kehidupan yang telah

banyak memberikan solusi kepada saya.

6. Seluruh teman dari Departemen Teknik Kimia, khususnya program studi

Teknologi Bioproses yang senantiasa membantu dan mengingatkan dalam

perkuliahan sehari – hari

Akhir kata, saya meminta maaf apabila dalam proses pembuatan seminar

ini ada kata – kata yang kurang berkenan. Semoga seminar ini memberikan

manfaat terutama bagi ilmu pengetahuan para pembaca.

Depok, 18 Desember 2013

iv

Penulis

ABSTRAK

Nama : Citta Devi Guntari

Program studi : Teknologi Bioproses

Judul :

ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA TANIN DARI DAUN BELIMBING WULUH (Averrhoa bilimbi) SERTA AKTIVITAS INHIBISINYA TERHADAP ENZIM XANTHINE OKSIDASE

Senyawa tanin merupakan salah satu jenis polifenol yang memiliki aktivitas inhibisi terhadap enzim xanthin oksidase. Enzim ini merupakan senyawa yang berperan dalam pembentukkan asam urat di dalam tubuh. Adanya overproduction asam urat menyebabkan timbulnya keadaan hiperuresemia yang mengakibatkan penyakit pirai atau encok. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk memperoleh ekstrak kasar daun belimbing wuluh kemudian mengisolasi tanin dari tanaman tersebut dengan beberapa jenis eluen dan mengetahui eluen terbaik yang digunakan untuk mengisolasi tanin, serta mengetahui kadar inhibisinya terhadap enzim xanthine oksidase untuk menurunkan kadar asam urat. Metode ekstraksi yang digunakan adalah sonikasi dengan frekuensi 42 kHz selama 50 menit menggunakan pelarut aseton 70%. Uji fitokimia dilakukan dengan penambahan FeCl3 pada ekstrak kasar. Isolasi menggunakan kromatografi lapis tipis analitik untuk mencari eluen terbaik, kemudian dilanjutkan dengan kromatografi lapis tipis preparatif untuk memperoleh tanin yang lebih murni dan kandungan tanin diuji secara kuantitatif dengan stainsy test. Nilai inhibisi diuji untuk beberapa isolat dari eluen terbaik dengan spektrofotometer.

Kata kunci: Hiperuresemia, tanin, xantin oksidase, kromatografi lapis tipis, inhibisi.

v

ABSTRACT

Name : Citta Devi Guntari

Major : Bioprocess Technology

Title :

Tannin Isolation and Identification of leaves of starfruit (Averrhoa bilimbi) and Inhibitory activities of Xanthine Oxidase Enzyme

Tannin is a polyphenol with inhibitory activity towards Xanthine Oxidase Enzyme which is a compound that plays a role in the formation of uric acid in the body. The overproduction of uric acid causes a state called hiperuresemia that leads to gout or rheumatism. The purpose of this study is to obtain a crude extract of starfruit leaves; isolate the tannin of the leaves with some type of eluent and to figure out which eluent is best used to isolate the tannin; and determine the inhibitory level of Xanthine Oxidase Enzyme to decrease uric acid rate. The extraction method used is sonication with the frequency of 42 kHz using 70% acetone solvent for 50 minutes long. Phytochemical test is performed by adding FeCl3 to the crude extract. The isolation is using analytical thin-layer chromatography to find the best eluent which is continued by preparative thin-layer chromatographyto obtain more pure tannin and the content of tannin is calculated by means of stainsy test. Inhibitory value is calculated for several isolates of the best eluent with a spectrophotometer.

Keywords: Hiperuresemia, tannin, xanthine oxidase enzyme, thin-layer chromatography, inhibition.

vi

DAFTAR ISIHALAMAN SAMPUL............................................................................................1

HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS....................................................ii

HALAMAN PENGESAHAN................................................................................iii

KATA PENGANTAR............................................................................................iv

ABSTRAK...............................................................................................................v

ABSTRACT............................................................................................................vi

DAFTAR ISI..........................................................................................................vii

DAFTAR GAMBAR............................................................................................viii

DAFTAR TABEL...................................................................................................ix

PENDAHULUAN...................................................................................................1

1.1 Latar Belakang............................................................................................1

1.2 Rumusan Masalah.......................................................................................4

1.3 Tujuan.........................................................................................................4

1.4 Batasan Penelitian.......................................................................................4

1.5 Sistematika Penulisan.................................................................................5

BAB II Tinjauan Pustaka.........................................................................................6

2.1 Asam Urat...................................................................................................6

2.2 Hiperuresemia dan artritis gout..................................................................9

2.3 Pengetahuan tentang Daun Belimbing Wuluh..........................................17

2.4 Tanin.........................................................................................................19

2.5 Metode Ekstraksi Tanin dari Daun Belimbing Wuluh.............................22

2.6 Isolasi Senyawa Tanin Dari Ekstrak Kasar Daun Belimbing Wuluh dengan Kromatografi Lapis Tipis...................................................................25

2.7 Uji Kualitatif dan Kuantitatif....................................................................27

2.8 Inhibisi Enzim Xantin Oksidase dan Metode Pengujiannya...................30

2.9 State of The Art.......................................................................................31

BAB III Metodelogi Penelitian..............................................................................33

3.1 Diagram Alir Penelitian............................................................................33

3.2 Alat dan Bahan.........................................................................................35

3.3 Lokasi Penelitian......................................................................................37

3.4 Prosedur Percobaan..................................................................................37

3.5 Variabel Penelitian....................................................................................42

vii

3.6 Data yang dikumpulkan............................................................................43

DAFTAR PUSTAKA............................................................................................44

viii

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2. 1. Struktur Kimia Asam Urat...............................................................6

Gambar 2. 2. Metabolisme Purin..........................................................................7

Gambar 2. 3. Skema Metabolisme Purin...............................................................8

Gambar 2. 4. Struktur Kimia Kolkisin................................................................13

Gambar 2. 5. Struktur Kimia Probenesid............................................................16

Gambar 2. 6. Tanaman Belimbing Wuluh...........................................................17

Gambar 2. 7. Struktur Tanin...............................................................................19

Gambar 2. 8. Struktur Flavan-3,4-diol................................................................21

Gambar 2. 9. Struktur Flavan-4-ol......................................................................21

Gambar 3. 1. Diagram Alir Penelitian Isolasi Tanin dari Daun Belimbing Wuluh

............................................................................................................................. 34

viii

DAFTAR TABEL

Tabel 2. 1. Penelitian Mengenai Senyawa Tanin.............................................................32

Tabel 3. 1. Daftar alat beserta fungsinya.........................................................................35Tabel 3. 2. Daftar bahan beserta fungsinya......................................................................36

ix

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar BelakangPenyakit asam urat sudah dikenal sejak 2000 tahun yang lalu dan menjadi

salah satu penyakit tertua yang dikenal manusia. Penyakit asam urat sangat

berhubungan dengan hiperurisemia. Hiperurisemia adalah peningkatan kadar

asam urat di atas nilai normal dan dipengaruhi oleh tingginya konsumsi makanan

yang kaya akan purin seperti jeroan, kacang – kacangan, makanan hasil laut dan

makanan hasil fermentasi (Owen & Jhons, 1999).

Di Amerika jumlah penderita asam urat sekitar 8 juta orang, sedangkan di

Indonesia penelitian tentang jumlah penderita asam urat baru dilakukan untuk

daerah – daerah tertentu. Penelitian lapangan yang dilakukan oleh penduduk Kota

Denpasar Bali mendapatkan prevalensi hiperurisemia sebesar 18,2% (Wisesa dan

Suastika, 2009). Sedangkan di Salem pada bulan Februari sampai April 2009

tercatat 200 orang yang memeriksakan kadar asam uratnya dan dari hasil

pemeriksaan ditemukan sekitar 46 orang atau 23% mengalami kadar asam urat di

atas normal. Kemudian bulan Juni sampai Agustus 2009 tercatat 120 orang yang

memeriksakan kadar asam uratnya dan dari hasil pemeriksaan ditemukan 35 orang

atau 29,75% mengalami kadar asam urat di atas normal. Dari data tersebut didapat

bahwa selama kurun waktu 3 – 4 bulan ditemukan kenaikan pemeriksaan kadar

asam urat dengan hasil di atas normal sebesar 6,75% (Data terolah Puskesmas

Kecamatan Salem, 2009). Jika dilihat dari data – data diatas maka kemungkinan

masyarakat terkena penyakit asam urat semakin meningkat.

Asam urat merupakan hasil akhir dari metabolisme purin. Pada reaksi tersebut,

purin yang dikandung oleh makanan akan diubah menjadi hipoxantin, selanjutnya

akan terjadi reaksi pembentukan xantin dari hipoxantin yang dikatalis oleh enzim

Xantin Oxidase (XO). Xantin yang terbentuk akan teroksidasi menjadi asam urat

dalam reaksi yang juga dikatalisis oleh enzim xantin oxidase (Murray, et al,

2003). Jadi xantin oxidase mengkatalis reaksi hipoxantin dan xantin menjadi asam

urat (Pacher; Nivorozhkin; dan Szabo, 2006).

1

2

Dewasa ini obat sintetik yang digunakan dalam pengobatan penyakit asam

urat adalah allopurinol (Connor, 2009). Allopurinol merupakan obat medis yang

digunakan untuk menghambat enzim xantin oxidase. Obat ini bereaksi sebagai

inhibitor kompetitif terhadap substrat pada enzim tersebut (Astari, 2008).

Walaupun allopurinol merupakan obat yang efektif untuk mengobati penyakit

asam urat, tetapi tidak dapat dihindari bahwa obat sintetik ini dapat menimbulkan

efek samping yang merugikan bagi penggunanya, yaitu alergi, kulit menjadi

kemerahan, gangguan saluran cerna, depresi sumsum tulang, anemia,

trombositopenia dan radang hati (Ganiswarna, 1995). Oleh karena itu dicari suatu

senyawa dari tanaman obat yang memiliki kemampuan untuk menghambat

aktivitas xantin oxidase dan memberikan efek samping yang rendah. Senyawa

tanin dan flavonoid pada tanaman obat dapat berperan sebagai anti asam urat

dengan menghambat kerja xantin oxidase (Cos et al. 1998; Milan et al.2004).

Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Hartanto (2013) menyimpulkan

bahwa proses ekstraksi senyawa tanin pada daun putri malu dengan metode

sonikasi menghasilkan aktivitas inhibisi terhadap enzim xanthin oksidase sebesar

24,6% untuk pelarut akuades, 23,8% untuk pelarut aseton 70% dan 22,6% untuk

pelarut etanol 70%. Penelitian yang dilakukan oleh Auliawati (2013) menyatakan

bahwa ekstraksi senyawa tanin daun jambu biji dengan metode sonikasi diperoleh

aktivitas inhibisi ekstrak aseton 70%, etanol 70% dan akuades berturut turut

adalah 28,54%, 38,6% dan 58,2%. sedangkan hasil penelitian yang dilakukan oleh

Chaerunissa (2013) menyimpulkan bahwa aktivitas inhibisi enzim oleh tanin dari

daun belimbing wuluh pada ekstrak kasar etanol 70%, aseton 70% dan aquadest

dengan metode yang sama yaitu sonikasi adalah 62,84%, 37,45% dan 29,72%.

Dari ketiga hasil penelitian tersebut dapat disimpulkan bahwa aktivitas inhibisi

terbesar diperoleh dari senyawa tanin yang diekstrak dari belumbing wuluh

menggunakan pelarut etanol 70%.

Tanaman belimbing wuluh dapat dimanfaatkan dalam kehidupan sehari – hari.

Bagian yang dapat digunakan diantaranya bunga, buah, daun dan batangnya.

Bunga belimbing wuluh digunakan sebagai obat batuk dan sariawan. Buah

belimbing wuluh dapat digunakan sebagai bumbu masak, juga dapat digunakan

sebagai obat menurunkan darah tinggi, gusi berdarah, jerawat dan batuk. Secara

Universitas Indonesia

3

tradisional daun belimbing wuluh dapat digunakan sebagai obat batuk, kompres

pada sakit gondongan, obat rematik, antidiare, sedangkan batang belimbing wuluh

dapat digunakan sebagai obat sakit perut (Atang, 2009).

Berdasarkan hasil pemeriksaan kandungan kimia yang dilakukan Herlih

(1993) menunjukkan bahwa daun belimbing wuluh mengandung tanin, sulfur,

asam format, peroksida, kalsium oksalat dan kalsium sitrat. Kadar tanin yang

tinggi pada simplisia daun belimbing wuluh muda adalah 1,6% dan pada daun

belimbing wuluh tua sebesar 1,28% (Nurliana, 2006). Lidyawati (2006)

menjelaskan dalam penelitiannya bahwa kadar tanin pada daun belimbing wuluh

sebesar 26,2%. Isolasi tanin dari daun belimbing wuluh dapat dilakukan dengan

pengambilan daun belimbing wuluh sekitar 20 cm dari pucuk daun, sehingga

tanpa merusak pertumbuhan dapat diperoleh tanin dari daunnya (Amnur, 2008).

Pansera (2004) menyatakan bahwa proses yang digunakan untuk mengekstrak

tanin adalah ekstraksi superkritikal fluida. Namun, hasil yang diperoleh dari

proses ini tidak memperoleh hasil yang baik. Uji coba mengekstrak tanin dengan

ekstraksi soxhlet menggunakan beberapa pelarut diantaranya etanol, dimetil eter,

dan n-heksan, hasil percobaan yang dipantau dengan kromatografi lapis tipis

menunjukkan bahwa dimetil eter dan n-heksan tidak dapat melarutkan senyawa

tanin, sedangkan etanol dapat melarutkan senyawa tanin.

Mengingat potensi senyawa tanin dalam daun belimbing wuluh dan aktivitas

inhibisinya terhadap xanthine oxidase, maka menarik untuk dilakukan ekstraksi

senyawa tanin dari simplisia tersebut dengan metode sonikasi. Metode sonikasi

dilakukan karena dapat menghasilkan hasil ekstrak yang besar dalam waktu yang

singkat, memerlukan jumlah pelarut yang lebih sedikit dibandingkan dengan

metode lain dan kondisi operasinya pada suhu 25oC sesuai dengan sifat tanin yang

mudah untuk teroksidasi pada suhu tinggi. Kemudian dilakukan isolasi dengan

kromatografi lapis tipis kualitatif dan preparative untuk memperoleh kemurnian

senyawa tanin yang tinggi. Identifikasi senyawa tanin dilakukan dengan

spektofotometri UV-Vis


4

1.2 Rumusan Masalah 1. Eluen apakah yang paling baik dalam pemisahan ekstrak kasar senyawa tanin

dari daun belimbing wuluh (A. bilimbi ) dengan kromatografi lapis tipis untuk

memperoleh kadar inhibisi Xantin Oksidase dan kandungan tanin tertinggi?

2. Bagaimana pengaruh kadar tanin terhadap kadar inhibisi dalam menghambat

xanthin oksidase?

3. Jenis senyawa tanin apa yang terdapat dalam ekstrak daun belimbing wuluh

dari hasil pemisahan dengan kromatografi lapis tipis?

1.3 Tujuan1. Menentukan eluen terbaik dalam pemisahan ekstrak kasar senyawa tanin dari

daun belimbing wuluh (A. bilimbi ) dengan kromatografi lapis tipis untuk

memperoleh kadar inhibisi Xantin Oksidase dan kandungan tanin tertinggi

pada eluen – eluen tersebut.

2. Mengetahui pengaruh kadar tanin terhadap kadar inhibisi dalam menghambat

xanthin oksidase.

3. Mengetahui jenis senyawa tanin yang terdapat dalam ekstrak daun belimbing

wuluh dari hasil pemisahan dengan kromatografi lapis tipis.

1.4 Batasan Penelitian1. Metode ekstraksi yang digunakan untuk memperoleh ekstrak kasar senyawa

tanin dari daun belimbing wuluh adalah sonikasi dengan pelarut etanol 70%.

2. Ekstraksi dilakukan dengan menggunakan alat ultrasonic cleaner pada

frekuensi 42 kHz selama 50 menit.

3. Penguapan dilakukan pada suhu 60oC menggunakan rotary evaporator.

4. Daun belimbing wuluh yang digunakan adalah daun belimbing wuluh muda.

5. Metode pengujian kualitatif senyawa tanin dilakukan untuk mengidentifikasi

jenis senyawa tanin dengan menggunakan metode yang dilakukan oleh

Sa’adah (2010).

6. Isolasi senyawa tanin dari ekstrak kasar daun belimbing wuluh menggunakan

metode kromatografi lapis tipis preparatif. Eluen terbaik diidentifikasi dengan

metode kromatografi analitik, dimana variasi eluen yang digunakan adalah

toluen : etil asetat (3:1), forestall (asam asetat glasial : akuades : HCl pekat)


5

(30:10:3), n-butanol : asam asetat : air (4:1:5), metanol : etil asetat (4:1), etil

asetat : kloroform : asam asetat 10% (15 : 5 : 2).

7. Metode pengujian kuantitatif senyawa tanin yang digunakan adalah metode

stiansy test

8. Metode uji aktivitas inhibisi enzim yang digunakan sesuai dengan mengukur

absorbansi menggunakan spektrofotometer.

9. Penelitian dilakukan di Laboratorium Dasar Proses Kimia dan Laboratorium

Bioproses Departement Teknik Kimia, Fakultas Teknik Universitas

Indonesia, Depok, Jawa Barat, Indonesia.

1.5 Sistematika PenulisanSistematika penulisan seminar ini adalah sebagai berikut:

BAB I : PENDAHULUAN

Bab I ini berisi tentang latar belakang penelitian dan penulisan, perumusan

masalah, tujuan penelitian dan sistematika penulisan.

BAB II : TINJAUAN PUSTAKA

Bab ini berisi tentang tinjauan pustaka yang dijadikan dasar penelitian serta

ringkasan mengenai penelitian sebelumnya.

BAB III : METODOLOGI PENELITIAN

Bab ini berisi diagram alir penelitian, prosedur penelitian, teknik pengambilan

data serta teknik analisa yang akan dilakukan.


BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Asam Urat

Asam urat adalah produk akhir atau produk buangan yang dihasilkan dari

metabolisme atau pemecahan purin yang berbentuk kristal - kristal. Asam urat

sebenarnya merupakan antioksidan dari manusia dan hewan, namun apabila dalam

jumlah berlebihan dalam darah akan mengalami pengkristalan dan dapat

menimbulkan hiperuresemia dan selanjutnya menimbulkan gout atau penyakit

asam urat (McCrudden Francis H, 2000) yang akan dijelaskan pada bagian

selanjutnya. Kadar asam urat dapat diketahui melalui hasil pemeriksaan darah.

Kadar asam urat normal dalam darah yaitu 3,6 – 8,2 mg/dl pada laki – laki dan 2,3

– 6,1 pada perempuan (E.Spicher, Jack Smith W. 1994).

2.1.1 Sifat dan struktur kimia asam uratAsam urat merupakan asam lemah dengan pKa 5,8. Asam urat cenderung

berada di cairan plasma ekstraseluler dan membentuk ion urat pada pH 7,4. Ion

urat itu sendiri mudah disaring dari plasma. Kadar asam urat di dalam darah

tergantung usia dan jenis kelamin dimana kadarnya akan meningkat dengan

bertambahnya usia dan gangguan fungsi ginjal. Di dalam mikroskop kristal asam

urat mempunyai bentuk jarum – jarum renik yang tajam, berwarna putih dan

berbau busuk dan merupakan senyawa organik semi solid yang terdiri dari

carbon, nitrogen, oxygen dan hydrogen dengan formula C5H4N4O3 seperti yang

terlihat pada gambar struktur kimia asam urat berikut.

6

Gambar 2. 1. Struktur Kimia Asam Urat

Sumber: http://obatasamurat777.wordpress.com/

7

http://obatasamurat777.wordpress.com/

8

2.1.2 Metabolisme Asam UratPada manusia, asam urat adalah hasil akhir degradasi purin. Purin yang

menghasilkan asam urat dapat berasal dari tiga sumber yaitu dari makanan dimana

secara alamiah purin terdapat dalam tubuh kita dan dijumpai pada semua makanan

dari sel hidup yakni makanan dari tanaman seperti sayur, buah, kacang –

kacangan ataupun hewan seperti daging, jeroan dan ikan sarden. Sumber purin

lainnya yaitu melalui konversi asam nukleat jaringan menjadi nukleotida purin,

dan sintesis de novo basa purin (Sukandar, 2008). Selanjutnya purin akan

dioksidasi menjadi Hypoxanthine dan xanthine oleh enzim xanthine oxidase dan

kemudian Hypoxanthine dan xanthine juga dioksidasi oleh enzim xanthine

oxidase menjadi asam urat seperti yang ditunjukkan oleh gambar 2.2 berikut.

Metabolisme nukletida purin dengan konversi asam nukleat dimulai dari

pelepasan asam nukelat dari pencernaan asam nukleat dan nukleoprotein yang

akan diurai menjadi mononukleotida oleh enzim ribonuklease, deoksiribonuklease

dan polinuklease (Rodwell, 2003).

Selanjutnya enzim nukleotidase dan fosfatase menghidrolisis mononukleotida

menjadi nukleosida yang kemudian dapat diserap atau diurai lebih lanjut oleh

enzim fosforilase intestinal menjadi basa purin serta pirimidin. Basa purin

kemudian akan teroksidasi menjadi Hipoxantin Universitas Indonesia

Gambar 2. 2. Metabolisme Purin(Wells, DiPiro, Schwinghammer, & Hamilton, 2006)

9

Enzim xantin oxidase (XO) berperan penting dalam katabolisme atau

pemecahan purin menjadi asam urat. XO merupakan suatu komplek enzim yang

terdiri atas 1332 residu asam amino, molybdenum (HO2SMo), FAD dan Fe2S2

sebagai pusat reaksi redoks dengan bobot molekul sebesar 275000 dalton.

Enzim xantin oxidase mengkatalis oksidasi hipoxantin menjadi xantin lalu

menjadi asam urat yang berperan penting pada penyakit gout. Pada saat bereaksi

dengan xantin untuk membentuk asam urat, atom oksigen ditransfer dari

molybdenum ke xantin. Berikut adalah skema metabolisme nukleotida purin

berdasarkan penjelasan diatas.

.


Fosforilase di usus

Nukleotidase dan fosfatase

Polinukleotidase di usus

Nuklease di getah pankreas

Enzim proteolitik di usus

Hipoxantin Inosin

Asam urat

Xantin

Guanin

AdenosinGuanosin

Basa Purin dan Pirimidin

Nukleosida

Mononukleotida

Nukleotida

Asam nukleat

Asam nukleat (dimakan dalam bentuk nucleoprotein dan dari penghancuran sel –

sel tubuh)

Gambar 2. 3. Skema Metabolisme PurinSumber: (Wells, DiPiro, Schwinghammer, & Hamilton, 2006)

10

Dari skema di atas, proses pembentukan asam urat sebagian besar diperoleh

dari metabolisme nukleotida purin, guanosine monophosphate (GMP), inosine

monophosphate (IMP), dan adenosine monophosphate (AMP). Enzim xantin

oxidase mengkatalis hipoxantin dan guanine menjadi produk akhir asam urat.

Proses katabolisme purin menjadi asam urat yaitu, pertama – tama adenosin akan

mengalami deaminasi menjadi inosin oleh enzim adenosine deaminase.

Fosforilisis ikatan N-glikosidat inosin dan guanosin yang dikatalisis oleh enzim

purin fosforilase, akan melepas senyawa ribose-1 fosfat dan basa purin.

Hipoxantin dan guanin selanjutnya membentuk xantin yang dikatalisis oleh

masing – masing enzim xantin oksidase dan guanase. Kemudian xantin

teroksidasi menjadi asam urat dalam reaksi kedua yang dikatalisis oleh enzim

xantin oxidase (Rodwell, 2003)

Pada mamalia selain primata berderajat tinggi, asam urat akan dipecah oleh

enzim urikase dan akan membentuk produk akhir yaitu alantoin yang mempunyai

sifat sangat larut dalam air. Oleh karena manusia tidak memiliki enzim urikase,

hal ini tidak terjadi pada manusia, itulah yang menyebabkan produk akhir dari

katabolisme purin berupa asam urat (Rodwell, 2003)

Menurut Siswoyo (2005) walaupun proses sintesis dan degradasi nukleotida

purin terjadi pada semua jaringan, namun proses pembentukan asam urat terjadi di

jaringan yang memiliki banyak enzim xantin oksidase, yang terutama terjadi di

hati dan usus halus.

2.2 Hiperuresemia dan artritis gout

Hiperuresemia merupakan keadaan terjadi peningkatan kadar asam urat

darah di atas normal. Sedangkan artitris gout adalah gejala khas dari

hiperuresemia yang bersifat monoartikular atau menyerang satu sendi saja, yang

gejalanya dibarengi dengan pembengkakan, kemerahan, nyeri hebat, panas dan

gangguan gerak dari sendi yang terserang yang terjadi mendadak (akut) yang

mencapai puncaknya kurang dari 24 jam. Lokasi yang paling sering terkena pada

serangan pertama adalah sendi pangkal ibu jari kaki.


11

Batasan yang digunakan untuk menyatakan bahwa seseorang mengalami

hiperuresemia apabila kadar asam urat di atas 2 standar deviasi hasil laboratorium

pada keadaan normal. Dari data, didapatkan bahwa hanya 5-10% pria normal

mempunyai kadar asam urat diatas 7mg/dl dan sedikit dari pengerita gout yang

mempunyai kadar asam urat di bawah kadar tersebut (Putra, 2009).

Oleh karena itu batasan seseorang dapat dikatakan mengalami hiperuresemia

adalah kadar asam urat di atas 7mg/dl pada pria dan 6mg/dl pada perempuan

(putra, 2009). Apabila kadar asam urat tidak segera diturunkan atau dinormalkan,

maka asam – asam urat tersebut akan berkumpul dan mengkristal pada bagian –

bagian tubuh seperti persendian, tendon, dan juga jaringan – jaringan disekitarnya

(Kumar, Abas, & Fausto, 2007).

Kristal yang terbentuk tersebut disebut dengan monosodium urat. Kumpulan

dari kristalisasi urat ini disebut dengan tofi atau tofus yang apabila kadarnya

terlalu tinggi akan memacu timbulnya arthritis akut pada persendian atau

munculnya batu ginjal pada kandung kemih (Kumar, Abas,& Fausto, 2007).

2.2.1 Penyebab hiperuresemia

Hal – hal yang dapat menyebabkan peningkatan kadar asam urat atau asam urat

atau hiperuresemia yaitu pembentukan asam urat yang berlebihan, penurunan

eksresi asam urat atau dapat juga gabungan keduanya (Putra, 2009)

a. Pembentukan asam urat yang berlebihan

Produksi asam urat biasanya meningkat apabila terjadi peningkatan

konsumsi purin yang kemudian akan meningkatkan frekuensi metabolisme

purin. Konsumsi alkohol, minuman yang mengandung fruktosa, daging

dan juga makanan laut dapat menyebabkan terjadinya peningkatan kadar

asam urat dalam tubuh karena eksresinya terhambat oleh pembuangan

kadar gula yang berlebihan melalui urin.

Selain faktor konsumsi purin, terjadinya ketidaknormalan dalam sistem

enzim yang mengatur metabolism purin juga dapat menyebabkan

overproduction asam urat. Ketidaknormalan dalam sistem enzim tersebut


12

yaitu peningkatan aktivitas enzim phorybosylpyrophosphatese (PRPP)

synthetase, akibat peningkatan enzim PRPP adalah pembentukan

nukleotida purin sehingga terjadi peningkatan produksi asam urat. Hal

lainnya disebabkan oleh kekurangan sebagian dari enzim HPRT. Enzim

HPRT adalah enzim yang mengubah basa purin menjadi nukleotida purin

dengan bantuan PRPP dalam proses pemakaian ulang dari metabolism

purin. Kekurangan enzim HPRT menyebabkan peningkatan produksi asam

urat (Putra, 2009).

Ada dua jalur yang dapat dilalui dalam sintesis asam urat yaitu De Novo

Pathway dimana purin disintesis dari bahan non-purin dan Salvage

Pathway dimana basa purin bebas didapatkan dari pemecahan asam

nukleat dari bahan – bahan diluar seperti yang telah dijelaskan

sebelumnya.

b. Penurunan eksresi asam urat

Sekitar dua per tiga asam urat yang dihasilkan oleh tubuh tiap harinya

dieksresikan melalui urin, sedangkan sisanya akan dieliminasi melalui

saluran gastrointestinal setelah degradasi enzimatik oleh bakteri usus.

Penurunan eksresi asam urat melalui urin menjadi dibawah kecepatan

produksinya menyebabkan hiperuresemia dan peningkatan kadar

monosodium urat (sukandar, 2008).

c. Kombinasi antara peningkatan produksi dan penurunan eksresi asam

urat

Salah satu contoh dimana peningkatan produksi asam urat terjadi

bersamaan dengan menurunnya sekresi asam urat adalah saat kita

mengonsumsi alkohol (etanol). Etanol meningkatkan produksi asam urat

dengan meningkatkan produksi asam laktat. Etanol juga meningkatkan

kadar plasma hipoxantin dan xantin dengan mempercepat degradasi

nukleotida adenin serta etanol dapat menyebabkan berkurangnya sekresi

asam urat dalam tubuh dengan menyebabkan dehidrasi.


13

2.2.2 Pengobatan untuk Hiperuresemia

Obat yang digunakan untuk menyembuhkan gout terdiri dari dua jenis yaitu

untuk mengobati serangan akut gout dan obat yang digunakan untuk penanganan

jangka panjang penyakit gout (Brunton, Lazo,& Parker, 2005). Untuk pengobatan

jangka panjang terdapat pilihan terapi non-farmakologi yaitu melalui penjagaan

pola makan dengan mengurangi konsumsi makan yang mengandung purin dalam

jumlah besar, menghindari alkohol, dan juga menurunkan berat badan apabila

mengalami obesitas.

Untuk penanganan farmakologi gout jangka panjang, pembentukan asam urat

dari metabolisme purin dapat dikendalikan dengan menggunakan inhibitor enzim

xantin oksidase seperti allopurinol ataupun menggunakan agen – agen urikosurik

seperti probenesid atau sulfinpirazon untuk meningkatkan eksresi asam urat

melalui urin agar tidak menimbulkan hiperuresemia. Sedangkan serangan gout

akut dapat diobati dengan menggunakan NSAIDs atau Non-Steroidal Anti-

Inflammatory Drugs dosis tinggi yang digunakan untuk mengobati peradangan

atau inflmasi (Brunton, Lazo,& Parker, 2005).

2.2.2.1. Pengobatan serangan gout akut

Beberapa jenis NSAIDs dinyatakan efektif dalam mengobati serangan gout

akut dan harus digunakan dalam dosis tinggi selama 3-4 hari yang kemudian

dilanjutkan dengan penggunaan dosis yang lebih rendah selama 7-10 hari.

Beberapa NSAIDs yang telah mendapat persetujuan dari FDA untuk mengobati

serangan gout yaitu kolkisin, indomethacin, naproxen, dan sulindac. Aspirin yang

merupakan obat anti-inflamasi standar tidak dapat digunakan untuk mengobati

kasus gout, karena aspirin akan menginhibisi eksresi kristal urat pada dosis

rendah, meningkatkan resiko terjadinya gagal ginjal pada dosis yang lebih tinggi

dan bahkan menghambat kerja agen urikosurik yang lainnya.

Glucocorticoids dan corticotropin merupakan contoh agen anti-inflamasi

yang dapat bekerja dengna baik pada kasus gout. Dosis yang tinggi biasanya

digunakan pada awal yaitu sekitar 30 sampai 60mg/hari selama tiga hari dan


14

dikurangi secara perlahan – lahan, 10mg per hari selama 14 hari, bergantung pada

jumlah sendi yang terserang gout (Brunton, Lazo,& Parker, 2005).

Kolkisin juga merupakan salah satu contoh NSAIDs yang sering digunakan

dalam pengobatan gout akut. Kolkisin merupakan senyawa alkaloid yang diisolasi

dari tanaman krokus, Colchicum autumnale (Katzung, 2006). Ekstrak terhadap

tanaman – tanaman yang mengandung kolkisin telah dilakukan sejak abad ke-

enam. Saat ini, kolkisin termasuk dalam kategori pengobatan alternatif kedua

karena memiliki efek samping yang cukup tinggi dan berbahaya jika

dibandingkan dengan jenis – jenis pengobatan baru lainnya, terutama pada dosis

tinggi (Brunton, Lazo, &Parker, 2005). Kolkisin merupakan senyawa alkaloid

dengan rumus kimia C22H25NO6 seperti yang terlihat pada gambar berikut:

Agar efektif, kolkisin biasanya diberikan sesegera mungkin pada saat gejala

timbul karena pada perkembangan gejala berikutnya kolkisin akan kurang efektif.

biasanya, dosis awal yang diberikan adalah 1mg yang kemudian diikuti dengan

0.5mg setiap 2 – 3 jam selama serangan akut sampai nyeri sendi mereda, pasien

mengalami efek samping gastrointestinal jika dosis maksimum 6mg diberikan

(Johnstone, 2005)

Efek samping kolkisin adalah mual dan muntah, diare dan nyeri abdomen

yang terjadi pada 80% pasien. Komplikasi utama terapi dengan menggunakan

obat ini adalah dehidrasi. Efek samping lain adalah kejang, depresi nafas, hepatik


Gambar 2. 4. Struktur Kimia KolkisinSumber: Brunton et al, 2005

15

dan nekrosis otot, kerusakan ginjal, demam, granulositopenia, anemia aplastik,

koagulasi intravaskuler yang menyebar dan alopesia. (Johnstone, 2005)

2.2.2.2 Pengobatan Gout Kronis dengan Inhibitor Xantin OksidaseAllupurinol merupakan senyawa yang dapat menginhibisi enzim xantin

oksidase sehingga dapat mencegah pembentukan asam urat dari xantin dan

hipoxantin. Mesikpun underexrection merupakan penyebab yang lebin umum

pada hiperuresemia dibandingkan dengan overproduction, allopurinol merupakan

salah satu langkah pengobatan yang efektif (Katzung,2006). Selain mengontrol

gejala, obat ini juga melindungi fungsi ginjal (Johnstone, 2005).

Allupurinol mengalami konversi di hati menjadi metabolit aktif oksipurinol,

oksipurinol dapat menghambat enzim xantin oksidase. Mereka bekerja pada

konsentrasi rendah sebagai inhibitor non kompetitif pada konsentrasi tinggi.

Keberadaan oksipurinol sebagai hasil reaksi antara allopurinol dan xantin oksidase

memberikan efek inhibisi yang lebih besar dibandingkan dengan allopurinol itu

sendiri (Johnstone, 2005).

Dalam keadaan tanpa allopurinol, produk purin utama yang terkandung

dalam urin adalah asam urat. Dengan adanya inhibisi enzim xantin oksidase,

produk – produk tersebut akan menjadi hipoxantin, xantin dan juga asam urat,

dimana ketiga senyawa ini memiliki kelarutan yang berbeda di dalam plasma

darah sehingga terjadi peningkatan eksresi purin tanpa perlu membebani saluran

urin dengan asam urat yang berlebih. Terlepas dari konsentrasinya dalam tubuh

yang meningkat, xantin dan hipoxantin dapat dieksresikan secara efektif tanpa

terjadinya penumpukan pada jaringan (Brunton, Lazo, &Parker, 2005).

Pada pasien dengan fungsi ginjal normal, dosis awal allopurinol tidak boleh

melebihi 300mg/24 jam. Biasanya pasien diberikan dosis 100mg/hari dan dosis

selanjutnya dititrasi sesuai dengan kebutuhan. Respon terhadap allopurinol dapat

dilihat sebagai penurunan kadar asam urat dalam serum darah pada 2 hari setelah

terapi dimulai dan maksimum setelah 7-10 hari (Johnstone, 2005)

Allopurinol dapat memperpanjang durasi serangan akut atau mengakibatkan

serangan lain sehingga allopurinol hanya diberikan jika serangan akut telah Universitas Indonesia

16

mereda terlebih dahulu. Efek samping dijumpai pada 3 – 5% pasien sebagai reaksi

alergi atau hipersensitivitas. Sindrom toksisitas allopurinol dapat berupa ruam,

demam, pemburukan insufisiensi ginjal, vaskulitis dan bahkan kematian, dimana

sindrom ini lebih banyak dijumpai pada pasien lanjut usia. Banyak pasien

mengalami penurunan fungsi ginjal jika dosis alupurinol terlalu tinggi (Johnstone,

2005).

2.2.2.3 Pengobatan dengan agen – agen urikosurik

Kebanyakan pasien dengan hiperuresemia yang disebabkan oleh eksresi asam

urat yang menurun dapat diterapi dengan menggunakan obat urikosurik.

Urikosurik merupakan alternatif allopurinol yang berfungsi untuk meningkatkan

laju eksresi dari asam urat, terutama untuk pasien yang tidak tahan terhadap

allopurinol. Pada manusia, asam urat disaring, dieksresikan dan diserap kembali

oleh ginjal. Reabsorpsi merupakan faktor penting karena hanya 10% asam urat

yang disaring yang akan dieksresikan. (Brunton, Lazo, &Parker, 2005).

Tahapan pertama dari reabsorbsi asam urat adalah pengambilan cairan

tubular oleh suatu transporter yang akan menukar asam urat dengan suatu anion.

Senyawa – senyawa yang bersifat urikosurik akan melakukan inhibisi terhadap

proses transportasi asam urat dan anion. Namun karena transportasi ini bersifat

dua arah, maka inhibisi yang terjadi juga dapat berlangsung dua arah, bergantung

pada konsentrasi obat yang digunakan. Untuk mengurangi eksresinya, biasanya

digunakan dosis yang rendah. Sedangkan untuk memicu terjadinya eksrese

digunakan dosis yang tinggi (Brunton, Lazo, &Parker, 2005). Contoh obat yang

tergolong urikosurik adalah probenesid dan sulfiniprazon.

a. Probenesid

Obat ini secara kompetitif menghambat reabsorbsi asam urat pada tubulus

proksimal sehingga meningkatkan eksresi asam urat dan mengurangi konsentrasi

asam urat dalam plasma darah (Brunton, Lazo, &Parker, 2005). Probenesid

merupakan turunan dari asam benzoat yang larut dalam minyak dengan struktur

kimia sebagai berikut:


17

Gambar 2. 5. Struktur Kimia ProbenesidSumber: Brunton et al, 2005

Probenesid dapat terabsorbsi sepenuhnya setelah konsumsi secara oral.

Konsentrasi puncaknya dalam tubuh akan terjadi dalam 2 – 4 jam. Dalam

penerapannya dalam mengobati gout, dosis yang digunakan adalah 250 mg

sebanyak dua kali sehari. Obat ini akan meningkatkan besarnya kadar asam urat

yang dieksresikan melalui urin. Efek samping probenesid yang paling sering

dijumpai adalah gangguan saluran cerna, nyeri kepala dan reaksi alergi (Katzung,

2006)

b. Sulfiipirazon

Sulfiniprazon merupakan senyawa yang diturunkan dari phenylbutazone yang

merupakan salah satu jenis NSAIDs. Meskipun demikian, senyawa ini tidak

memiliki sifat anti-inflamasi yang tinggi, melainkan efek urikosurik yang baik

(Brunton, Lazo, &Parker 2005).

Sulfiniprazon mencegah dan mengurangi kelainan sendi dan tofi pada

penyakit gout kronik berdasarkan hambatan reabsorbsi tubular asam urat.

Sulfiniprazon kurang efektif menurunkan kadar asam urat dibandingkan dengan

allopurinol dan tidak berguna mengatasi serangan gout akut melainkan dapat

meningkatkan frekuensi serangan pada tahap awal. Dosis yang diberikan kepada

pasien penderita gout biasanya 100 – 200 mg/hari selama 2 kali sehari,

ditingkatkan sampai 400 – 800 mg/hari, kemudian dikurangi sampai dosis efektif

minimal. Efek samping yang mungkin ditimbulkan adalah gangguan saluran cerna

dan alergi.


18

2.3 Pengetahuan tentang Daun Belimbing WuluhBelimbing wuluh merupakan tanaman yang termasuk dari keluarga

oxalidaceae. Belimbing wuluh (A. Bilimbi L.) dikenal sebagai tanaman

pekarangan yang berbunga sepanjang tahun. Belimbing wuluh memiliki pohon

kecil dengan tinggi mencapai 10 m dengan batang yang tidak begitu besar dan

mempunyai garis tengah hanya 30 cm. belimbing wuluh ditanam sebagai pohon

buah, ada yang tumbuh secara liar dan kebanyakan berada di daerah dataran

rendah dengan ketinggian 500 meter di atas permukaan laut (Arland, 2006).

Belimbing wuluh mempunyai batang kasar berbenjol – benjol, percabangan

sedikit, arahnya condong ke atas, cabang muda berambut halus seperti beludru,

warnanya coklat muda. Daun belimbing wuluh berupa daun majemuk menyirip

ganjil dengan 21 – 45 pasang anak daun. Anak daun bertangkai pendek,

bentuknya bulat seperti telur sampai jorong, ujung runcing, pangkal membundar,

tepi rata, panjang 2 -10 cm, lebar 1 -3 cm, warnanya hijau, permukaan berwarna

hijau muda. Bunga belimbing wuluh kecil – kecil berbentuk bintang warnanya

ungu kemerahan, berkelompok, keluar dari batang atau percabangan yang besar.

Buah belimbing wuluh berbentuk bulat lonjong bersegi, panjang sekitar 4 -6 cm,

warnanya hijau kekuningan, bila sudah masak banyak mengandung air dan

rasanya asam seperti yang terlihat dari gambar 2.6 berikut.


Gambar 2. 6. Tanaman Belimbing WuluhSumber: Masithah, 2006

19

Klasifikasi ilmiah tanaman belimbing wuluh sebagai berikut (Dasuki, 1991):

Kingdom : Plantae (Tumbuhan)

Subkingdom : Tracheobionta (Berpembuluh)

Superdivisio : Spermatophyta (Menghasilkan biji)

Divisio : Magnoliophyta (Berbunga)

Kelas : Magnoliopsida (Berkeping dua/ dikotil)

Sub kelas : Rosidae

Ordo : Geraniales

Familia : Oxalidaceae

Genus : Averrhoa

Spesies : Averrhoa bilimbi L.

2.3.1 Manfaat Daun Belimbing Wuluh

Belimbing wuluh (A. bilimbi L) banyak ditanam sebagai pohon buah.

Tanaman asal Amerika tropis ini dapat digunakan untuk mengobatai berbagai

macam penyakit. Orang mengambil manfaat belimbing wuluh selama ini hanya

sebagai sirup, manisan atau bumbu masak, padahal secara tradisional tanaman ini

banyak digunakan untuk mengatasi berbagai penyakit seperti batuk, diabetes,

rematik, gondongan, sariawan, sakit gigi, gusi berdarah, jerawat sampai tekanan

darah tinggi, selain itu juga bisa menyembuhkan kelumpuhan, memperbaiki

fungsi pencernaan dan radang rectum (Arland, 2006).

Daun belimbing wuluh digunakan masyarakat aceh sebagai penyedap rasa

yang disebut asam sunti, selain itu mereka juga menggunakan air belimbing

wuluh yang diperoleh dari proses pembuatan asam sunti untuk mengawetkan ikan

dan daging (Abdul, 2008). Arifiyani (2007) menyatakan bahwa air daun

belimbing wuluh dapat digunakan mengobati penyakit stroke karena ekstrak daun

belimbing wuluh ini mengandung senyawa tanin, selain itu daun belimbing wuluh Universitas Indonesia

20

dapat dimanfaatkan sebagai obat sakit perut, rematik, perotitik dan obat batuk.

Daun belimbing wuluh berkhasiat untuk mengurangi rasa sakit atau nyeri dan

pembunuh kuman serta dapat menurunkan kadar gula darah (Arland, 2006). Daun

belimbing wuluh dapat melancarkan pengeluaran empedu, anti radang, dan pereda

nyeri (analgesik) (Dalimarta, 2006).

2.3.2 Kandungan Kimia Daun Belimbing Wuluh

Arland (2006) menyatakan bahwa daun belimbing wuluh mengandung

senyawa metabolit sekunder diantaranya senyawa tanin, selain itu daun belimbing

wuluh juga mengandung sulfur dan asam format. Fahrani (2009) menunjukkan

bahwa ekstrak daun belimbing wuluh mengandung flavonoid, saponin dan tanin.

Dalimatra (2006) menjelaskan bahwa di dalam daun belimbing wuluh selain tanin

juga mengandung peroksidase, kalsium oksalat dan kalium sitrat. Bahan aktif

pada daun belimbing wuluh yang dapat dimanfaatkan sebagai obat adalah tanin.

2.4 TaninTanin merupakan suatu nama deskriptif umum untuk satu grup substansi

fenolik polimer yang mampu mempresipitasi gelatin dari cairan, suatu sifat yang

dikenal sebagai astringensi. Tanin hampir ditemukan di setiap bagian dari

tanaman yaitu kulit kayu, daun, buah dan akar (Hargerman, 1998). Tanin dibentuk

dengan kondensasi turunan flavan yang ditransportasikan ke jaringan kayu dari

tanaman, tanin juga dibentuk dengan polimerisasi quinon (Anonymous, 2005).


Gambar 2. 7. Struktur Tanin (Robinsson, 1995)

21

Berdasarkan gambar yang terlihat di atas, secara strukturan tanin merupakan

suatu senyawa fenol yang memiliki berat molekul besar yang terdiri dari gugus

hidroksi dan beberapa gugus seperti karboksil untuk membentuk kompleks kuat

yang efektif dengan protein dan beberapa makromolekul (Horvart, 1981). Sebagai

salah satu tipe dari senyawa metabolit sekunder, tanin mempunyai karakteristik

sebagai berikut (Giner-Chavez, 2011):

- Senyawa oligopolimer dengan satuan struktur yang bermacam – macam

dengan gugus fenol bebas.

- Berat molekul antara 500 – 20000

- Larut dalam air, dengan pengecualian beberapa struktur yang mempunyai

berat molekul besar

- Mampu berkaitan dengan protein dan terbentuk kompleks tanin protein

yang larut dan tidak larut.

Secara kimia terdapat dua jenis tanin yang tersebar tidak merata dalam dunia

tumbuhan yaitu tanin terkondensasi (Proantosianidin) dan tanin terhidrolisis

(Hydrolizable tannin) (Harborne, 1987). Kedua golongan tanin menunjukkan

reaksi yang berbeda dalam larutan garam Fe (III). Tanin terkondensasi

menghasilkan warna hijau kehitaman sedangkan tanin terhidrolisis memberikan

warna biru kehitaman (Etherington, 2002).

2.4.1 Tanin Terkondensasi

Tanin terkondensasi secara biosintesis dapat dianggap terbentuk dengan cara

kondensasi katekin tunggal (galokatekin) yang membentuk senyawa dimer dan

kemudian oligopolimer yang lebih tinggi. Proantosianidin merupakan nama lain

dari tanin terkondensasi karena jika direaksikan dengan asam panas, beberapa

ikatan karbon penghubung akan terputus menjadi monomer antosianidin

(Harborne, 1987).

Proantosianidin didefinisikan sebagai oligo atau polimer flavonoid (flavan-3-

ol atau flavan-3-4-diol), dimana ikatan C-C tidak mudah untuk dihidrolisis

(Etherington, 2002) seperti yang terlihat pada gambar 2.8 dan 2.9 di bawah.

Proantosianidin lebih banyak terdistribusi daripada tanin terhidrolisis. Universitas Indonesia

22

Proantosianidin dapat dideteksi langsung dalam jaringan tumbuhan hijau dengan

mencelupkan ke dalam HCl 2M mendidih selama setengah jam. Bila terbentuk

warna merah, maka ini merupakan bukti adanya senyawa tersebut (Harborne,

1987).

2.4.2 Tanin Terhidrolisis

Tanin terhidrolisis merupakan molekul dengan poliol (umumnya D-glikosa)

sebagai pusatnya. Tanin terhidrolisis terbentuk dari proses pecahnya karbohidrat

dan asam fenolik oleh asam lemah atau basa lemah (Hagerman, 2008). Gugus

hidroksi pada karbohidrat sebagian atau seluruhnya teresterifikasi dengan gugus

karboksil pada asam gallat (gallotanin) atau asam ellagat (ellaginatin). Tanin

terhidrolisis biasanya sedikit terdapat dalam tanaman (Giner-Chavez, 2001).

2.4.2.1 Gallotanin

Gallotanin terbentuk dari asam gallat dan gula, biasanya glukosa. Sifat fisik

dari gallotanin berupa polimer amorf, berwarna putih kekuningan, mempunyai

bau spesifik, dapat larut dalam air, gliserol dan sangat larut dalam alkohol dan

aseton. Gallotanin tidak larut dalam benzene, kloroform, eter, petroleum eter,

karbon disulfida dan karbon tetraklorida (Gohen, 1976).

Sifat kimia dari gallotanin adalah berwarna coklat apabila terkena cahaya,

dengan albumin, tepung, gelatin, alkaloid dan garam metalik memberikan

endapan yang tidak larut, sedangkan dengan FeCl3 memberikan warna biru

kehitaman. Pada suhu 215oC akan terdekomposisi menjadi piragalol dan CO2

(Tyler, 1947). Universitas Indonesia

Gambar 2. 8. Struktur Flavan-3,4-diol (Hagermen, 1998)

Gambar 2. 9. Struktur Flavan-4-ol (Hagerman, 1998)

23

Asam gallat (3,4,5 trihidroksibenzoat) merupakan senyawa turunan dari

aromatik karboksilat dengan berat molekul 170.12 mempunyai titik didih 200oC,

titik leleh 110oC, sedikit larut dalam air panas, alkohol, etil asetat dan gliserol.

2.4.2.2 Ellagitanin

Ellagitanin terbentuk dari dua molekul asam gallat melalui reaksi oksidasi

(Fiesel, 1961). Hidrolisis dengan asam kuat akan menghasilkan asam ellagat.

Asam ellagat memberikan reaksi warna spesifik dengan adanya asam nitrit

(HNO2). Reaksi ini merupakan metode yang penting dalam penentuan ellagitanin

(Bate, 1972).

Dalam penentuan ellagitanin diperlukan reaksi warna dengan asam nitrat

dalam lingkungan nitrogen, dimana akan memberikan warna merah yang lama

kelamaan berubah menjadi biru. Bila ada udara di lingkungannya maka lama

kelamaan akan berubah menjadi kuning (Bate, 1972).

Assam ellagat meleleh pada 360oC, tidak larut dalam eter, sedikit larut dalam

air dan larut dalam alkali/basa dengan warna kuning yang kuat. (Fieser, 1961).

2.4.3 Tanin dan Efek Inhibisi enzim Xanthin Oksidase

Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan oleh Owen dan Johns (1999),

Analisis kinetika inhibisi dengan plot Lineweaver-Burks menunjukkan bahwa

ekstrak tanaman yang mengandung senyawa tanin dan fenol lainnya memiliki

aktivitas inhibisi enzim xanthin oksidase dengan mengikat enzim bebas ataupun

kompleks enzim substrat (Owen&Johns, 1999). Dari penelitian yang dilakukan,

disimpulkan bahwa kandungan tanin dan senyawa fenolik lainnya pada suatu

tanaman memiliki peranan penting dalam inhibisi enzim xanthin oksidase.

2.5 Metode Ekstraksi Tanin dari Daun Belimbing WuluhEkstraksi merupakan suatu proses selektif yang dilakukan untuk mengambil

zat – zat yang terkandung dalam suatu campuran dengan menggunakan pelarut

yang sesuai. Metode pemisahan ini bekerja berdasarkan prinsip kelarutan, yaitu

pelarut polar akan melaurtkan zat polar dan sebaliknya (Khopkar, 2002). Proses

ini merupakan langkah awal penting dalam penelitian tanaman obat, karena


24

preparasi ekstrak kasar tanaman merupakan titik awal untuk isolasi dan pemurnian

komponen kimia yang terdapat pada tanaman. Pemisahan zat dari suatu campuran

relatif mudah dilakukan jika zat tersebut larut dalam pelarut yang digunakan,

sedangkan zat lain yang tidak diinginkan tidak ikut larut. Dengan demikian, hasil

ekstraksi yang diperoleh bergantung pada kandungan ekstrak yang terdapat dalam

sampel dan jenis pelarut yang digunakan (Khopkar, 2002). Untuk mendapatkan

tanin dari suatu tanaman, kita dapat menggunakan beberapa metode ekstraksi,

seperti maserasi, perkolasi, soxhlet, metode microwave, dan sonikasi.

Salah satu prosedur klasik untuk memperoleh kandungan senyawa organik

dari jaringan tumbuhan ialah maserasi. Metode maserasi digunakan untuk

mengekstrak komponen, baik yang tidak tahan panas maupun yang tahan panas.

Metode ini dilakukan hanya dengan merendam sampel dalam suatu pelarut

dengan lama waktu tertentu, biasanya selama 24 jam tanpa menggunakan

pemanasan. Kelebihan metode maserasi adalah metodenya yang sederhana, tidak

menggunakan peralatan rumit, relatif murah, serta dapat menghindari kerusakan

komponen senyawa yang tidak tahan panas. Kelemahan dari metode ini adalah

membutuhkan waktu yang lama dan penggunaan pelarut yang tidak efisien

(Meloan, 1999). Perendaman bahan dalam pelarut dapat meningkatkan

permeabilitas dinding sel dalam tiga tahapan yaitu masuknya pelarut dalam

dinding sel tanaman dan membengkakan sel, kemudian senyawa yang terdapat

dalam dinding sel akan terlepas dan masuk ke dalam pelarut, diikuti oleh difusi

senyawa yang terekstraksi oleh pelarut keluar dari dinding sel tanaman (Supriadi,

2008). Umumnya pelarut ditambahkan sekurang kurangnya sampai seluruh

sampel dapat terendam.

Dari metode – metode tersebut, metode sonikasi merupakan yang paling

sederhana dan cepat sehingga lebih cocok digunakan untuk pengujian dasar yang

dilakukan pada penelitian ini.

Berdasarkan fasa yang terlibat terdapat dua jenis ekstraksi, yaitu ekstraksi

cair – cair dan ekstraksi padat – cair. Proses ekstraksi padat cair sangat

dipengaruhi oleh waktu ekstraksi, suhu yang digunakan, pengadukan dan


25

banyaknya pelarut yang digunakan (Harborne, 1996). Perlakuan pendahuluan

untuk bahan padat dapat dilakukan dengan berbagai cara diantaranya dengan

pengeringan bahan baku sampai kadar air tertentu dan penggilingan untuk

mempermudah proses ekstraksi dengan memperbesar kontak antara bahan dan

pelarut (Harborne, 1996).

Pemilihan pelarut merupakan faktor yang sangat berpengaruh dalam

ekstraksi. Pelarut yang digunakan dalam ekstraksi harus dapat menarik komponen

aktif dari campuran. Hal – hal yang harus diperhatikan dalam pemilihan pelarut

adalah selektivitas, sifat pelarut, kemampuan untuk mengekstraksi, tidak bersifat

racun, mudah diuapkan dan harganya relatif murah (Gamse, 2002).

Umumnya tanin dapat diekstrak dari bagian – bagian tumbuhan tertentu

dengan menggunakan pelarut (Deny, 2007). Pelarut yang umum adalah aseton,

etanol maupun metanol dan secara komersial tanin dapat diekstraksi dengan

menggunakan pelarut air. Pengekstraksi tanin yang baik adalah campuran air

dengan pelarut organik misalnya metanol, etanol dan aseton berair (7:3) yang

mengandung asam askorbat. Penambahan asam askorbat dalam pelarut aseton

adalah untuk meminimumkan oksidasi tanin selama ekstraksi. Hal ini disebabkan

oksidator akan bereaksi terlebih dahulu dengan asam askorbat yang lebih mudah

teroksidasi (Abdurrohman, 2007).

Metode ekstraksi sonikasi memanfaatkan gelombang ultrasonik dengan

frekuensi rendah 20 – 40 kHz yang dapat mempercepat waktu kontak antara

sampel dan pelarut meskipun pada suhu ruang. Hal ini menyebabkan proses

perpindahan massa senyawa bioaktif dari dalam sel tanaman ke pelarut menjadi

lebih cepat. Sonikasi mengandalkan energi gelombang yang menyebabkan proses

kavitasi, yaitu proses pembentukan gelembung – gelembung kecil akibat adanya

transmisi gelombang ultrasonik untuk membantu difusi pelarut ke dalam dinding

sel tanaman (Ashley et al, 2001).

Pada sonikator, gelombang ultrasonik digunakan untuk membuat gelembung

kavitasi (cavitation bubbles) pada material larutan. Ketika gelembung pecah dekat

dengan dinding sel maka akan terbentuk gelombang kejut dan pancaran cairan


26

(liquid jets) yang akan membuat dinding sel pecah. Pecahnya dinding sel akan

membuat komponen di dalam sel keluar bercampur dengan larutan. Cara ekstraksi

ini biasanya lebih cepat dan lebih efisien dibandingkan dengan cara – cara

ekstraksi terdahulu (Cinta & Crovotto, 2005).

Faktor yang mempengaruhi proses ekstraksi sonikasi menurut Mandal et al,

2007 adalah:

Sifat pelarut dan volume

Pelarut harus memiliki selektivitas yang tinggi terhadap analit

dibandingkan komponen lain yang tidak diinginkan. Volume pelarut

harus cukup untuk memungkinkan matrik tanaman tercelup di dalam

pelarut selama waktu iradiasi. Biasanya volume optimum yang

digunakan adalah dengan rasio 10:1 (ml/mg) hingga 20:1 (ml/mg)

Waktu ekstraksi

Secara umum dengan meningkatnya waktu ekstraksi, jumlah analit

yang dapat diekstrak juga semakin meningkat meskipun degradasi

dari kualitas ekstrak mungkin terjadi. Biasanya waktu 15 – 20 menit

cukup untuk melakukan ekstraksi.

Kekuatan matriks

Material yang akan diekstrak biasanya memiliki ukuran yang berkisar

antara 100 µm – 2mm. bubuk halus dapat meningkatkan ekstraksi

karena adanya luas permukaan kontak yang lebih besar dan dapat

meningkatkan penetrasi gelombang mikro.

Temperature

Temperature yang meningkat dapat meningkatkan efisiensi ekstraksi.

Temperature yang berbeda dapat dihasilkan pada pelarut yang

berbeda.

2.6 Isolasi Senyawa Tanin Dari Ekstrak Kasar Daun Belimbing Wuluh

dengan Kromatografi Lapis Tipis

Kromatografi merupakan salah satu metode pemisahan yang didasarkan pada

distribusi differensial komponen – komponen yang dipisahkan antara 2 fase, yaitu


27

fase diam dengan permukaan yang luas dan fase gerak yang berupa zat cair yang

mengalir sepanjang fase diam. Komponen – komponen hasil pemisahan keluar

dari kolom pada waktu yang berbeda. Komponen yang tertahan lebih kuat di

dalam kolom akan keluar dari kolom dengan waktu yang lebih lama dibandingkan

komponen yang tidak tertahan dengan kuat atau bahkan tidak ditahan kolom sama

sekali (Sastrohamidjojo, 2007).

Kromatografi lapis tipis merupakan cara analisis cepat yang memerlukan

bahan yang sangat sedikit, baik penyerap maupun cuplikannya. KLT dapat

digunakan untuk memisahkan senyawa – senyawa yang sifatnya hidrofobik

seperti lipida – lipida dan hidrokarbon yang sukar dikerjakan dengan kromatografi

kertas. KLT juga dapat berguna untuk mencari eluen untuk kromatografi kolom,

analisis fraksi yang diperoleh dari kromatografi kolom, identifikasi senyawa

secara kromatografi dan isolasi senyawa murni skala kecil. Pelarut yang dipilih

untuk pengembang disesuaikan dengan sifat kelarutan senyawa yang dianalisis.

Bahan lapisan tipis seperti silica gel adalah senyawa yang tidak bereaksi dengan

pereaksi – pereaksi yang lebih reaktif seperti asam sulfat (Anonymous, 2008).

Identifikasi dari senyawa – senyawa yang terpisah pada lapisan tipis dapat

menggunakan harga Rf, meskipun harga Rf dalam lapisan tipis kurang tepat bila

dibandingkan pada kertas. Seperti halnya pada kertas, harga Rf pada lapisan tipis

didefinisikan sebagai berikut (Sastrohamidjojo, 2007):

Harga Rf = Jarak yang ditempuh senyawaJarak yangditempuh pelarut

Kromatografi lapis tipis dapat digunakan untuk tujuan kualitatif dan

preparatif. KLT kualitatif digunakan untuk menganalisis senyawa – senyawa

organik dalam jumlah kecil, menentukan pelarut yang tepat untuk pemisahan

dengan KLT preparative atau kromatografi kolom dan juga untuk

mengidentifikasi komponen penyusun campuran melalui perbandingan dengan

senyawa yang diketahui strukturnya.

Sedangkan KLT preparatif digunakan untuk memisahkan campuran senyawa

dari sampel dalam jumlah yang besar berdasarkan fraksinya, yang selanjutnya Universitas Indonesia

(2.1)

28

fraksi – fraksi tersebut dikumpulkan dan digunakan untuk analisis berikutnya

(Townshend, 1995).

Eluen yang dipilih disesuaikan dengan sifat kelarutan dan kepolaran senyawa

yang akan diisolasi. Plat yang digunakan pada kromatografi lapis tipis berbahan

silika gel karena bahan tersebut tidak bereaksi dengan pereaksi – pereaksi yang

lebih reaktif seperti asam sulfat (Anonymous, 2008).

Yuliani (2003) memisahkan senyawa tanin dari 3 daun jambu biji yang

berbeda dengan eluen toluen : etil asetat (3:1) menghasilkan 9 bercak dengan

harga Rf mulai dari 0,23 – 0,94. Ekstrak kedua juga menghasilkan 9 bercak

dengan harga Rf mulai dari 0,13 – 0,94 dan ekstrak ketiga hanya memberikan 5

bercak dengan harga Rf mulai dari 0,16 – 0,59. Penelitian yang dilakukan oleh

Nuraini (2002) adalah memisahkan senyawa tanin dengan menggunakan eluen

asam asetat glasial : air : asam klorida (30 : 10 : 3) menghasilkan harga R f 0,7.

Sedangkan Olivina (2005) mengelusi senyawa tanin dengan menggunakan eluen

etil asetat : metanol : asam asetat (6 : 14 :1) menghasilkan 2 bercak warna merah

muda dan jingga pada Rf 0,39 dan 0,53, serta Lidyawati (2006) mengelusi

senyawa tanin dengan eluen metanol : etil asetat (4:1).

Eluen – eluen yang telah digunakan pada penelitian – penelitian sebelumnya

yang telah dijelaskan diatas akan digunakan pada penelitian ini untuk diseleksi

eluen mana yang paling baik untuk mengisolasi senyawa tanin.

2.7 Uji Kualitatif dan Kuantitatif 2.7.1 Uji Fitokimia

Uji fitokimia senyawa tanin dapat dilakukan dengan menggunakan FeCl3,

senyawa ini digunakan untuk menentukan apakah sampel mengandung gugus

fenol. Adanya gugus fenol ditunjukan dengan warna hijau kehitaman atau biru tua

setelah ditambahkan FeCl3. Tanin sendiri merupakan senyawa polifenol. Hal ini

diperkuat dengan penelitian yang dilakukan oleh Harborne (1987) yang

mendeteksi senyawa fenol sederhana yaitu menambahkan ekstrak dengan larutan

FeCl3 1% dalam air yang menimbulkan warna hijau kehitaman. Terbentuknya


29

warna hijau kehitaman karena tanin akan membentuk senyawa kompleks dengan

ion Fe3+.

Uji fitokimia dengan menggunakan larutan formalin 3% dan HCl 1 N

merupakan uji awal untuk membedakan antara tanin katekol (tanin terkondensasi)

dan tanin galat (tanin terhidrolisis). Tanin katekol ditunjukkan dengan adanya

endapan merah muda jika ekstrak ditambah dengan formalin 1% dan HCl 1 N.

Tanin merupakan senyawa fenol sehingga dapat berkondensasi dengan

formaldehid. Hasil kondensasi tanin dengan formaldehid ditambahkan dengan

asam panas yaitu asam klorida (HCl), maka beberapa ikatan karbon – karbon

penghubung satuan terputus dan akan dibebaskan monomer antosianidin. Jika

dalam suatu sampel mengandung senyawa proantosianidin atau tanin katekol akan

terbentuk warna merah jika direaksikan dengan HCl (Harborne, 1987).

2.7.2 Uji Kuantitatif

2.7.2.1 Metode Lowenthal-Procter

Prinsip penentuan kadar tanin dengan metode Lowenthal-Proceter

berdasarkan jumlah gugus fenol pada tanin. Tanin termasuk golongan senyawa

yang memiliki gugus fenol, sehingga jumlah gugus fenol ini mewakili jumlah

tanin secara keseluruhan. Titrasi dengan kalium permanganat, gugus fenol akan

teroksidasi. Jumlah gugus fenol berbanding lurus dengan jumlah kalium

permanganat yang diperlukan untuk titrasi. Sebagai indikator redoks digunakan

larutan indigokarmin dan warna yang dihasilkan adalah kuning emas. Penentuan

kadar tanin dilakukan dengan menggunakan persamaan berikut (Sudarmadji,

1997):

Perhitungan: 1 ml KMnO4 0,1 N = 0.00416 gram tanin.

kadar tanin=(50 A−50 B ) x 0.00416

Sx100 %

dimana (A-B) adalah banyaknya KMnO4 yang diperlukan untuk titrasi (A

merupakan senyawa tanin dan B merupakan senyawa non tanin) serta S adalah

berat sampel. Universitas Indonesia

(2.2)

30

2.7.2.2 Metode Spektrofotometer UV-Vis

Spektroskopi UV-Vis merupakan suatu metode identifikasi gugus fungsi

dari sampel. Spektrum yang diabsorbsi oleh suatu senyawa adalah sejumlah sinar

yang diserap oleh suatu senyawa pada panjang gelombang tertentu.

Spektrofotometer UV-Vis dapat digunakan untuk mengidentifikasi jenis

senyawa tanin. Kedudukan gugus hidroksi fenol bebas pada inti tanin dapat

ditentukan dengan menambahkan pereaksi geser ke dalam larutan cuplikan dan

mengalami pergeseran puncak serapan yang terjadi. Metode ini secara tidak

langsung juga berguna untuk menentukan kedudukan gula atau metal yang terikat

pada salah satu gugus hidroksi fenol. Pereaksi geser yang biasa digunakan adalah

NaOMe/NaOH, NaOAc, H3BO3, AlCl3, dan HCl (Markham, 1988).

Penetapan kadar tanin dengan spektrofotometri ditetapkan oleh Price and

Butler untuk daun sorgum, metode ini didasarkan atas reaksi pembentukan warna

yaitu reduksi ion ferri menjadi ferro oleh senyawa tanin dan polifenolik lainnya,

diikuti dengan pembentukan kompleks ferrisianida dan ion ferro. Warna yang

terbentuk diukur absorbansinya dengan menggunakan spektofotometer pada

panjang gelombang 720 nm (Muhtadi, 1999).

Sumartha (2000) mengukur kadar tanin pada buah salak dengan

spektofotometer yaitu pada air ditambahkan sodium tungstat, asam posfomolibdat

dan asam posforat. Campuran direflux selama 2 jam dan didinginkan sampai 25oC

dan larutkan sampai 1L dengan air. Air ditambahkan sodium karbonat anhidrat,

dilarutkan pada suhu 70 – 80oC dan didingikan satu malam. Larutan standar

dibuat dengan melarutkan asam tanat dalam air. Siapkan larutan baru untuk setiap

determinasi (1 mL = 0.1 mg tanat). Larutan ditambahkan dengan reagen Folin-

Denis dan larutan Na2CO3 dan setelah 30 menit diukur dengan panjang gelombang

760 nm terhadap blank yang disesuaikan pada absorbansi 0. Penentuan kadar

tanin dapat dilakukan dengan kalkulasi berikut:

tanin sebagai asam tanat= mg asam tanat x pelarutan x100ml sampel diukur xberat sampel x100


(2.3)

31

2.7.2.3 Metode Stiansy Test

Metode kuantitaif untuk menentukan kadar tanin salah satunya adalah

Stiansy Test. Reaksi yang terjadi didasarkan pada kereaktifan struktur flavonoid

dari tanin terkondensasi terhadap formaldehida. Hasil reaksi ini akan membentuk

endapan, sehingga secara kuantitatif dapat diketahui adanya tanin terkondensasi

(Giner, 1997). Kadar tanin dapat diketahui dengan metode Stainsy test, yaitu

sebanyak 0.5 gram sampel tanin dilarutkan dalam 175 ml aquadest, ditambahkan

28.5 ml HCl dan disimpan selama 5 jam. Endapan yang terbentuk dibilas dengan

akuades, endapan dikeringkan dalam oven dan didinginkan dalam desikator

kemudian ditimbang. Kadar tanin terkondensasi dihitung berdasarkan gravimetric

(Linggawati, 2002).

2.8 Inhibisi Enzim Xantin Oksidase dan Metode Pengujiannya

Inhibitor dari enzim xantin oksidase dapat berupa senyawa apapun yang

memiliki sifat inhibisi terhadap enzim xantin oksidase. Dengan adanya inhibitor

ini, proses pembentukan asam urat dari xantin dan hipoxantin dapat dikurangi

frekuensinya sehingga dapat digunakan sebagai pengobatan terhadap

hiperuresemia yang menyebabkan gout. Beberapa contoh inhibitor terhadap enzim

xantin okisdase yang telah ditemukan adalah allopurinol, oksipurinol, flavonoid,

dan febuxostat, dimana allopurinol dan oksipurinol merupakan obat kimia sintetis

yang telah dijelaskan pada bagian sebelumnya dan mempunyai berbagai efek

samping.

Inhibisi terhadap enzim xantin oksidase dapat dikategorikan menjadi dua

jenis berdasarkan strukturnya yaitu analog dengan purin atau tidak. Mode inihibisi

dari masing – masing inhibitor juga berbeda yaitu dapat menginhibisi secara

kompetitif ataupun non-kompetitif atau non-specific binding, misalnya oleh

senyawa tanin (Owen & John, 1999).

Untuk mengukur tingkat inhibisi dari suatu inhibitor, dapat digunakan istilah

persen inhibisi dan juga nilai IC50. Semakin rendah nilai IC50 suatu inhibitor, maka

semakin besar potensi senyawa tersebut sebagai suatu inhibitor. Nilai IC50


32

menunjukkan besarnya konsentrasi senyawa inhibitor yang dibutuhkan untuk

mendapatkan 50% inhibisi.

Pengujian terhadap aktivitas inhibisi enzim xantin oksidase pada umumnya

dilakukan dengan mengukur penurunan absorbansi pada dua buah larutan sampel,

yaitu yang ditambahkan ekstrak inhibitor dan yang tidak. Dengan mengukur

perbedaan nilai penurunan absorbansi dari larutan standar allopurinol, kita dapat

mengetahui persen inhibisi ekstrak tanaman yang digunakan.

2.9 State of The ArtBerbagai penelitian telah dilakukan sebelumnya untuk menemukan tanaman

dengan kandungan senyawa tanin tertinggi dan yang berpotensi sebagai inhibitor

enzim xanthin oksidase. Tanin dapat diekstraksi dengan menggunakan beberapa

metode yaitu metode maserasi, perkolasi, soxhlet dan sonikasi.

Metode ekstraksi maserasi adalah jenis metode ekstraksi tanpa pemanasan

dengan merendam sampel dengan pelarut selama 48 jam, kelemahan dari metode

maserasi adalah waktu yang dibutuhkan untuk mengekstrak senyawa target sangat

lama dan memungkinkan tanaman yang akan diekstrak terpapar udara sehingga

senyawa tanin teroksidasi, selain itu metode maserasi membutuhkan pelarut yang

cukup banyak. Sedangkan metode ekstraksi soxhlet dengan memanaskan pelarut

sampai semua senyawa target terekstrak secara kontinyu, kelemahan dari metode

ini adalah senyawa tanin dapat teroksidasi pada suhu di atas 98oC, sedangkan

soxhlet menggunakan pemanasan dengan suhu di atas 100oC. Dibandingkan

dengan metode lain, metode sonikasi dapat mengekstrak senyawa tanin dalam

waktu yang lebih cepat dan membutuhkan pelarut yang sedikit. Suhu yang

digunakan pada metode ini adalah suhu ruang yaitu 25oC sehingga tanin tidak

rusak atau mengalami oksidasi, tetapi hasil ekstraksi yang diperoleh belum

mengandung senyawa tanin yang murni, karena masih terdapat beberapa senyawa

kimia lain yang dapat mengganggu proses inhibisi enzim xanthine oxidase, maka

dalam penelitian ini akan dilakukan kombinasi metode ekstraksi sonikasi dan

isolasi senyawa tanin.


33

Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Lestari (2012) yang

mengekstraksi tanin dengan metode maserasi untuk menghambat aktivitas enzim

xanthin oksidase dari tanaman sidaguri diperoleh yield ekstrak sebesar 0,67%

dengan menggunakan pelarut etanol. Sa’adah (2010) melakukan ekstraksi

senyawa tanin dengan metode ekstraksi maserasi dari tanaman belimbing wuluh

menghasilkan yield ekstrak sebesar 10,78%. Kemudian Marnoto, et al (2012)

mengekstraksi tanin yang dimanfaatkan sebagai bahan pewarna alami dari

tanaman putri malu menggunakan metode soxhlet menghasilkan yield ekstrak

sebesar 4,4% menggunakan pelarut etanol. Berikut adalah tabel state of the art

dari penelitian ini.

Tabel 2. 1. Penelitian Mengenai Senyawa Tanin

Tanaman Sumber Senyawa Tanin

Pemanfaatan

MetodeInhibitor enzim xanthin oksidase

Pengawet alami

Sidaguri (Lestari, 2012) Maserasi

Daun Belimbing Wuluh(Sa’adah,

2010)Maserasi

(Chaerunissa, 2013)

Sonikasi

Daun Putri Malu

(Marnoto et al, 2012)

Soxhletasi

(Hartanto,2

013)Sonikasi

Daun Jambu Biji (Auliawati, 2013) Sonikasi


BAB III

METODOLOGI PENELITIAN

Untuk melakukan ekstraksi terhadap daun belimbing wuluh (Averrhoa

bilimbi L) dan juga metode analisa lainnya, terdapat metodologi peneletian

tertentu yang harus diikuti agar hasil yang didapat sesuai dengan yang diharapkan.

Oleh karena itu, dalam bab ini akan dijelaskan mengenai beberapa bagian dari

metodologi penelitian, yang terdiri dari prosedur penelitian, alat dan bahan yang

dibutuhkan, pengumpulan data, variabel – variabel yang ada, serta teknik analisis

yang digunakan.

3.1 Diagram Alir PenelitianProsedur penelitian yang akan dilakukan terdiri dari beberapa langkah dasar

berikut ini:

34

35

PENGUMPULAN BAHAN TANAMAN DAN PREPARASI AWAL

Daun dikeringkan menggunakan oven Daun dipulverasi dengan High Speed Multifunctional Pulverizing selama 2

menit

EKSTRAKSI TANAMAN

Ekstraksi dilakukan dengan metode sonikasi menggunakan pelarut Aseton 70% (7:3) dengan perbandingan massa daun per volume pelarut 1:10

dilanjutkan dengan filtrasi vakum dengan corong buchner dan pemekatan filtrate dengan rotary evaporator pada suhu 50oC

ANALISIS KUALITATIF TANINUji kualitatif tanin ini bertujuan untuk mengidentifikasi jenis senyawa tanin

yang terdapat dalam daun belumbing wuluh

UJI INHIBISI XANTIN OKSIDASEAnalisis aktivitas enzim xantin oksidase oleh senyawa tanin dilakukan

dengan metode Owen&Johns

ANALISIS KUANTITATIF SENYAWA TANINAnalisis kuantitatif tanin dilakukan dengan metode stainsy test

ISOLASI TANIN Eluen terbaik yang diperoleh dari metode sebelumnya digunakan untuk

mengisolasi tanin. Tanin diisolasi dengan menggunakan metode kromatografi lapis tipis preparatif

PENCARIAN ELUEN TERBAIK SENYAWA TANIN Pencarian eluen terbaik untuk senyawa tanin dilakukan dengan kromatogradi

lapis tipis analitik.

Gambar 3. 1. Diagram Alir Penelitian Isolasi Tanin dari Daun Belimbing Wuluh

36

3.2 Alat dan Bahan

Untuk melakukan penelitian ini, alat dan bahan yang dibutuhkan adalah

sebagai berikut:

3.2.1 AlatAlat – alat yang dibutuhkan untuk percobaan ini adalah sebagai berikut:

Tabel 3. 1. Daftar alat beserta fungsinya

No. ALAT FUNGSI

1 Timbangan digital Untuk menimbang bahan – bahan penelitian

2 Beaker glass Sebagai wadah bahan – bahan penelitian

3 Botol sampel Sebagai wadah bahan – bahan penelitian

4 Pipet tetes Untuk mengambil larutan dalam volume besar

5 Kertas saring Untuk menyaring sampel

6 Mikropipet Untuk mengambil larutan dalam volume kecil

7 Kaca arloji Sebagai wadah untuk penimbangan massa

sampel

8 Rottary evaporator Untuk menguapkan sampel hasil ekstraksi

9 High speed multifunction

pulverizing machine

Untuk menghaluskan sampel daun belimbing

wuluh menjadi serbuk daun

10 Oven Untuk mengeringkan sampel pada uji tanin

11 Desikator Untuk mendinginkan sampel

12 Ultrasonic cleaner Untuk mengekstraksi sampel

13 Pengaduk kaca Untuk mengaduk larutan agar tercampur secara

homogeny

14 Corong buncher Untuk memfiltrasi sampel

15 Spektrofotometer UV-Vis Untuk mengukur nilai absorbansi sampel

16 pH meter Untuk mengukur pH larutan uji

17 Kuvet Sebagai wadah sampel pada spektofotometer

18 Tabung reaksi Sebagai wadah untuk uji kualitatif

19 Plat KLT silika G60 F254 Sebagai alat untuk isolasi senyawa tanin

20 Chamber KLT Sebagai alat untuk isolasi senyawa tanin


37

21 Centrifuge Sebagai alat untuk isolasi senyawa tanin

3.2.2 BahanBahan – bahan yang dibutuhkan untuk percobaan ini adalah sebagai berikut:

Tabel 3. 2. Daftar bahan beserta fungsinya

No. BAHAN FUNGSI

1 Daun Belimbing wuluh muda Sebagai sumber senyawa tanin

2 Aseton Pelarut dan eluen

3 Akuades Pelarut

4 Asam askorbat Mencegah terjadinya oksidasi tanin

5 Kloroform Eluen

6 Etil asetat Eluen

7 FeCl3 1% Sebagai reagen dalam stainsy test

8 HCl 0.28 N Digunakan dalam stainsy test

9 HCl pekat Eluen

10 NaoH Pelarut xantin dan pengatur pH xantin

11 FeCl3 Indikator senyawa tanin

12 HCl Pengasam, pengatur pH xantin dan buffer

13 Xantin (SIGMA) Substrat reaksi pembentukan asam urat

14 Xantin oksidase Senyawa pembentuk asam urat

15 Formaldehid 37% Reagen tanin pada stainsy test

16 Allupurinol 300 mg Larutan standar dalam uji aktivitas enzim xantin

oksidase

17 Buffer fosfat Sebagai buffer untuk mengatur pH larutan

18 KH2PO4 Bahan untuk membuat buffer fosfat

19 K2HPO4 Bahan untuk membuat buffer fosfat

20 Toluene Eluen

21 Ferri sulfat Sebagai pendeteksi dalam isolasi senyawa tanin

22 Asam asetat glasial Eluen

23 Asam asetat Eluen

24 n-butanol Eluen


38

25 Metanol Eluen

3.3 Lokasi PenelitianPenelitian ini akan dilakukan di Laboratorium Dasar Proses Kimia dan

Laboratorium Bioproses Departemen Teknik Kimia, Fakultas Teknik, Universitas

Indonesia, Depok, Jawa Barat, Indonesia.

3.4 Prosedur Percobaan

3.4.1 Pengumpulan Bahan Tanaman dan Preparasi Awal Daun Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi L)

Mengumpulkan daun – daun belimbing wuluh yang masih muda dari

pekarangan rumah. Setelah daun didapatkan, dilakukan beberapa preparasi yaitu:

1. Mencuci daun dengan air mengalir hingga bersih

2. Mengeringkan daun yang telah dicuci dengan menggunakan oven pada

suhu 60oC selama 5 jam.

3. Mempulverasi daun yang sudah kering tersebut dengan High speed

Multifunction Pulverizing Machine selama dua menit sehingga menjadi

serbuk daun halus

4. Menyimpan serbuk daun halus dalam wadah yang kering dan tertutup

rapat hingga dilakukan proses ekstraksi.

3.4.2 Ekstraksi Daun Belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L)1. Serbuk daun yang telah disiapkan sebelumnya ditimbang sebanyak 25

gram menggunakan kaca arloji dan timbangan digital.

2. Menyiapkan pelarut etanol 70% sebanyak 250 mL dalam beaker glass agar

perbandingan antara massa daun dengan volume pelarut adalah 1:10

(Rachmawati, 2006).

3. Mencampurkan serbuk daun yang telah disiapkan ke dalam beaker glass

yang telah berisi pelarut sebanyak 250 mL dan dimasukkan ke dalam

Ultrasonic cleaner

4. Ultrasonic cleaner diatur agar beroperasi pada frekuensi 42 kHz selama 50

menit pada suhu ruang.


39

5. Menyaring larutan ekstrak yang didapat dengan pompa vakum dan corong

buncher.

6. Mengeringkan ekstrak yang telah disaring dengan Rotary Evaporator pada

suhu 50oC hingga terbentuk pasta.

3.4.3 Analisis Kualitatif untuk Identifikasi Jenis Senyawa Tanin dari Daun

Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi L)

Analisis kualitatif dilakukan dengan metode yang dilakukan oleh Sa’adah

(2010).

1. Ekstrak pekat hasil ekstraksi dimasukkan ke dalam 2 tabung reaksi masing

– masing sebanyak 0,5 gram.

2. Ekstrak pada tabung pertama ditambahkan 1 – 2 mL akuades dan 1 – 2

tetes FeCl3 1%.

3. Kemudian mengamati hasil, apabila perubahan warna menunjukkan warna

hijau kecoklatan atau biru kehitaman menandakan bahwa terdapat tanin

jenis gallotonin atau asam galat yang merupakan tanin terhidrolisis.

4. Ekstrak pada tabung kedua ditambahkan beberapa tetes formaldehid 3% :

asam klorida 1 N (2:1) dan dipanaskan sampai suhu 90oC.

5. Jika terbentuk endapan merah muda menunjukkan bahwa terdapat jenis

tanin proantosianidin atau katekol yang merupakan tanin terkondensasi.

3.4.4 Pencarian Eluen Terbaik untuk Senyawa Tanin menggunakan Kromatografi Lapis Tipis Analitik (KLT Analitik)

1. Menyiapkan plat silika G 60 F254 yang telah diaktifkan dengan pemanasan

dalam oven pada suhu 100oC selama 10 menit. Masing – masing plat

mempunyai ukuran 1 x 10 cm.

2. Menyiapkan ekstrak tanin hasil dari metode sebelumnya kemudian

ditotolkan pada jarak 1 cm dari tepi bawah plat dengan pipa kapiler

kemudian dikeringkan.

3. Mengelusi plat yang telah ditotolkan ekstrak tanin dengan fasa gerak

toluen : etil asetat (3:1) dengan pendeteksi ferri sulfat (Yuliani, 2003),

forestall (asam asetat glasial : akuades : HCl pekat) (30:10:3) (Nuraini,

2002), etil asetat : metanol : asam asetat (6:14:1) dengan pendeteksi


40

aluminium klorida 5% (Olivina, 2005), n-butanol : asam asetat : air (4:1:5)

(Sudarwanti, 2004), metanol : etil asetat (4:1) dengan pendeteksi AlCl3 1%

(Lidyawati, 2006), etil asetat : kloroform : asam asetat 10% (15 : 5 : 2).

4. Menghentikan elusi setelah gerakan larutan eluen sampai kepada garis

batas.

5. Mengukur harga Rf dari masing – masing noda yang terbentuk,

selanjutnya dengan memperhatikan bentuk noda pada berbagai larutan

eluen ditentukan perbandingan larutan eluen yang paling baik untuk

keperluan preparatif. Noda yang terbentuk diperiksa dengan lampu UV-

Vis pada panjang gelombang 254 nm dan 366 nm.

3.4.5 Isolasi Senyawa Tanin dari Ekstrak Kasar Daun Belimbing Wuluh

sesuai dengan Eluen Terbaik dengan KLT preparatif

1. Menyiapkan plat G 60 F254 dengan ukuran 10 x 20 cm.

2. Melarutkan ekstrak pekat hasil ekstraksi dengan aseton – air, kemudian

ditotolkan sepanjang plat pada jarak 1 cm dari garis bawah dan 1 cm dari

garis tepi.

3. Mengelusi plat yang telah ditotolkan dengan larutan menggunakan dua

eluen yang memberikan pemisahan terbaik dari KLT analitik.

4. Menghentikan elusi setelah gerakan larutan elusi telah sampai pada garis

batas.

5. Mengukur nilai Rf dari noda yang terbentuk

6. Memeriksa noda – noda yang terbentuk di bawah sinar UV pada panjang

gelombang 254 nm dan 366 nm. Senyawa tanin diduga mempunyai nilai

Rf 0,61 – 0,62.

7. Mengerok noda – noda hasil KLT preparatif pada plat yang mendekati

harga Rf tanin dan melarutkannya di dalam pelarut aseton : air (7:3)

8. Mensetrifuge untuk mengendapkan silika yang terikut lalu dihasilkan

supernatant

9. Supernatant dipekatkan dengan gas N2 atau desikator vakum.

10. Kemudian dihasilkan isolat pekat.

3.4.6 Analisis Kuantitatif Senyawa Tanin


41

Kandungan tanin dalam ekstrak daun belimbing wuluh yang didapatkan diuji

dengan metode stiansy test sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh

Linggawati (2002). Tahapan analisisnya sebagai berikut:

1. Melarutkan 1 gram isolat sampel dalam 175 ml akuadest

2. Menambahkan 28.5 ml HCl 0.28 N dan 1 ml formaldehid 37% ke dalam

larutan nomor 1

3. Mengaduk campuran larutan selama lima menit dan menyimpannya

selama 5 jam.

4. Menyaring campuran larutan tersebut

5. Membilas endapan yang terbentuk dengan akuades

6. Mengeringkan endapan dalam oven dan mendinginkannya dalam desikator

untuk selanjutnya ditimbang dengan neraca dan diukur kandungan

taninnya melalui persamaan berikut:

Kadar tanin (% bb )=BE sebelum pemanasan−BE setelah pemanasan

BE sebelum pemanasanx100 %

Dimana BE adalah berat endapan isolat daun belimbing wuluh.

3.4.5 Uji Inhibisi Xantin Oksidase

Aktivitas enzim xantin oksidase dari ekstrak kemudian diuji menggunakan

xantin sebagai substrat melalui pengukuran spektrofotometri sesuai prosedur

pengukuran kontinyu yang dilakukan oleh Owens and Johns (1999) dengan

penginkubasian larutan sebagai modifikasinya. Tahapan untuk pengujian inhibisi

ini dibagi menjadi dua bagian, yaitu tahapan preparasi dan tahapan analisis kadar

inhibisinya.

3.4.5.1 Tahapan Preparasi

Tahapan preparasi bahan adalah tahapan untuk membuat berbagai macam

larutan uji. Pada tahapan ini, ada berbagai prosedur yang dilakukan untuk

membuat larutan uji, yaitu:

1. Pembuatan larutan Xantin 0,15 mM


(3.1)

42

Melarutkan 0,002 g xantin dalam beberapa tetes NaOH 1M yang

kemudian diencerkan dengan akuades hingga 100 mL. pH kemudian diatur

hingga 7,5 dengan menggunakan HCL dan NaOH

2. Pembuatan Buffer Fosfat 50 mM

Mencampurkan 0,2 g KH2PO4 dengan 0,6 g K2HPO4 dan dilarutkan dengan

100 mL akuades. pH buffer kemudian diatur hingga 7,5 dengan

menambahkan HCl dan KOH.

3. Pembuatan larutan Xantin oksidase 0,2 U/mL

Mencampurkan 0,006 mL larutan Xantin oksidase dengan 0,01 mL larutan 50

mM buffer fosfat dingin sehingga menghasilkan 0,105 mL Xantin Oksidase

0,2 U/mL.

4. Pembuatan Larutan Isolat Dengan konsentrasi 0.4 mg/mL

Mencampurkan 2 mg isolat yang akan diuji dengan 5 mL larutan 50 mM

buffer fosfat.

3.4.5.2 Tahapan Analisis

Tahapan analisis merupakan tahapan inti pada penelitian ini karena pada

tahapan ini dilakukan pengujian dari isolat daun belimbing wuluh dari dua eluen

terbaik dan allupurinol sebagai kontrol dari ekstrak kasar ini.Tujuan dari tahapan

ini adalah untuk mengetahui eluen mana yang paling baik dalam menghinbisi

Xantin oksidase serta benda apa yang terbaik untuk menghambat Xantin oksidase.

Tahapan analisis yang dilakukan adalah sebagai berikut:

1. Membuat larutan dasar yang dibutuhkan. Larutan dasar yang dibutuhkan

adalah: 0,75 mL ekstrak tanaman atau allupurinol (0,4 mg/ml larutan 50

mM buffer fosfat, pH 7,5), 1 mL larutan 50 mM Buffer Fosfat pH 7,5, 0,1

mL larutan xantin 15 mM, dan 0,1 mL larutan xantin oksidase 0,2 U/mL.

2. Mencampurkan 0,1 mL larutan xantin 15 mM ke dalam 1 mL larutan 50

mM Buffer Fosfat pH 7,5, dan 0,1 mL larutan xantin oksidase 0,2 U/mL

yang bertindak sebagai larutan blanko. Universitas Indonesia

43

3. Mencampurkan 0,75 mL isolat (0,4 mg/ml larutan 50 mM buffer fosfat,

pH 7,5), 0,10 mL larutan xantin 15 mM, 1 mL larutan 50 mM Buffer

Fosfat pH 7,5 , dan 0,105 mL larutan xantin oksidase 0,2 U/mL yang

bertindak sebagai larutan ekstrak yang bertindak sebagai inhibitor.

4. Mencampurkan 0,75 mL allupurinol 300 mg (0,4 mg/ml larutan 50 mM

buffer fosfat, pH 7,5), 0,10 mL larutan xantin 15 mM, 1 mL larutan 50

mM Buffer Fosfat pH 7,5 , dan 0,1 mL larutan xantin oksidase 0,2 U/mL

yang bertindak sebagai larutan ekstrak yang bertindak sebagai inhibitor.

5. Menginkubasikan larutan tersebut selama 10 menit pada suhu 25oC

sebelum direaksikan.

6. Mereaksikan larutan tersebut ke dalam kuvet dan mengukur perubahan

nilai absorbansi dari ke empat larutan pada panjang gelombang 295 nm

(menunjukkan terbentuknya asam urat) setiap 30 detik selama 10 menit.

Pada saat mengukur perubahan nilai absorbansinya, larutan yang berisi

buffer yang berfungsi sebagai larutan blanko dimasukkan bersamaan

dengan larutan uji ke dalam Spektofotometer UV-Vis

7. Menghitung nilai aktivitas inhibisi Xantin oksidase diekspresikan dalam

persen inhibisi sesuai dengan persamaan: (1-A/B)*100% dimana A adalah

perubahan absorbansi tanpa ekstrak tanaman (blanko) dan B adalah

perubahan absorbansi dengan ekstrak tanaman.

%inhibisi= A−BA

x 100 %

3.5 Variabel Penelitian

Pada penelitian ini, variabel – variabel yang digunakan terbagi menjadi dua,

yaitu variabel bebas dan variabel terikat. Variabel bebas dari penelitian ini

diantaranya adalah jenis eluen yang digunakan untuk mengisolasi, yaitu toluen :

etil asetat (3:1), forestall (asam asetat glasial : akuades : HCl pekat) (30:10:3), n-

butanol : asam asetat : air (4:1:5), metanol : etil asetat (4:1), etil asetat :

kloroform : asam asetat 10% (15 : 5 : 2). Sedangkan, variabel terikat yang

dipengaruhi oleh variasi – variasi di atas adalah yield tanin yang didapatkan dari

isolat daun belimbing wuluh


(3.2)

44

3.6 Data yang dikumpulkan

Data yang dikumpulkan pada percobaan ini berupa data persen aktivitas

inhibisi enzim xanthin oksidase dan juga nilai konsentrasi senyawa tanin dalam

daun belimbing wuluh yang dapat diperoleh dari isolasi dengan kromatografi lapis

tipis preparative dengan menggunakan eluen terbaik hasil kromatografi lapis tipis

analitik.


45

DAFTAR PUSTAKA

Arland. 2006. Belimbing Wuluh. Jakarta: BPPT.

Auliawati, Yenni. 2013. Ekstraksi Tanin dari Daun Jambu Biji (Psidium guajava)

sebagai Inhibitor Enzim Xanthin Oksidase untuk Menurunkan Kadar Asam

Urat. [Skripsi]. Depok: Universitas Indonesia.

Bate, S. 1972. Detection And Determinant of Ellagitannin:Phytochemistry And

International Journal Of Plant Biochemistry Vol II. England: Pragaman

Press.

Brunton, L. L., Lazo, J. S., & Parker, K. L. 2005. Goodman & Gilman’s The

Pharmacological Basis of Therapeutics, 11th Edition. San Diego: Goodman

& Gilman’s

Chaerunissa, A. L. 2013. Ekstraksi Kasar Tanin dari Daun Belimbing Wuluh

sebagai Inhibitor Enzim Xantin Oksidase. [Skripsi]. Depok: Universitas

Indonesia.

Dalimatra S. 2006. Resep Tumbuhan Obat untuk Asam Urat. Bogor: Penebar

Swadaya.

Deny, Wiryawan. 2007. Pemanfaatan Tanin Sebagai Perekat. Jakarta: PT.

Erlangga.

Hagerman, A.E, M.E. Rice and N.T. Richard 1998. Mechanisme of Protein

Precipitation of Two Tannins, Pentagalloyl Glucose and Apichatecin16 (4-

8) Cathechin (Procyanidin). Journal of Agri Food Chem. Vol 46.

Hakim L. 2005. Inhibisi formula ekstrak sidaguri (Sida rhombifolia L) dan seledri

(Apium graveolens) pada enzim xantin oksidase seta efek anti inflamasi

[Skripsi]. Bogor: Institut Pertanian Bogor.


46

Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia. Padmawinata K, Soediro I, Penerjemah;

Niksolihin S, editor. Bandung: ITB. Terjemahan dari Phytochemical

Methode.

Hartanto, Andrian. 2013. Ekstraksi Senyawa Tanin dari Daun Putri Malu (Mimosa

pudica) dan Aktivitas Inhibisinya terhadap Enzim Xanthine Oxidase.

[Skripsi]. Depok: Universitas Indonesia.

Hidayat R. 2007. Kinetika inhibisi flavonoid dalam sidaguri (Sida rhombifolia)

terhadap aktivitas enzim xantin oksidase [tesis]. Bogor: Institut Pertanian

Bogor.

Johnstone A. 2005. Gout; the disease and non-drug treatment. Hospital Pharm.

12:391 – 393.

Katzung, B. G. 2006. Basic and Clinical Pharmacology 10th Edition. San

Fransisco: The Mc. Graw-Hills Companies, Inc.

Kumar, V., Abbas, A., & Fausto, N. 2007. Robbins and Cotran’s Pathologic

Basis of Disease Seventh Edition. Saunders

Linggawati, A. 2002. Pemanfaatan Tanin dari Kulit Kayu Bakau sebagai

Pengganti Gugus Fenol pada Resin Fenol Formaldehid. Prosiding Seminar

Nasional Teknik Kimia 2011.

Muhtadi, Setiawan. 1999. Penetapan Kadar Tanin dengan Spektrofotometri.

Bandung: ITB.

Owen, P. L., & Johns T. 1999. Xanthine oksidase inhibitory activity of

northeastern North America plant remedies for used for gout. Journal of

Ethnopharmacology, 64: 149 – 160

Robinson, T. 1995. Kandungan Senyawa Organik Tumbuhan Tinggi (Prof. Dr.

Kosasih Padmawinata, Penerjemah). Bandung: ITB Press.

Sa’dah, Lailis. 2010. Isolasi dan Identifikasi senyawa tanin dari daun belimbing

wuluh. [skripsi]. Malang: Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim.


47

Tyler, C.B. 1947. Organic Chemistry for Students of Agriculture. London 2nd

Allan.

Umamaheswari et al.. 2007. Xanthine oxidase inhibitory activity of some indian

medical plant. J Ethnopharmacol Communication 109:547-551.

Ummah., KM 2010.Ekstraksi dan pengujian aktivitas antibakteri senyawa tanin

pada daun belimbing wuluh (kajian variasi pelarut). [Skripsi]. Malang:

Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim.


Seminar Citta Devi Guntari

Documents

Transcript of Seminar Citta Devi Guntari