PRAKTIKUM IVABSORPSI OBAT SECARA IN VITRO

I. TUJUAN PERCOBAANMempelajari pengaruh pH terhadap absorpsi obat melalui saluran cerna secara in vitro.

II. PRINSIP PERCOBAANA. AbsorpsiAbsorpsiatau penyerapan zat aktif adalah masuknya molekul obat ke dalam tubuh atau menuju ke peredaran darah tubuh setelah melewati sawar biologis (Aiache, et al., 1993). Absorpsi obat adalah peran yang terpenting untuk akhirnya menentukan efektivitas obat (Joenoes, 2002). Agar suatu obat dapat mencapai tempat kerja di jaringan atau organ, obat tersebut harus melewati berbagai membran sel.B. Derajat IonisasiDerajat Ionisasiyaitu perbandingan jumlah mol zat yang terionisasi dengan jumlah mol zat mula-mula. Derajat ionisasi tergantung pada pH larutan dan pKa obat seperti terlihat pada persamaan Henderson-Hasselbalch.

C. Kecepatan transport obatPermeabilitas membran biologis terhadap suatu obat dapat digambarkan oleh koefisien partisinya dan mempunyai hubungan linear dengankecepatan transportatau kecepatan absorpsinya, dinyatakan dengan persamaan :

III. TEORIProses absorpsi merupakan dasar penting dalam menentukan aktivitas farmakologis obat. Kehilangan obat selama proses absorpsi akan mempengaruhi efek obat dan menyebabkan kegagalan terapi. Faktor yang mempengaruhi kecepatan dan besarnya absorbsi, adalah bentuk dosis, jalur/rute pemberian obat, aliran darah ke tempat pemberian, fungsi saluran pencernaan,adanya makanan atau obat lain, serta variabel lainnya (Abrams, 2005).Absorpsi atau penyerapan zat aktif adalah masuknya molekul-molekul obat ke dalam tubuh atau menuju ke peredaran darah tubuh setelah melewati sawar biologis. Absorpsi obat adalah peran yang terpenting untuk akhirnya menentukan efektivitas obat. Agar suatu obat dapat mencapai tempat kerja di jaringan atau organ, obat tersebut harus melewati berbagai membran sel. Pada umumnya, membran sel mempunyai struktur lipoprotein yang bertindak sebagai membran lipid semipermeabel (Shargel and Yu, 1988). Sebelum obat diabsorpsi, terlebih dahulu obat itu larut dalam cairan biologis. Kelarutan serta cepat-lambatnya melarut menentukan banyaknya obat terabsorpsi. Dalam hal pemberian obat per oral, cairan biologis utama adalah cairan gastrointestinal, dari sini melalui membran biologis obat masuk ke peredaran sistemik (Joenoes, 2002).Obatpadaumumnyadiabsorpsidarisaluranpencernaansecaradifusipasifmelalui membran selular. Obat-obat yang ditranspor secara difusi pasif hanyalah yang larut dalam lipid. Makin baik kelarutannya dalam lipid, maka baik absorpsinya sampai suatu absorpsi optimum tercapai. Obatobatyangdigunakansebagianbesarbersifatasamataubasaorganiklemah. Absorpsiobatdipengaruhiderajationisasinyasaatzattersebutberhadapandengan membran. Membran sel lebih permeable terhadap bentuk obat yang tidak terionkan dari padabentuk obat yang terionkan. Derajat ionisasi tergantung pada pH larutan dan pKa obat seperti terlihat pada persamaanHenderson-Hasselbachsebagai berikut: Absorpsi obat adalah langkah utama untuk disposisi obat dalam tubuh dari sistemLADME(Liberasi-Absorpsi-Distribusi-Metabolisme-Ekskresi). Bila pembebasan obat dari bentuk sediaannya (liberasi) sangat lamban, maka disolusi dan juga absorpsinya lama sehingga dapat mempengaruhi efektivitas obat secara keseluruhan(Joenoes, 2002).A. Faktor-faktor yang mempengaruhi absorpsi obata) Ukuran partikel obatb) Kecepatan disolusi obat berbanding langsung dengan luas permukaan yang kontak dengan cairan/pelarut. Makin kecil ukuran partikel, makin luas permukaan total, makin mudah obat terlarut.c) Pengaruh daya larut obatPengaruh daya larut obat/bahan aktif tergantung pada:1. Sifat kimia: modifikasi kimiawi obat2. Sifat fisik: modifikasi fisik obat3. Prosedur dan teknik pembuatan obat4. Formulasi bentuk sediaan/galenik dan penambahan eksipiend) Beberapa faktor lain fisiko-kimia obat.1. Temperatur2. pKa dan derajat ionisasi obat (Joenoes, 2002)

B. Mekanisme Lintas MembranMekanisme lintas membran berkaitan dengan peristiwa absorpsi, meliputi mekanisme pasif dan aktif (Syukri, 2002).a) Difusi pasif melalui poriSemua senyawa yang berukuran cukup kecil dan larut dalam air dapat melewati kanal membran. Sebagian besar membran (membran seluler epitel usus halus dan lain-lain) berukuran kecil yaitu 4-7 dan hanya dapat dilalui oleh senyawa dengan bobot molekul yang kecil yaitu lebih kecil dari 150 untuk senyawa yang bulat, atau lebih kecil dari 400 jika senyawanya terdiri atas rantai panjang (Syukri, 2002).b) Difusi pasif dengan cara melarut pada lemak penyusun membranDifusi pasifmenyangkut senyawa yang larutdalam komponen penyusun membran. Penembusan terjadi karena adanya perbedaan konsentrasi atau elektrokimia tanpa memerlukan energi, sehingga mencapai keseimbangan pada kedua sisi membran. Waktu yang diperlukan untuk mencapai keseimbangan tersebut mengikuti hukum difusi Fick (Syukri, 2002).c) Tranpor aktifTranspor aktif suatu molekul merupakan cara pelintasan transmembranyang sangat berbeda dengan difusi pasif. Pada transpor aktif diperlukan adanya pembawa. Pembawa ini dengan molekul obat dapat membentuk kompleks pada permukaan membran. Kompleks tersebut melintasi membran dan selanjutnya molekul dibebaskan pada permukaan lainnya, lalu pembawa kembali menuju ke permukaan asalnya (Syukri, 2002).Sistem transpor aktif bersifat jenuh. Sistem ini menunjukkan adanya suatu kekhususan untuk setiap molekul atau suatu kelompok molekul. Oleh sebab itu dapat terjadi persaingan beberapa molekul berafinitas tinggi yang menghambat kompetisi transpor dari molekul berafinitas lebih rendah. Transpor dari satu sisi membran ke sisi membran yang lain dapat terjadi dengan mekanisme perbedaan konsentrasi. Tranpor ini memerlukan energi yang diperoleh dari hidrolisis adenosin trifosfat (ATP) dibawah pengaruh suatu ATP-ase (Syukri, 2002).d) Difusi terfasilitasiDifusi ini merupakan cara perlintasan membran yang memerlukan suatu pembawa dengan karakteristik tertentu (kejenuhan, spesifik dan kompetitif). Pembawa tersebut bertanggung jawab terhadap transpor aktif, tetapi pada transpor ini perlintasan terjadi akibat gradien konsentrasi dan tanpa pembebasan energi (Syukri, 2002).e) PinositosisPinositosis merupakan suatu proses perlintasan membran oleh molekul-molekul besar dan terutama oleh molekul yang tidak larut. Perlintasan terjadi dengan pembentukan vesikula (bintil) yang melewati membran (Syukri, 2002).f) Transpor oleh pasangan ionTranspor oleh pasangan ion adalah suatu cara perlintasan membran dari suatu senyawa yang sangat mudah terionkan pada pH fisiologik. Perlintasan terjadi dengan pembentukan kompleks yang netral (pasangan ion) dengan senyawa endogen seperti musin, dengan demikian memungkinkan terjadinya difusi pasif kompleks tersebut melalui membran (Syukri, 2002).Studi absorpsiin vitrodimaksudkanuntuk memperoleh informasi tentang mekanisme absorpsi suatu bahan obat, tempat terjadinyaabsorpsi yang optimal, permeabilitas membran saluran pencernaan terhadap berbagai obat, sertapengaruh berbagai faktor terhadap absorpsi suatu obat.Uji Permeasi Usus TerbalikBiasanya menggunakan usus tikus kecil untuk parameter kinetik menentukan transportasi yang handal dan direproduksi. Metode ini mutlak diperlukan untuk mempertahankan oksigenasi jaringan kelangsungan jaringan usus yang hanya berlangsung selama maksimal 2 jam. Awalnya, studi ini hanya digunakan untuk mempelajari pengangkutan molekul makro dan liposom, namun kini telah mengembangkan penelitian untuk transportasi seluler obat obat yang hidrofil dan mempelajari efek dari enhancer dalam penyerapan obat.Keuntungan dari metode ini adalah karena dapat digunakan untuk menentukan transportasi di berbagai segmen dari usus kecil, sebagai studi awal untuk transportasi obat, dan untuk memperkirakan tingkat level first pass metabolisme obat pada sel epitel usus. Sedangkan kelemahan metode ini adalah karena adanya mukosa muskularis menyebabkan obat untuk berpindah dari lumen kedalam lamina propria dan menembus mukosa muskularis, menyebabkan obat obat tertentu dapat terikat dengannya dan menyebabkan transportasi lebih rendah dari yang seharusnya diukur (Keperawatan, 2011).Hewan percobaan yang umum digunakan dalam penelitian ilmiah adalah tikus. Tikus (Rattusnor vegicus) telah diketahui sifat-sifatnya secara sempurna, mudah dipelihara, dan merupakan hewan yang relative sehat dan cocok untuk berbagai penelitian. Ciri-ciri morfologiRattusnor vegicusantara lain memiliki berat 150-600 gram, hidung tumpul dan badan besar dengan panjang 18-25 cm, kepala dan badan lebih pendek dari ekornya, serta telinga relatif kecil dan tidak lebih dari 20-23 mm. Usus halus terdiri dari duodenum, jejunum, dan ileum. Duodenum pada manusia memiliki panjang sekitar 25 cm terikat erat pada dinding dorsal abdomen dan sebagian besar terlatak retroperitoneal. Jalannya berbentuk seperti huruf C yang mengitari pankreas dan ujung distalnya menyatu dengan jejunum yang terikat pada dinding dorsal rongga melalui mesenterium. Jejunum dapat bergerak bebas pada mesenteriumnya dan merupakan dua-perlima bagian proksimal usus halus. Sedangkan ileum merupakan sisa tiga-perlimanya. Dinding usus halus terdiri atas empat lapis konsentris yaitu mukosa, submukosa, muskularis, dan serosa (Leesonet al.1990).Lapisan mukosa terdiri dari lamina epitel, lamina propia, dan muskularis mukosa. Bentuk mukosa tersusun dari tonjolan berbentuk jari yang disebut vili yang digunakan untuk memperluas permukaan. Pada permukaan epitel vili terdapat mikrovili yang dapat meningkatkan efisiensi penyerapan nutrisi. Pada usus halus juga terdapat sel goblet yang menghasilkan mucus sebagai pelindung mukosa usus.Membran mukosa adalah lingkungan yang unik dimana banyak spesies mikroorganisme yang berbeda dapat hidup dan berekspresi. Terdapat 1014 mikroorganisme dari 200 spesies, 40-50 genus hidup pada permukaan tersebut, dan 99% dari populasi mikroorganisme pada membrane mukosa terjadi di bagian distal usus halus dan di bagian proksimal kolon. Membran mukosa dalam tubuh berkontak langsung dengan lingkungan luar dan membran mukosa juga terkolonisasi oleh mikroorganisme yang berbeda dalam jumlah yang besar.

IV. ALAT DAN BAHAN PERCOBAANA. Alat1. Tabung Crane dan Wilson yang dimodifikasi2. Spektrofotomet3. Timbangan Analitik4. pH Meter

5. 6. Peralatan oprasi

B. Bahan1. 2. Hewan percobaan (tikus putih jantan)3. Cairan lambung buatan tanpa pepsin (pH 1,2), Cairan usus buatan tanpa pankreatin (pH 7,5)4. Larutan NaCl 0,9% b/v5. CTM6. Eter7. Gas Oksigen8. Alkohol

V. PROSEDUR5.1. Pembuatan Kurva Baku10 mg CTM standar dilarutkan dengan aqua dest hingga 100 mL. Kemudian diencerkan menjadi berbagai macam gradasi konsentrasi. Masing-masing larutan dimasukkan ke dalam kuvet dan dimasukkan ke alat spektrofotometer uv-vis di panjang gelombang 286.5 nm. Lalu diukur masing-masing absorbansinya. Setelah itu dilakukan perhitungan dan dibuat kurva kalibrasinya.5.2. Pembuatan Larutan Barium Hidroksida 0,3 N dan Seng Sulfat 5%Barium hidroksida (Ba(OH)2.8H2O) ditimbang sebanyak 4,732 gram, diperoleh dari rumus diatas (BM= 315,47) (FI IV, 1995 hal 1137) dan dilarutkan kedalam air panas sebanyak 100 ml. Sedangkan sengsulfat (ZnSO4.H2O) ditimbang sebanyak 5 gram dan dilarutkan kedalam 100 ml air (BM= 179,46) (FI IV, 1995 hal 836). Barium hidroksida agak sukar larut dalam air dingin, sehingga butuh pemanasan untuk melarutkannya, namun pada saat percobaan, barium hidroksida masih belum larut sempurna sekalipun dilarutkan dalam air panas sambil dipanaskan, sedangkan sengsulfat sangat larut dalam air.5.3. Penentuan Absorpsi Pada Usus Halus TikusHewan percobaan dipuasakan selama 20-24 jam, tetapi diberi minum air masak. Lalu tikus dibunuh dengan eter, kemudian dibuka perutnya di sepanjanglinea medianadan usus dikeluarkan. Setelah itu, usus sepanjang 15 cm di bawahpylorusdibuang dan 20 cm di bawahnya dipotong untuk percobaan. Lalu usus dibagi dua sama panjang dan dibersihkan. Bagian anal digunakan sebagai kontrol sedangkan ujunganaldari potongan usus tersebut diikat dengan benang. Kemudian dengan menggunakan pinset usus tersebut dibalik sehingga bagian mukosa terletak di luar.Usus diisi dengan larutan NaCl 0,9% b/v sebanyak 1,4 ml. Lalu usus yang sudah diisi NaCl dan diikat, dimasukkan ke dalam tabung yang berisi cairan mukosal pH 1,2 sebanyak 75 ml (yang mengandung bahan obat) pada suhu 37oC. Perlakuan ini diulangi dengan tabung yang berisi cairan mukosal pH 7,4 (yang mengandung bahan obat) dan untuk kontrol menggunakan cairan mukosal pH 1,2 dan pH 7,4 juga tetapi tanpa bahan obat. Selama percobaan berlangsung, seluruh bagian usus dijaga agar dapat terendam dalam cairan mukosal dan selalu dialiri gas oksigen dengan kecepatan kira-kira 100 gelembung per menit. Untuk larutan uji (berisi CTM) tiap 5, 10, dan 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 dan 60 menit, cairan serosal diambil melalui kanula yang dimasukkan ke dalam vial kemudian diisi lagi dengan 1,4 ml NaCl 0,9% b/v. Hal yang sama juga dilakukan terhadap larutan kontrol (tanpa CTM).5.4. Analisis CTM dengan Spektrofotometer UVSebanyak 1 ml dari tiap vial diambil kemudian ditambahkan dengan 2 ml larutan seng sulfat 5% dan 2 ml barium hidroksida 0,3 N. Larutan dikocok dan disentrifugasi selama 2 menit dengan kecepatan 30 rpm. Lalu, bagian yang jernih diambil dan dibaca absorbansinya menggunakan spektrofotometer UV pada panjang gelombang 268.5 nm dan dibuat grafik hubungan antara jumlah dan kadar obat yang ditranspor, dihitung permeabilitas danlag timenya serta dihitung tetapan kecepatan absorpsinya.

VI. DATA PENGAMATAN1. Kurva Baku a. Konsentrasi Larutan Baku CTM yang dibuat = 10 mg/100 ml = 100 ppmb. Perhitungan Pegenceran Larutan CTMKet : volume larutan CTM hasil pengenceran = 10 mlKonsentrasi Larutan CTMVolume Larutan Baku CTM Yang Dibutuhkan

30 ppm3 ml

40 ppm4 ml

50 ppm5 ml

60 ppm6 ml

70 ppm7 ml

80 ppm8 ml

c. Data Kurva Baku CTMKonsentrasir Larutan CTMAbsorbansi\

30 ppm0,33

40 ppm0,42

50 ppm0,513

60 ppm0,693

70 ppm0,708

80 ppm0,822

d. Kurva Baku CTM

2. Absorpsi Pada pH Asama. Data Absorbansi dan Konsentrasi Per KelompokWaktuKelompok 1Kelompok 2

PositifNegatifPositifNegatif

AbsorbConcAbsorbConcAbsorbConcAbsorbConc

50.29427.3660.25422.7260.25822.8260.25422.726

100.33531.4380.25522.8710.26825.3510.27725.061

150.39837.6190.30728.1140.30728.1140.29126.476

200.40338.2790.31629.0170.32529.2270.31629.017

250.41439.3170.35733.230.34733.340.39335.358

300.42340.2240.37835.3070.42339.9190.42239.809

b. Grafik Hubungan Konsentrasi Obat Yang Ditranspor Sebagai Fungsi Waktu Per Kelompok

c. Data Absorbansi dan Konsentrasi Rata-RataWaktuConc

PositifNegatif

525.09622.726

1028.39523.966

1532.86727.295

2033.75329.017

2536.32934.294

3040.07237.558

d. Grafik Hubungan Konsentrasi Obat Yang Ditranspor Sebagai Fungsi Rata-Rata

e. Pehitungan Pm (Permeabilitas) Membrany = mx + by = 0.5689x + 22.795m = 0.5689

Konsetrasi awal cairan mukosa (Cg) :5 mg / 150 ml = 33.333 ppm

Rumus :Pm = m / CgPm = 0.5689/33.33Pm = 0.0171 cm/detik

f. Perhitungan Leg Timex = ty = mx + by = 0.5689x + 22.7950 = 0.5689x +22.795t = -40.069 menit

3. Absorpsi Pada pH Basaa. Data Absorbansi dan Konsentrasi Per KelompokWaktuKelompok 3Kelompok 4

PositifNegatifPositifNegatif

AbsorbConcAbsorbConcAbsorbConcAbsorbConc

50.18715.930.657.8950.41438.9750.67665.552

100.37735.1720.46744.3070.46544.1740.63461.28

150.37835.3280.45843.4610.53351.0690.56654.406

200.35432.8620.36133.5820.48642.2560.3734.553

250.3835.5230.36934.370.37735.2630.3239.1

300.26323.6750.327.3770.35132.6020.27857.67

b. Grafik Hubungan Konsentrasi Obat Yang Ditranspor Sebagai Fungsi Waktu Per Kelompok

c. Data Absorbansi dan Konsentrasi Rata-RataRata-rata

WaktuConc

PositifNegatif

527.45361.724

1039.67352.794

1543.19948.934

2037.55934.068

2535.39336.735

3028.13942.524

d. Grafik Hubungan Konsentrasi Obat Yang Ditranspor Sebagai Fungsi Rata-Rata

e. Pehitungan Pm (Permeabilitas) Membrany = mx + by = 0.086x + 36.741m = 0.086

Konsetrasi awal cairan mukosa (Cg) :5 mg / 150 ml = 33.333 ppmRumus Pm = m / CgPm = 0.086/33.33Pm = 0.0026 cm/detik

f. Perhitungan Leg Timex = ty = mx + by = 0.086x + 36.7410 = 0.086x +36.741t = -427.221 menit

VII. PEMBAHASANPada praktikum kali ini, dilakukan pengujian absorpsi CTM secara in vitro dengan menggunakan metode usus terbalik. Pengujian ini bertujuan untuk melihat pengaruh pH terhadap absorpsi obat melalui saluran pencernaan secara in vitro. Hewan percobaan yang digunakan adalah tikus putih jantan. Tikus putih biasa digunakan dalam percobaan laboratorium karena mudah dikembangbiakkan dan mudah dalam perawatannya, hewan ini juga memiliki struktur anatomi fisiologi yang hampir sama dengan manusia. Sehingga hasil uji yang dicobakan pada tikus putih yang menyangkut struktur fisiologi anatomi dapat diaplikasikan pada manusia.Sebelumnya, tikus percobaan dipuasakan dari makanan selama 20-24 jam, tapi diberi minum air masak. Tujuan dari tikus dipuasakan agar tidak ada faktor makanan yang mengganggu saat dilakukan percobaan. Tikus dibunuh dengan eter sebagai obat bius yang diberikan melalui pernapasan. Kemudian dibuka perutnya di sepanjanglinea mediana (linea mediana adalah garis yang melintas tepat ditengah tubuh dengan arah lintasan atas bawah/vertikal) dan usus dikeluarkan. Usus sepanjang 15 cm dibawah pilorus (pilorus adalah daerah atau bagian lambung bawah yang berhubungan dengan bagian atas duodenum/usus duabelas jari) dibuang dan 20 cm dibawahnya dipotong untuk percobaan. Usus dibagi dua bagian sama panjang, kemudian dibersihkan. Ujung anus dari potongan usus tersebut diikat dengan benang, kemudian dengan menggunakan pinset kecil usus tersebut dibalik secara perlahan agar usus tidak sobek, sehingga bagian mukosa terletak diluar. Usus tikus yang telah didapatkan direndam dalam larutanNaCl fisiologis 0,9% yang bersifat isotonis agar tidak kering dan rusak. Usus harus dibalik karena percobaan ini bertujuan untuk mengetahui kadar absorpsi obat oleh filia bagian dalam usus pada perbedaan pH yang diatur sesuai pH lambung dan pH usus secarain vitro(menggunakan instrumen yang menyerupai bagian dalam tubuh). Selain itu mukosa usus adalah bagian yang lipofil, sehingga diharapkan nantinya akan dapat diukur seberapa besar kadar zat aktif obat yang bersifat lipofil yang dapat diabsorpsi oleh mukosa usus.Pada praktikum ini kita menggunakan 2 Tabung Crane&Willson untuk kontrol positif dan kontrol negatif. Pada kontrol positif campuran dapar ditambahkan zat aktif yang akan diuji (CTM), dan pada kontrol negatif hanya berisi larutan dapar saja . Kedalam tabung instrument pertama dimasukkan larutan dapar pH 7,5 yang telah dicampur CTM 5 mg melalui pipa A sebanyak 75 ml menggunakansyringe sebagai kontrol positif dan pada tabung instrument kedua dimasukan larutan dapar pH 7,5 melalui pipa A sebanyak 75 ml. Alasan dibuat kontrol positif dan kontrol negatif adalah agar kita dapat membandingkan seberapa banyak zat aktif yang terabsorpsi dan seberasa besar efek yang ditimbulkan jika tidak menggunakan zat aktif (berisi dapar saja).Setelah itu, kantong usus yang sudah berisi cairan serosal ini dimasukkan ke dalam tabung yang sudah berisi cairan mukosal 75 ml pada tabung pertama (yang mengandung bahan obat yaitu CTM). Kantong usus untuk kontrol negatif (tabung kedua) dilakukan dengan cara yang sama, tetapi dengan menggunakan cairan mukosal tanpa obat. Selama percobaan berlangsung, seluruh bagian usus dijaga agar dapat terendam dalam cairan mukosal dan selalu dialiri gas oksigen dengan kecepatan yang diatur. Oksigen diberikan agar sel-sel usus tetap hidup.Ujung usus yang lain diikat dengan benang dan dikaitkan ke ujung pipa C, digunakan larutan NaCl fisiologis yang isotonis karena menyerupai cairan tubuh tikus/ mamalia. Larutan NaCl fisiologis diambil dari usus setiap rentang waktu 5 menit karena akan dihitung kadar CTM yang terabsorpsi melalui filia usus dan masuk kedalam larutan untuk mengetahui absoprsi optimal dari CTM pada perbedaan pengaturan pH yang disesuaikan kondisi dalam tubuh mamalia.Kemudian percobaan dilanjutkan dengan menganalisis, persiapanya adalah dengan menyiapkan 12 tabung reaksi dan 12 vial sebagai wadah yang digunakan untuk sampling dan untuk pengukuran spektrofotometer. Sebelum melakukan sampling tiap menit, pada 12 tabung reaksi diisi larutan 2ml Ba(OH)2 dan 2ml Larutan ZnSO4 5%, Fungsi barium hidroksida dan sengsulfat adalah untuk mengekstraksi CTM dan memisahkan CTM dari senyawa-senyawa lain yang mungkin terikut, sehingga hanya CTM yang akan dianalisis menggunakan spektrofotometri UV.Setelah itu pensamplingan larutan uji (berisi CTM) diambil tiap 5, 10, dan 15, 20, 25, dan 30 menit, cairan serosal diambil melalui kanula yang dimasukkan ke dalam vial kemudian diisi lagi dengan 1,4 ml NaCl 0,9% b/v, begitupun untuk yang kontrol negatif. Setaip kali sampling, lautan uji hasil sampling kemudiaan di masukan kedalam campuran larutan Ba(OH02 dan larutan ZnSO4. Melalui pensamplingan ini diperoleh 12 tabung reaksi (6 tabung untuk kontrol positif dan 6 tabung untuk kontrol negatif). Campuran larutan pada tabung reaksi tersebut disentrifugasi untuk memisahkan endapan dengan filtratnya. Dimana filtrat yang berupa cairan jernih tersebut yang mengandung CTM. Pada saat sentrifugasi, campuran larutan tersebut dimasukkan kedalam tabung sentrifugasi lalu tabungnya ditempatkan kedalam alat sentrifugasi secara berseberangan dan dengan jumlah yang sama, setelah itu diatur kecepatan pemutarannya, yaitu 3000 RPM (Revolutions Per Minute) (angka 30 dilayar dikali faktor pengali 100) selama 2 menit. Hasil sentrifugasi berupa larutan jernih di bagian atas dan endapan di bagian bawah. Bagian atas yang berupa larutan jernih diambil menggunakan pipet dan dimasukkan kedalam vial sebelum dianalisis menggunakan Spektrofotometer UV.Setelah di sentrifugasi, larutan-larutan yang telah dimasukan kedalam vial kemudian dianalisis spektrofotometer UV, dengan panjang gelombang 265,4 nm. Alasan memilih panjang gelombang maksimum adalah karena panjang gelombang maksimum memiliki kepekaan maksimal karena terjadi perubahan absorbansi yang paling besar dan pada panjang gelombang maksimum, bentuk kurva absorbansi terhadap konsentrasi memenuhi hukumLambert-Beer. Sebelum sampel diukur, alat spektrofotometer terlebih dahulu di-referencekedalam panjang gelombang yang sesuai menggunakan blanko yaitu blanko dari 7,4 pada waktu = 0 menit. Berdasarkan data pengamatan, nilai absorbansi yang didapatkan sesuai dengan hukumLambert Beer, yaitu konsentrasi yang baik itu berada di rentang absorbansi 0,2-0,8 yang terdeteksi dengan spektro UV.Dari data pengamatan terlihat bahwa data yang didapatkan pada percobaan dengan pH 1,2 yaitu 0.0171 cm/detik dan nilai leg time -40.069 menit untuk percobaan dengan pH 7,5 yaitu 0.0026 cm/detik dan leg time -427.221 menit.Namun data yang dihasilkan pada pH 1,2 lebih tinggi dibandingkan dengan pada pH 7,4 itu adalah benar dan sesuai dengan teori, yaitu bahwa suatu obat yang bersifat asam akan terabsorpsi optimum di pH asam (lambung) dan obat yang bersifat basa terabsorpsi optimum di pH basa(usus). Pada percobaan kali ini, senyawa obat yang digunakan adalah CTM , dimana senyawa obat ini bersifat asam, sehingga obat ini akan terabsorpsi optimum di pH asam. Dapat dibandingkan dari daya absorpsi pH asam dan pH basa dilihat dari konsentrasi untuk pH asam lebih tinggi nilai konsentrasi CTM yang terabsorpsi di banding CTM yang terabsorpsi di basa. Dilakukannya percobaan pada pH basa yaitu untuk menyamakan absorpsi pada pH usus.

VIII. KESIMPULANDari data pengamatan tersebut dapat disimpulkan bahwa, CTM pada pH asam lebih optimal karena CTM bersifat asam yang dapat larut optimal di pH asam.

DAFTAR PUSTAKA

Anne Collins Abrams,RN, MSN. 2005. Clinical Drug Therapy. US. Wolters Kluwer Health, Lippincott Williams Wilkins.Depkes RI. 1995.Farmakope Indonesia IV. Jakarta. Departemen Kesehatan.Familiamedika. 2013. CTM/Aspirin. Tersedia dihttp://familiamedika.net/obat-keluarga/CTM.html#.UlCL--iyBCY[diakses tanggal 06 Oktober 2013]Leeson, C.R., T.S. Lesson,dan A.A. Paparo. 1990.Buku Ajar Histologi. Jakarta. Penerbit Buku Kedokteran EGC.Shargel,L and yu, A. B. C. 1988.Biofarmasetika dan Farmakokinetika Terapan. Surabaya. Airlangga University Press.Syukri, S. 2002.KIMIA DASAR 1. Bandung.Penerbit ITB.Watson, D.G.,2007. Analisis Farmasi. EGC. Jakarta.