7/18/2019 Protein Purification
http://slidepdf.com/reader/full/protein-purification-56971b455ae2a 1/13
PROTEINPURIFICATION
Dian PurnamaS(08121006009)
Fitria Rosari
(08121006016)
Lia Junita ()
Regina Floremcia()
Titis Utami
(0812100609)
!eni "nggraini
(0812100608)
!ulisa Tri
"n#ari(081210060)
7/18/2019 Protein Purification
http://slidepdf.com/reader/full/protein-purification-56971b455ae2a 2/13
INTI MATERIPrinsip pemurnian protein Untu$ mengisolasi satu %rotein $&usus #ari
sam%el' Seua& $ominasi #ari te$ni$ ra$sinasi a#ala& #engan mengeta&ui
$elarutan* u$uran* muatan* #an+atau ainitas i$atan s%esii$ #ari %rotein
,ang #iingin$an
Prinsip pemurnian protein -arena %rotein memili$i eragai #istriusi
#alam material iologi* ma$a %emili&an sam%el ,ang a$an #imurni$an%roteinn,a sangat %enting' .ni iasan,a men/a#i sumer ,ang relati $a,a
a$an %rotein ,ang #iingin$an #an mu#a& #i#a%at'
Homogenisasi dan solubilisasiProtein &arus #i%erole& #alam entu$ larutan
terlei& #a&ulu untu$ #imurni$an' Jaringan #an sel &arus #i%eca& #engan
&omogenisasi atau osmotic l,sis* $emu#ian #isentriugasi untu$ mengisolasi
ra$si suseluler #imana %rotein terleta$' Untu$ %rotein teri$atmemran*
stru$tur memra &arus #ilarut$an #engan #etergen untu$ memeas$an
%rotein'
7/18/2019 Protein Purification
http://slidepdf.com/reader/full/protein-purification-56971b455ae2a 3/13
Stabilisasi proteinTin#a$an %encega&an tertentu &arus #ila$u$an untu$ mencega& %rotein ,ang ter#enaturasi
atau ina$ti selama %emurnian ole& a$tor isi$ atau iologis' Tin#a$an terseut antara lain %enama&an
uer* mela$u$an %rose#ur %a#a su&u ren#a& #an %enaama&an %rotease in&iitor untu$ mencega& %roteolisis
,ang ti#a$ #iingin$an'
Uji logam beratU/i logam erat %enting untu$ memonitor $ema/uan %urii$asi ' er#asar$an %roteinn,a* u/i
logam #a%at #iguna$an untu$ mrngu$ur a$tiitas enim atau an,a$n,a i$atan ligan* atau mung$in /uga
an,a$n,a /enis %rotein #engan mengguna$an antio#i s%esii$'
ialisisProtein #a%at #i%isa&$an #ari mole$ul $ecil #engan mengguna$an #ialisis mele3ati memran
semi%ermeael er%ori ,ang #a%at men,ea$an mole$ul $ecil lolos #ari memran se#ang$an %rotein ti#a$
Ammonium sul!at Pre"ipitation -elarutan %rotein menurun #engan mening$atn,a $onsentrasi amonium sulat'
"monium sulat men,ea$an %rotein $eluar #ari larutan #an mengen#a%' 4n#a%an #a%at ere#a antara 1
%rotein #engan %rotein lainn,a #alam suatu cam%uran se&ingga #a%at #i%isa&$an
Ultrasentri!ugasi Protein #engan %ere#aan 5 tinggi #a%at #i%isa&$an #engan sentriugasi rateonal
mengguna$an gra#ien material ,ang teal* se%erti su$rosa
7/18/2019 Protein Purification
http://slidepdf.com/reader/full/protein-purification-56971b455ae2a 4/13
PRINSIP PEMURNIAN PROTEINtu/uan #asar #alam %emurnian %rotein a#ala& untu# mengisolasi
sala$ satu protein tertentu %ang diingin#an #ari %rotein
mencemari lain se&ingga stru$tur #an + atau %ro%erti lainn,a #a%at
#i%ela/ari'
Protein #ilarut$an $e #alam larutan #an #i%isa&$an #ari $ontaminan
#engan cara ra$sinasi #an %emisa&an
Pemisa&an #ila$u$an er#asar$an
-elarutan
U$uran
"initas s%esii$ i$atan
Te#ni# pemisa$an eru%a
$romatograi %enu$ar ion
iltrasi gel* 7
$romatograi ainitas
7/18/2019 Protein Purification
http://slidepdf.com/reader/full/protein-purification-56971b455ae2a 5/13
PEMI&IHAN SUM'ER PROTEINSeelum memurni$an %rotein* &al %ertama ,ang &arus
#i%er&ati$an a#ala& sumer a&an a$un,a' Protein
ter#istriusi ere#ae#a %a#a tia% selular #an /aringan* &al
ini #i$eta&ui a&3a %rotein a$an melim%a& #i suatu /aringan
tertentu (misaln,a gin/al)* /a#i %emurnian a$an #ila$u$an%a#a agian ini' "#a /uga eera%a sumer ,ang lei& mu#a&
terse#ia #ari %a#a ,ang lain #an ini &arus #i%er&itung$an /uga'
Saat ini* #engan mengguna$an te$ni$ re$ominan D"*%rotein lang$a #a%at #i&asil$an #alam a$teri atau sel
eu$arioti$ #engan /umla& %rotein ,ang #i&asil$an relati esar
7/18/2019 Protein Purification
http://slidepdf.com/reader/full/protein-purification-56971b455ae2a 6/13
HOMO(ENITAS ) SO&U'ITITAS Setela& men#a%at$an sumer ,ang coco$ untu$ #ii#entii$asi
lang$a& selan/utn,a ,aitu men#a%at$an %rotein #alam larutan
Untu$ %rotein ,ang a#a #alam cairan iologis* se%erti serum
#ara& * teta%i untu$ seagian esar %rotein /aringan #an selsel
isa rusa$ #an %eca&' :ara lain ,ang se#er&ana untu$ memeca&
sel ,ang ti#a$ memili$i #in#ing sel ,ang a#ala& lisis osmotic'
$eti$a selsel &e3an #item%at$an #alam larutan &i%otoni$ air
#alam larutan se$itarn,a er#iusi $e #alam sitosol lei&
ter$onsentrasi* men,ea$an sel memeng$a$ #an %eca&'
Protein%rotein ,ang teri$at $e memran memerlu$an lang$a&
soluilisasi lan/ut'
setela& isolasi #engan sentriugasi #ierensial memran sesuai
#i%erla$u$an #engan #eter/en se%erti Triton ;100 untu$
merusa$ ila,er li%i# #an mele%as$an %rotein memran $e
#alam larutan
7/18/2019 Protein Purification
http://slidepdf.com/reader/full/protein-purification-56971b455ae2a 7/13
STA'I&ITAS PROTEIN
pemilihan pH larutan yang digunakan
untuk bufer harus hati – hati agarprotein dapat stabil.
Temperatur berkisar antara 25 derajatcelcius
7/18/2019 Protein Purification
http://slidepdf.com/reader/full/protein-purification-56971b455ae2a 8/13
U*I PROTEINPengu/ian %rotein %aling se#er&ana ,aitu #engan
mengguna$an enim seagai $atalis rea$si #engan %ro#u$,ang mu#a& #i#ete$si (#a%at #ili&at %a#a to%i$ :2)'
Protein ,ang u$an enim* %engu/iann,a #a%at #ila$u$an
#engan %engamatan ee$ iologin,a
:onto&n,a
Rese%tor #a%at #iu/i #engan cara mengu$ur $emam%uann,auntu$ mengi$at suatu ligan s%esii$'
Te$ni$ imunologi sering menguna$an %engu/ian %rotein
#engan mengguna$an antio#i s%esii$
4<' Ra#ioimmunoassa,* 4L.S"* atau 3estern lot anal,sis'
7/18/2019 Protein Purification
http://slidepdf.com/reader/full/protein-purification-56971b455ae2a 9/13
PRESIPITASI AMONIUM SU&FAT+PEN(ENAPAN AMONIUM SU&FAT,
Lang$a& %ertama %emisa&an ,ang umum
#iguna$an a#ala& %resi%itasi amonium sulat'
Te$ni$ ini memanaat$an a$ta a&3a $elarutan
%rotein %aling menurun %a#a $onsentrasi garam
,ang tinggi' Saat $onsentrasi garam mening$at*titi$ ,ang #ica%ai ,aitu saat #i mana %rotein $eluar
#ari larutan #an mengen#a%' -onsentrasi garam
,ang #i%erlu$an untu$ ee$ =salting out> ini
er?ariasi #ari %rotein $e %rotein* #an #engan#emi$ian %rose#ur ini #a%at #iguna$an untu$
ra$sinasi cam%uran %rotein
7/18/2019 Protein Purification
http://slidepdf.com/reader/full/protein-purification-56971b455ae2a 10/13
5isaln,a* 0*8 5 amonium sulat mengeluar$an
%engen#a%an %eme$uan %rotein irinogen #ari serum
#ara&* se#ang$an 2*@ 5 amonium sulat #i%erlu$an
untu$ en#a%an alumin' ASalting outB /uga $a#ang$a#ang #iguna$an #i ta&a%ta&a% selan/utn,a #alam
%rose#ur %emurnian untu$ larutan er$onsentrasi
encer %a#a %rotein ,ang %roteinn,a tela& mengen#a%
#an $emu#ian #a%at #ilarut$an $emali #alam ?olume#engan uer lei& $ecil'
PS- Pengen#a%an %a#a meto#e saltingout ter/a#i $arena
%roses %ersaingan antara garam #an %rotein untu$mengi$at air' Cru% ion %a#a %ermu$aan %rotein
menari$ an,a$ mole$ul air #an eri$atan #engan
sangat $uat'
7/18/2019 Protein Purification
http://slidepdf.com/reader/full/protein-purification-56971b455ae2a 11/13
IA&ISA Protein #a%at #i%isa&$an #ari mole$ul $ecil #engan #ial,sis
melalui memrane semi %ermeale se%erti* :ello%&ane (Selulosa
asetat)'
Pori%ori %a#a memran memung$in$an mole$ul #engan u$uran
$ira$ira 10 $Da untu$ lolos* se#ang$an mole$ul ,ang lei& esar
terta&an #i#alam #ial,sis ag'
-ean,a$an %rotein memili$i 5 lei& #ari 10 $Da
Te$ni$ ini ti#a$ coco$ untu$ %emisa&an %rotein* namun &an,auntu$ meng&ilang$an mole$ul $ecil se%erti garam #ari mole$ul
%rotein' Pa#a $ea#aan euilirium $onsentrasi mole$ul $ecil
#i#alam #ial,sis ag a$an sama #engan #iluarn,a'
7/18/2019 Protein Purification
http://slidepdf.com/reader/full/protein-purification-56971b455ae2a 12/13
U&TRASENTRIFU(ASI
Meskipun ultrasentrifugasi digunakan secara luas di masalalu untuk mengisolasi protein, kemajuan dalam teknik
pemisahan lainnya umumnya digantikan metode ini. Protein
yang memiliki perbedaan besar dalam berat molekul dapatdipisahkan dengan tingkat sentrifugasi zonal menggunakan
gradien dari bahan padat seperti sukrosa. Sebagian besar
protein, meskipun memiliki kerapatan yang sama,namun
tidak dapat dengan mudah dipisahkan dengan density gradien
sentrifugasi.
7/18/2019 Protein Purification
http://slidepdf.com/reader/full/protein-purification-56971b455ae2a 13/13
Top Related