PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI EFEK ... fileiv HALAMAN PERSEMBAHAN “Everyone makes...
Transcript of PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI EFEK ... fileiv HALAMAN PERSEMBAHAN “Everyone makes...
i
EFEK HEPATOPROTEKTIF EKSTRAK ETANOL 70% DAUN JARONG
(Stachytarpheta indica (L.) Vahl.) TERHADAP KADAR ALANN
AMINOTRANSFERASE DAN ASPARTAT AMINOTRANSFERASE PADA
TIKUS JANTAN GALUR WISTAR TERINDUKSI KARBON
TETRAKLORIDA
Skripsi
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh :
Bartolomeus Widiasta
NIM : 128114115
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2016
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
ii
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iii
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iv
HALAMAN PERSEMBAHAN
“Everyone makes mistakes. The wise are not people who never make mistake, but
those who forgive themselves and learn from their mistake” Ajahn Brahm
“Impian haruslah menyala dengan apapun yang kita miliki, meskipun yang kita miliki tidak
sempurna, meskipun itu retak-retak” 9 Summers 10 Autumns
“Dua hal itu tidak dapat berubah: Allah tidak mungkin berdusta mengenai janji dan sumpah-Nya. Sebab itu, kita yang sudah berlindung pada Allah,
diberi dorongan kuat untuk berpegang teguh pada harapan yang terbentang di depan kita” Ibrani 6 : 18
Kupersembahkan karya ini untuk:
Tuhan Yesus Kristus yang selalu memberi perlindungan, kekuatan dan
penerangan di setiap langkah hidupku
Bapak, Ibu, Mb Aning, Mas Anton, Mb Shinta, Mb Nita, Daud, Ria,
Kakak Jo
Teman dan sahabat-sahabatku
Almamaterku
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
v
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
vi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
vii
PRAKATA
Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas segala
perlindungan dan berkat yang telah diberikan sehingga skripsi berjudul “Efek
Hepatoprotektif Ekstrak Etanol 70% Daun Jarong (Stachytarpheta indica (L.)
Vahl.) Terhadap Kadar Alanin Aminotransferase dan Aspartat Aminotransferase
pada Tikus Jantan Galur Wistar Terinduksi Karbon Tetraklorida” dapat dikerjakan
dengan baik dan lancar.
Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini tidak terlepas dari campur
tangan berbagai pihak. Oleh karena itu, penulis ingin mengucapkan rasa terima
kasih kepada:
1. Ibu Aris Widayati, M.Si., Ph.D., Apt. dan ibu Dra. Sri Hartati Yuliani, Apt.
selaku Dekan dan Ketua Program Studi Farmasi Universitas Sanata Dharma.
2. Bapak Prof. Dr. C.J. Soegihardjo, Apt. selaku Dosen Pembimbing Utama dan
Dosen Penguji yang telah membimbing, mendampingi, memotivasi dan
memberikan saran selama penyusunan skripsi.
3. Ibu drh. Sitarina Widyarini, MP., Ph.D. selaku Dosen Pembimbing
Pendamping dan Dosen Penguji yang telah membimbing, mendampingi,
memotivasi, dan memberikan saran selama penyusunan skripsi.
4. Ibu Phebe Hendra, M.Si., Apt., Ph. D. Sebagai Dosen Penguji skripsi atas
koreksi dan masukan kepada penulis.
5. Ibu Dr. Yustina Sri Hartini, M.Si., Apt. Sebagai Dosen Penguji skripsi atas
koreksi dan masukan kepada penulis.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
viii
6. Ibu Agustina Setiawati, M.Sc., Apt., selaku Kepala Penanggungjawab
Laboratorium Fakultas Farmasi yang telah memberikan ijin dalam penggunaan
fasilitas laboratorium untuk kepentingan penelitian ini.
7. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si. yang telah memberikan bantuan dalam
determinasi tanaman Stachytarpheta indica (L,) Vahl..
8. Pak Kayat, Pak Heru, Pak Parjiman, Pak Parlan, dan Pak Bimo selaku laboran
laboratorium Fakultas Farmasi yang telah membantu penulis dalam proses
pelaksanaan penelitian di laboratorium.
9. Seluruh Dosen dan Karyawan Universitas Sanata Dharma terutama Fakultas
Farmasi yang telah membantu dan memberi pembelajaran penulis dari awal
hingga akhir perkuliahan.
10. Bapak yang selalu mendoakan dari surga, Ibu, Mb Aning, Mas Anton, Mb
Shinta, Mb Nita, Daud, Ria, Kakak Jo yang selalu memberikan doa, segala
bentuk dukungan, semangat, dan kasih sayang.
11. Teman-teman seperjuangan penelitian daun Jarong: Irest, Jojo, Anna yang
telah membant, kerjasama, menikmati suka duka dari awal hingga akhir .
12. Teman satu kelompok praktikum Putra, Agatha, Tika, Cindy, Rossa, Astrid,
Ruri, Novi, Meda, Ira, PWT, Sion, Vani, Vivin yang telah memberikan banyak
pelajaran dan dinamika selama proses perkuliahan terlebih praktikum.
13. Sahabat ngumpul Yudha, Sion, Aan, Satrio, Danang atas semangat dan
dukungan dalam penyelesaian penelitian ini. Sativa sebagai sahabat yang selalu
memberi semangat dan teman berbagi keluh kesah.
14. Keluarga besar MMXII terlebih FSM C 2012 dan FST B 2012 tercinta.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
ix
15. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu sehingga penulis
dapat menyelesaikan tugas akhir ini dengan baik.
Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih memiliki banyak kekurangan
sehingga penulis berharap kritik dan saran dari semua pihak. Akhir kata, penulis
berharap semoga tugas akhir ini dapat bermanfaat bagi semua pihak terutama di
bidang ilmu Farmasi.
Penulis
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
x
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ........................................................................................... i
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ................................................ ii
HALAMAN PENGESAHAN ........................................................................... iii
HALAMAN PERSEMBAHAN ........................................................................ iv
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA .............................................................. v
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA . ............ vi
PRAKATA ........................................................................................................ vii
DAFTAR ISI ...................................................................................................... x
DAFTAR TABEL ............................................................................................. xv
DAFTAR GAMBAR ..................................................................................... xvii
DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................. xviii
INTISARI ......................................................................................................... xx
ABSTRACT ...................................................................................................... xxi
BAB I PENGANTAR ....................................................................................... 1
A. Latar Belakang ...................................................................................... 1
1. Perumusan Masalah........................................................................ 3
2. Keaslian Penelitian ......................................................................... 4
3. Manfaat Penelitian.......................................................................... 5
B. Tujuan Penelitian .................................................................................. 5
1. Tujuan Umum ................................................................................ 5
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xi
2. Tujuan Khusus .................................................................................5
BAB II PENELAAHAN PUSTAKA .................................................................. 7
A. Jarong (Stachytarpheta indica (L.) Vahl.) .............................................. 7
B. Anatomi dan Fisiologi Hati ..................................................................... 9
C. Kerusakan Hati ..................................................................................... 12
D. Hepatotoksin ......................................................................................... 13
E. Alanin Aminotransferasi (ALT) dan Aspartat Aminotransferase (AST)14
F. Karbon Tetraklorida ................................................................................ 14
G. Flavonoid ................................................................................................. 16
H. Maserasi .................................................................................................. 16
I. Landasan Teori ........................................................................................ 17
J. Hipotesis .................................................................................................. 18
BAB III METODE PENELITIAN ...................................................................... 19
A. Jenis dan Rancangan Penelitian .............................................................. 19
B. Variabel dan Definisi Operasional .......................................................... 19
1. Variabel utama ................................................................................. 19
2. Variabel pengacau ............................................................................ 19
3. Definisi operasional.......................................................................... 20
C. Bahan Penelitian ..................................................................................... 21
1. Bahan utama ...................................................................................... 21
2. Bahan kimia ...................................................................................... 21
D. Alat Penelitian ......................................................................................... 23
E. Tata Cara Penelitian ................................................................................ 23
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xii
1. Determinasi tanaman jarong (Stachytarpheta indica (L.) Vahl) ....... 23
2. Pengumpulan bahan uji ..................................................................... 24
3. Pembuatan serbuk ............................................................................. 24
4. Penetapan kadar air serbuk daun Stachytarpheta indica (L.) Vahl. .. 24
5. Uji tabung kandungan polifenol ........................................................ 25
6. Pembuatan pelarut etanol 70% .......................................................... 25
7. Pembuatan ekstrak kental daun Stachytarpheta indica (L.) Vahl ..... 25
8. Pembuatan CMC-Na 1% ................................................................... 26
9. Penetapan dosis ekstrak etanol 70% daun Stachytarpheta indica (L.)
Vahl ................................................................................................... 26
10. Pembuatan larutan karbon tetraklorida konsentrasi 50% .................. 26
11. Uji pendahuluan ................................................................................ 26
a. Penetapan dosis hepatotoksin ................................................ 26
b. Penetapan waktu pencuplikan darah ..................................... 27
12. Pengelompokan dan perlakuan hewan uji ......................................... 27
13. Pembuatan serum .............................................................................. 28
14. Pengukuran kadar ALT-AST ............................................................ 28
F. Tata Cara Analisis Hasil.......................................................................... 29
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN............................................................. 31
A. Penyiapan Bahan .................................................................................... 31
1. Hasil determinasi tanaman .......................................................... 31
2. Pengumpulan bahan uji ............................................................... 32
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiii
3. Pembuatan serbuk daun jarong (Stachytarpheta indica (L.)
Vahl.) ........................................................................................... 32
4. Penetapan kadar air serbuk daun jarong (Stachytarpheta indica (L.)
Vahl.) ........................................................................................... 33
5. Hasil uji tabung kandungan polifenol ......................................... 33
B. Pembuatan Ekstrak Etanol 70% daun jarong (Stachytarpheta indica (L.)
Vahl.) ....................................................................................................... 34
C. Uji Pendahuluan ...................................................................................... 35
1. Penentuan dosis hepatotoksin ........................................................... 35
2. Penentun dosis ekstrak etanol 70% daun jarong (Stachytarpheta indica
(L.) Vahl.) ......................................................................................... 35
3. Penentuan waktu pencuplikan darah ................................................. 36
D. Hasil Uji Efek Hepatoprotektif Ekstrak Etanol 70% Daun Jarong
(Stachytarpheta indica (L.) Vahl.) Pada Tikus Terinduksi Karbon
Tetraklorida ............................................................................................. 40
1. Kontrol negatif olive oil 2 mL/kgBB ............................................... 43
2. Kontrol hepatotoksin 2 mL/kgBB .................................................... 45
3. Kontrol perlakuan ekstrak etanol 70% daun jarong 400 mg/kgBB . 46
4. Kelompok perlakuan ekstrak etanol 70% daun Stachytarpheta indica
(L.) Vahl. pada tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon
tetraklorida ....................................................................................... 47
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN .............................................................. 53
A. Kesimpulan .............................................................................................. 53
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiv
B. Saran ........................................................................................................ 53
DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 54
LAMPIRAN ........................................................................................................ 59
BIOGRAFI PENULIS ....................................................................................... 99
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xv
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel I Komposisi dan konsentrasi dari reagen ALT ......................................... 22
Tabel II Komposisi dan konsentrasi dari reagen AST .......................................... 22
Tabel III Purata kadar ALT tikus setelah induksi karbon tetraklorida dengan
dosis 2 mL/kgBB saat pencuplikan darah pada jam ke 0, 24, dan 4 ....... 36
Tabel IV Hasil Paired-Samples T Test kadar ALT tikus setelah induksi karbon
tetraklorida dengan dosis 2 mL/kgBB saat pencuplikan darah pada jam
ke-0, 24, dan 48 ...................................................................................... 37
Tabel V Purata kadar AST tikus setelah induksi karbon tetraklorida dengan
dosis 2 mL/kgBB saat pencuplikan darah pada jam ke 0, 24, dan 48 ..... 38
Tabel VI Hasil Paired-Samples T Test kadar ALT tikus setelah induksi karbon
tetraklorida dengan dosis 2 mL/kgBB saat pencuplikan darah pada jam
ke-0, 24, dan 48 ..................................................... ................................ 39
Tabel VII Purata ± SE kadar ALT dan AST tikus jantan galur Wistar pada
kelompok perlakuan .............................................................................. 41
Tabel VIII Hasil uji Kruskal-Wallis Mann-Whitney kadar ALT praperlakuan
ekstrak etanol 70% S. indica pada tikus terinduksi karbon tetraklorida
dosis 2 mL/kgBB................................................................................. 43
Tabel IX Hasil uji Post-Hoc Games Howell kadar AST praperlakuan ekstrak
etanol 70% S. indica pada tikus terinduksi karbon tetraklorida dosis 2
mL/kgBB ............................................................................................... 43
Tabel X Purata kadar ALT dan AST tikus setelah pemberian olive oil 2 mL/kgBB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xvi
pada jam ke-0 dan 24 .............................................................................. 44
Tabel XI Hasil Paired-Samples T Test kadar ALT tikus setelah pemberian olive oil
2 mL/kgBB pada jam ke-0 dan 24 ......................................................... 44
Tabel XII Hasil Paired-Samples T Test kadar AT tikus setelah pemberian olive oil 2
mL/kgBB pada jam ke-0 dan 24 ........................................................... 44
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xvii
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Tanaman jarong (Stachytarpheta indica (L.) Vahl. ............................... 7
Gambar 2. Letak hati dalam tubuh manusia........................................................... 10
Gambar 3. Anatomi hati manusia........................................................................... 10
Gambar 4. Letak hati dalam tubuh tikus ................................................................ 11
Gambar 5. Hati tikus dan pembagian lobus tikus .................................................. 12
Gambar 6. Biotransformasi karbon tetraklorida..................................................... 15
Gambar 7. Diagram batang purata kadar ALT pada selang waktu 0, 24, dan 48 jam
setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB .................... 37
Gambar 8. Diagram batang purata kadar AST pada selang waktu 0, 24, dan 48 jam
setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB .................... 38
Gambar 9. Diagram batang purata kadar ALT tikus jantan galur Wistar pada
kelompok perlakuan ............................................................................. 41
Gambar 10. Diagram batang purata kadar AST tikus jantan galur Wistar pada
kelompok perlakuan ........................................................................... 42
Gambar 11. Diagram batang purata kadar ALT tikus jantan galur Wistar setelah
pemberian olive oil 2 mL/kgBB pada jam ke-0 dan 24 ..................... 45
Gambar 12. Diagram batang purata kadar ALT tikus jantan galur Wistar setelah
pemberian olive oil 2 mL/kgBB pada jam ke-0 dan 24 ..................... 45
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xviii
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Foto tumbuhan Stachytarpheta indica (L.) Vahl. ..................... 61
Lampiran 2. Foto daun Stachytarpheta indica (L.) Vahl. segar .................... 61
Lampiran 3. Foto simplisia Stachytarpheta indica (L.) Vahl. ...................... 62
Lampiran 4. Foto ekstrak etanol 70% daun Stachytarpheta indica (L.) Vahl.
.................................................................................................. 62
Lampiran 5. Foto ekstrak etanol 70% daun Stachytarpheta indica (L.) Vahl
kental. ....................................................................................... 63
Lampiran 6. Foto ekstrak kental yang dilarutkan dalam CMC ..................... 63
Lampiran 7. Hasil determinasi Jarong (Stachytarpheta indica (L.) Vahl.) ... 64
Lampiran 8. Surat pengesahan determinasi Stachytarpheta indica (L.)
Vahl. .......................................................................................... 67
Lampiran 9. Surat pengesahan Medical and Health Research Ethics
Committee (MHREC) ...................................................................... 68
Lampiran 10. Surat keterangan penggunaan program IBM SPSS Statistics 22 Lisensi
UGM ................................................................................................. 69
Lampiran 11. Analisis statistik kadar ALT dan AST pada penetapan waktu
pencuplikan darah ............................................................................. 70
Lampiran 12. Analisis statistik kadar ALT dan AST pada kelompok kontrol olive oil 2
mL/kgBB ........................................................................................... 72
Lampiran 13. Analisis statistik kadar ALT pada perlakuan ekstrak etanol 70% daun
jarong (Stachytarpheta indica (L.) Vahl.) setelah induksi karbon
tetraklorida 2 mL/kgBB .................................................................... 74
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xix
Lampiran 14. Analisis statistik kadar AST pada perlakuan ekstrak etanol 70% daun
jarong (Stachytarpheta indica (L.) Vahl.) setelah induksi karbon
tetraklorida 2 mL/kgBB .................................................................... 88
Lampiran 15. Perhitungan efek hepatoprotektif ............................................. 94
Lampiran 16. Perhitungan konversi dosis ekstrak etanol 70% daun jarong
(Stachytarpheta indica (L.) Vahl.) ............................................... 96
Lampiran 17. Penetapan kadar air serbuk simplisia daun Stachytarpheta indica
(L.) Vahl. ................................................................................... 97
Lampiran 18. Rendemen ekstrak kental daun S. Indica (L.) Vahl. .................. 98
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xx
INTISARI
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek hepatoprotektif ekstrak
etanol 70% daun jarong (Stachytarpheta indica (L.) Vahl.) terhadap aktivitas alanin
aminotransferase (ALT) dan asparat aminotransferase (AST) pada tikus jantan
galur Wistar yang terinduksi CCl4 serta untuk mengetahui dosis efektif ekstrak
sebagai hepatoprotektif.
Penelitian ini merupakan jenis penelitian eksperimental murni, rancangan
acak lengkap pola searah. Subjek dalam penelitian ini tikus jantan galur Wistar
sebanyak 30 ekor berumur 2-3 bulan berat badan 160-250 g, dibagi secara acak
dalam 6 kelompok. Kelompok I (kontrol negatif) diberi minyak zaitun dosis 2
mL/KgBB. Kelompok II (kontrol hepatotoksin) diberi larutan CCl4 dalam olive oil
dengan perbandingan 1:1 dosis 2 mL/KgBB. Kelompok III (kotrol ekstrak etanol)
diberi ekstrak etanol 70% daun S. Indica dengan dosis 400 mL/kgBB, setalah enak
jam diambil darah. Kelompok IV, V, dan VI diberi ekstrak etanol 70% daun S.
Indica dengan dosis bertingkat yakni 100, 200, dan 400 mg/KgBB, 6 jam setelah
pemberian ekstrak etanol 70% dilakukan induksi dengan CCl4 dengan dosis 2
mL/kgBB secara i.p. Dilakukan pengambilan darah pada sinus orbitalis mata untuk
penetapan aktivitas ALT dan AST pada jam ke-24 setelah pemberian CCl4. Data
aktivitas serum ALT dianalisis menggunakan one way ANOVA dengan taraf
kepercayaan 95% dan dilanjutkan uji Mann-Whitney atau Games Howel.
Hasil menunjukkan bahwa ekstrak etanol 70% daun S. indica memiliki
persen hepatoprotektif dari dosis terendah ke tertinggi sebesar 38,12, 30,56 dan
97,53%. Dosis efektif adalah dosis 400 mg/kgBB.
Kata kunci : efek hepatoprotektif, Stachytarpheta indica (L.) Vahl.,
ekstrak etanol 70%, ALT, AST
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xxi
ABSTRACT
This aims of study research to determine the hepatoprotective effect of
70% ethanol extract of jarong (Stachytarpheta indica (L.) Vahl.) leaves to alanine
aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) activities in male
Wistar rats were induced by CCl4 and to determine the effective dose of the extract.
This research is purely experimental research with randomized complete
direct sampling design. Subjects in this research used 30 male Wistar rats, aged 2-
3 months, 160-250 g weight, were randomly divided into 6 groups. Group I
(negative control) was given olive oil at a dose 2 mL/ KgBW. Group II (control
hepatotoxins) was given CCl4 dissolved in olive oil (1:1) at a dose of 2 mL/KgBW.
Group III (ethanol extract) was given 70% ethanol extract S. Indica leaves at a dose
of 400 mL/KgBW, blood was taken after the six hours later. Group IV, V, and VI
were given 70% ethanol extract of S. indica leaves with dose level of 100, 200, and
400 mg/KgBW orally six hours before CCl4 administration intraperitonially at dose
2 mL/kgBW. Blood sampling from all group were taken through eyes orbital sinus
for measuring of the activity of ALT and AST at the 24th hours after administration
of CCl4. The data were analyzed using one-way ANOVA with 95% significancy
level and continued test with Mann-Whitney or Howel Games.
The results showed that administration of 70% ethanol extract of S. indica
leaves has a hepatoprotective percent from the lowest to the highest dose at 38.12,
30.56 and 97.53%. The effective dose is the dose of 400 mg/kgBW.
Keywords: hepatoprotective effect, Stachytarpheta indica (L.) Vahl.,
70% ethanol extract, ALT, AST
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
1
BAB I
PENGANTAR
A. Latar Belakang
Setiap organ dalam tubuh memiliki perannya sendiri-sendiri. Organ penting
dalam tubuh manusia salah satunya hati. Hati merupakan kelenjar terbesar dalam
tubuh dengan berat sekitar 1300-1550 g. Hati berfungsi sebagai pabrik terbesar
dalam tubuh untuk suplai darah yang cukup besar, yaitu 1-1,5 L/menit, salah
satunya adalah menerima darah dari vena porta yang membawa produk pencernaan
dari saluran cerna. Beberapa fungsi hati, yaitu untuk metabolisme karbohidrat,
protein, lemak, sintesis, penyimpanan, detoksifikasi, produksi eritrosit, dan
destruksi eritrosit (Gibson, 2002).
Fungsi hati yang sangat penting bagi tubuh menyebabkan hati harus dilindungi agar
dapat beraktivitas sesuai tugasnya. Beberapa penyakit dapat menyebabkan
menurunnya aktivitas dari fungsi hati, salah satunya adalah steatosis atau biasa
disebut perlemakan hati (non-alcoholic fatty liver disease-NAFLD). Amarapurka
et al. (2007) dalam tulisannya berjudul How common is non-alcoholic fatty liver
disease in the Asia-Pcific region and are there local difference menyatakan bahwa
30% penduduk dewasa di Indonesia terkena NAFLD. Steatosis ini merupakan
penimbunan abnormal dari trigliserida dalam sel parenkim. Penyebab terjadinya
steatosis ini adalah senyawa toksin, malnutrisi protein, diabetes melitus, obesitas,
dan anoksia. Steatosis dapat disebabkan karena masuknya asam lemak dalam hati
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
2
sampai keluarnya lemak dari hati sebagai lipoprotein (Sudiono, Kurniadhi,
Hendrawan, & Djimantoro, 2001).
Banyak cara pengobatan yang dapat dilakukan untuk melindungi organ
hati dari kerusakan atau penyakit, salah satunya adalah dengan pengobatan herbal.
Pengobatan dengan menggunakan herbal merupakan cara yang lebih aman daripada
menggunakan obat modern. Hal tersebut, dikarenakan obat herbal memiliki efek
samping yang lebih rendah dibandingkan dengan obat modern yang sudah ada.
Tetapi penggunaan obat herbal ini harus digunakan dengan bahan yang sesuai, tepat
dosis, penggunaan yang tepat guna, informasi akurat mengenai obat herbal yang
digunakan dan tidak menyalahgunakan obat herbal (Sari, 2006). Berdasarkan
tulisan Sari (2006) tersebut sehingga memungkinkan untuk pencegah terjadinya
penyakit steatosis menggunakan herbal. Indonesia sendiri memiliki banyak
tanaman yang berguna untuk pengobatan herbal salah satunya daun jarong
(Stachytarpheta indica (L.) Vahl.).
Karbon tetraklorida (CCl4) merupakan salah satu senyawa yang dapat
merusak hati dengan terjadinya perlemakan dihati. Kerusakan hati ini ditandai
dengan peningkatan kadar enzim ALT dan AST (Panjaitan, Handaryani, Chairul,
& Masriani, 2007). Karbon tetraklorida ini menjadi radikal bebas karena
dimetabolisme oleh sitokrom P450 2E1 (CYP2E1). Dengan pemberian CCl4
dengan dosis tinggi akan mengakumulasi lipid.
Ekstrak daun Stacytarpheta indica (L.) dalam artikel yang ditulis oleh
Joshi, Sutar, Karigar, Patil, Gopalakrishna, & Sureban (2010) mengandung
senyawa karbohidrat, glikosida, dan flavonoid. Dijelaskan pula dalam tulisan Joshi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
3
et al. (2010) bahwa ekstrak etanol Stacytarpheta indica (L.) Vahl. memiliki
aktivitas hepatoprotektif yang ditunjukkan dengan tikus yang telah diinduksi
hepatotoksin CCl4 mengalami penurunan nilai SGPT, SGOT, SALP dan serum
bilirubin. Gayatri, Ramesh, Sumalatha, Venkates, & Vidyadhara (2011)
menyebutkan bahwa terdapat kandungan alkaloid, glikosida, saponin, tannin,
karbohidrat dan flavonoid. Senyawa flavonoid dapat diekstraksi dengan etanol 70%
(Harborne, 1987). Ekstrak dari serbuk simplisia dengan cara maserasi
menggunakan pelarut yang sesuai. Digunakan pelarut yang dapat menyari sebagian
besar metabolit sekunder yang terkandung dalam serbuk simplisia. Jika tidak
dinyatakan lain digunakan etanol 70% (Keputusan Menteri Kesehatan Republik
Indonesia, 2009).
Berdasarkan pemaparan diatas, perlu dilakukan penelitian mengenai
pengaruh efek hepatoprotektif ekstrak etanol 70% daun jarong (Stachytarpheta
indica (L.) Vahl.) terhadap aktivitas ALT-AST pada tikus jantan galur Wistar
terinduksi karbon tetraklorida.
1. Perumusan masalah
a. Apakah pemberian ekstrak etanol 70% daun jarong (Stachytarpheta
indica (L.) Vahl.) mempunyai efek hepatoprotektif dengan menurunkan aktivitas
AST-ALT pada tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida?
b. Berapakah dosis efektif dosis ekstrak etanol 70% daun Jarong
(Stachytarpheta indica (L.) Vahl.) dalam penggunaan jangka pendek terhadap
aktivitas AST-ALT yang dapat memberikan efek hepatoprotektif optimal pada tikus
jantan galur Wistar?
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
4
2. Keaslian penelitian
Penelitian menggunakan tanaman Stacytarphyta indica (L.) Vahl. pernah
dilakukan oleh :
a. Sahoo, Dash, and Bhatnagar (2014) yang melaporkan mengenai
aktivitas antioksidan dari ekstrak metanol Stacytarpheta indica Vahl. dengan
menggunakan metode DPPH.
b. Joshi et al. (2010) yang melakukan penelitian tentang ekstraksi ekstrak
etanol daun Stacytarpheta indica Vahl. menggunakan sokhlet dengan pelarut yang
kepolaritasanya meningkat. Dalam penelitian ini ekstrak etanol Stacytarpheta
indica Vahl. dilaporkan memiliki efek hepatoprotektif. Uji efek hepatoprotektif ini
dilakukan dengan menggunakan kontrol positif liv 52 (obat herbal dari The
Himalaya Drug Company) dengan jangka waktu penelitian 10 hari.
c. Gayatri et al. (2011) melakukan penelitian tentang aktivitas
hepatoprotektif ekstrak etanol herba Stachytarpheta indica Vahl. pada tikus Wistar.
Metode ekstraksi yang digunakan adalah dengan metode sokletasi. Uji aktivitas
hepatoprotektif dilakukan dalam jangka waktu 7 hari.
Berdasarkan penelitian diatas, penelitian efek hepatoprotektif jangka
pendek ekstrak etanol 70% daun jarong (Stachytarpheta indica Vahl.) dengan
metode ekstraksi maserasi belum pernah dilakukan sebelumnya.
3. Manfaat penelitian
a. Manfaat teoretis. Hasil penelitian ini diharapkan mampu memberikan
informasi terkait ilmu pengetahuan khususnya pada bidang kefarmasian mengenai
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
5
pengaruh pemberian jangka pendek ekstrak etanol 70% daun jarong
(Stachytarpheta indica (L.) Vahl.) sebagai hepatoprotektor.
b. Manfaat praktis. Hasil penelitian ini diharapkan mampu memberikan
informasi terkait dosis efektif pemberian ekstrak etanol 70% daun jarong
(Stachytarpheta indica (L.) Vahl.) bagi masyarakat dan industri farmasi sebagai
hepatoprotektor.
B. Tujuan
1. Tujuan umum
Untuk mengetahui efek hepatoprotektif pemberian ekstrak etanol 70% daun
jarong (Stachytarpheta indica (L.) Vahl.) terhadap aktivitas ALT dan AST pada
tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida.
2. Tujuan khusus
a. Mengetahui efek hepatoprotektif pemberian ekstrak etanol 70% daun
jarong (Stachytarpheta indica Vahl.) terhadap penurunan aktivitas ALT-AST pada
tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida.
b. Mengetahui dosis efektif pemberian esktrak etanol 70% daun jarong
(Stachytarpetha indica (L.) Vahl.) terhadap aktivitas ALT-AST yang dapat
memberikan efek hepatoprotektif optimal pada tikus jantan galur Wistar terinduksi
karbon tetraklorida.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
6
BAB II
PENELAAHAN PUSTAKA
A. Jarong (Stachytarpheta indica (L.) Vahl.)
Jarong dengan nama latin (Stachytarpheta indica (L.) Vahl.) merupakan
jenis tumbuhan liar yang berbunga sepanjang tahun, dapat diperbanyak dengan biji,
dan dapat tumbuh di tempat-tempat teduh dengan ketinggian 1300 meter di atas
permukaan laut (Maradjo, 1985). Berikut ini adalah gambar dari tanaman jarong:
Gambar 1 Tanaman Jarong (Stachytarpheta indica (L.) Vahl.)
(Dokumentasi Pribadi, 2015)
1. Taksonomi
Kingdom : Plantae
Subkingdom : Tracheobionta
Super Divisi : Spermatophyta
Divisi : Magnoliophyta
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
7
Kelas : Magnoliopsida
Sub Kelas : Asteridae
Ordo : Lamiales
Famili : Verbenaceae
Genus : Stachytarpheta
Spesies : Stachytarpheta indica Vahl.
(van Steenis, 1992; Plantamor, 2012)
Sinonim nama ilmiah:
Spesies : Stachytarpheta indica (L.) Vahl.
2. Nama daerah
Di Indonesia, jarong juga dikenal dengan nama berbeda di tiap-tiap daerah
seperti: remek getih, ngadi rengga (Jawa), jarongan, jarong lelaki (Jakarta), jarong
lelaki, pecut kuda (Sunda), rum jarum, roem jharum (Madura), selasih hutan
(Sumatera) (Dharma, 1996; Soedibyo, 1998).
3. Nama asing
Gajihan (Malaysia), ratstail (Filipina), yu long bian (China) (Plantamor,
2012).
4. Morfologi
Stachytarpheta indica (L.) Vahl. adalah rumput-rumputan yang tegak,
tinggi 0,3-0,9 m. Memiliki daun berhadap-hadapan, bertangkai sangat panjang,
berbentuk elips memanjang atau bulat telur, dengan kaki yang menyempit demi
sedikit, di atas bagian kaki yang bertepi rata berigigi beringgit, berambut jarang
atau tidak yang ukurannya 4-9 cm dan 2,5-5 cm. Bulir bertangkai pendek, panjang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
8
15-30 cm. Daun pelindung menempel kuat pada kelopak, bertepi lebar serupa
selaput. Kelopak bergigi empat, panjang 0,5 cm. Tabung dasar bunga berbentuk
bantal. Buah berbentuk garis baji, panjang 0,5 cm, pecah dalam 2 kendaga.
Terutama di daerah dengan musim kemarau yang tegas, di tempat yang cerah atau
sedikit, 1-1,250 m (Van Steenis, 1992).
5. Kandungan kimia
Jarong mengandung senyawa kimia berupa terpenoid, flavonoid,
glikosida, dan flavonoid (Chowdhury, 2003).
B. Anatomi dan Fisiologi Hati
1. Anatomi hati manusia
Hati manusia terletak dibawah diafragma di sisi kanan rongga perut. Hati
terbagi atas dua lapisan utama, yaitu permukaan atas yang berbentuk cembung dan
permukaan bawah tidak rata dan memperlihatkan lekukan fisura transfersus. Fisura
longitudinal memisahkan belahan kanan dan kiri hati dibagian atas hati, selanjutnya
hati dibagi menjadi empat belahan, yaitu lobus kanan, lobus kiri, lobus kaudat, dan
lobus quadratus (Syaifuddin, 2006). Organ hati di dalam tubuh manusia memiliki
berat sekitar 1500 g, terletak dalam rongga perut sebelah kanan, berwarna merah
kecokelatan dengan konsistensi lunak. Hati merupakan organ sekaligus kelenjar
terbesar di dalam tubuh yang memproduksi empedu dan juga mengeluarkan hasil
produksi dari makanan yang sudah dicerna (Wibowo dan Paryana, 2009). Letak dan
pembagian lobus hati dapat dilihat pada gambar 2 dan gambar 3.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
9
Gambar 2. Letak hati dalam tubuh manusia (Rogers dan Dintzis, 2012)
Gambar 3. Anatomi hati manusia (Rogers dan Dintzis, 2012)
Hati memiliki dua jalur peredaran darah, yaitu arteri hepatika dan vena
porta. Pada arteri hepatika, darah yang keluar dari aorta dan memberi seperlima
darah pada hati dan darah ini memiliki kejenuhan 95%-100%. Kemudian darah
yang masuk ke hati kemudian membentuk jaringan kapiler setelah bertemu dengan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
10
kapiler vena, kemudian akan keluar melalui vena hepatika. Pada vena porta yang
terbentuk dari lienalis dan vena mesentrika superior menghantarkan empat perlima
darahnya ke hati. Darah ini mempunyai kejenuhan 70% karena beberapa oksigen
telah diambil oleh limfase dan usus. Kegunaan darah ini membawa zat makanan ke
hati yang telah diabsorbsi oleh mukosa dan usus halus. Besar diameter vena porta
lebih kurang 1 mm dan satu dengan yang lain terpisah dengan jaringan ikat yang
membuat cabang pembuluh darah ke hati
2. Anatomi hati tikus
Pada tikus, hati mempunyai berat 6 g (6% dari berat tubuh). Bagian hati
berada pada subdiaphragmatic regional. Hati tikus dibagi menjadi empat bagian
lobus, yaitu lobus kanan, lobus kiri, lobus medial, dan lobus caudate. Lobus kanan
memiliki septum transversal yang membagi menjadi dua. Pada lobus medial berada
pada bagian perut dan merupakan bagian yang paling menonjol pada bagian rongga
perut. Lobus kiri merupakan bagian lobus terbesar dan merupakan bagian yang
paling sering digunakan sampel pemeriksaan histologis, sedangkan lobus caudate
merupakan lobus kecil. Sirkulasi darah tikus mirip dengan manusia (Rogers dan
Dintzis, 2012). Hati tikus digambarkan seperti gambarkan pada gambar 4 dan
gambar 5.
Gambar 4. Letak hati tikus dalam tubuh (Rogers dan Dintzis, 2012)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
11
Gambar 5. Hati tikus dan pembagian lobus (Rogers dan Dintzis, 2012)
3. Fisiologi hati
Hati memiliki fugsi mengubah zat makanan yang diabsorpsi dari usus dan
yang disimpan di suatu tempat dalam tubuh dan akan dikeluarkan sesuai dengan
pemakaiannya dalam jaringan. Selain itu hati mengubah zat buangan dan bahan
racun untuk diekskresi dalam empedu dan urine. Hati juga berperan untuk
menghasilkan enzim glikogenik untuk mengubah glukosa menjadi glikogen. Hati
juga sebagai pembentuk ureum dari asam amino yang diterima hati kemudian
dikeluarkan melalui darah menuju ginjal untuk dikeluarkan dalam bentuk urine.
Dan hati berfungsi untuk menyiapkan lemak untuk pemecahan terakhir asam
karbonat dan air (Syaifuddin, 2006).
C. Kerusakan Hati
Kerusakan hati dapat mengakibatkan beberapa penyakit. Beberapa
dianataranya, yaitu: perlemakan hati (steatosis), nekrosis, kolestasis, dan sirosis
(Hodgson, 2010).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
12
a. Perlemakan hati
Merupakan akibat dari toksin, malnutrisi protein, diabetes mellitus, obesitas,
dan anoksia. Timbunan trigliserida dalam hati dapat disebabkan karena defek
dari mulai masuknya asam lemak dalm hati sampai keluarnya lemak dari hati
sebagai lipoprotein (Sudiono, Kurniadhi, Hendrawan, & Djimantoro, 2001).
b. Nekrosis
Merupakan keadaan pada kematian jaringan. Dapat dikategorikan nekrosis
keoagulaif yang terjadi karena kekurangan suplai darah karena infark pada
organ, nekrosis likuefaktif, tipe khusus, dan apoptosis (Tambayong, 2000).
c. Kolestasis
Merupakan kelainan mekanisme pengangkutan empedu (kolestasis) yang
terjadi karena obstruksi atau terjadinya efek samping karena terganggunya
struktur hati karena kerusakan sel hati (Jeyaratnam dan Koh, 2009).
d. Sirosis
Merupakan penyakit kronis pada hepar dengan inflamasi dan fibrosis hepar
yang mengakibatkan distorsi struktur hepar dan hilangnya sebagian besar
fungsi hepar (Baradero, Dayrit, & Siswandi, 2008).
D. Hepatotoksin
Hepatotoksin diklasifikasikan menjadi dua, yaitu: hepatotoksin intrinsik
dan hepatotoksin indiosinkratik. Hepatotoksin intrinsik merupakan senyawa yang
mempunyai efek hepatotoksik hampir pada seluruh populasi yang terpejankan
senyawa tersebut. Senyawa ini bergantung pada dosis pemberian, sedangkan
hepatotoksin indiosinkratik merupakan senyawa yang mempunyai efek
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
13
hepatotoksik pada sebagian kecil populasi yang terpejankan senyawa tersebut.
Beberapa bergantung pada dosis pemberian (Friedman and Keeffe, 2012).
E. Alanin Aminotransferase (ALT) dan Aspartat Aminotransferase
(AST)
Alanin aminotransferase (ALT) dan Aspartat Aminotransferase (AST)
meupakan serum yang sering digunakan dalam uji fungsi hati. Jika kedua enzim
ditemukan di dalam serum, maka mengindikasikan adanya kerusakan fungsi hati
(McPhee dan Ganong, 2007). Konsentrasi enzim ALT terbesar terdapat pada hati
yang merupakan petunjuk spesifik adanya nekrosis dibandingkan AST yang
terdapat pada hampir semua jaringan, otot rangka, dan hati (Zimmerman, 1999).
Sebagai parameter krusakan hati, serum ALT dan AST dalam darah
memiliki kisaran kadar sebagai patokan ukuran. Pada tikus putih menurut Pilichos
et., al. (2004) kadar serum AST, yaitu berkisar antara 19,3-68,9 U/L sedangkan
kadar serum ALT 29,8-77,0 U/L.
F. Karbon tetraklorida
Karbon tetraklorida merupakan senyawa xenobiotic yang sering digunakan
untuk menginduksi peroksidasi lipid dan keracunan. Dalam retikulum endoplasma
hati, karbon tetraklorida dimetabolisme oleh sitokrom P450 2 E1 (CYP2E1)
menjadi radikal bebas yang akan menyebabkan peroksidasi lipid sehingga
mengganggu homestasis Ca2+ dan akhirnya dapat menyebabkan kematian sel (Lin,
Yen, Lo, Lin, 1998). Dengan dosis 10 ml/kg CCl4 dapat emgakibatksan perlemakan
hati (steatosis) (Panjaitan et al., 2007). Mekanisme biotransformasi karbon
tetraklrodida disajikan dalam gambar 6.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
14
Gambar 6. Biotransformasi karbon tetraklorida (McGregor dan Lang, 1996)
Karbon tetraklorida (CCl4) dapat memberikan kerusakan sel hati berupa
perlemakan hati. Sitokrom P-450 (CYP2E1) memiliki fungsi sebagai agen
pereduksi dan mengkatalisis adisi elektron yang mengakibatkan satu ion klorin
yang hilang sehingga membentuk suatu radikal bebas berupa triklorometil (•CClз)
(Gregus, 2008). •CClз dapat berikatan dengan protein dan lemak mikrosomal, serta
akan bereaksi secara langsung dengan kolesterol dan fosfolipid dan terbentuk
radikal lipid yang mengaktifkan oksigen reaktif dan terjadi peroksidasi lipid
(Timbrell, 2009). Penyakit hati yang dinyatakan steatosis jika kadar ALT dan AST
mengalami kenaikan sebesar 3 atau 4 kali lipat dari kadar normal (Paschos dan
Paketas, 2009).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
15
G. Flavonoid
Flavonoid merupakan senyawa fenolik yang diisolasi dari tumbuhan
dengan memiliki komponen senyawa sebanyak lebih dari 8000 senyawa. Senyawa
ini mempunyai kemampuan sebagai antioksidan, antimikroba, fotoreseptor,
skrining cahaya, dll (Piettea, 2000). Flavonoid dibagi menadi beberapa kelas, yaitu
Isoflavonoid, Neoflavonoid, dan Chalcones (Grotewold, 2006). Senyawa flavonoid
dapat diekstraksi dengan etanol 70% (Harborne, 1987). Flavonoid dapat digunakan
untuk menghambat kerusakan jaringan hepar tikus percobaa dengan dosis 100
mg/KgBB. Penghambatan kerusakan jaringan hepar dapat dilihat dari penurunan
aktivitas SGOT dan SGPT (Yerizel, Oenzil, & Endrinaldi, 1998).
H. Maserasi
Ekstraksi merupakan pemisahan senyawa yang mengandung zat aktif
untuk pengobatan yang didapat dari tanaman atau hewan. Teknik yang digunakan
dalam ekstraksi harus dapat mengambil senyawa aktif yang diingin dengan hasil
terbanyak. Beberapa metode ekstraksi, yaitu maserasi, perkolasi, digestion, infusa,
dan dekokta (Troy, 2006). Ekstraksi untuk untuk pengambilan senyawa dari
tanaman dapat berupa bagian tanaman yang masih segar dan bagian tanaman yang
dikeringkan (simplisia). Terdapat empat macam ekstraksi, yaitu maserasi, pekolasi,
perkolasi dingin, dan countercurrent extraction (Raaman, 2006).
Maserasi merupakan metode ekstraksi sederhana dengan merendam
simplisia dari tanaman dalam pelarut yang sesuai dengan keadaan tertutup pada
suhu kamar. Rasio pelarut yang digunakan untuk maserasi simplisia:pelarut, yaitu
1:5 atau 1:10. Perendaman dilakukan hingga beberapa hari. Selama ekstraksi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
16
dilakukan pengadukan dengan mixer atau shaker hingga homogen. Serbuk hasil
maserasi ini dapat dilakukan maserasi kembali sekali atau dua kali dengan pelarut
yang baru (Mahdi dan Altikriti, 2010). Jika tidak dinyatakan lain, maserasi
dilakukan dengan etanol 70% (Keputusan Menteri Kesehatan Republik Indonesia,
2009).
I. Landasan Teori
Organ hati merupakan organ sekaligus kelenjar terbesar didalam tubuh
yang memproduksi empedu dan juga mengeluarkan hasil produksi dari makanan
yang sudah dicerna (Wibowo dan Paryana, 2009). Beberapa keruskaan hati akibat
efek toksik, yaitu steatosis, nekrosis, kolestasis, dan sirosis (Lu, 1995).
Karbon tetraklorida (CCl4) dapat memberikan kerusakan sel hati berupa
perlemakan hati. Sitokrom P-450 (CYP2E1) memiliki fungsi sebagai agen
pereduksi dan mengkatalisis adisi elektron yang mengakibatkan satu ion klorin
yang hilang sehingga membentuk suatu radikal bebas berupa triklorometil (•CClз)
(Gregus, 2008). •CClз dapat berikatan dengan protein dan lemak mikrosomal, serta
akan bereaksi secara langsung dengan kolesterol dan fosfolipid dan terbentuk
radikal lipid yang mengaktifkan oksigen reakatif dan terjadi peroksidasi lipid
(Timbrell, 2009). Kerusakan hati oleh karbon tetraklorida dapat dilihat dengan
adanya kenaikan aktivitas serum ALT dan AST.
Jika kedua enzim ALT dan AST ditemukan meningkat di dalam serum
yang diuji, maka mengindikasikan adanya kerusakan fungsi hati (McPhee dan
Ganong, 2007). Konsentrasi enzim ALT terbesar terdapat pada hati yang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
17
merupakan petunjuk spesifik adanya nekrosis dibandingkan AST yang terdapat
pada hampir semua jaringan, otot rangka, dan hati (Zimmerman, 1999).
Pentingnya menjaga kondisi hati dari senyawa yang toksik dapat dilakukan
dengan berbagai cara. Salah satu dengan pengobatan menggunakan senyawa dari
bahan alam, yaitu flavonoid. Senyawa flavonoid hampir terdapat pada semua
tanaman, salah satunya adalah tanaman jarong (S. indica (L.) Vahl.) (Chowdhury,
2003). Tanaman jarong ini merupakan tanaman yang mudah dijumpai di Indonesia.
Penelitian yang dilakukan oleh Gayatri et al. (2011) menunjukkan bahwa esktrak
etanol 95% dengan metode sokletasi daun jarong mempunyai efek hepatoprotektif.
Senyawa flavonoid dapat diekstraksi dengan etanol 70% (Harborne, 1987).
Menurut Keputusan Menteri Kesehatan Republik Indonesia (2009) maserasi jika
tidak dinyatakan lain menggunakan etanol 70%. Berdasarkan pemaparan di atas,
diperlukan penelitian untuk mengetahui efek hepatoprotektif ekstrak etanol 70%
daun jarong sebagai hepatoprotektif pada tikus galur Wistar yang terpejankan CCl4.
J. Hipotesis
Ekstrak etanol 70% daun jarong (S. indica (L.) Vahl.) memiliki efek
hepatoprotektif dengan menurunkan aktivitas ALT-AST pada tikus jantan galur
Wisar terinduksi karbon tetraklorida.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
18
BAB III
METODE PENELITIAN
A. Jenis dan Rancangan Penelitian
Penelitian mengenai efek hepatoprotektif pemberian jangka pendek ekstrak
etanol 70% daun jarong (S. indica (L.) Vahl.) terhadap aktivitas ALT-AST pada
tikus jantang galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida merupakan jenis penelitian
eksperimental murni dengan rancangan acak lengkap pola searah.
B. Variabel dan Definisi Operasional
1. Variabel utama
a. Variabel bebas. Variabel bebas penelitian ini adalah variasi dosis dalam
pemberian jangka pendek ekstrak etanol 70% daun jarong (S. indica (L.) Vahl.).
b. Variabel tergantung. Variabel tergantung penelitian ini adalah nilai
aktivitas ALT-AST tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida
setelah pemberian ekstrak etanol 70% daun jarong (S. indica (L.) Vahl.).
2. Variabel pengacau
a. Variabel pengacau terkendali. Hewan uji yang digunakan, yaitu tikus
jantan galur Wistar yang berumur 2-3 bulan dengan berat badan 160-250 g, cara
pemberian ekstrak secara per oral, frekuensi waktu pemberian ekstrak, dan tempat
tumbuh daun jarong (S. indica (L.) Vahl.).
b. Variabel pengacau tak terkendal. Kondisi patologis dan fisiologis dari
tikus jantan galur Wistar.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
19
3. Definisi operasional
a. Daun S. indica (L.) Vahl. Daun S. indica (L.) Vahl. yang diambil dari
tanaman S. indica (L.) Vahl. adalah daun yang berwarna hijau, segar, dan sudah
memiliki bunga.
b. Ekstrak etanol 70% daun S. indica (L.) Vahl. Ekstrak etanol 70% daun
S. indica (L.) Vahl. didapatkan dengan cara merendam (memaserasi) simplisia
kering daun jarong ke dalam etanol dengan konsentrasi 70% kemudian dipekatkan
dengan menggunakan vaccum rotary evaporator dan diuapkan dengan water bath
hingga bobot tetap.
c. Efek hepatoprotektif. Efek hepatoprotektif merupakan kemampuan
ekstrak etanol 70% S. indica (L.) Vahl. dengan dosis tertentu yang diberikan dapat
melindungi hati yang ditunjukkan dengan penurunan aktivitas ALT-AST pada tikus
jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida.
d. Dosis efektif. Didefinisikan sebagai sejumlah miligram per kilogram
berat badan (mg/KgBB) ekstrak etanol S. indica (L.) Vahl. yang memiliki %
hepatoprotektif dari aktivitas ALT dan AST paling mendekati 100% proteksi hati
di antara dosis uji, yaitu 100, 200, dan 400 mg/KgBB.
e. ALT-AST. Alanin aminotransferase (ALT) - Aspartat
aminotransferase (AST) adalah enzim yang ditemukan di dalam serum. Enzim akan
terjadi kenaikan kadar yang mengindikasikan adanya kerusakan fungsi hati.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
20
C. Bahan Penelitian
1. Bahan utama
a. Hewan uji. Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah tikus
jantan galur Wistar yang berusia 2-3 bulan dengan berat badan 160-250 g yang
diperoleh dari daerah Bantul, Daerah Istimewa Yogyakarta dan telah memenuhi
kelaiakan etik (Lampiran 9).
b. Bahan uji. Bahan uji yang digunakan, yaitu serbuk daun S. indica (L.)
Vahl. yang diperoleh dari kebun obat Kampus III Universitas Sanata Dharma,
Paingan, Maguwoharjo.
2. Bahan kimia
a. Hepatotoksin
Karbon tetraklorida Merck® yang diperoleh dari Laboratorium Kimia
Analisis Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.
b. Kontrol negatif dan pelarut hepatotoksin
Kontrol negatif dan pelarut hepatotoksin yang digunakan adalah minyak
zaitun (olive oil) Caesar® yang diperoleh dari PT. Prambanan Kencana.
c. Pelarut ekstrak
Pelarut ekstrak yang digunakan adalah etanol 70% yang didapat dari
pengenceran etanol 96% dari toko Progo Mulyo, Yogyakarta dan aquadest yang
diperoleh dari Laboratorium Kultur Jaringan Fakultas Farmasi Universitas Sanata
Dharma.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
21
d. Pelarut ekstrak ketika digunakan
Pelarut ekstrak yang digunakan adalah CMC-Na 1%. Bahan CMC-Na
diperoleh dari CV. General Labora, Yogyakarta.
e. Reagen ALT
Reagen ALT yang digunakan adalah reagen ALT DiaSys. komposisi dan
konsentrasi dari reagen ALT adalah sebagai berikut:
Tabel I. Tabel komposisi dan konsentrasi reagen ALT
Komposisi pH Konsentrasi
R1: TRIS 7,15 140 mmol/L
L-Alanine 700 mmol/L
LDH (Lactate dehydrogenase) ≥2300 U/L
R2: 2-Oxoglutarate 85 mmol/L
NADH 1 mmol/L
Pyridoxal-5 phospate FS:
God’s buffer
Pyridoxal-5-phospate
9,6
100 mmol/L
13 mmol/L
f. Reagen AST
Reagen AST yang digunakan adalah reagen AST DiaSys. Komposisi dan
konsentrasi dari reagen AST adalah sebagai berikut:
Tabel II. Tabel komposisi dan konsentrasi dari reagen AST
Komposisi pH Konsentrasi
R1:TRIS 7,65 110 mmol/L
L-Aspartate 320 mmol/L
MDH (Malate dehydrogenase) ≥800 U/L
LDH (Lactate dehydrogenase) ≥1200 U/L
R2: 2-Oxyglutarate 65 mmol/L
NADH 1 mmol/L
Pyridoxal-5 phospate FS:
God’s buffer
Pyridoxal-5-phospate
9,6
100 mmol/L
13 mmol/L
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
22
D. Alat Penelitian
1. Alat pembuatan serbuk daun S. indica
Alat yang digunakan antara lain oven, mesin penyerbuk, dan ayakan.
2. Alat ekstraksi daun S. indica
Alat-alat yang digunakan antara lain beaker glass, Erlenmeyer, gelas ukur,
labu ukur, cawan porselen, pipet tetes, batang pengaduk, shaker, dan timbangan
analitik.
3. Alat uji penetapan kadar air
Moisture balance, sendok.
4. Alat pengujian hepatoprotektif
Alat-alat yang dibutuhkan adalah gelas Beaker, gelas ukur, tabung reaksi,
labu ukur, pipet tetes, batang pengaduk (Pyrex Iwaki Glass®), timbangan analitik
(Mettler Toledo®), vortex (Genie Wilten®), spuit injeksi per oral untuk tikus, spuit
injeksi intraperitonial, pipa kapiler, micropipet, tabung Eppendorf, sentrifuge,
microvitalab 200 Merck®, blue tip, dan yellow tip.
E. Tata Cara Penelitian
1. Determinasi tanaman jarong (S. indica (L.) Vahl.)
Tanaman jarong yang diperoleh dari kebun obat kampus III Universitas
Sanata Dharma, Paingan, Maguwoharjo. Tanaman jarong dideterminasi dengan
mencocokkan morfologi tanaman jarong dengan buku acuan (van Steenis, 1992).
Determinasi dilakukan dilakukan di Laboratorium Farmakognosi Fitokimia,
Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
23
2. Pengumpulan bahan uji
Bahan uji dipetik dari Kebun Obat Fakultas Farmasi Universitas Sanata
Dharma. Daun dipilih yang ideal, yaitu dipetik dengan batas tiga daun dari bawah
maupun dari atas dan dilakukan pada bulan Juli-Agustus saat pagi hari. Daun yang
telah didapat disortasi dan dicuci bersih dengan air mengalir. Setelah bersih, daun
diangin-anginkan dengan ditutup kain hitam hingga tidak tampak basah kemudian
dilakukan pengeringan menggunakan oven pada suhu 40oC selama 48 jam.
Penetapan suhu berdasarkan aturan Direktorat Jenderal Obat dan Makanan
Republik Indonesia (1985) dimana disebutkan bahwa pengeringan dilakukan pada
suhu antara 30-90oC.
3. Pembuatan serbuk
Daun yang telah benar-benar kering (mudah dihancurkan dengan cara
diremas), daun kering diserbuk dan diayak menggunakan ayakan nomor mesh 40
supaya kandungan fitokimia dalam daun S. indica (L.) Vahl. lebih mudah terekstrak
karena luas permukaan serbuk yang kontak dengan pelarut semakin besar.
4. Penetapan kadar air serbuk daun S. indica
Serbuk daun S. indica (L.) Vahl. dimasukkan ke dalam alat moisture
balance sebanyak 5 gram, lalu diratakan. Bobot serbuk tersebut ditetapkan sebagai
bobot sebelum pemanasan, setelah itu dipanaskan pada suhu 105oC selama 15
menit. Serbuk yang telah dipanaskan ditimbang kembali lalu dihitung sebagai bobot
setelah pemanasan. Kadar air serbuk simplisia yang baik tidak adalah <10%.
Perhitungan kadar air serbuk diperoleh menggunakan rumus:
(𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑠𝑒𝑏𝑒𝑙𝑢𝑚 𝑝𝑒𝑚𝑎𝑛𝑎𝑠𝑎𝑛 − 𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑠𝑒𝑡𝑒𝑙𝑎ℎ 𝑝𝑒𝑚𝑎𝑛𝑎𝑠𝑎𝑛)
𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑠𝑒𝑏𝑒𝑙𝑢𝑚 𝑝𝑒𝑚𝑎𝑛𝑎𝑠𝑎𝑛 𝑥 100%
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
24
5. Uji tabung kandungan polifenol serbuk daun jarong
Uji kandugan polifenol dilakukan dengan menambahkan 10 mL aquadest
pada sebuah tabung berisi 2 g serbuk daun jarong dan 10 mL etanol 70% pada
tabung lain yang juga berisi 2 g serbuk daun jarong. Kedua tabung didihkan di atas
penangan air, kemudian dilakukan penyaringan. Setelah dingin, filtrat diteteskan
FeCl3 sebanyak 3 tetes. Hasil positif adanya polifenol ditunjukkan dengan
terbentuknya warna hijau-biru (Wulandari dan Hartini, 2015).
6. Pembuatan pelarut etanol 70%
Etanol 96% diencerkan dengan menggunakan rumus V1.C1 = V2.C2,
dimana etanol 96% diencerkan dengan menggunakan aquadest hingga
konsentrasinya menjadi 70%
7. Pembuatan ekstrak kental daun S. indica
Serbuk daun jarong sebanyak 30 g diekstraksi dengan etanol 70% sebanyak
300 mL dengan metode maserasi menggunakan shaker selama 24 jam (Gunawan,
Soegihardjo, Mulyani, Wahyuningsih, dan Sudarto, 1993). Kemudian dilakukan
remaserasi satu kali dengan perlakuan sama dengan maserasi awal. Ekstrak cair
yang diperoleh dari maserasi dan remaserasi diuapkan pelarutnya dengan vacuum
rotary evaporator. Hasil evaporasi yang didapat kemudian dituangkan dalam
cawan porselin yang telah ditibang terlebih dahulu beratnya untuk menghitung
rendemen ekstrak kental kemudian diuapkan dengan waterbath sampai menjadi
ekstrak kental dan bobot tetap. Menurut Farmakope Herbal Indonesia, ekstrak
kental dicapai ketika tercapai bobot tetap, yakni apabila perbedaan dua kali
penimbangan berturut-turut setelah dikeringkan selama 1 jam tidak melebihi 0,5
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
25
mg pada penimbangan dengan timbangan analitik. Rendemen ekstrak kental
didapat dari persamaan berikut:
𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘
𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑖𝑚𝑝𝑙𝑖𝑠𝑖𝑎× 100%
8. Pembuatan CMC-Na 1%
CMC-Na ditimbang kurang lebih 1,0 g. Kemudian dilarutkan dengan cara
disebarkan didalam erlenmeyer yang berisi aquadest 40 mL selanjutnya
ditambhakan lagi 60 mL aquadest.
9. Penetapan dosis ekstrak etanol 70% daun S. indica (L.) Vahl.
Penentuan dosis ekstrak etanol 70% mengacu pada penelitian yang
dilakukan oleh Joshi et al. (2010) yang menyebutkan bahwa dosis efektif ekstrak
etanol daun jarong adalah 200 mg/kgBB. Dosis ini dijadikan sebagai dosis tengah.
Penelitian ini menggunakan tiga peringkat dosis dengan faktor kelipatan 2
sehingga dosis rendah sebesar 100 mg/kgBB, dosis tengah sebesar 200 mg/kgBB,
dan dosis tinggi 400 mg/kgBB.
10. Uji pendahuluan
a. Penetapan dosis hepatoksin
Penetapan dosis hepatotoksin dilakukan melalui studi literatur yang
dilakukan oleh Janakat dan Al-Merie (2002) yang menyebutkan bahwa dosis
hepatotoksin karbon tetraklorida yang digunakan untuk menginduksi kerusakan
hati tikus jantan galur Wistar adalah 2 mL/kgBB dimana volume CCl4 sama dengan
volume minyak zaitun (1:1). Pemilihan dosis hepatoksin ini karena pada dosis
tersebut, terjadi kerusakan sel-sel hati dari tikus jantan galur Wistar yang terdeksi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
26
dari kenaikan serum ALT dan AST, namun tidak sampai menyebabkan kematian
pada tikus jantan sebagai subjek penelitian tersebut (Janakat & Al-Merie, 2002).
b. Penetapan waktu pencuplikan darah
Waktu pencuplikan darah diperoleh dengan cara melakukan orientasi
dengan tiga kelompok perlakuan waktu, yakni pada waktu ke- 0, 24, dan 48 jam.
Kemudian diukur kenaikan aktivitas AST-ALT. Penelitian terdapat sebelumnya
yang dilakukan oleh Janakat dan Al-Merie (2002) telah menunjukkan bahwa
terdapat peningkatan aktivitas ALT pada tikus yang terinduksi karbon tetraklorida
yang dilarutkan dalam olive oil dengan perbandingan (1:1), yakni dengan dosis 2
mL/kgBB. Peningkatan aktivitas maksimal terjadi pada jam ke-18 dan jam ke-24
setelah pemberian karbon tetraklorida secara injeksi dan kemudian berangsur
menurun pada jam ke-48 dan terjadi perbaikan sel hati setelah 3 hari pemberian
hepatotoksin (Janakat, Al- Merie, 2002).
11. Pengelompokkan dan perlakuan hewan uji
Tikus jantan galur Wistar yang diperlukan sebagai hewan uji adalah
sebanyak 36 ekor yang kemudian akan dibagi kedalam 6 kelompok secara acak
sama banyak. Kelompok I (kelompok kontrol negatif diberi minyak zaitun dosis 2
mL/kgBB secara i.p., kemudian setelah 24 jam dilakukan pengambilan darah.
Kelompok II (kelompok kontrol hepatotoksin) diberi larutan karbon tetraklorida
dalam minyak zaitun (1:1) dengan dosis 2 mL/kgBB secara intraperitonium (i.p.),
setelah 24 jam dilakukan pengambilan darah. Kelompok III (kelompok kontrol
ekstrak) yakni diberi ekstrak etanol daun Stachytarpheta indica (L.) Vahl. dengan
dosis tertinggi (400 mg/kg BB) secara peroral, kemudian setelah enam jam
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
27
dilakukan pengambilan darah. Kelompok V-VI (kelompok perlakuan uji yang
diberikan ekstrak etanol daun Stachytarpheta indica (L.) Vahl. dengan dosis
bertingkat yakni 100 mg/KgBB; 200 mg/KgBB; dan 400 mg/KgBB kemudian
enam jam setelah pemberian ekstrak etanol 70% daun jarong dilakukan induksi
dengan karbon tetraklorida dengan dosis 2 mL/kgBB secara intraperitoneal
(Alkreathy, Khan, Khan, & Sahreen, 2014). Dilakukan pengambilan darah pada
daerah sinus orbitalis mata sebanyak 1 mL untuk penetapan aktivitas ALT dan AST
pada jam ke-24 setelah pemberian karbon tetraklorida.
12. Pembuatan serum
Darah yang diambil melalui sinus orbitalis mata menggunakan pipa
kapiler ditampung dalam tabung Eppendorf sebanyak 1 mL (Office of Animal Care
and Use, 2015). Kemudian darah yang diambil didiamkan selama 15 menit,
selanjutnya dilakukan sentrifugasi dengan kecepatan 8000 rpm selama 15 menit
(Egbung, Atangwho, Itam, & Essien, 2012).
13. Pengukuran aktivitas ALT-AST
Pengukuran aktivitas serum ALT-AST dilakukan menggunakan Microlab-
200 Merck® di Laboratorium Biokimia Fisiologi Manusia, Fakultas Farmasi,
Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Aktivitas serum ALT-AST diukur pada
panjang gelombang 340 nm, dan dinyatakan dengan satuan U/L. Kisaran nilai ALT
serum kontrol DiaSys Trulab N series yakni 29,8-77,0 U/L. Tahap analisis ALT
dilakukan dengan mengambil sejumlah 100 µL serum dicampurkan dengan 1000
µL reagen I dan divortex selama 5 detik. Campuran didiamkan selama 5 menit
selanjutnya dicampur dengan 250 µL reagen II dan divortex selama 5 detik.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
28
Campuran kemudian dibaca serapannya setelah 1 menit berselang dari pemberian
reagen II (DiaSys, 2012).
Tahap analisis ALT dilakukan dengan mengambil sejumlah 100 µL serum
dicampurkan dengan 1000 µL reagen I dan divortex selama 5 detik. Campuran
didiamkan selama 5 menit selanjutnya dicampur dengan 250 µL reagen II dan
divortex selama 5 detik. Campuran kemudian dibaca serapannya setelah 1 menit
berselang dari pemberian reagen II. Tahap analisis AST dilakukan dengan cara yang
sama, yakni dengan mengambil sejumlah 100 µL serum dicampurkan dengan 1000
µL reagen I dan divortex selama 5 detik. Campuran didiamkan selama 5 menit
selanjutnya dicampur dengan 250 µL reagen II dan divortex selama 5 detik.
Campuran kemudian dibaca serapannya setelah 1 menit berselang dari pemberian
reagen II (DiaSys, 2012).
F. Tata Cara Analisis Hasil
Data aktivitas dari ALT dan AST serum diperoleh, selanjutnya dianalisis
dengan Saphiro Wilk (karena sampel di bawah 50) untuk mengetahui apakah
distribusi normal atau tidak, kemudian dilakukan uji Levene’s Test untuk
mengetahui homogenitas varian data antar kelompok sebagai syarat parametrik.
Jika diperoleh distribusi normal, kemudian dilanjutkan dengan analisis pola searah
(One Way ANOVA) dengan taraf kepercayaan 95% untuk mengetahui perbedaan
dari masing-masing kelompok. Post-Hoc test Tukey selanjutnya dilakukan untuk
melihat kebermaknaan perbedaan data antara masing-masing kelompok untuk data
berdistribusi normal dan variansi homogen. Post-Hoc test Games Howell
selanjutnya dilakukan guna melihat kebermaknaan perbedaan data antara masing-
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
29
masing kelompok untuk data berdistribusi normal dan variansi tidak homogen.
Perbedaan dikatakan bermakna (signifikan) bila memiliki nilai p<0.05, sedangkan
tidak bermakna (tidak signifikan) bila p>0,05.
Bila data aktivitas ALT dan AST yang diperoleh tidak normal, maka
dilakukan uji Kruskall-Wallis. Selanjutnya dilakukan uji Mann-Whitney untuk
melihat kebermaknaan perbedaan data antar kelompok. Perbedaan dikatakan
bermakna (signifikan) bila memiliki nilai p<0,05, sedangkan tidak bermakna (tidak
signifikan) bila p>0,05.
Perhitungan persen efek hepatoprotektif terhadap hepatotoksin karbon
tetraklorida diperoleh dengan rumus sebagai berikut:
ALT = (1 −(purata ALT perlakuan − purata ALT kontrol negatif)
(purata ALT kontrol hepatotoksin − purata ALT kontrol negatif)) x100%
AST = (1 −(purata AST perlakuan − purata AST kontrol negatif)
(purata AST kontrol hepatotoksin − purata AST kontrol negatif)) x100%
(Wakchaure, Jain, Singhai, dan Somani, 2013).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
30
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek hepatoprotektif pemberian
ekstrak etanol 70% daun jarong (Stachytarpheta indica (L.) Vahl) terhadap aktivitas
ALT-AST pada tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida (CCl4)
serta mengetahui dosis efektif pemberian ekstrak etanol 70% daun jarong.
Penelitian ini melihat pengaruh hepatoprotektif ekstrak etanol 70% daun jarong dari
penuruan kadar ALT-AST pada tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon
tetraklorida (CCl4).
A. Penyiapan Bahan
1. Determinasi tanaman
Penelitian ini menggunakan bagian daun dari tanaman jarong
(Stachytarpheta indica (L.) Vahl). Banyaknya tanaman yang berpotensi sebagai
obat menjadikan pemastian tanaman yang akan digunakan dalam penelitian sangat
penting (Epidemiological and Statistical Methodology Unit, 1986). Pemastian
tanaman dilakukan dengan melakukan determinasi tanaman. Tanaman yang
digunakan diambil dari kebun obat Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma
Yogyakarta.
Determinasi dilakukan dengan mengacu pada tulisan van Steenis (1992).
Pengamatan untuk determinasi dilakukan dari keseluruhan tanaman mulai daun,
bunga, batang, hingga akar. Hasil dari determinasi didapat bahwa tanaman yang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
31
akan digunakan adalah benar tanaman jarong (Stachytarpheta indica (L.) Vahl.)
(Lampiran 7 dan Lampiran 8).
2. Pengumpulan bahan uji
Setelah didapatkan daun jarong, lalu diproses hingga pengeringan sesuai
dengan panduan pembuatan simplisia. Sortasi dilakukan untuk memastikan daun
yang diambil tidak terkontaminasi dengan bahan lain, selain itu juga untuk memilah
daun yang rusak. Daun yang rusak harus dipisahkan karena jika daun yang rusak
akibat hama serangga ditakukan akan mempengaruhi kualitas dari zat yang
terkandung dalam daun tersebut. Proses diangin-anginkan setelah sortasi dilakukan
agar pengeringan dapat berlangsung dengan tepat dan benar. Suhu oven
pengeringan dilakukan pada suhu 40oC karena pada suhu tersebut merupakan suhu
optimal (tidak terlalu tinggi maupun tidak terlalu panas), sehingga diharapkan tidak
merusak kandungan senyawa daun jarong. Hasil pengumpulan bahan uji ini
mendapatkan daun jarong sesuai dengan yang diharapkan dan dalam kondisi yang
baik hingga pengeringannya.
3. Pembuatan serbuk daun S. indica (L.) Vahl.
Daun jarong dipastikan kering dengan cara meremas daun, jika daun
langsung hancur menandakan bahwa daun telah kering sempurna dan dapat
dilakukan pembuatan serbuk. Pengayakan serbuk dilakukan dengan menggunakan
penyaring antara mesh 30-40 (International Centre for Science and High
Technology, 2008), sehingga pada penelitian ini digunakan mesh 40 untuk
pengayakan agar partikel serbuk yang besar tidak tercampur dengan partikel serbuk
(ukuran partikel sama). Ukuran peraktikel yang kecil juga diharapkan pada saat
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
32
penyarian serbuk simplisia daun jarong dapat tersari sempurna karena dengan
semakin kecilnya ukuran serbuk simplisia menyebabkan luas permukaan kontak
menjadi lebih besar. Serbuk yang didapatkan berwarna hijau.
4. Penetapan kadar air serbuk simplisa S. indica (L.) Vahl.
Syarat serbuk simplisia yang baik menurut Dirjen POM salah satunya
adalah kandungan air yang ada tidak lebih dari 10%. Mengacu syarat tersebut maka
dilakukan pengujian kadar air serbuk simplisia daun jarong yang telah siap
digunakan dalam penelitian. Pengujian kadar ini bertujuan mengetahui %
kandungan air yang ada dalam serbuk simplisa. Pengujian dilakukan dengan
metode gravimetri di laboratorium Kimia Analisis Universitas Sanata Dharma
Yogyakarta. Hasil pengukuran kadar air yang didapat sebesar 8,26%. Hasil tersebut
sudah memenuhi persyaratan mutu serbuk simplisia yang baik menurut Dirjen
POM tahun 1995 yang menyatakan bahwa untuk kadar air serbuk simplia kurang
dari 10%.
5. Hasil uji tabung kandungan polifenol
Pada tulisan Harborne pada tahun 1987 menjelaskan bahwa pengujian
polifenol dapat dilakukan dengn pereaksi FeCl3. Pengujian polifenol ini dengan
tujuan untuk melihat secara kualitatif apakah ekstrak etanol 70% daun S. indica (L.)
Vahl. mempunyai senyawa yang dituju, yaitu flavonoid. Flavonoid merupakan
bagian terbesar penyusun polifenol (Dai dan Mumper, 2010). Hasil uji secara
kualitatif ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol 70% daun S. indica (L.) Vahl.
mengandung polifenol salah satunya flavonoid, hal ini ditunjukkan dengan adanya
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
33
perubahan warna dari ekstrak yang berwaran coklat kehijauan menjadi warna hijau
kebiruan setelah diberikan FeCl3 pada ekstrak (Harborne, 1987).
B. Pembuatan ekstrak etanol 70% daun S. indica (L.) Vahl.
Ekstrak etanol 70% didapat dengan meode maserasi yang dilanjutkan
remaserasi satu kali. Maserasi merupakan metode ekstraksi yang sederhana
(menggunakan alat-alat sederhana) dengan cara merendam serbuk simplisia dengan
menggunakan pelarut yang sesuai. Selanjutnya dilakukan remaserasi untuk menyari
kembali senyawa yang masih tertinggal pada serbuk simplisia. Penggunaan pelarut
yang sebanyak 300 mL ini dimaksudkan agar dapat menyari senyawa yang
diinginkan dengan optimal, dimana Mahdi dan Altikriti (2010) juga menyatakan
bahwa perbandingan simplisia dan pelarut yang digunakan 1:5 atau 1:10.
Penggunaan shaker ini bertujuan untuk mempermudah penggojogan secara konstan
selama maserasi berlangsung, sehingga pelarut yang ada disekitar permukaan
partikel tidak jenuh dan pengambilan senyawa dapat berlangsung dengan maksimal
(International Centre for Science and High Technology, 2009).
Ektrak cair hasil maserasi dan remaserasi kemudian diuapkan pelarutnya
dengan menggunakan rotary evaporator. Prinsip penggunaan rotary evaporator ini
adalah proses pemisahan ekstrak dari cairan penyarinya dengan pemanasan yang
dipercepat oleh putaran dari labu, cairan penyari akan dapat menguap dibawah titik
didih pelarutnya disebabkan oleh karena adanya tekanan. Selanjutnya diuapkan
dengan menggunakan water bath untuk mendapatkan ekstrak kental dan agar
memudahkan perhitungan rendemennya. Ektrak kental harus memenuhi salah satu
klasifikasi, yaitu bobot yang didapatkan adalah tetap. Bobot tetap ini dimaksudkan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
34
bahwa ekstrak yang ada hanya ekstrak yang diinginkan saja, sedangkan pelarutnya
diharapkan sudah menguap semua. Berdasarkan Farmakope Herbal Indonesia,
bobot tetap didapat dengan menimbang selama 1 jam ekstrak hingga selisi bobot
tidak lebih dari 0,5 mg. Sebanyak 30 gram serbuk simplisia daun jarog dengan
replikasi 3 kali menghasilkan bobot ekstrak kental 6,494 gram dengan rendemen
yang didapat, yaitu 21,646%.
C. Uji Pendahuluan
1. Penetuan dosis hepatotoksin
Karbon tetraklorida (CCl4) merupakan salah satu senyawa hepatotoksin
yang sering digunakan dalam penelitian. Sebelum digunakan sebagai hepatotoksin,
senyawa ini harus diketahui berapa dosisnya agar menyebabkan tikus mengalami
kerusakan hati dalam hal ini steatosis. Dosis CCl4 pada penelitian ini mengacu pada
penelitian yang dilakukan oleh Janakat dan Al-Merie (2002) yang menyatakan
bahwa dosis 2 mL/KgBB CCl4 yang diinduksikan pada tikus secara intra peritoneal
telah dapat menyebabkan hepatotoksik. Karbon tetraklorida ini dilarutkan dalam
pelarut olive oil dengan perbandingan 1:1. Pemastian dosis hepatotoksin ini dilihat
dari uji kadar ALT dan AST. Kenaikan dari kadar ALT dan AST dari kadar normal
menandakan adanya kerusakan hati yang terjadi.
2. Penentuan dosis ekstrak etanol 70% daun jarong (S. indica (L.) Vahl.)
Joshi et al (2010) dalam penelitiannya menyatakan bahwa dosis efektif
untuk ekstrak etanol daun jarong (S. indica (L.) Vahl.) adalah 200 mg/KgBB. Dosis
tersebut dijadikan sebagai acuan untuk dosis ekstrak etanol 70% daun jarong pada
penelitian ini. Penelitian ini dilakukan dengan tiga peringkat dosis dengan faktor
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
35
kelipatan 2, dengan dosis acuan sebagai dosis tengah. Sehingga dosis yang
digunakan dalam penelitian ini 100 mg/KgBB sebagai dosis rendah, 200 mg/KgBB
sebagai dosis tengah, dan 400 mg/KgBB sebagai dosis tinggi.
3. Penentuan waktu pencuplikan darah
Penentuan waktu pencuplikan darah ini dilakukan untuk mengetahui efek
optimum hepatotoksin CCl4 pada jam tertentu yang akan digunakan sebagai
penentu pemngambilan darah pada penelitian ini. Penentuan waktu pencuplikan
berdasarkan nilai ALT dan AST kelompok tikus jantan galur Wistar yang diberikan
hepatotoksin CCl4 diukur kadar ALT dan AST pada jam ke 0, 24, dan 48 setelah
pemberian hepatotoksin. Dari pengambilan darah pada jam-jam tersebut
dibandingkan manakah yang memiliki kadar hepatotoksin tertinggi. Darah yang
diambil melalui sinus orbitalis. Hasil dari pengukuran kadar ALT setelah pemberian
karbon tetraklorida dosis 2 mL/KgBB tersaji pada tabel III dan gambar 7.
Tabel III. Purata aktivitas serum ALT tikus setelah induksi karbon tetraklorida
dosis 2 mL/kgBB pada pencuplikan jam ke-0, 24, dan 48 (n = 3)
Waktu pencuplikan jam ke- Purata kadar ALT ± SE (U/L)
0 60,80 ± 2,27
24 181,40 ± 6,40
48 74,20 ± 1,99
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
36
Gambar 7. Diagram batang aktivitas serum ALT pada selang waktu 0, 24, dan 48
jam setelah induksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB
Berdasarkan tabel III dan gambar 7 dapat diketahui bahwa aktivitas serum
ALT pada jam ke 0, 24, dan 48 secara beturut-turut, yaitu 60,80 ± 2,27, 181,40 ±
6,40 dan 74,20 ± 1,99 U/L, sehingga dari data tersebut dapat diketahui bahwa kadar
ALT kelompok tikus yang terinduksi CCl4 pada pencuplikan darah jam ke-24
menunjukkan hasil yang lebih tinggi jika dibandingkan dengan pencuplikan darah
pada jam ke 0 dan 48. Selanjutnya, dari hasil tersebut dilakukan analisa paired-
samples T test. Hasil dari analisa paired-samples T test disajikan pada tabel IV.
Tabel IV. Hasil Paired-Samples T Test aktivitas serum ALT tikus setelah induksi
karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB pada pencuplikan jam ke-0, 24, dan
48 (n = 3)
Waktu pencuplikan
(jam ke-)
Jam ke-0 Jam ke-24 Jam ke-48
Jam ke-0 BB BB
Jam ke-24 BB BB
Jam ke-48 BB BB
Keterangan gambar: BB = Berbeda Bermakna (p≤0,05)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
37
Hasil analisa paired-samples T test menunjukkan bahwa kadar ALT pada
jam ke-0, 24, dan 48 menunjukkan bahwa hasil yang didapat berbeda bermakna
dimana kadar CCl4 pada jam ke 24 naik dengan signifikan dari jam ke-0 dan pada
jam ke-48 terjadi penurunan kadar tetapi belum sama dengan kadar pada jam ke-0,
sehingga dapat disimpulkan bahwa peningkatan kadar ALT yang optimum adalah
pada jam ke-24. Hal ini karena pada jam ke-24 menunjukkan bahwa kadar ALT
paling tinggi dibandingkan yang lain (Gambar 7).
Sedangkan hasil pengukuran kadar AST tersaji pada tabel V dan gambar
8.
Tabel V. Purata aktivitas serum AST tikus setelah induksi karbon tetraklorida
dengan dosis 2 mL/kgBB saat pencuplikan darah pada jam ke-0, 24, dan
48
Waktu pencuplikan jam ke- Purata kadar AST ± SE (U/L)
0 141,20 ± 5,15
24 452,40 ± 32,45
48 156,80 ± 4,61
Gambar 8. Diagram batang purata aktivitas serum AST pada selang waktu 0, 24,
dan 48 jam setelah induksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
38
Berdasarkan hasil aktivitas serum AST tersebut pada jam ke-0, 24, dan 48
berturut-turut, yaitu 141,20 ± 5,15, 452,40 ± 32,45 dan 156,80 ± 4,61 U/L.
Penentuan perbandingan kadar AST pada jam ke 0, 24, dan 48 dengan
menggunakan analisis statistik Paired-Sample Test (Tabel VI). Hasil statistik
menunjukkan aktivitas kadar serum AST pada jam ke-0 berbeda bermakna dengan
kadar AST jam ke-24 (p=0,000) dan jam ke-48 (p=0,006), yang dapat diartikan
bahwa terjadi peningkatan kadar CCl4 dalam darah pada jam ke-24 dan pada jam
ke-48 terjadi penurunan tetapi belum sama dengan kadar pada jam ke-0. Pada
perbandingan kadar AST pada jam ke-24 dengan kadar AST jam ke-48
menunjukkan perbedaan yang bermakna (p=0,001), dimana terjadi penurunan yang
cukup signifikan dari jam ke-24 ke jam ke-48. Berdasarkan pengukuran, dapat
dilihat bahwa terjadi peningkatan kadar AST pada jam ke 24 yang paling optimum.
Pada jam ke 48, kadar AST mengalami penuruanan tetapi tidak mencapai nilai
normal. Sehingga dapat dinyatakan bahwa kadar optimum CCl4 terjadi pada jam
ke-24. Berikut adalah tabel hasil uji T berpasangan kadar AST:
Tabel VI. Hasil Paired-Samples T Test kadar AST tikus setelah induksi karbon
tetraklorida dengan dosis 2 mL/kgBB saat pencuplikan darah pada jam
ke-0, 24, dan 48
Waktu pencuplikan
(jam ke-)
Jam ke-0 Jam ke-24 Jam ke-48
Jam ke-0 BB BB
Jam ke-24 BB BB
Jam ke-48 BB BB
Keterangan gambar: BB = Berbeda Bermakna
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
39
D. Hasil Uji Hepatoprotekti Ekstrak Etanol 70% Daun Jarong (Stachytarpheta
indica (L.) Vahl.) pada Tikus Jantan Galur Wistar Terinduksi Karbon
Tetraklorida
Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui efek hepatoprotektif pemberian
ekstrak etanol 70% daun jarong (Stachytarpheta indica (L.) Vahl.) terhadap
penurunan aktivitas ALT dan AST pada tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon
tetraklorida serta untuk mengetahui dosis efektif pemberian ekstrak etanol 70%
daun jarong (Stachytarpheta indica (L.) Vahl.) terhadap aktivitas ALT dan AST
yang dapat memberikan efek hepatoprotektif optimal pada tikus jantan galur Wistar
terinduksi karbon tetraklorida. Pada penelitian untuk perlakuan dengan
menggunakan tiga peringkat dosis, yaitu 100, 200, dan 400. Sebelum dilakukan
pengujian kepada kelompok perlakuan, peneliti melakukan pengukuran untuk
kontrol olive oil, kontrol CCl4, dan kontrol ekstrak dengan dosis tertinggi. Efek
hepatoprotektif yang ditunjukkan dengan adanya penurunan kadar aktivitas serum
ALT dan AST dari hewan uji. Data kadar aktivitas serum ALT dan AST ditampilkan
dalam bentuk purata ± SE pada tabel VII, gambar 9, dan gambar 10.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
40
Tabel VII. Purata ± SE kadar ALT dan AST tikus jantan galur Wistar pada
kelompok perlakuan
Kelompok Perlakuan
Purata kadar
ALT ± SE
(U/L)
Purata kadar
AST ± SE
(U/L)
Efek
hepato-
protektif
(ALT)
Efek
hepato-
protektif
(AST)
I Kontrol olive oil 2
mL/kgBB 49,20 ± 1,07 127,00 ± 2,30 - -
II Kontrol CCl4 2
mL/kgBB 178,80 ± 7,47 451,00 ± 32,21 - -
III Kontrol ekstrak 51,20 ± 0,86 127,80 ± 2,65 - -
IV
EE 70% DJ (*) 100
mg/kgBB + CCl4 2
mL/kgBB
129,40 ± 4,36 363,80 ± 10,92 38,12% 26,91%
V
EE 70% DJ (*) 200
mg/kgBB + CCl4 2
mL/kgBB
139,20 ± 5,63 374,60 ± 19,53 30,56% 23,58%
VI
EE 70% DJ (*) 400
mg/kgBB + CCl4 2
mL/kgBB
52,40 ± 1,43 137,60 ± 1,86 97,53% 96,73%
Keterangan : * EE 70% DJ : Ekstrak etanol 70% daun Jarong
Gambar 9. Diagram batang purata kadar ALT tikus jantan galur Wistar
pada kelompok perlakuan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
41
Gambar 10.Diagram batang purata kadar AST tikus jantan galur Wistar pada
kelompok perlakuan
Data yang diperoleh dianalisis menggunakan uji Shapiro Wilk untuk
mengetahui normalitas dari data yang didapat. Hasil dari data aktivitas serum ALT
menunjukkan data yang tidak normal dengan p < 0,05 sedangkan pada data aktivitas
serum AST menunjukkan bahwa data yang normal dengan p > 0,05. Selanjutnya
dilakukan uji homogenitas untuk data aktivitas serum ALT dan AST. Berdasarkan
Levene’s test hasil yang didapat baik data aktivitas serum ALT dan AST terdistribusi
tidak normal dengan p < 0,05. Berdasarkan hasil uji Shapiro Wilk dan Levene’s test,
maka untuk data aktivitas serum ALT dianalisis dengan menggunakan Kruskal-
Wallis test. Sedangkan untuk data aktivitas serum AST dianalisis menggunakan
Post-Hoc test Games Howell. Hasil uji Kruskal-Wallis test dan Post-Hoc test
Games Howell tersaji dalam tabel VIII dan tabel IX.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
42
Tabel VIII. Hasil uji Kruskal-Wallis Mann-Whitney kadar ALT praperlakuan
ekstrak etanol 70% Stachytarpheta indica (L.) Vahl. pada tikus
terinduksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB
Kontrol
Olive
Oil
Kontrol
CCl4
Kontrol
ekstrak
Dosis
100
mg/kgBB
Dosis
200
mg/kgBB
Dosis
400
mg/kgBB
Kontrol Olive Oil BB BTB BB BB BTB
Kontrol CCl4 BB BB BB BB BB
Kontrol ekstrak BTB BB BB BB BTB
Dosis 100 mg/kgBB BB BB BB BTB BB
Dosis 200 mg/kgBB BB BB BB BTB BB
Dosis 400 mg/kgBB BB BB BTB BB BB
Keterangan : BB : Berbeda bermakna
BTB: Berbeda tidak bermakna
Tabel IX. Hasil uji Post-Hoc Games-Howell kadar AST praperlakuan ekstrak
etanol 70% Stachytarpheta indica (L.) Vahl. pada tikus terinduksi
karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB
Kontrol
Olive
Oil
Kontrol
CCl4
Kontrol
ekstrak
Dosis
100
mg/kgBB
Dosis
200
mg/kgBB
Dosis
400
mg/kgBB
Kontrol Olive Oil BB BTB BB BB BTB
Kontrol CCl4 BB BB BTB BTB BB
Kontrol ekstrak BTB BB BB BB BTB
Dosis 100 mg/kgBB BB BTB BB BTB BB
Dosis 200 mg/kgBB BB BTB BB BTB BB
Dosis 400 mg/kgBB BTB BB BTB BB BB
Keterangan : BB : Berbeda bermakna
BTB: Berbeda tidak bermakna
1. Kontrol negatif olive oil 2 mL/KgBB
Kontrol negatif yang digunakan dalam penelitian ini adalah olive oil
(minyak zaitun). Kontrol negatif ini dilakukan untuk memastikan bahwa pelarut
hepatotoksin yang digunakan tidak mempengaruhi aktivitas kadar serum ALT dan
AST, sehingga diharapkan hanya CCl4 saja yang memberikan kadar hepatotoksin.
Pengukuran dilakukan pada jam ke-0 atau sebelum penginjekan olive oil dan pada
jam ke-24 setelah penginduksian CCl4. Dosis olive oil yang diberikan 2 mL/KgBB.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
43
Dosis tersebut disamakan dengan dosis hepatotoksin yang akan diinjeksikan karena
olive oil merupakan pelarut dari CCl4. Purata aktivitas kadar serum ALT dan AST
pada saat sebelum dan setelah pemberian olive oil 24 jam ditunjukkan pada tabel X
Tabel X. Purata kadar ALT dan AST tikus setelah pemberian olive oil 2 mL/kgBB
pada jam ke-0 dan 24
Waktu pencuplikan
(jam ke-)
Purata kadar ALT ±
SE (U/L)
Purata kadar AST ±
SE (U/L)
Jam ke-0 47,80 ± 2,75 129,00 ± 2,49
Jam ke-24 49,20 ± 1,07 127,00 ± 2,30
Berdasarkan hasil pengukuran aktivitas kadar serum ALT dan AST (tabel
X), dapat dinyatakan bahwa hasil tersebut berbeda tidak bermakna. Selanjutnya
dilakukan analisa Paired-Sample T Test untuk memastikan perbedaan. Hasil dari
analisa Paired-Sample T Test untuk pengukuran ALT menunjukkan bahwa p = 0,716
pada jam ke-0 dan p 0,345 pada jam ke-24. Hal tersebut menunjukkan bahwa
pengukuran tersebut berbeda tidak bemakna dengan p>0,05, yang dapat diartikan
bahwa tidak ada kenaikan/penurunan kadar ALT maupun AST yang signifikan
antara jam ke-0 dan jam ke-24. Hasil analisa Paired-Samples T Test ditampilkan
lewat tabel XI, tabel XII, gambar 11, dan gambar 12.
Tabel XI. Hasil Paired-Samples T Test kadar ALT tikus setelah pemberian olive
oil 2 mL/kgBB pada jam ke-0 dan 24
Waktu pencuplikan (jam ke-) Kadar ALT jam ke-0 Kadar ALT jam ke-24
Jam ke-0 BTB
Jam ke-24 BTB
Keterangan tabel: BTB = Berbeda Tidak Bermakna
Tabel XII. Hasil Paired-Samples T Test kadar AST tikus setelah pemberian olive
oil 2 mL/kgBB pada jam ke-0 dan 24
Waktu pencuplikan (jam ke-) Kadar AST jam ke-0 Kadar AST jam ke-24
Jam ke-0 BTB
Jam ke-24 BTB
Keterangan tabel: BTB = Berbeda Tidak Bermakna
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
44
Gambar 12. Diagram batang purata kadar AST tikus jantan galur Wistar
setelah pemberian olive oil 2 mL/kgBB pada jam ke-0 dan 24
Berdasarkan anlisa statistika diatas, dapat dinyatakan bahwa olive oil
sebagai kontrol negatif tidak memberikan efek hepatotoksi.
2. Kotrol hepatotoksin CCl4 dosis 2 mL/KgBB
Kontrol hepatotoksin bertujuan untuk melihat pengaruh dari pemberian
CCl4 terhadap kerusakan organ hati yang dilihat dari kenaikan kadar aktivitas serum
ALT dan AST pada tikus percobaan. Pengukuran dilakukan setelah 24 jam
Gambar 11. Diagram batang purata kadar ALT tikus jantan galur Wistar setelah
pemberian olive oil 2 mL/kgBB pada jam ke-0 dan 24
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
45
penginjekan hepatotoksin dengan dosis 2 mL/KgBB. Organ hati dinyatakan rusak
jika kadar ALT dan AST menunjukkan hasil yang tinggi. Kemudian hasil yang
didapat dibandingkan dengan kontrol negatif untuk melihat efek yang ditimbulkan
dari hepatotoksin.
Data kadar ALT yang didapatkan 178,80 ± 7,47 U/L dan kadar AST yang
didapatkan 451,00 ± 32,21 U/L. Pada penelitian ini peyakit hati yang diinginkan
adalah steatosis (perlemakan hati). Penyakit hati dinyatakan steatosis jika kenaikan
kadar ALT dan AST sebesar 3 atau 4 kali lipat dari kadar normal (Paschos dan
Paketas, 2009). Berdasarkan hasil perbandingan antara kontrol negatif dengan
kontrol CCl4 didapatkan kenaikan kadar ALT sebesar 3,6 kali lipat sedangkan untuk
kadar AST terjadi kenaikan sebesar 3,55. Kenaikan tersebut mendekati 4 kali lipat
sehingga dapat dinyatakan bahwa tikus yang terinduksi CCl4 mengalami steatosis
seperti yang diharapkan.
Berdasarkan uji statistika yang dilakukan menunjukkan adanya perbedaan
yang signifikan antara kontrol hepatotoksin dengan kontrol olive oil dimana teradi
peningkatan kadar pada yang cukup signifikan pada perlakukan CCl4 jika
dbandingkan dengan kontrol olive oil, hal ini dapat dilihat dari nilai siginifikansi
dari kadar aktivitas serum ALT p = 0,00 dan kadar aktivitas serum AST p = 0,003.
Sehingga dapat dinyatakan bahwa pemberian hepatotoksin CCl4 dapat
menyebabkan hepatotoksik pada hewan uji.
3. Kontrol perlakuan ekstrak etanol 70% daun jarong 400 mg/KgBB
Tujuan dari dilakukan kontrol perlakuan ekstrak etanol 70% daun Jarong
dengan dosis 400 mg/KgBB selama enam jam untuk melihat pengaruh pemberian
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
46
ekstrak terhadap kadar aktivitas serum ALT dan AST tanpa diberikan karbon
tetraklorida. Dengan pengujian perlakuan pada dosis tertinggi dari ketiga peringkat
dosis diharapkan dosis tertinggi ini memiliki efek sehingga dosis yang lebih rendah
diperkirakan juga memiliki efek.
Hasil yang didapat pada kontrol perlakuan ini untuk kadar aktivitas serum
ALT 51,20 ± 0,86 U/L sedangkan kadar kativitas serum AST sebesar 127,80 ± 2,65
U/L. Berdasarkan hasil uji statistika, kadar aktivitas serum ALT dan AST berbeda
tidak bermakna dengan kontrol olive oil dengan nilai p = 1,000 (ALT) dan p = 151
(AST). Sehingga dapat dinyatakan bahwa pemberian ekstrak tidak mempengaruhi
kadar aktivitas serum ALT maupun AST.
4. Kelompok perlakuan esktrak etanol 70% daun jarong (Stachytarpheta
indica (L.) Vahl.) pada tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon
tetraklorida
Pengujian kelompok perlakuan ini bertujuan untuk melihat efek
hepatoprotektif ekstrak etanol daun jarong (S. indica) pada tikus jantan galur Wistar
yang terinduksi karbon tetraklorida dengan melihat ada atau tidaknya penurunan
kadar aktivitas serum ALT maupun AST. Dosis yang digunakan dalam pengukuran
ini merupakan dosis bertingkat, yaitu 100, 200, dan 400 mg/KgBB.
Hasil uji statistika perlakuan ekstrak etanol 70% S. indica dengan dosis
100 mg/KgBB menunjukkan kadar aktivitas serum ALT sebesar 129,40 ± 4,36 U/L
berbeda bermakna (p = 0,008) terhadap kontrol CCl4 (178,80 ± 7,47) yang
menunjukkan bahwa terjadi penurunan kadar ALT, sedangkan pada perbandingan
kelompok dosis 100 mg/KgBB dengan kontrol olive oil (ALT = 49,20 ± 1,07 U/L)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
47
menunjukkan perbedaan yang bermakna (p = 0,008), sehingga dapat diartikan
bahwa terjadi penurunan kadar ALT tetapi belum mencapai kadar normal. Kadar
aktivitas serum AST sebesar 363,80 ± 10,92 U/L menunjukkan adanya perbedaan
tidak bermakna (p = 0,261) terhadap kontrol CCl4 (178,80 ± 7,47), hal ini
menunjukkan bahwa tidak adanya penurunan kadar AST, sedangkan perbandingan
kadar AST kelompok dosis 100 mg/KgBB dengan kontrol olive oil (127,00 ± 2,30
U/L) menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna (p = 0,000) yang
menunjukkan bahwa kadar AST belum dapat mencapai kadar normal. Hasil
statistika yang diperoleh efek pemberian ekstrak etanol 70% daun jarong dengan
dosis 100 mg/KgBB tidak mempunyai efek hepatoprotektif karena tidak dapat
menurunkan kedua kadar, yaitu ALT dan AST pada tikus jantan galur Wistar yang
terinduksi CCl4.
Kelompok perlakuan ekstrak etanol 70 % daun S. indica dengan dosis 200
mg/KgBB menunjukkan hasil kadar aktivitas serum ALT (139,20 ± 5,63 U/L)
dibandingkan dengan kontrol CCl4 (178,80 ± 1,07 U/L) menunjukkan adanya
perbedaan bermakna (p = 0,008) yang menunjukkan bahwa terjadi penurunan kadar
ALT, sedangkan jika dosis 100 mg/KgBB dibandingkan dengan kontrol olive oil
(49,20 ± 1,07 U/L) menunjukkan perbedaan yang bermakna (p = 0,008) yang
menunjukkan bahwa terjadinya penurunan kadar ALT tetapi belum mencapai kadar
normal. Pada kadar AST, perbandingan dosis 100 mg/KgBB menunjukkan adanya
perbedaan yang tidak bermakna (p = 0,416) terhadap kontrol CCl4 (451,00 ± 32,21
U/L) yang berarti tidak ada penurunan kadar AST, sedangkan jika dibandingkan
dengan kontrol olive oil (127,00 ± 2,30 U/L) menunjukkan adanya perbedaan yang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
48
bermakna (p = 0,001) yang dapat diartikan bahwa tidak ada penurunan kadar hingga
kadar normal. Hasil statistika menunjukkan bahwa ekstrak etanol 70% daun jarong
dosis 200 mg/KgBB tidak memiliki efek hepatoprotektif karena tidak dapat
menurunkan kedua kadar, yaitu ALT dan AST.
Hasil perbandingan antara kelompok perlakuan dosis 400 mg/KgBB
(52,40 ± 1,43 U/L) dengan kontrol CCl4 (178,80 ± 7,47 U/L) menunjukkan adanya
perbedaan yang bermakna (p = 0,008) yang dapat diartikan bahwa terjadi
penurunan kadar ALT, sedangkan jika dibandingan dengan kontrol olive oil (49,20
± 1,07 U/L) menunjukkan bahwa terjadi perbedaan yang tidak bermakna (p = 0,008)
yang dapat diartikan bahwa terjadi penurunan kadar ALT hingga mendekati kadar
normal. Pada kadar AST (137 ± 60 U/L), jika dibandingkan dengan kontrol CCl4
(451,00 ± 32,21 U/L) menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna (p = 0,004)
sehingga dapat diartikan bahwa terjadi penurunan kadar AST, sedangkan, jika
dibandingkan dengan kontrol olive oil (127,00 ± 2,30 U/L) menunjukkan adanya
perbedaan yang tidak bermakna (0,58) yang dapat diartikan bahwa terjadi
penurunan kadar AST hingga mendekati kadar normal. Hasil statistika
menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol 70% daun jarong dosis 400
mg/KgBB memiliki efek hepatoprotektif karena dapat menurunkan kedua kadar,
yaitu ALT maupun AST. Besar persen efek hepatoprotektif yang didapat untuk ALT
sebesar 97,53% dan kadar AST 96,73%.
Hasil uji statistika menunjukkan kadar aktivitas serum ALT maupun AST
pada perbandingan dosis 100 mg/KgBB dengan dosis 200 mg/KgBB berbeda tidak
bermakna (ALT p = 0,95 dan AST p = 0,995). Sehingga dapat diartikan bahwa tidak
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
49
ada perbedaan yang signifikan antara dosis 100 mg/KgBB dengan dosis 200
mg/KgBB, sedangkan pada perbandingan antara dosis 100 mg/KgBB dengan dosis
400 mg/KgBB dan perbandingan dosis 200 mg/KgBB dengan dosis 400 mg/KgBB
menunjukkan perbedaan yang bermakna. Sehingga dari perbandingan tersebut
menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan anatra dosis 100 dan 200
mg/KgBB dengan dosis 400 mg/KgBB, sehingga dapat dinyatakan bahwa dosis 400
mg/KgBB mempunyai efek hepatoprotektif, hal ini didukung pula dengan dosis
tersebut dapat menurunkan kadar ALT maupun AST.
Alanin transaminase merupakan enzim sitosol dan terlibat dalam
glukoneogenesis. Peningkatan kadar ALT dalam darah terutama disebabkan oleh
kerusakan sel hati dan sel otot rangka. Asparatat transaminase juga merupakan
enzim yang terlibat dalam glukoneogenesis, terdapat di dalam sitosol serta
mitokondria sel hati, otot rangka, otot jantung, dan eritrosit. Berdasarkan hal
tersebut pada penelitian ini dilakukan pengujian terhadap kadar ALT dan AST untuk
melihat kerusakan hati dari kenaikan kadar yang diperoleh. Namun untuk kadar
AST hanya sebagai pendukung karena AST tidak spesifik penanda kerusakan hati
karena dihasilkan di berbagai organ selain hati.
Perlemakan hati salah satunya disebabkan oleh adanya radikal bebas.
Radikal bebas dalam penelitian ini yang digunkan adalah CCl4. CCl4 pada lazimnya
digunakan untuk menginduksi peroksidai lipid dan keracunan. Dalam endoplasmik
retikulim hati CCl4 dimetabolisme oleh sitokrom P450 2E1 (CYP2E1) menjadi
radikal bebas triklorometil. Triklorometilperoxi yang dapat menyerang lipid
membran endoplasmik reikulum dengan kecepatan yang melebihi radikal bebas
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
50
triklorometil. Selanjutnya triklorometilperoxi menyebabkan peroksidasi lipid
sehingga menganggu homeostasis Ca2+ dan akhirnya menyebabkan kematian sel
(Panjaitan et al. 2007).
Adanya dugaan kandungan flavonoid dalam ekstrak etanol 70% daun S.
indica (L.) Vahl., memungkinkan untuk digunakan sebagai hepatoprotektor karena
dapat menangkap radikal bebas. Flavonoid sebagai antioksidan dapat mendonorkan
hidrogen sehingga dapat menetralisir efek toksik dari radikal bebas. Sehingga
dengan pemberian flavonoid yang berfungsi sebagai antioksidan dapat digunakan
sebagai hepatoprotektor.
Dosis efektif dalam penelitian ini dilihat dari persen efek hepatorpotektif
yang mendekati 100%. Berdasarkan hal tersebut, hasil penelitian menunjukan
bahwa ekstrak etaol 70% daun S. indica (L.) Vahl. dengan dosis 400 mg/KgBB
memiliki persen aktivitas hepatoprotektor dengan hasil yang didapat 97,53% untuk
kadar ALT dan 96,73% untuk kadar AST. Hal ini dapat didukung dengan hasil uji
statistika perbandingan antara perlakuan ekstrak etanol 70% daun S.indica (l.) Vahl.
dengan kontrol negatif olive oil. Berdasarkan perbandingan tersebut menunjukkan
perbedaan yang tidak berbeda bermakna yang dapat diartikan bahwa terjadi
penurunan kadar ALT dengan pemberian ekstrak etanol 70% daun S. indica (L.)
Vahl. pada tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida.
Hasil dalam penelitian ini menunjukkan bahwa terjadi perbedaan yang
cukup signifikan dari dosis 100 dan 200 ke dosis 400. Signifikansi tersebut dapat
dilihat dari persen hepatoprotektif yang didapat dari dosis 100, 200, dan 400
berturut-turut untuk nilai ALT, yaitu 38,12; 30,56; dan 97,53 %, sedangkan untuk
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
51
persen hepatoprotektif kadar AST berturut-turut, yaitu 26,91%; 23,58%; dan
96,73%. Dari perbedaan yang cukup signifikan tersebut maka perlu dilakukan
pengujian pada dosis 200 hingga 400 untuk memastikan efek hepatoprotektif 50%
diantara dosis tersebut.
Gangguan fungsional hati lebih mudah dipahami melalui pengamatan unit
struktur penyusun organ hati, yaitu lobul. Lobul tersusun atas sel hapatosit,
pembuluh darah, dan kantung empedu. Adanya kerusakan pada bagian tertentu
dapat menyebar ke seluruh bagian lobul karena secara anatomi letaknya berdekatan.
Beberapa jenis perubahan miksroskopik yang terjadi dapat dilihat dari perubahan
pada inti, sitoplasma, maupun sel secara keseluruhan. Adanya perlemakan hati
dapat dilihat dari perubahan struktur di dalam sitoplasma sehingga mendesak inti
hingga ketepi sel (Hastutui, 2008). Penelitian Joshi et al. (2010) menggambarkan
histopatologi pemberian ekstrak etanol dengan dosis 200 mg/KgBB pada tikus
Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida mengalami regenerasi kembali pada sel-
sel hepatositnya. Oleh karena itu, perlu dilakukan pengujian kondisi patofisiologi
hati, sehingga daoat mempertegas efek hepatoprotektif.
Flavonoid diklasifikasikan dalam beberapa senyawa, yaitu flavon,
flavonon, flavonol, antosianin, isoflavon, dll. Berdasarkan klasifikasinya tersebut,
senyawa-senyawa dalam flavonoid mempunyai perannya masing-masing. Salah
satu peran flavonoid, yaitu sebagai hepatoprotektif dengan senyawa spesifiknya
isoflavonoid. Isoflavonoid ini mempunyai sub kelas, yaitu genistein, daidzein,
glisetin, genistin, dan daidzin (Srivastava dan Bezwada). Dari hal tersebut
disarankan pengujian kadar isoflavonoid. Dengan pengujian adanya isoflavonoid
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
52
dalam ekstrak 70% daun jarong ini untuk memberikan penegasan bahwa ekstrak
mampu digunakan sebagai hepatoprotektif.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
53
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
1. Pemberian ekstrak etanol 70% daun S. indica (L.) Vahl. dosis 400 mg/KgBB 6
jam sebelum penginduksian karbon tetraklorida selama 24 jam memiliki efek
hepatoprotektif dengan penurunan kadar ALT dan AST pada tikus jantan galur
Wistar.
2. Dosis efektif ekstrak etanol 70% daun S. indica (L.) Vahl. sebagai
hepatoprotektif pada tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon
tetraklorida adalah 400 mg/KgBB.
B. Saran
1. Pengamatan profil histopatologi pada hati dengan kondisi steatosis dan kondisi
hati setelah diberikan perlakuan.
2. Pengujian kadar isoflavonoid sebagai salah satu senyawa flavonoid yang
terkandung dalam ekstrak daun S. indica (L.) Vahl.
3. Dilakukan penelitian efek hepatoprotektif pada dosis 200mg/KgBB hingga 400
mg/KgBB untuk memastikan efek hepatoprotektif 50%.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
55
DAFTAR PUSTAKA
Alkreathy, H. M., Khan, R. A., Khan, M. R., dan Sahreen, S., 2014, CCl4 induced
genotoxicity and DNA oxidative damages in rats : hepatoprotecive effect of
Sonchus arvensis, BioMed Central Complement Altern Medicine, 21 (14) :
452
Amarapurkar, D. N., Hashimoto, E., Lesmana, L. A., Sollano, J. D., Chen, P., dan
Goh, K. L., 2007, How common is non-alcoholic fatty liver disease in the
Asia-Pacific region and are there local differences, Journal of
Gastroenterology and Hepatology, 22 (6) : 788-793.
Badan Pengawas Obat dan Makanan RI, 2009, Acuan Sediaan Herbal, 5(1), Badan
Pengawasan Obat dan Makanan RI, hal.4.
Baradero, M., Dayrit, M. W., & Siswandi, Y., 2008, Klien Gangguan Hati : Seri
Asuhan Keperawatan, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, hal. 1-3.
Cairns, D., 2012, Essential of Pharmaceutical Chemistry, Pharmaceutical Press,
UK, pp. 159-160.
Chowdhury, R., 2003, Ipolamiide and α-spinasterol from Stachytarpheta
urticaefolia. Biochemical Systematics and Ecology, 31 : 1209–1211.
Dai, J., dan Mumper, R. J., 2010, Plant Phenolics: Extraction, Analysis, and Their
Antioxidant and Anticancer Properties, Molecules, USA, hal. 7313-7352.
Dharma, A.P., 1996, Indonesian Medical Plants, Balai Pustaka, Jakarta, hal. 99,
204.
DiaSys, 2012, Diagnostic reagent for qualitative in vitro determination of ALAT
(GPT) in serum or plasma o photometric system, DiaSys Diagnostic
Systems GmbH, German, hal. 1-2.
DiaSys, 2012, Diagnostic reagent for qualitative in vitro determination of ASAT
(GOT) in serum or plasma o photometric system, DiaSys Diagnostic
Systems GmbH, German, hal. 1-2.
Dirjen Bina Kefarmasian dan Alat Kesehatan, 2013, Suplemen III : Farmakope
Herbal Indonesia, Edisi I, Jakarta, Kementrian Kesehatan RI., Hal. Xxii
Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia, 1989,
Materia Medika Indonesia, Jilid 5, Departemen Kesehatan Republik
Indonesia, Jakarta, hal. xxii.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
56
Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia, 1995,
Farmakope Indonesia, edisi IV, Departemen Kesehatan Republik Indonesia,
Jakarta, hal. 1036.
Egbung, G. E., Atangwho, I. J., Itam, E. H., dan Essien, E. U., 2012, rans fatty acids
effect on some serum enzymes and immunological parameters in Wistars
albino rats, Agriculture and Biology Journal of North America, 3 (11) : 461-
465
Friedman, L.S., & Kneeffe, E. B., 2012, Handbook of Liver Disease, 3rd edition,
Elsevier, Philadelphia
Ganong, W., & McPhee, S.J., 2011, Patofisiologi penyakit : Pengantar Menuju
Kedokteran Klinis, Edisi ke-5, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, hal.
419-462.
Gayatri, G., Ramesh, B. J., Sumalatha, N., Venkates, J., dan Vidyadhara, S., 2011,
Hepatoprotective Activity of Ethanolic of Stachytarpetha indica on Wistar
Rats, Pharmacie Global, 2 : 1-2.
Gibson, J., 2002, Fisiologi dan Anatomi Modern untuk Perawat, EGC, Jakarta, hal.
207-214.
Girindra, A., 1989, Biokimia Patologi Hewan, Bogor: IPB Pr.
Gomes, A., 2015, Efek Hepatoprotektif Pemberian Jangka Panjang Infusa Herba
Bidens Pilosa L. Terhadap Aktivitas ALT-AST Serum pada Tikus Betina
Terinduksi Karbon Tetraklorida, Skripsi, 31, Universitas Sanata Dharma.
Gregus, Z., 2008, Mechanism of Toxicity, in Klaaseen, C. D., Casarett & Doull’s
Toxicology: the Basic Science Poisons, 7th edition, McGraw-Hill, New York,
hal. 57-64.
Grotewold, E., 2006, The Science of Flavonoids, Springer Science, USA, hal. 1-4.
Harborne, J.B., 1987, Metode Fitokimia, Penuntun Cara Modern Menganalisis
Tumbuhan, Penerbit Institut Teknologi Bandung, Bandung, hal. 6.
Hastuti, T., 2008, Aktivitas Enzim Transaminase dan Gambaran Histopatologi Hati
Tikus yang Diberi Kelapa Kopyor Pascainduksi Parasetamol, Skripsi,
Universitas Institus Pertania Bogor, Bogor.
Hodgson, E., 2010, A Textbook of Modern Toxicology, 4th edition, John Wiley &
Sons, Inc., New Jersey, pp. 168, 277-289.
Indrayani, L., Soetjipto, H., & Sihasale, L., 2006, Skrining Fitokimia dan Uji
Toksisitas Ekstrak Daun Pecut Kuda (Stachytarpheta indica Vahl.) Terhadap
Larva Udang Artemia salina Leach., Berk. Penel. Hayati, 12 : 57-61.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
57
International Centre for Science and High Technology, 2008, Extraction
Technologies for Medicinal and Aromatic Plants, ICS-UNIDO, Italy, Hal.
29, 71.
Javaplant, 200, Javaplant Extraction Methodology, http://www.javaplant.co.id/,
diakses pada tanggal 10 Mei 2015
Janakat, S., & Al-Merie, H., 2002, Optimization of the Dose and Route of injection,
and Characterization of the Time Course of Carbon Tetrachloride-induced
Hepatotoxicity in the Rat, Journal of Pharmacology and Toxicology
Methods, 48 (1) : 41-44.
Jeyaratnam, J., dan Koh, D., 2009, Buku Ajar Praktik Kedokteran Kerja, EGC,
Jakarta, hal. 229.
Joshi, V. G., Sutar, P. S., Karigar, A. A., Patil, S. A., Gopalakrishna, B., & Sureban,
R. R., 2010, Screening of Ethanolic Extract of Stachytarpheta indica L.
(Vahl) Leaves for Hepatoprotective Activity, International Journal of
Research in Ayurveda and Pharmacy, 1 (1) : 174-179.
Keputusan Menteri Kesehatan Republik Indonesia, 2009, Farmakope Herbal
Indonesia Edisi Pertama, Menteri Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta,
hal. 175.
Lin, C. C., Yen, M. H., Lo, T. S., dan Lin, 1998, Evaluation of the hepatoprotective
and antioxidant activity of Boehmeria nivea var. nivea and B. Nivea var.
Tenacissima, Journal of Ethnopharmacology, 60 (1) : 9-17
Lu, F.C., 1995, Basic Toxicology Fundamental Target Organ, and Risk Assesment,
Edisi 2, alih bahasa oleh : Nugroho Edi., UI Press, Jakarta, hal. 85-97.
Mahdi, S., dan Altikriti, Y., 2010, Extracion of Natural Product, Uppsala
Universitet, Sweden, hal. 2.
Maradjo, M., 1985, Flora Indonesia Tumbuhan Liar, Cetakan ke-2, PT. Gita Karya,
Jakarta, hal. 30-31.
Marliana, S. D., Suryanti, V., & Suyono, 2005, Skrining Fitokimia dan Analisis
Kromatografi Lapis Tipis Komponen Kimia Buah Labu Siam (Sechium
edule Jacq. Swartz.) dalam ekstrak etanol, Biofarmasi, 3 (1) : 25-31.
McGregor, D., & Lang, M., 1996 Carbon tetrachloride: genetic effects and other
modes of action, Mutat Res, hal. 181–195.
McPhee, S. J., dan Ganong, W. F., 2006, Pathophysyiology of Desease : An
Introduction to Clinical Medicine, 5th Edition, Lange Medical Books, USA,
hal. 389.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
58
Office of Animal Care and Use, 2015, Guidelines for Collection of Blood from
Laboratory Animals, Thiel College Institutional Animal Care and
Utilization Committee, hal. 1-5.
Paschos, P., dan Paletas, K., 2009, Non Alcoholic Fatty Liver Disease and
Metabolic Syndrome, Hippokratia, 13 (1) 9-19.
Panjaitan, R. G. P., Handharyani, E., Chairul, & Masriani, 2007, Pengaruh
Pemberian Karbon Tetraklorida Terhadap Fungsi Hati dan Ginjal Tikus,
Makara Kesehatan, 11 :11-17.
Plantamor, 2012, Stachytarpetha,
http://www.plantamor.com/index.php?Plant=1187, diakses tanggal 10 Mei
2015
Piettea, P. G., 2000, Flavonoid as Antioxidants, Journal of Natural Products, 63 (7)
1035-1042.
Pilichos, C.J., Kouerinis, I.A., Zografos, G.C., Korkolisa, D.P., Prexa, A.A.,
Gazouli, M., Menenakos, E.I., 2004, Management of Carbon Tetrachloride-
induced Acute Liver Injury in Rats by Syngeneic Hepatocyte
Transplantation in Splen and Peritoneal Cavity, World Journal of
Gastroenterol 10 (14) : 2099-2112.
Raaman, N., 2006, Phytochemical Techniques, New India Publishing, New Delhi,
hal. 10.
Rogers, A. B., dan Dintzis, R. Z., 2012, Comparative Anatomy and Histology,
Elsevier, USA, hal. 193-196.
Sari, L.O., 2006, Pemanfaatan Obat Tradisional dengan Pertimbangan Manfaat
dan Keamanan, Majalah Ilmu Kefarmasian UI, 03:01-07.
Sahoo, S. R., Dash, R. R., & Bhatnagar, S, 2014, Phytochemical Screening and
Bioevaluation of Medicinal Plant Stachytarpheta indica L. (Vahl),
Pharmacology & Toxicology Research, hal. 1-5.
Soedibyo, M., 1998, Alam Sumber Kesehatan Manfaat dan Kegunaan, Penerbit
Balai Pustaka, Jakarta, hal. 7.
Srivastava, N., dan Bezmada, R. S., Flavonoid : The Real Boosters, INDOFINE
Chemical Company, New Jersey, hal. 4.
Sudiono, J., Kurniadhi, B., Hendrawan, A., & Djimantoro, B., 2001, Penuntun
Praktikum Patologi Anatomi, EGC, Jakarta, hal. 4.
van Steenis C.G.G.J., 1992, Flora : untuk sekolah di Indonesia, Cetakan keenam,
PT Pradnya Paramita, Jakarta, hal. 348
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
59
Syaifuddin, 2006, Anatomi Fisiologi untuk Mahasiswa Keperawaan, EGC, Jakarta,
hal.178-179.
Tambayong, J., 2000, Patofisiologi untuk Keperawatan, EGC, Jakarta, hal. 9.
Timbrell, J. A., 2009, Principles of Biochemical Toxicology, 4th edition, Informa
Healthcare USA, New York, hal. 308, 311.
Troy, D. B., 2006, Remington : The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition,
Lippincott Williams & Wilkins, Maryland, hal. 773.
Wakchaure, D., Jain, D., Singhai, A. K., Somani, R., 2013, Hepatoprotective
Activity of Symplocos racemosa Bark on Tetrachloride-Induced Hepatic
Damage in Rats, Journal of Ayurveda & Integrative Medicine, 2 (3) : 137-
143.
Epidemiological and Statistical Methodology Unit, 1986, Sample Size
Determination, World Healt Organization, Ganeva, hal. 1-3.
Wibowo, D. S. & Paryana, 2009, Anatomi Tubuh Manusia, Graha Ilmu, Indonesia,
hal. 347, 348, 351, 352
Wibowo, D. S. & Paryana, 2005, Anatomi Tubuh Manusia, Graha Ilmu, Indonesia,
hal. 347, 348, 351, 352.
Wulandari, E.T. dan Hartini, Y.S., 2015, Panduan Praktikum Farmakognosi
Fitokimia, Universitas Sanata Dharma, hal. 11.
Yerizel, E., Oenzil, F., & Endrinaldi, 1998, Efek Hepatoprotektor Flavonoid
Terhadap Kerusakan Hepar Tikus, Majalah Kedokteran Andalas, 22 (1) :
31-37.
Zafar, Z., Talkad, M. S., Bandopadhyay, Sinha, M., & Sarkhel, J., 2011,
Antioxidant Activity of Five Selective Medicinal Plants, African Journal of
Scientific Research, 2 (1) : 1-2
Zimmerman, H. J, 1999, Hepatototoxicity : the Adverse Effectst of Drugs and
others Chemical on the Liver, 2nd edition, Lippincott Williams & Wilkins,
Philadelphia, USA, hal. 126.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
LAMPIRAN
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI