IDENTIFIKASI CLOSTRIDIUM TETANI

Bagian Mikrobiologi

FK - UNJANI

Sifat umum

Batang besar Gram positif

Menghasilkan spora (vegetatif)

Pada C. tetani, letak spora pada salah satu ujung “drum stick”

Dapat bergerak, memiliki flagel peritrik

Bakteri anaerob absolut :

Cara kimiawi : “gaspak” dalam sebuah sungkup anaerob.Gaspak berfungsi sbg suplai hidrogen yang akan mengikat O2 H2O.

Indikator : biru metilen, selama msh tidak berwarna anaerob.

Gaspack

Isolasi

Media : LAD koloni C.tetani “Swarming” + hemolisis.

Media yang bersifat anaerob :

- Media tioglikolat, mengandung asam tioglikolat yg dpt mengikat O2

Isolasi

- Media Tarrozi, kaya enzim peroksidase, yg dpat mengubah H2O2 yg dihasilkan menjadi H2O dan O2 yg tdk toksik, dan bakteri dapat terus tumbuh.

- Untuk menambah suasana anaerob, media tsb dipanaskan dulu dlm penangas air mendididih selama 30`

Untuk mengurangi kontaminasi pd bhn pmrks, BP juga hrs dipanaskan pd penangas air bersuhu 65°C selama 30`.

Inkubasi : 37°C, diperiksa tiap hari dgn pewarnaan klein, Hsl (+) stlh 3 – 4 hr inkubasi

Lakukan penyuntikan pada hewan percobaan kejang-kejang

Pewarnaan Klein

• Buatlah dalam tabung suspensi biakan bakteri yang telah berumur 72 jam dalam larutan NaCl fisiologis, kemudian tambahkan ke dalam suspensi tadi larutan karbol-fukhsin sama banyak, kemudian panaskan diatas api kecil selama 5 menit.

• Buatlah sediaan oles dari campuran tersebut.• Setelah kering dan difiksasi, tuangi larutan H2SO4

1% selama 2 detik

Pewarnaan Klein

Cuci dengan air mengalir sampai bersih

Kemudian tuangi dengan larutan biru metilen dan biarkan selama 3 menit.

Cuci kembali dengan air mengalir sampai bersih, kemudian keringkan dengan cara ditekan-tekan diantara dua lembar kertas saring.

Hasil Pewarnaan :

Badan bakteri berwarna biru

Spora berwarna merah

Hasil pewarnaan Klein