Nama : Erni Wulandari

NIM : 4411412053

PENGENCERAN SERIE

Untuk menentukan jumlah mikrobia pada suatu bahan dapat ditentukan dengan bermacam-

macam cara, tergantung pada bahan dan jenis mikrobianya. Jenis populasi mikrobia dalam tanah,

air, bahan makanan dan lain-lainnya berbeda-beda tergantung pada susunan bahan tersebut. Ada

dua cara perhitungan jumlah mikrobia yaitu perhitungan secara langsung dan perhitungan secara

tidak langsung (Soetarto dkk, 2008). Beberapa cara perhitungan mikrobia secara langsung yaitu

menggunakan counting chamber, menggunakan cara pengecatan dan pengamatan di bawah

mikroskop, dan cara lainnya dengan menggunakan filter membran. Cara menghitung mikrobia

secara tidak langsung dipakai untuk menentukan jumlah mikrobia secara keseluruhan, baik yang

hidup maupun yang mati atau hanya untuk menentukan jumlah mikrobia yang hidup saja,

tergantung cara yang digunakan. Untuk menentukan jumlah mikrobia yang hidup dapat dilakukan

setelah suspensi bahan atau biakan mikrobia diencerkan beberapa kali dan ditumbuhkan dalam

medium dengan cara tertentu tergantung dari macamnya bahan dan sifat mikrobia. Beberapa cara

menetukan jumlah mikrobia secara tidak langsung yaitu dengan menghitung jumlah mikrobia

menggunakan sentrifuge, berdasarkan kekeruhan, menggunakan perhitungan elektronik

(elektronik counter), berdasarkan analisis kimia, bedasarkan berat kering, menggunakan cara

pengenceran, menggunakan cara Most Probable Number (MPN) dan menghitung bakteria

berdasarkan jumlah koloni.

Pengenceran yang bertingkat ditujukan untuk membentuk konsentrasi dari suatu suspense

bakteri/mikrobia. Tingkat pengenceran yang diperlukan didasarkan pada pendugaan populasi

bakteri/mikrobia. Hasil yang baik adalah jika pada pengenceran yang lebih rendah sampel yang

diduga lebih banyak menunjukkan hasil uji positif (adanya pertumbuhan mikrobia) dan pada

pengenceran lebih tinggi sampel yang diduga lebih sedikit menunjukkan hasil uji positif (tidak

ada pertumbuhan mikrobia). Oleh karena itu jumlah populasi mikrobia yang ada dalam sampel

diduga tinggi maka sampel harus diencerkan sampai diperoleh tingkat pengenceran yang paling

mudah dengan melakukan pengenceran 10 kali lipat dengan menggunakan 3 atau 5 tabung

pengenceran sekaligus.

Keuntungan:

- dapat menghitung jumlah koloni dengan pngenceran tertinggi

- menggunakan kontrol sehingga hasil lebih baik

- dapat digunakan untuk sampel yang padat maupun cair

- menggunakan pengenceran berulang sehingga lebih teliti

Kerugian :

- memerlukan banyak media

- memerlukan banyak waktu

- kemungkinan terkontaminasi besar

Langkah/prosedur kerja pengenceran seri : 1.Menyiapkan biakan/isolate yang akan dihitung (biasanya dalam bentuk suspense)

2. Membuat pengenceran seri sampai 10-6 (tergantung prediksi tingkat kekeruhan suspense

dan keperluannya)

3. Menandai tabung A, B, C, D, E, F yang berisi aquadest steril sebanyak 9 ml. 4. Memindahkan 1 ml suspensi control ke tabung A.

5.Mengocok tabung A sehingga larutan tercampur

6. Memindahkan 1 ml larutan dari tabung A ke tabung B, kemudian kocok.

7.Memindahkan 1 ml larutan dari tabung B ke tabung C, kemudian kocok 8.Mengulangi langkah tersebut sampai tabung F 9.Menanam dalam medium cawan petri dengan inokulasi sebesar 1 ml atau 0,1 ml, dengan masing-

masing pengenceran diulang 2 kali

10. Meratakan (spread plate) dalam seluruh permukaan

11. Inkubasi pada suhu 25-300C selama 24-48 jam 12. Mengamati jumlah koloni yang tumbuh, menghitung dan mencatat

Suspensi pengenceran yang ke-1, 2,3 dari akhir ditanam dengan metode tuang (pour plate) atau

sebar (spread plate). Bakteri akan bereproduksi pada medium agar dan membentuk koloni setelah

18-24 jam inkubasi. Untuk menghitung jumlah koloni dalam cawan petri dapat digunakan alat

colony counter yang biasanya dilengkapi dengan pencatat elektronik.

Menurut Pangastuti dan Triwibowo (1996), syarat perhitungan jumlah bakteri

adalah:

a. Jumlah koloni pada tiap cawan petri antara 30-300 koloni, bila tidak ada, dipilih yang

mendekati.

b. Tidak ada spreader (koloni yang menutup lebih dari setengah luas cawan petri).

c. Bila perbandingan jumlah bakteri antara pengenceran yang lebih besar dengan

pengenceran sebelumnya < 2, hasilnya dirata-rata, tetapi bila > 2, yang dipakai jumlah bakteri

dan pengenceran sebelumnya.

d. Bila dengan ulangan dan hasil memenuhi syarat, hasilnya dirata-rata

Analisis Data

No. Pengenceran Jumlah koloni tiap petridish Jumlah bakteri

1 2

1.

2.

3.

4.

10-5

10-6

10-5

10-6

10-5

10-6

10-4

10-5

10-6

360

26

305

66

260

89

301

176

54

270

27

Spreader

60

280

70

297

154

62

2,7 x 107 sel/gram

6,3 x 107 sel/gram

2,7 x 107 sel/gram

2,97 x 107 sel/gram

Perhitungan:

Jumlah koloni x 1

Factor pengenceran

Referensi:

Fardiaz, Srikandi. 1992. Mikrobiologi Pangan 1. Gramedia : Jakarta

Pangastuti Hestining dan Triwibowo Sitoresmi http://www.kalbe.co.id/files/ cdk/files/17 (Diakses pada 19 Mei 2014)

Soetarto, M., Pudjarwoto, S., and Nurindah P. 2008. Analisis Mikroorganisme. Jakarta: EGC