i

PENENTUAN AKTIVITAS ESTROGENIK EKSTRAK

ETANOL DAUN DAN BUNGA JERUJU (Acanthus ilicifolius)

MENGGUNAKAN YES-ASSAY

SKRIPSI

Untuk memenuhi sebagian persyaratan

Mencapai Derajat Sarjana S-1

Diajukan Oleh

DIAN KARTIKA SARI

1008010119

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PURWOKERTO

PURWOKERTO

2014

Penentuan Aktivitas Estrogenik…, Dian Kartika Sari, Fakultas Farmasi UMP, 2014

PENENTUAN AKTIVITAS ESTROGENIK EKSTRAK

ETANOL DAUN DAN BUNGA JERUJU (Acanthus ilicifolius)

MENGGUNAKAN YES-ASSAY

SKRIPSI

Untuk memenuhi sebagian persyaratan

Mencapai Derajat Sarjana S-1

Diajukan Oleh

DIAN KARTIKA SARI

1008010119

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PURWOKERTO

PURWOKERTO

2014

Penentuan Aktivitas Estrogenik…, Dian Kartika Sari, Fakultas Farmasi UMP, 2014

3

Penentuan Aktivitas Estrogenik…, Dian Kartika Sari, Fakultas Farmasi UMP, 2014

4

Penentuan Aktivitas Estrogenik…, Dian Kartika Sari, Fakultas Farmasi UMP, 2014

5

Penentuan Aktivitas Estrogenik…, Dian Kartika Sari, Fakultas Farmasi UMP, 2014

6

INTISARI

DIAN KARTIKA SARI.Penentuan Aktivitas Estrogenik Ekstrak Etanol Daun dan

Bunga Jeruju (Acanthus Ilicifolius) Menggunakan Yes-Assay

Dibawah bimbingan BINAR ASRINING DHIANI danSUSANTI

Latar belakang: Estrogen merupakan hormon steroid yang sebagian besar

diproduksi oleh wanita dan dalam jumlah yang sedikit diproduksi oleh laki- laki.

Beberapa penyakit terkait dengan kurangnya estrogen dalam tubuh bisa terjadi

pada setiap wanita, terutama pada wanita yang mengalami post menopause.

Tujuan Penelitian:Penelitian ini bertujuan untuk menentukan aktivitas

estrogenik daun dan bunga jeruju (Acanthus ilicifolius) dan EC50 dari aktivitas

estrogenik yang ditentukan dengan menggunakan YES- Assay.

Metode Penelitian: Penelitian ini dilakukan secara in vitro menggunakan metode

YES (Yeast Estrogen Screen). Dengan menggunakan sampel ekstrak etanol daun

dan bunga jeruju (Acanthus ilicifolius) dengan konsentrasi

50,100,200,400,800,1000,1200,1600,2000μg/ml dalam DMSO.

Hasil: Ekstrak etanol daun jeruju (Acanthus ilicifolius)pada YES –

hERαmenunjukkan pengaruh pemberian ekstrak dengan banyaknya unit β-

galaktosidase. Pada konsentrasi 50 μg/ml menunjukkan aktivitas terkecil. Dan

pada konsentrasi tertinggi yaitu 2000 μg/ml menunjukkan adanya aktifitas enzim

β galaktosidase paling besar.EC50 sampel ekstrak etanol daun jeruju yang

ditentukan dengan YES- hERα adalah sebesar 28.960 μg/ml. Hasil perlakuan

dengan ekstrak etanol daun terhadap YES –hERβ menunjukkan aktivitas

pembentukan β-galaktosidase terkecil pada konsentrasi 50 μg/ml dan aktivitas

terbesar pada konsentrasi 2000 μg/ml. EC50 untuk sampel ekstrak etanol daun

yang ditentukan dengan YES –hERβ sebesar 29.292 μg/ml. Pada penambahan

ekstrak etanol bunga terhadap YES- hERα terdapat warna kuning yang dihasilkan

dari oNP. Namun EC50 ekstrak etanol bunga tidak dapat dihitung berdasarkan

parameter empat model log dosis – respon. Sedangkan pada YES –hER β yang

diberi perlakuan dengan ekstrak etanol bunga memiliki aktivitas enzim β

galaktosidase terkecil pada konsentrasi 100 μg/ml dan tertinggi pada konsentrasi

2000. Sehingga didapatkan EC50 sebesar 1,809 x 108

μg/ml.

Kesimpulan:Ekstrak etanol daun dan bunga jeruju memiliki aktivitas estrogenik

yang sangat lemah yang ditentukan dengan YES –hERα dan YES – hERβ.

Kata Kunci: Yes- assay; Reseptor estrogen α (ER α); Reseptor estrogen β (ER β);

fitoestrogen; Acanthus ilicifolius

v Penentuan Aktivitas Estrogenik…, Dian Kartika Sari, Fakultas Farmasi UMP, 2014

7

ABSTRACT

DIAN KARTIKA SARI. Estrogenic Activity Determination ofLeaf and Flower

Ethanol Extractof Jeruju (Acanthus Ilicifolius) Using Yes-Assay.

Under supervision of BINAR ASRINING DHIANI and SUSANTI

Background: Estrogen is a steroid hormone that is produced mostly in women

and produced in small amounts in men. Some diseases associated with lack of

estrogen in the body can occur in women, especially in women who experience

post menopause.

Objective: This study aimed to determine the estrogenic activity of the leaves and

flowers ofJeruju (Acanthus ilicifolius) and EC50 of estrogenic activity were

determined using YES-assay.

Method:This study performed by in vitro using YES- assay. With series of

concentration of ethanol extract from leaf and flower of jeruju (Acanthus

ilicifolius) 50,100,200,400,800,1000,1200,1600,2000 μg/ml in DMSO.

Results: The ethanol extract of leaves of Jeruju (Acanthus ilicifolius) on YES -

hERα showed that the treatment by extract was proportional to amount of units β-

galactosidase. At a concentration of 50 ug / ml showed the lowest activity. And at

highest concentration 2000 ug / ml showed the highest β galactosidase enzyme

activity. EC50 leaf of ethanol extract from jeruju samples determined byYES-

hERα was 28.960 μg / ml. While the results from ethanol extract of the leaves

YES - hERβ showed the lowest β-galactosidase activity in the smallest

concentration (50 ug / ml), and the largest activity at a concentration of 2000 ug /

ml. EC50 for ethanol extract of leaf samples determined by YES - hERβ was

29.292 ug / ml. In addition, the ethanol extract of flowers determined byYES-

hERα exhibited the yelow colours from oNP. However, EC50 ethanol extract of

flowers could not be calculated based on the parameters of the four models of log

dose - response. While on YES - HERβ treated by ethanol extract of flowers

exhibited β-galactosidase enzyme activity at concentration of 100 ug / ml and the

highest concentration of 2000ug / ml. So the EC50 obtained for 1,809 x 108

ug /

ml.

Conclusion: The ethanol extract of leaves and flowers weeds exhibited very weak

estrogenic activity as determined by YES-hERα and YES-hERβ.

Keywords: Yes- assay; Estrogen receptor α (ER α); Estrogen receptor β (ER β);

phytoestrogens; Acanthus ilicifolius

vi Penentuan Aktivitas Estrogenik…, Dian Kartika Sari, Fakultas Farmasi UMP, 2014

8

PRAKATA

Puji syukur atas kehadirat Allah SWT yang telah melimpahkan rahmat dan

karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan penulisan skripsi dengan

judul “PENENTUAN AKTIVITAS ESTROGENIK EKSTRAK ETANOL

DAUN DAN BUNGA JERUJU (Acanthus Ilicifolius)MENGGUNAKAN YES -

ASSAY”. Skripsi ini disusun sebagai salah satu syarat untuk mencapai gelar

Sarjana Farmasi di Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto.

Penyusunan skripsi ini tidak lepas dari bantuan dan masukan yang

diterima dari berbagai pihak.Oleh karena itu, penulis ingin mengucapkan terima

kasih dan penghargaan sebesar-besarnya kepada semua pihak yang telah

memberikan bantuan saran, dukungan moril maupun kritik dalam penyelesaian

skripsi ini, terutama kepada:

1. Dr. Nunuk Aries Nurulita, M.Si., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi

Universitas Muhammadiyah Purwokerto.

2. Binar Asrining Dhiani, M.Sc., Apt. dan Susanti, M.Phil., Apt. selaku

pembimbing skripsi yang telah memberikan bimbingan, saran, dan petunjuk

dalam penyusunan skripsi.

3. Retno Wahyuningrum, M.Si., Apt. selaku Pembimbing Akademik yang telah

memberikan bimbingan dan motivasi.

4. Seluruh Dosen, Laboran, dan Staf Karyawan Fakultas Farmasi Universitas

Muhammadiyah Purwokerto.

5. Semua pihak yang telah membantu selama penulis melaksanakan penelitian

dan penyusunan skripsi ini hingga selesai yang tidak dapat disebutkan satu

persatu.

Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari kesempurnaan, oleh

karena itu saran dan kritik yang membangun sangat diharapkan demi

penyempurnaannya. Semoga penelitian ini dapat bermanfaat bagi penulis

khususnya dan pembaca umumnya.

vii Penentuan Aktivitas Estrogenik…, Dian Kartika Sari, Fakultas Farmasi UMP, 2014

9

MOTTO

“ Ijhad wa laa taksal wa laa takun ghoofilan fa nadaamatul „uqba

liman yatakaasal”

“Adduafaau yatafawwakuuna ala al adzkiyaai jiddan watawakkulan”

“Inna ma al usri yusro”

-Al- Insyirah 6 -

viii Penentuan Aktivitas Estrogenik…, Dian Kartika Sari, Fakultas Farmasi UMP, 2014

10

HALAMAN PERSEMBAHAN

Alhamdulillah puji syukur atas kehadirat Allah SWT yang telah memberikan anugrah, rahmat serta hidayah sehingga skripsi ini bisa

terselesaikan Kupersembahkan skripsi ini kepada orang-orang yang sangat aku

sayangi

Terimakasih untuk Abah dan Ibu atas untaian doa yang selalu dipanjatkan disetiap sujudnya

Untuk adikku Suci AfiatiYunge terimakasih telah memberikan

semangat dan motivasi serta doa ^^

Untuk Aa‟ Aan Kurnia Wardiyan yang setiap waktu memberikan doa, semangat dan motivasi menghadapi keluh kesah

Saudaraku Luluk, Om Beny, Bulik Ummu sukron kastiron doa nya

Keluarga Acanthus, Dina, Ergia, Meisty, Jo, Desi, sungguh luar

biasa ngelab bersama kalian. Teteh Nurul yang selalu menemani dan ikut memotivasi. Personil baru, Ii, Icha dan Titi selamat

bergabung di Yes Assay, trima kasih kerja sama nya.

Teman – teman FKK :Firly, Yana, Rizka, 2 Twin, Arumi, Vita, Tyas dan semua teman – teman Farmasi angkatan 2010 terimakasih atas

kebersamaannya :^)

ix Penentuan Aktivitas Estrogenik…, Dian Kartika Sari, Fakultas Farmasi UMP, 2014

11

RIWAYAT HIDUP

Nama : Dian Kartika Sari

TTL : Blora, 16 Februari 1990

Alamat : Jalan Mahoni 003/005 Kridosono – Blora

Orang Tua : Djaka Prijana (Ayah), Ratna Puji Astuti (Ibu)

Pendidikan :

- TK : TK Tunas Rimba Blora1995-1996

- SD : SDN Tempelan 1 Blora 1996 - 2002

- SMP : SMPN 1 Blora 2002-2005

- SMA : Pondok Modern Darussalam Gontor Putri 1 2005 – 2009

- S1 : Universitas Muhammadiyah Purwokerto

Keanggotaan Organisasi :

- Anggota Ikatan Mahasiswa Muhammadiyah Fakultas Farmasi Universitas

Muhammadiyah Purwokerto 2010- 2011

- Anggota Ikatan Mahasiswa Muhammadiyah Fakultas Farmasi Universitas

Muhammadiyah Purwokerto 2011 -2012

Pengalaman :

- Asisten Praktikum Mikrobiologi dan Virologi Fakultas Farmasi UMP 2011-

2012

- Asisten Praktikum Farmakognosi Fakultas Farmasi UMP 2012 - 2013

- Asisten Praktikum Mikrobiologi dan Virologi Fakultas Farmasi UMP 2012 -

2013

- Asisten Praktikum Fitokimia Fakultas Farmasi UMP 2012 - 2013

- Asisten Praktikum Farmakognosi Fakultas Farmasi UMP 2013 - 2014

- Asisten Praktikum Analisis Farmasi Fakultas Farmasi UMP 2013 – 2014

- Asisten Praktikum Biofarmasetika Fakultas Farmasi UMP 2013 – 2014

- Asisten Praktikum Farmakoterapi 2 Fakultas Farmasi UMP 2013 – 2014

- Asisten Praktikum Mikrobiologi dan Virologi Fakultas Farmasi UMP 2013-

2014

x Penentuan Aktivitas Estrogenik…, Dian Kartika Sari, Fakultas Farmasi UMP, 2014

12

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ....................................................................................... i

HALAMAN PERSETUJUAN ........................................................................ ii

HALAMAN PENGESAHAN ......................................................................... iii

PERNYATAAN .............................................................................................. iv

INTISARI ....................................................................................................... v

ABSTRACT..... ............................................................................................... vi

PRAKATA ...................................................................................................... vii

MOTTO .. ...................................................................................................... viii

HALAMAN PERSEMBAHAN ..................................................................... ix

RIWAYAT HIDUP ......................................................................................... x

DAFTAR ISI ................................................................................................... xi

DAFTAR TABEL ........................................................................................... xiii

DAFTAR GAMBAR ...................................................................................... xiv

DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................... xv

BAB I PENDAHULUAN ........................................................................ 1

A. Latar Belakang ...................................................................... 1

B. Perumusan Masalah… ............................................................ 3

C. Tujuan Penelitian .................................................................... 4

D. Manfaat Penelitian .................................................................. 4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ............................................................... 5

A. Tumbuhan Acanthus ilicifolius ............................................... 5

B. Estrogen .................................................................................. 6

C. Fitoestrogen ............................................................................. 7

D. Uji Hayati Penentuan Aktivitas Estrogenik ............................ 8

E. Metode Perhitungan Jumlah Sel Yeast .................................. 9

BAB III METODE PENELITIAN .............................................................. 11

A. Jenis dan Rancangan Penelitian .............................................. 11

B. Variabel Penelitian .................................................................. 11

C. Definisi Variabel Operasional ................................................. 11

D. Waktu dan Tempat Penelitian ................................................. 12

xi Penentuan Aktivitas Estrogenik…, Dian Kartika Sari, Fakultas Farmasi UMP, 2014

13

E. Alat dan Bahan ........................................................................ 12

F. Cara Penelitian ........................................................................ 13

G. Analisis Statistik ..................................................................... 15

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ..................................................... 16

A. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun dan Bunga Jeruju ................. 16

B. Penyiapan Kultur Yeast ............................................................ 17

C. Perhitungan Jumlah Sel Yeast dengan haemocytometer .......... 18

D. Penentuan Aktivitas Estrogenik................................................ 22

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ..................................................... 27

A. Kesimpulan ............................................................................. 27

B. Saran ........................................................................................ 27

DAFTAR PUSTAKA

LAMPIRAN

xii Penentuan Aktivitas Estrogenik…, Dian Kartika Sari, Fakultas Farmasi UMP, 2014

14

DAFTAR TABEL

Tabel 1. Strain Saccharomyces cerevisiae Y190 ............................................ 13

Tabel 2. Jumlah Bobot Ekstrak Etanol Daun dan Bunga Jeruju ..................... 17

xiii Penentuan Aktivitas Estrogenik…, Dian Kartika Sari, Fakultas Farmasi UMP, 2014

15

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Struktur estradiol... ........................................................................ 7

Gambar 2. Struktur genistein ......................................................................... 8

Gambar 3. Prinsip Metode YES ..................................................................... 9

Gambar 4. Haemocytometer........................................................................... 10

Gambar 5. Area Perhitungan Koloni Secara Mikroskopis dengan

Haemocytometer ........................................................................... 10

Gambar 6. a. Hasil streaking YES-hERα∆pdr5snq2∆yor1 ............................ 17

Gambar 6. b. Hasil streaking YES-hERβ∆pdr5snq2∆yor1 ............................ 17

Gambar 7. Grafik pertumbuhan sel YES - hERαsebelum dan sesudah

perlakuan ekstrak etanol daun dan bunga jeruju ........................... 19

Gambar 8. Grafik pertumbuhan YES - hERα sebelum dan sesudah perlakuan

estradiol dan genistein. .................................................................. 20

Gambar 9.Grafik pertumbuhan sel YES – hERβ sebelum dan sesudah

perlakuan ekstrak etanol bunga dan daun jeruju (Acanthus

ilicifolius). ..................................................................................... 21

Gambar 10.Grafik pertumbuhan sel YES – hERβ sebelum dan sesudah

perlakuan Estradiol dan genistein sebagai kontrol positif ............ 21

Gambar 11.Grafik hubungan antara log konsentrasi ekstrak etanol daun dan

bunga jeruju dengan unit β-galaktosidase yang ditentukan

pada YES – hERα dan YES – hERβ. ............................................ 23

Gambar 12.Grafik hubungan antara log konsentrasi Estradiol dengan Miller Unit

terhadap YES – hERα dan YES – hERβ. ...................................... 25

Gambar 13.Grafik hubungan antara log konsentrasi Genistein dengan Miller Unit

terhadap YES – hERα dan YES – hERβ. ...................................... 25

xiv Penentuan Aktivitas Estrogenik…, Dian Kartika Sari, Fakultas Farmasi UMP, 2014

16

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Foto perhitungan sel yeast menggunakan haemocytometer .... 34

Lampiran 2. Hasil absorbansi pada ELISA reader ...................................... 41

Lampiran 3. Data absorbansi dan perhitungan miller unit ........................... 42

Lampiran 4. Analisis hasil pada Grap padPrisma ........................................ 50

Lampiran 5. Gambar Proses Penelitian ........................................................ 53

Lampiran 6. Perhitungan pembuatan buffer fosfat ...................................... 55

Lampiran 7. Perhitungan pembuatan Z-buffer ............................................. 56

Lampiran 8. Perhitungan pembuatan Na2CO3 ............................................. 57

Lampiran 9. Perhitungan pembuatan larutan stok estradiol ......................... 58

Lampiran 10. Perhitungan pembuatan larutan stok genistein ......................... 60

Lampiran 11. Perhitungan pembuatan larutan stok ekstrak etanol daun dan

bunga jeruju ............................................................................. 62

xv Penentuan Aktivitas Estrogenik…, Dian Kartika Sari, Fakultas Farmasi UMP, 2014