Perhitungan Akut Dengan BSLT

5/27/2018 Perhitungan Akut Dengan BSLT

1/8

ksisitas Akut Dengan BSLT ( Brine Shrimp Letality Test )

I. Tujuan

Terampil dalam melakukan uji toksisitas akut dengan menggunakan metode BSLT Mengetahui cara perhitungan LD50 dengan metode BSLT Mampu melaksanakan pengujian toksisitas secara in vitro dengan menggunakan

metode BSLT Mampu menetapkan LC50sebagai parameter ketoksisan akut berdasarkan analisa

probit.

II. Landasan Teori

Toksisitas dari suatu senyawa secara umum dapat diartikan kepada potensi dari

suatu senyawa kimia untuk dapat menyebabkan kerusakan ketika senyawa tersebut

mengenai atau masuk kedalam tubuh manusia. Suatu senyawa kimia dikatakan bersifat

racun akut jika senyawa tersebut dapat menimbulkan efek racun dalam jangka waktu yang

singkat, dan bersifat kronis jika senyawa tersebut dapat menimbulkan efek racun dalam

jangka waktu yang panjang (karena kontak yang berulang-ulang walaupun dalam jumlah

yang sedikit).

Pengetahuan mengenai toksisitas suatu bahan kimia disimpulkan dengan

mempelajari efek-efek dari pemaparan bahan kimia terhadap hewan percobaan, pemaparan

bahan kimia terhadap organism tingkat rendah seperti bakteri dan kultur sel-sel dari

mamalia di laboratorium dan pemaparan bahan kimia terhadap manusia.

Untuk skrining dan fraksionasi fisiologi aktif dari ekstrak tanaman dapat di lakukan

uji standar toksisitas akut (jangka pendek). Suatu metode yang digunakan secara luas

dalam penelitian bahan alam untuk maksud tersebut adalah adalah Brine Shrimp Lethality

Test (BSLT). BSLT merupakan salah satu cara yang cepat dan murah untuk uji aktifitas

farmakologi dari ekstrak tanaman dengan menggunakan hewan laut yaitu larva udang

Artemia salina Leach. Uji ini mengamati mortalitas larva udang yang di sebabkan oleh

senyawa uji. Senyawa yang aktif akan menghasilkan mortalitas yang tinggi.

Uji toksisitas dengan metode BSLT ini memiliki spectrum aktifitas farmakologi yang

luas, prosedurnya sederhana, cepat dan tidak membutuhkan biaya yang besar, sertahasilnya dapat di percaya. Disamping itu metode ini sering dikaitkan dengan metode

penapiasan senyawa antikanker. Dengan alas an-alasan tersebut, maka uji ini sangat tepat

digunakan dalam penelitian bahan alam.

Peranan antioksidan sangat penting dalam meredam efek radikal bebas yang

berkaitan erat dengan terjadinya penyakit degeneratif seperti tekanan darah tinggi, jantung

koroner, diabetes dan kanker yang didasari oleh proses biokimiawi dalam tubuh. Radikal


2/8

bebas yang dihasilkan secara terus menerus selama proses metabolisme normal, dianggap

sebagai penyebab terjadinya kerusakan fungsi sel-sel tubuh yang akhirnya menjadi pemicu

timbulnya penyakit degeneratif. Reaksi radikal bebas secara umum dapat dihambat oleh

antioksidan tertentu baik alami maupun sintetis. Sebahagian besar antioksidan alami

berasal dari tanaman, antara lain berupa senyawaan tokoferol, karatenoid, asam askorbat,

fenol, dan flavonoid.

Senyawa bioaktif hampir selalu toksik pada dosis tinggi, oleh karena itu daya bunuh

in vivo dari senyawa terhadap organisme hewan dapat digunakan untuk menapis ekstrak

tumbuhan yang mempunyai bioaktivitas dan juga memonitor fraksi bioaktif selama

fraksinasi dan pemurnian. Salah satu organisme yang sesuai untuk hewan uji adalah brine

shrimp (udang laut).

Untuk mengetahui toksisitas ekstrak daun dalam penelitian ini digunakan metode

BSLT (Brine ShrimpLethality Test) dan untuk mengetahui aktivitas ekstrak daun sebagai

antioksidan digunakan metode DPPH (-1,1-difenil-2-pikrilhidrazil). Pengukuran antioksidan

secara Efek peredaman radikal bebas DPPH merupakan metode pengukuran antioksidan

yang sederhana, cepat dan tidak membutuhkan banyak reagen seperti halnya uji lain

(xantin-xantin oksidase, metode Tiosianat, antioksidan total). Hasil pengukuran

menunjukkan kemampuan antioksidan sampel secara umum tidak berdasar jenis radikal

yang dihambat. Pada metode ini, DPPH berperan sebagai radikal bebas yang diredam oleh

antioksidan dari bahan uji, dimana DPPH akan bereaksi dengan antioksidan tersebut

membentuk 1,1,-difenil-2- pikril hidrazin. Reaksi ini menyebabkan terjadinya perubahan

warna yang dapat diukur dengan spektrofotometer sinar tampak pada 515 nm, sehingga

aktivitas peredaman radikal bebas oleh sampel dapat ditentukan.

Uji Toksisitas dengan Metode BSLT. Metode Meyer et al. digunakan untuk

mempelajari toksisitas sampel secara umum dengan menggunakan telur udang (Artemia

salina Leach). Penetasan Larva Udang, disiapkan bejana untuk penetasan telur udang. Di

satu ruang dalam bejana tersebut diletakkan lampu untuk menghangatkan suhu dalam

penetasan, sedangkan di ruang sebelahnya diberi air laut. Kedalam air laut dimasukkan +

50-100 mg telur udang untuk ditetaskan. Pada bagian telur ditutup dengan aluminium foil,

dan lampu dinyalakan selama 48 jam untuk menetaskan telur. Diambil larva udang yang

akan diuji dengan pipet.

Prosedur Uji Toksisitas dengan Metode BSLT. Sebanyak 100 L air laut yang

mengandung larva udang sebanyak 10-12 ekor dipipet, kemudian dimasukkan ke dalam


3/8

wadah uji. Di tambahkanlarutan sampel yang akan diuji masing-masingsebanyak 100 L,

dengan konsentrasi 10, 100, 200, 500dan 1000 ppm. Untuk setiap konsentrasi dilakukan 3

kali pengulangan (triplikat). Larutan diaduk sampai homogen. Untuk kontrol dilakukan

tanpa penambahan sampel. Larutan dibiarkan selama 24 jam, kemudian dihitung jumlah

larva yang mati dan masih hidup dari tiap lubang. Angka mati dihitung dengan

menjumlahkan larva yang mati dalam setiap konsentrasi (3 lubang).Angka hidup dihitung

dengan menjumlahkan larva yanghidup dalam setiap konsentrasi (3 lubang).Perhitungan

akumulasi mati tiap konsentrasi dilakukan dengan cara berikut: akumulasi mati untuk

konsentrasi 10 ppm = angka mati pada konsentrasi tersebut, akumulasi mati untuk

konsentrasi 100 ppm = angka mati pada konsentrasi 10 ppm + angka mati pada

konsentrasi 100n ppm, akumulasi mati untuk konsentrasi 200 ppm = angka mati pada

konsentrasi 10 ppm + angka mati pada konsentrasi 100 ppm + angka mati pada

konsentrasi 200 ppm. Akumulasi angka mati dihitung sampai konsentrasi 1000 ppm.

Perhitungan akumulasi hidup tiap konsentrasi dilakukan dengan cara berikut: akumulasi

hidup untuk konsentrasi 1000 ppm = angkahidup pada konsentrasi 1000 ppm, akumulasi

hidup untuk konsentrasi 500 ppm = angka hidup pada konsentrasi 1000 ppm + angka

hidup pada konsentrasi 500 ppm, akumulasi hidup untuk konsentrasi 200 ppm = angka

hidup pada konsentrasi 1000 ppm + angka hidup pada konsentrasi 500 ppm + angka hidup

padakonsentrasi 200 ppm. Akumulasi angka hidup dihitungsampai konsentrasi 10 ppm.

Selanjutnya dihitung mortalitas dengan cara: akumulasi mati dibagi jumlah

akumulasi hidup dan mati (total) dikali 100%. Grafik dibuat dengan log konsentrasi sebagai

sumbu x terhadap mortalitas sebagai sumbu y. Nilai LC50 merupakan konsentrasi dimana

zatmenyebabkan kematian 50% yang diperoleh denganmemakai persamaan regresi linier

y = a + bx. Suatu zatdikatakan aktif atau toksik bila nilai LC50 < 1000 ppm untuk ektrak

dan < 30 ppm untuk suatu senyawa.

III. Alat dan Bahan

Kotak penetasan larva Mikro pipet 2-20 L Mikro pipet 20-200 L Wellplate Kaca pembesar Tabung reaksi Labu ukur kotak steroform


4/8

IV. Prosedur kerja

a.Penetasan larva

b.Orientasi konsentrasi

V. HASIL PENGAMATANAnalisis data BSCT dengan analisis Probit

Kelas Konsentrasippm

Log C

(y)Hidup mati %

kematianProbit Lc 50

AEkstrak

BINTARO

10000 4 - 10 100 8,7190

-

1000 3 - 10 100 8,7190100 2 - 10 100 8,719010 1 - 10 100 8,71901 0 - 10 100 8,7190

0,1 -1 - 10 100 8,7190B

EkstrakAlpukat

10000 4 - 10 100 8,7190

26,4338ppm

1000 3 1 9 90 6,2816100 2 4 6 60 5,253310 1 5 5 50 5,0001 0 2 8 80 5,8416

0,1 -1 3 7 70 5,5244

Ket :Digunakan regresi linierY = a + bxProbit = a + b (log C)a = 3,26715b = 1,21853r = 0,9271
http://3.bp.blogspot.com/-0QtNaKrjM2w/T5lDV5GakmI/AAAAAAAAAH4/hr62HYCUw2o/s1600/caker+1.pnghttp://1.bp.blogspot.com/-pB--AqUr-K0/T5lC3P2Kn0I/AAAAAAAAAHw/QvjdISgDPbA/s1600/caker+1.pnghttp://3.bp.blogspot.com/-0QtNaKrjM2w/T5lDV5GakmI/AAAAAAAAAH4/hr62HYCUw2o/s1600/caker+1.pnghttp://1.bp.blogspot.com/-pB--AqUr-K0/T5lC3P2Kn0I/AAAAAAAAAHw/QvjdISgDPbA/s1600/caker+1.png


5/8

di hitung LC 50 ?LC 50 = (5-a)/bLC 50 = (5-3,26715)/1,21853LC 50 = 1,42216Antilog LC 50 = 26,4338 ppm

Analisis data BSCT dengan analisis Reed-Munch

kelasKonsentrasi

ppmhidup mati mati

hiduptotal ratio

%kematian

LC

BEkstrakAlpukat

0,1 11 19 19 45 64 19/64 29,68

0,6p

1 7 23 42 34 76 42/76 55,2610 13 17 59 27 86 52/79 68,6100 13 17 76 14 90 76/90 84,4

1000 1 29 105 1 106 105/106 99,010000 0 30 135 0 135 135/135 100

Di hitung :h= 50%-a/(b-a)h : ukuran jaraka : % yang menyebabkan kematian lebih kecil dari 50 %b : % yang menyebabkan kematian lebih besar dari 50 %

h = (50%-29,68%)/(55,26%-29,68%)

Di hitung :

i = log kematian diatas 50% / kematian dibawah 50%i : log kenaikan dosisi = log 1/0,1i = log 10i = 1

Di hitung :g = h X ig : hasil kali dari ukuran jarak dan log kenaikan dosisg = 0,749 X 1g = 0,749DI hitung :

y = g + log kematian lebih kecil dari 50 %y : hasil penjumlahan g dan log kematian kecil dari 50 %y = 0,749 + log 0,1y = 0,749 1y = - 0,206

LC 50 = anti log yLC 50 = anti log 0,206LC 50 = 0,6223 ppm


6/8

Analisis data BSCT dengan analisis Farmakopekelas Konsentrasi

ppmLog

dosisHidup Mati mati Pi Pi LC 50

BEkstrakAlpukat

0,1 -1 11 19 63 0,63

4,47 1,071 ppm

1 0 7 23 76 0,7610 1 13 17 56 0,56100 2 13 17 56 0,561000 3 1 29 96 0,9610000 4 0 30 100 100

Di hitung :m = a b ( Pi 0,5)Pi : % kematian terhadap % seluruh hewan yang dicobakan.m = 4 1 (4,47 0,5)m = 4 1 (3,97)m = 4 3,97m = 0,03

LC 50 = anti log mLC 50 = anti log 0,03LC 50 = 1,071 ppm

VI. PembahasanUji BSLT (Brine Shrimp Lethality Test) merupakan uji toksisitas yang digunakan

sebagai uji permulaan untuk mengetahui aktivitas dari suatu zat atau senyawa yang

terkandung dalam suatu ekstrak atau suatu isolat murni.

Pada praktikum kali ini larva udang yang digunakan adalah jenis Artemia salinayang

telah berumur 48 jamdan proses pembenihan telur udang yang digunakan adalah sebanyak

0,5 gram dan dimasukkan dalam air garam dengan kadar 38% (38 gram dalam 1liter air)

hal ini dilakukan sebagai simulasi dari habitat asli udang yaitu air laut.

Adapun ekstrak yang digunakan adalah ekstrak buah alpukat dan bintaro yang dibuat

larutan dengan konsentrasi yang berbeda-beda yaitu mulai dari 10000, 1000, 100, 10, 1

dan 0,1 ppm. Hal ini bertujuan untuk mengetahui LC50 dari masing - masing ekstrak

tersebut dengan berbagai konsentrasi.

Pada prakteknya dengan perlakuan yang sama yaitu larutan ekstrak yang dimasukkan

dalam tabung reaksi yang berisi 10 buah larva dengan 10 ml larutan (9 ml air garam danekstrak sebanyak 1 ml). Ekstrak bintaro menunjukkan hasil data yang error, hal ini

ditunjukkan dengan adanya kematian pada semua larva udang di berbagai konsentrasi.

Adapun untuk ekstrak alpukat menunjukkan hasil bahwa dengan naiknya konsentrasi maka

larva udang yang mati semakin banyak, tetapi pada konsentrasi 1 dan 0,1 ppm tidak

menunjukkan hal denmikian, sehingga data yang dipakai adalah pada konsentrasi 10000


7/8

sampai 100 ppm. Selain itu percobaan dilakukan triplo agar didapat data statistik yang

baik sehingga, dapat dihitung secara statistik dari data tersebut.

Dalam penentuan nilai LC50 ini dapat dilakukan dengan 3 cara/metode, yaitu :

1. Perhitungan probit

2. analisis Reed-Munch3. analisis Farmakope

Dalam perhitungan dengan metode analisis probit, diperlukan tabel probit dan rumus

regresi liniear untuk menentukan nilai a, b dan r. Kemudian dimasukkan dalam rumus X50=

(b-a)/b dan kemudian dapat ditentukan nilai LC50. Adapun hasil perhitungan dengan

menggunakan metode ini menunjukkan hasil bahwa LC50 adalah 26,438 ppm.

Sedangkan dalam perhitungan dengan metode analisis Reed-Munch sebelumnya harus

diketahui jumlah larva yang mati dan hidup. Yang kemudian dihitung ukuran jarak (h) =

(50%-a)/(b-a) , kenaikan dosis (i) = log kematian diatas 50 %/kematian dibawah 50% ,

nilai (g) = h X I , nilai (y) = g + log kematian lebih kecil dari 50 %, kemudian dapat

ditentukan bahwa:

nilai LC 50= anti log y

Dengan menggunakan metode analisis Reed-Munch didapatkan hasil LC50 sebesar

22,54 ppm.

Perhitungan data BSLT dengan metode yang ketiga yaitu dengan analisis Farmakope.

Terlebih dahulu dicari nilai Pi dan sigma Pi untuk selanjutnya dimasukkan dalam rumus :

m = a b ( Pi 0,5) Pi = % kematian terhadap % seluruh hewan yang

dicobakan

a = dosis terendah yang dapat menyebabkan kematian 100%

b = beda log dosis yang berurutan

selanjutnya dapat ditentukan nilai LC 50 = anti log m. Dari hasil perhitungan

didapatkan nilai LC50 sebesar 26,3 ppm.

Dari ketiga metode tersebut dapat diketahui bahwa didapatkan LC50 dengan

perbedaan yang tak terlalu jauh yaitu 26,438 ppm, 22,54 ppm, dan 22,54 ppm sehingga hal

ini menunjukkan bahwa ekstrak biji alpukat bersifat toksik terhadap larva udang karena LC

50 1000 g/mL, sedangkan suatu ekstrak dikatakan aktif apabila mempunyai LC 501000g/mL.

VII. Kesimpulan

Berdasarkan hasil percobaan yang telah dilakukan :


8/8

1. Semakin tinggi konsentrasi ekstrak semakin banyak larva udang yang mati.

2. Nilai LC50 pada metode perhitungan analisis probit adalah 26,438 ppm,

pada analisis Reed-Munch nilai LC50 adalah 26,438 ppm,

dan pada analisis farmakope nilai LC50 adalah 26,3 ppm.

3. Ekstrak biji bintaro tidak dapat dihitung LC50 nya karena pada berbagai konsentrasi larva

udang mati semua.

VIII. Daftar PustakaAnonim. 2000. Informatorium Obat Nasional Indonesia. Depkes RI : Jakarta

Anief, Moh. 2000. Ilmu Meracik Obat. Gadjah Mada University Press : Yogyakarta

Anonim. 1995. Farmakope Indonesia Edisi IV. Depkes RI : Jakarta

Ansel, Howard.C. 1989. Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi. Universitas Indonesia Press :

Jakarta

Ernst Mutschler, 1986, Dinamika Obat ; Farmakologi dan Toksikologi (terjemahan), ITB,

Bandung

Perhitungan Akut Dengan BSLT

Documents

Transcript of Perhitungan Akut Dengan BSLT