Protein Purification

7/18/2019 Protein Purification

http://slidepdf.com/reader/full/protein-purification-56971b455ae2a 1/13

PROTEINPURIFICATION

Dian PurnamaS(08121006009)

Fitria Rosari

(08121006016)

Lia Junita ()

Regina Floremcia()

Titis Utami

(0812100609)

!eni "nggraini

(0812100608)

!ulisa Tri

"n#ari(081210060)



INTI MATERIPrinsip pemurnian protein Untu$ mengisolasi satu %rotein $&usus #ari

sam%el' Seua& $ominasi #ari te$ni$ ra$sinasi a#ala& #engan mengeta&ui

$elarutan* u$uran* muatan* #an+atau ainitas i$atan s%esii$ #ari %rotein

,ang #iingin$an

Prinsip pemurnian protein -arena %rotein memili$i eragai #istriusi

#alam material iologi* ma$a %emili&an sam%el ,ang a$an #imurni$an%roteinn,a sangat %enting' .ni iasan,a men/a#i sumer ,ang relati $a,a

a$an %rotein ,ang #iingin$an #an mu#a& #i#a%at'

Homogenisasi dan solubilisasiProtein &arus #i%erole& #alam entu$ larutan

terlei& #a&ulu untu$ #imurni$an' Jaringan #an sel &arus #i%eca& #engan

&omogenisasi atau osmotic l,sis* $emu#ian #isentriugasi untu$ mengisolasi

ra$si suseluler #imana %rotein terleta$' Untu$ %rotein teri$atmemran*

stru$tur memra &arus #ilarut$an #engan #etergen untu$ memeas$an

%rotein'



Stabilisasi proteinTin#a$an %encega&an tertentu &arus #ila$u$an untu$ mencega& %rotein ,ang ter#enaturasi

atau ina$ti selama %emurnian ole& a$tor isi$ atau iologis' Tin#a$an terseut antara lain %enama&an

uer* mela$u$an %rose#ur %a#a su&u ren#a& #an %enaama&an %rotease in&iitor untu$ mencega& %roteolisis

,ang ti#a$ #iingin$an'

Uji logam beratU/i logam erat %enting untu$ memonitor $ema/uan %urii$asi ' er#asar$an %roteinn,a* u/i

logam #a%at #iguna$an untu$ mrngu$ur a$tiitas enim atau an,a$n,a i$atan ligan* atau mung$in /uga

an,a$n,a /enis %rotein #engan mengguna$an antio#i s%esii$'

ialisisProtein #a%at #i%isa&$an #ari mole$ul $ecil #engan mengguna$an #ialisis mele3ati memran

semi%ermeael er%ori ,ang #a%at men,ea$an mole$ul $ecil lolos #ari memran se#ang$an %rotein ti#a$

Ammonium sul!at Pre"ipitation -elarutan %rotein menurun #engan mening$atn,a $onsentrasi amonium sulat'

"monium sulat men,ea$an %rotein $eluar #ari larutan #an mengen#a%' 4n#a%an #a%at ere#a antara 1

%rotein #engan %rotein lainn,a #alam suatu cam%uran se&ingga #a%at #i%isa&$an

Ultrasentri!ugasi Protein #engan %ere#aan 5 tinggi #a%at #i%isa&$an #engan sentriugasi rateonal

mengguna$an gra#ien material ,ang teal* se%erti su$rosa



PRINSIP PEMURNIAN PROTEINtu/uan #asar #alam %emurnian %rotein a#ala& untu# mengisolasi

sala$ satu protein tertentu %ang diingin#an #ari %rotein

mencemari lain se&ingga stru$tur #an + atau %ro%erti lainn,a #a%at

#i%ela/ari'

Protein #ilarut$an $e #alam larutan #an #i%isa&$an #ari $ontaminan

#engan cara ra$sinasi #an %emisa&an

Pemisa&an #ila$u$an er#asar$an

-elarutan

U$uran

"initas s%esii$ i$atan

Te#ni# pemisa$an eru%a

$romatograi %enu$ar ion

iltrasi gel* 7

$romatograi ainitas



PEMI&IHAN SUM'ER PROTEINSeelum memurni$an %rotein* &al %ertama ,ang &arus

#i%er&ati$an a#ala& sumer a&an a$un,a' Protein

ter#istriusi ere#ae#a %a#a tia% selular #an /aringan* &al

ini #i$eta&ui a&3a %rotein a$an melim%a& #i suatu /aringan

tertentu (misaln,a gin/al)* /a#i %emurnian a$an #ila$u$an%a#a agian ini' "#a /uga eera%a sumer ,ang lei& mu#a&

terse#ia #ari %a#a ,ang lain #an ini &arus #i%er&itung$an /uga'

Saat ini* #engan mengguna$an te$ni$ re$ominan D"*%rotein lang$a #a%at #i&asil$an #alam a$teri atau sel

eu$arioti$ #engan /umla& %rotein ,ang #i&asil$an relati esar



HOMO(ENITAS ) SO&U'ITITAS Setela& men#a%at$an sumer ,ang coco$ untu$ #ii#entii$asi

lang$a& selan/utn,a ,aitu men#a%at$an %rotein #alam larutan

Untu$ %rotein ,ang a#a #alam cairan iologis* se%erti serum

#ara& * teta%i untu$ seagian esar %rotein /aringan #an selsel

isa rusa$ #an %eca&' :ara lain ,ang se#er&ana untu$ memeca&

sel ,ang ti#a$ memili$i #in#ing sel ,ang a#ala& lisis osmotic'

$eti$a selsel &e3an #item%at$an #alam larutan &i%otoni$ air

#alam larutan se$itarn,a er#iusi $e #alam sitosol lei&

ter$onsentrasi* men,ea$an sel memeng$a$ #an %eca&'

Protein%rotein ,ang teri$at $e memran memerlu$an lang$a&

soluilisasi lan/ut'

setela& isolasi #engan sentriugasi #ierensial memran sesuai

#i%erla$u$an #engan #eter/en se%erti Triton ;100 untu$

merusa$ ila,er li%i# #an mele%as$an %rotein memran $e

#alam larutan



STA'I&ITAS PROTEIN

pemilihan pH larutan yang digunakan

untuk bufer harus hati – hati agarprotein dapat stabil.

Temperatur berkisar antara 25 derajatcelcius



U*I PROTEINPengu/ian %rotein %aling se#er&ana ,aitu #engan

mengguna$an enim seagai $atalis rea$si #engan %ro#u$,ang mu#a& #i#ete$si (#a%at #ili&at %a#a to%i$ :2)'

Protein ,ang u$an enim* %engu/iann,a #a%at #ila$u$an

#engan %engamatan ee$ iologin,a

:onto&n,a

Rese%tor #a%at #iu/i #engan cara mengu$ur $emam%uann,auntu$ mengi$at suatu ligan s%esii$'

Te$ni$ imunologi sering menguna$an %engu/ian %rotein

#engan mengguna$an antio#i s%esii$

4<' Ra#ioimmunoassa,* 4L.S"* atau 3estern lot anal,sis'



PRESIPITASI AMONIUM SU&FAT+PEN(ENAPAN AMONIUM SU&FAT,

Lang$a& %ertama %emisa&an ,ang umum

#iguna$an a#ala& %resi%itasi amonium sulat'

Te$ni$ ini memanaat$an a$ta a&3a $elarutan

%rotein %aling menurun %a#a $onsentrasi garam

,ang tinggi' Saat $onsentrasi garam mening$at*titi$ ,ang #ica%ai ,aitu saat #i mana %rotein $eluar

#ari larutan #an mengen#a%' -onsentrasi garam

,ang #i%erlu$an untu$ ee$ =salting out> ini

er?ariasi #ari %rotein $e %rotein* #an #engan#emi$ian %rose#ur ini #a%at #iguna$an untu$

ra$sinasi cam%uran %rotein



5isaln,a* 0*8 5 amonium sulat mengeluar$an

%engen#a%an %eme$uan %rotein irinogen #ari serum

#ara&* se#ang$an 2*@ 5 amonium sulat #i%erlu$an

untu$ en#a%an alumin' ASalting outB /uga $a#ang$a#ang #iguna$an #i ta&a%ta&a% selan/utn,a #alam

%rose#ur %emurnian untu$ larutan er$onsentrasi

encer %a#a %rotein ,ang %roteinn,a tela& mengen#a%

#an $emu#ian #a%at #ilarut$an $emali #alam ?olume#engan uer lei& $ecil'

PS- Pengen#a%an %a#a meto#e saltingout ter/a#i $arena

%roses %ersaingan antara garam #an %rotein untu$mengi$at air' Cru% ion %a#a %ermu$aan %rotein

menari$ an,a$ mole$ul air #an eri$atan #engan

sangat $uat'



IA&ISA Protein #a%at #i%isa&$an #ari mole$ul $ecil #engan #ial,sis

melalui memrane semi %ermeale se%erti* :ello%&ane (Selulosa

asetat)'

Pori%ori %a#a memran memung$in$an mole$ul #engan u$uran

$ira$ira 10 $Da untu$ lolos* se#ang$an mole$ul ,ang lei& esar

terta&an #i#alam #ial,sis ag'

-ean,a$an %rotein memili$i 5 lei& #ari 10 $Da

Te$ni$ ini ti#a$ coco$ untu$ %emisa&an %rotein* namun &an,auntu$ meng&ilang$an mole$ul $ecil se%erti garam #ari mole$ul

%rotein' Pa#a $ea#aan euilirium $onsentrasi mole$ul $ecil

#i#alam #ial,sis ag a$an sama #engan #iluarn,a'



U&TRASENTRIFU(ASI

Meskipun ultrasentrifugasi digunakan secara luas di masalalu untuk mengisolasi protein, kemajuan dalam teknik

pemisahan lainnya umumnya digantikan metode ini. Protein

yang memiliki perbedaan besar dalam berat molekul dapatdipisahkan dengan tingkat sentrifugasi zonal menggunakan

gradien dari bahan padat seperti sukrosa. Sebagian besar

protein, meskipun memiliki kerapatan yang sama,namun

tidak dapat dengan mudah dipisahkan dengan density gradien

sentrifugasi.

Protein Purification

Documents

Transcript of Protein Purification