5

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 TINJAUAN MENGENAI KANKER

Kanker adalah suatu penyakit dimana terjadi pertumbuhan sel-sel jaringan

tubuh yang tidak normal, cepat dan tidak terkendali. Dalam keadaan normal, sel

hanya akan membelah diri bila tubuh membutuhkannya seperti mengganti sel-sel

yang rusak atau mati. Sebaliknya, sel kanker akan membelah diri meskipun tidak

dibutuhkan sehingga terjadi kelebihan sel-sel baru. Kanker dapat tumbuh disemua

sel jaringan tubuh, seperti sel kulit, sel hati, sel darah, sel otak, sel lambung, sel

usus, sel paru, sel saluran kencing dan beberapa sel bagian tubuh lainnya. Oleh

karena itu dikenal macam-macam jenis kanker menurut sel atau jaringan asalnya.

Dikenal beberapa jenis kanker, seperti karsinoma, sarkoma, limfosa

(neoplasma sistem limfatik) atau leukimia (neoplasma ganas sel darah putih).

Karsinoma merupakan tumor ganas yang berasal dari sel epitel, misalnya kanker

payudara, kanker kulit, dan kanker lambung. Adapun sarkoma merupakan tumor

ganas yang berasal dari jaringan mesodermal, misalnya fibrosarkoma (tumor

ganas jaringan ikat), limfosarkoma (tumor ganas sistem limfatik), dan

osteosarkoma (tumor ganas pada tulang). (Dalimartha, 2003)

6

Sel kanker dapat dibedakan dengan sel normal antara lain: sel kanker tidak

mempunyai kontrol pertumbuhan, daya lekat sel kanker berkurang atau bahkan

sudah tidak ada, inhibisi kontak sel kanker berkurang atau bahkan sudah tidak ada

sehingga jika ditanam pada media kultur jaringan akan diperoleh pertumbuhan

yang berlapis-lapis dan tidak teratur, sistem enzim lebih sedikit

jumlahnya/macamnya, misalnya sel kanker tidak mempunyai asparagin sintase

sehingga tidak bisa mensintesis asparagin, enzim-enzim untuk pertumbuhan sel

kanker lebih besar (Mulyadi, 1997).

Sifat umum dari kanker adalah sebagai berikut:

1. Pertumbuhan berlebihan umumnya berbentuk tumor;

2. Gangguan diferensiasi dari sel dan jaringan sehingga mirip jaringan mudigah;

3. Bersifat invasif, mampu tumbuh di jaringan sekitarnya;

4. Bersifat metastatik, menyebar ke tempat lain dan menyebabkan pertumbuhan

baru;

5. Memiliki hereditas bawaan (acquired heredity) yaitu turunan sel kanker juga

dapat menimbulkan kanker; dan

6. Pergeseran metabolisme ke arah pembentukan makromolekul dari nukleosida

dan asam amino serta peningkatan katabolisme karbohidrat untuk energi sel

(Ganiswara, 1995).

Penyebab tumbuhnya kanker antara lain:

1. Faktor keturunan

2. Sinar ultraviolet dan radioaktif

3. Infeksi menahun

7

4. Pencemaran lingkungan

5. Minuman beralkohol

6. Asap rokok

7. Diet jangka panjang yang salah

8. Makanan berlemak

9. Berganti-ganti pasangan seksual

10. Bahan karsinogen seperti senyawa kimia (bahan sisa industri, zat pewarna,

bahan tambahan pada makanan dan minuman), faktor fisika (bahan pembawa

radiasi seperti bom atom), virus onkogenik (virus yang bersifat menyebabkan

timbulnya tumbuh ganda), hormon (Dalimartha, 2003)

Pencegahan kanker merupakan upaya untuk mengenali berbagai faktor

yang dapat menyebabkan timbulnya kanker dan menjadikan faktor-faktor tersebut

menjadi tidak efektif. Pencegahan kanker ini dapat bersifat primer atau sekunder.

Pencegahan primer merupakan tindakan untuk menghindari berbagai

faktor yang dapat menimbulkan kanker, antara lain:

1. Mengenai makanan, usahakan:

a. Mengurangi makanan berlemak,

b. Lebih banyak makan makanan berserat,

c. Lebih banyak makan buah dan sayuran berwarna kuning atau hijau

karena banyak mengandung vitamin seperti beta karoten, vitamin C,

mineral, dan phytonutrient,

d. Usahakan makan makanan segar,

e. Hindari makan makanan yang telah disimpan terlalu lama,

8

f. Kurangi makan makanan yang telah diawetkan, seperti diasinkan,

dibakar, diasap, atau yang ditambah bahan pengawet, serta

g. Batasi minum alkohol.

2. Hindarkan diri dari penyakit akibat hubungan seksual.

3. Hindari kebiasaan merokok. Berhenti merokok bagi perokok.

4. Hindari kontak dengan sinar matahari yang berlebihan.

5. Upayakan kehidupan seimbang dan hindari stres.

6. Periksa kesehatan secara berkala dan teratur.

Pencegahan sekunder merupakan istilah yang lebih umum dipakai oleh

para petugas kesehatan, terutama yang bergerak dalam penanggulangan kanker.

Pencegahan ini seperti:

a. Mengidentifikasikan kelompok populasi beresiko tinggi terhadap kanker,

b. Skrining populasi tertentu,

c. Deteksi dini kanker pada individu yang tanpa gejala (asimptomatik), dan

d. Mengubah perilaku manusia. (Dalimartha, 2003)

Pengobatan kanker yang digunakan pada dasarnya sama, yaitu dengan:

1. Pembedahan (operasi)

2. Penyinaran/radiasi (radioterapi)

3. Obat-obat pembunuh sel kanker/sitostatika (khemoterapi)

4. Obat-obat yang meningkatkan daya tahan tubuh (imunoterapi)

5. Endokrinoterapi, merupakan bagian dari kemoterapi, yaitu penggunaan

hormon tertentu untuk pengobatan tumor pada organ yang proliferasinya

tergantung pada hormon, seperti karsinoma payudara.

9

6. Tumbuhan obat, simplisia dari binatang dan mineral lainnya

Pengobatan dilakukan dengan salah satu jenis atau kombinasi cara-cara

diatas (multimodalitas). Pengobatan multimodalitas misalnya pembedahan dengan

penyinaran atau penyinaran dengan sitostatika. Hasil pengobatannya tentu

tergantung dari tingkat (stadium) penyakit. Apabila kanker stadium dini cepat

diobati dan dilakukan dengan cepat maka penderita dapat disembuhkan.

(Dalimartha, 1999)

2.2 TINJAUAN MENGENAI Oryza sativa L.

2.2.1 Klasifikasi

Klasifikasi dari tanaman Oryza saliva L. adalah sebagai berikut:

Divisi: Spermatophyta; Anak divisi: Angiospermae; Kelas: Monocotyledonae;

Bangsa: Glumiflorae; Suku: Poaceae (Gramineae); Marga: Oryza; Jenis: Oryza

sativa L (Wilkipedia Indonesia, 2008)

2.2.2 Nama lokal

Jawa: Padi, pari, pare, pantun ; Inggris: Rice (Dalimartha, 1993)

2.2.3 Morfologi Tumbuhan

Rumput berumpun kuat, berumur 1 tahun, dari ruas keluar banyak batang

tang berakar tinggi, tinggi 1,5-2 m. lidah tumbuh kuat, panjang 1-4 mm,

bercangap 2. Helaian daun berbentuk garis, kebanyakan dengan tepi kasar. Malai

panjang 15-40 cm, tumbuh ke atas akhirnya ujung menggantung. Cabang malai

10

kasar. Pada waktu masak buah kuning rontok atau tidak. Buah berbeda, kadang

kaya pati, kadang kaya perekat (ketan).

(Steenis et al, 2006)

2.2.4 Kegunaan

Akar berkhasiat menghilangkan keringat, membunuh cacing (antelmentik),

dan sebagai penawar racun. Selaput biji (kulit ari) berkhasiat untuk memelihara

lambung, memperkuat limpa, meningkatkan nafsu makan dan antineuritis.

Tangkai beras berkhasiat untuk mengatasi: rambut kotor dan keguguran.

(Dalimartha, 1993)

2.2.5 Kandungan Kimia

Biji mengandung karbohidrat, dekstrin, arabanoxylan, xylan, phytin, glutein,

enzim (phytase, lipase, diastase) dan vitamin B1 (Dalimartha, 1993)

2.3 TINJAUAN TENTANG Brine Shrimp Lethality Test (BST)

Uji Brine Shrimp Lethality Test (BST) merupakan uji pendahuluan

(praskrining) yang sederhana untuk mengetahui ada atau tidaknya aktivitas

biologis senyawa tertentu. (Mc Laughlin et al., 1991)

Keuntungan pemakaian metode kematian anak udang atau BST adalah:

Waktu pelaksanaan cepat, biaya relatif murah, pengerjaan sederhana, tidak

memerlukan teknik aseptik, tidak memerlukan perawatan khusus, menggunakan

sampel yang relatif sedikit, tidak memerlukan serum hewan (Anderson et al,

1991). Selain itu telur larva Artemia salina Leach cukup banyak tersedia dalam

11

keadaan siap pakai ditoko-toko ikan. Dengan menempatkan sejumlah telur udang

tersebut dalam air laut, maka setelah 48 jam telur menetas menjadi larva yang

disebut nauplii dalam jumlah besar yang dapat dipakai dalam penelitian. (MC

Laughlin, 1991).

Hasil uji menggunakan larva Artemia salina Leach memiliki korelasi yang

baik dengan uji anti kanker menggunakan metode 9 ps (sel leukemia in vivo).

Penelitian tersebut menyeleksi ekstrak etanol biji-bijian dari 4 jenis tumbuhan

suku Euphorbiaceae, dimana 24 ekstrak aktif terhadap uji antikanker

menggunakan metode 9 ps dan 14 diantara 24 macam ekstrak tersebut juga aktif

pada uji terhadap larva Artemia salina Leach. (Mayer et al, 1982)

Pada penelitian yang dilakukan oleh MC Laughlin (1991) terhadap sejumlah

alkaloid kaktus dari derivat dihydroisoquinolin, berhasil dibuktikan bahwa uji

dengan larva Artemia salina Leach memiliki korelasi yang baik dengan uji anti

kanker dengan menggunakan metode 9 KB (sel karsinoma nasofaring).

Prinsip metode uji kematian anak udang adalah sifat toksisitas senyawa

bioaktif dari tanaman pada dosis tinggi, sehingga dapat diartikan kematian hewan

sederhana seperti anak udang laut (Artemia salina) secara in vivo yang dapat

digunakan sebagai alat pantau yang tepat untuk proses skrining dan fraksinasi

pada penelitian bioaktif baru dari sumber alam. (Mayer et al, 1982)

Ekstrak atau komponen murni yang di uji dibuat dalam berbagai konsentrasi

yaitu: 10 g/ml,100 g/ml,1000 g/ml dalam vial yang telah dikalibrasi 5ml yang

kemudian diisikan 10 ekor larva artemia salina leach. Setelah 24 jam jumlah larva

Artemia salina yang masih hidup dihitung dalam jumlah prosentase kematian

12

masing-masing. Setelah itu data di analisis dengan Probit Analyze Program untuk

mengetahui harga LC50 (Lethal Concentration 50% yaitu konsentrasi yang

menyebabkan kematian 50 % pada hewan coba) dengan derajat kepercayaan 95%.

(MC Laughlin et al, 1991).

Hal-hal yang perlu diperhatikan dalam pelaksanaan metode ini antara lain:

ekstrak yang dipakai harus bebas dari pelarut, vial yang dipakai harus dikalibrasi

dahulu, pada perhitungan larva Artemia yang mati harus benar teliti, larva Artemia

yang mati bila tidak menunjukan gerakan sama sekali pada saat pengamatan. Bila

pada larutan kontrol ada larva Artemia yang mati maka jumlah larva Artemia yang

mati pada masing-masing larutan uji dikurangi dengan jumlah larva Artemia yang

mati pada kontrol. (Anderson et al, 1991)

2.4 TINJAUAN TENTANG Artemia salina Leach

Menurut Mudjiman (1989), nama ilmiah dan klasifikasi Artemia Salina

adalah: Filum: Arthropoda; Kelas: Crustacea; Sub kelas: Brachipoda; Ordo:

Anostrace ; Familia: Arthemiida; Genus: Artemia; Spesies: Artemia salina

Artemia salina Leach merupakan kelompok udang-udangan dari philum

Arthropoda. Artemia salina Leach hidup didanau-danau garam (berair asin) yang

ada diseluruh dunia (Purwakusuma, 2002). Air laut alami (sekitar 35 g garam

perliter) merupakan media yang dipilih, media ini harus disterilkan dengan

pemanasan 30 menit dan disaring melalui penyaringan yang terbuat dari sintered

glass. Air yang hilang pada waktu pemanasan digantikan oleh aquadestilata.

Udara yang disaring dilewatkan melalui larutan pendingin untuk memberikan

oksigen pada media. Jika air laut tidak tersedia maka media tiruan dapat disiapkan

13

seperti pada formula di bawah ini, pH harus disesuaikan pada pH 7 8 dengan

Natrium bicarbonat, laju penetasan dan kelangsungan hidup nauplii pada air laut

alami hampir sama atau serupa dengan air laut buatan.

Formula air laut buatan: NaCl 24.0 g/l; CaCl2.2H2O 1.5 g/l; KBr 0.1 g/l; KCl

0.7 g/l; Na2SO4 4.0 g/l; NaHCO3 0.2 g/l; MgCl2.6H2O 11.0 g/l; Total garam 41.5

g/l (Colegate and Molyneux, 1993)

Siklus hidup Artemia salina Leach dimulai dari saat menetasnya telur. Setelah

24 jam, membran luar kista pecah dan keluar embrio. Beberapa jam kemudian

keluar embrio masih tetap menempel pada kulit kista untuk berkembang biak

menjadi nauplii dan mampu berkembang bebas dalam air. (Harefa, 2003)

Pada awalnya nauplii akan berwarna orange kecoklatan karena akibat masih

mengandung telur (Purwakusuma, 2002). Telur ini digunakan sebagai sumber

energi karena mulut dan alat pencernaannya masih belum sempurna (Drewes,

2002). Artemia yang baru menetas tidak akan makan, karena mulut dan anusnya

masih belum terbentuk sempurna. Setelah 12 jam menetas, mereka akan ganti

kulit dan memasuki tahap larva ke-dua. Dalam fase ini mereka akan mulai makan

dengan pakan berupa mikrialga, bakteri dan detritus organik lainnya. Pada

dasarnya mereka tidak memilih jenis pakan yang dikonsumsinya selama bahan

tersebut tersedia dalam air dengan ukuran yang sesuai. Nauplii akan berganti kulit

sebanyak 15 kali sebelum menjadi dewasa dalam waktu 8 hari (Purwakusuma,

2002) dan mencapai kedewasaan seksual dalam waktu 20-35 hari (Colegate dan

Molyneux, 1993).

14

Variable yang berpengaruh pada siklus hidup Artemia salina Leach, antara

lain:

1. Temperatur

Temperatur yang sesuai dengan siklus hidup Artemia salina Leach adalah

25oC-30oC (Purwakusuma, 2002)

2. Salinitas

Salah satu keunggulan Artemia salina Leach adalah kemampuannya dalam

beradaptasi dalam berbagai lingkungan, khususnya terhadap salinitas. Artemia

salina Leach mampu hidup dalam rentang salinitas 5-150 ppm, bahkan ada

yang mampu hidup diperairan dengan salinitas sampai 350 ppm, namun

sangat jarang dijumpai, hanya beberapa strain saja (Harefa, 2003)

3. Aerasi yang cukup; untuk menjaga oksigen terlarut sekitar 3 ppm

(Puwakusuma, 2002). Bila kadar oksigen rendah dan air banyak yang

mengandung bahan organik, Artemia salina akan memakannya. Apabila

keadaan ini terus berlanjut, mereka akan tumbuh dan beranak pinak dengan

cepat

4. Cahaya

Pengaruh cahaya terhadap Artemia salina Leach berkaitan dengan tingkat

keberhasilan penetasan hanya mencapai 50%. Lampu standart Grow-lite sudah

cukup untuk keperluan Artemia salina Leach (Harefa, 2003; Purwakusuma,

2002)

5. Keasaman media cair

15

Kondisi yang tidak dapat ditolerir oleh Artemia salina Leach adalah

keasaman (pH) pada media air. Artemia salina Leach hidup dalam rentang

kisaran 7-8. Penurunan pH sampai dibawah 7 dapat mengakibatkan kematian.

Senyawa-senyawa ammonium (NH4), Nitrit (NO2), dan Nitrat (NO3) dapat

menyebabkan kematian Artemia salina Leach. (Harefa, 2003)

2.5 TINJAUAN TENTANG EKSTRAKSI

Ekstraksi adalah kegiatan penarikan kandungan kimia yang dapat larut

sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dalam pelarut cair. Simplisia

yang diekstrak mengandung senyawa yang dapat larut seperti serat, karbohidrat,

protein, dll. Senyawa aktif yang terdapat dalam berbagai simplisia dapat

digolongkan kedalam golongan minyak atsiri, alkaloid, flavonoid, dll (Depkes RI,

2000)

Pada proses ekstraksi ini pada dasarnya dibedakan menjadi dua fase, yaitu:

1. Fase pencucian

Terjadi pada saat penyatuan cairan ekstraksi dengan meterial simplisia,

maka sel-sel yang dirusak dengan penghalusan langsung kontak dengan bahan

pelarut. Komponen sel yang terdapat disini dengan demikian lebih mudah

diambil dan dicuci. Dalan fase ini sebagian bahan aktif tiba-tiba berpindah ke

dalam bahan pelarut.

16

2. Fase ekstraksi

Bahan pelarut untuk melarutkan komponen dalam sel yang tidak terluka

harus mendesak masuk ke dalamnya. Membran sel yang mengering dan

menciut yang terdapat dalam simplisia mula-mula harus diubah dalam suatu

keadaan, yang memungkinkan suatu pelintasan bahan pelarut ke dalam bagian

sel. Hal itu terjadi mulai pembengkakan, dengan demikian membran

mengalami suatu pembesaran volume melaui pengambilan molekul bahan

pelarut. Kemampuan untuk mengikat zat perancah selulose terhadap molekul

cairan, menyebabkan bahwa struktur perancak tersebut menjadi longgar,

sehingga terbentuk ruang antarmiselar, yang memungkinkan bahan ekstraksi

mencapai ke dalam ruang dalam sel. (Voigt, 1994)

Proses pembuatan ekstrak meliputi:

1. Penyiapan bahan

Proses awal pembuatan ekstrak adalah tahapan pembuatan serbuk

simplisia kering (penyerbukan). Proses ini dapat mempengaruhi mutu ekstrak.

Makin halus serbuk simplisia, proses ekstraksi makin efektif dan efisien,

namun makin halus serbuk, makin rumit secara teknologi peralatan untuk

tahapan filtrasi. (Depkes RI, 2000)

2. Pembasahan serbuk simplisia

Pada simplisia kering terbentuk pori-pori yang berisi udara. Agar

penguraian dapat berjalan dengan baik, maka udara yang terdapat dalam pori-

pori harus dihilangkan dan digantikan oleh cairan penyari. Bila serbuk

dibasahi, akan terjadi pembengkakan kembali. Pembasahan serbuk sebelum

17

dilakukan penyarian dimaksudkan memberi kesempatan sebesar-besarnya

kepada cairan penyari untuk memasuki seluruh pori-pori dalam simplisia

untuk mempermudah penyarian (Depkes RI, 1986)

3. Penyarian kandungan kimia

Cairan penyari yang baik harus memenuhi kriteria: murah dan mudah

diperoleh; stabil secara fisika dan kimia; bersifat netral; tidak mudah menguap

dan tidak mudah terbakar; selektif, yaitu hanya menarik zat berkhasiat yang

dikehendaki; tidak mempengaruhi zat berkhasiat; diperbolehkan oleh

peraturan (Depkes RI, 1986)

4. Penanganan hasil ekstraksi

Pemekatan berarti peningkatan jumlah partikel solut (senyawa terlarut)

secara penguapan pelarut tanpa sampai menjadi kondisi kering, ekstrak hanya

menjadi kental atau pekat (Depkes RI, 2000)

Pada prinsipnya cairan pelarut harus memenuhi syarat kefarmasian dan atau

dalam perdagangan dikenal dengan kelompok spesifikasi Pharmaceutical

Grade. (DepKes RI, 1986) Ada dua macam pelarut yang umumnya digunakan

pada ekstraksi, yaitu air dan pelarut organik (DepKes RI, 1986). Menurut Sidik

dan Mudahar (2000), sampai saat ini berlaku aturan bahwa pelarut yang

diperbolehkan adalah air atau alkohol (etanol) serta campurannya. Jenis pelarut

lain seperti metanol, heksana, toluen, kloroform, aseton, dan lain-lain, umumnya

digunakan sebagai pelarut untuk tahap separasi dan tahap pemurnian (fraksinasi).

Khusus untuk metanol, dihindari penggunaannya. (Depkes RI, 2000)

18

Kelebihan dari pelarut air sebagai cairan ekstraksi adalah murah dan mudah

diperoleh, stabil, tidak mudah menguap dan tidak mudah terbakar, tidak beracun,

dan alamiah; sedangkan kekurangannya adalah tidak selektif, mempercepat proses

hidrolisis senyawa, ekstrak dapat ditumbuhi kapang dan kuman serta cepat rusak,

dan penguapannya membutuhkan waktu lama karena titik didihnya 1000C.

Kelebihan pelarut etanol adalah lebih selektif, kapang dan kuman sulit

tumbuh dalam etanol 20% ke atas, tidak beracun, netral, absorbsinya baik, dan

panas yang diperlukan untuk pemekatan lebih sedikit. Sedang kekurangannya

adalah mahal harganya. Untuk meningkatkan penyarian biasanya digunakan

campuran antara etanol dan air (DepKes RI, 1986).

Penyarian dipengaruhi oleh derajat perbedaan konsentrasi serbuk simplisia

mulai dari butir sampai kepermukaannya dan kehalusan serbuk. Makin besar

pebedaan konsentrasi makin besar gaya dorong sehingga makin cepat

penyariannya. Makin kasar serbuk simplisia makin panjang jarak, sehingga beda

konsentrasi zat aktif yang terlarut dan tertinggal dalam sel makin besar. (Depkes

RI, 1986)

Atas dasar sifatnya, Ekstrak dibagi menjadi:

1. Ekstrak encer (Extraktum Tenue)

Sediaan ini memiliki konsistensi semacam madu dan dapat dituang

2. Ekstrak kental (Extraktum Spissum)

Sediaan ini liat dalam keadaan dingin dan tidak dapat dituang, kandungan

airnya sekitar 30%. Tingginya kandungan air menyebabkan ketidakstabilan

19

sediaan obat (cemaran bakteri) dan bahan aktifnya (penguraian secara kimia)

dan ekstrak ini sulit ditampung.

3. Ekstrak kering (Extraktum Siccum)

Sediaan ini mempunyai konsistensi kering, memiliki kandungan lembab tidak

lebih dari 5%

4. Ekstrak cair (Extraktum Fluidum)

Ekstrak yang dibuat sedemikian rupa sehingga satu bagian simplisia sesuai

dengan dua bagian (kadang-kadang juga satu bagian) ekstrak cair

(Voigt, 1994)

Pemilihan cara ekstraksi bergantung pada:

1. Sifat fisik bahan

Bila sifatnya keras seperti biji-bijian, kulit kayu dan kulir akar diekstraksi

secara panas. Bila sifatnya lunak diekstraksi secara dingin

2. Kadar air bahan

Pada bahan segar (kandungan air besar) dapat digunakan pelarut yang

mengandung air/etanol/pelarut yang dapat bercampur dengan air

3. Stabilitas senyawa yang diisolasi

Untuk senyawa termolabil diekstraksi secara dingin, senyawa termostabil

diekstraksi secara panas (dapat memperbesar kelarutan) dan untuk senyawa

yang belum diketahui kelarutannya diekstraksi secara dingin

(Depkes RI, 1986)

20

Ekstraksi dapat dilakukan dengan beberapa cara, yaitu:

a. Berdasarkan suhu

1. Ekstraksi cara panas

Dengan pelarut air: perebusan, infudasi, seduhan. Dengan pelarut organik: soxhletasi, refluks.

2. Ekstraksi cara dingin

Maserasi: bahan tumbuhan direndam dengan pelarut. Maserasi kinetik: maserasi dengan pengadukan pada suhu kamar untuk

meningkatkan kelarutan.

Perasan/penekanan: untuk simplisia yang berupa buah, rhizoma, umbi. Perkolasi: dengan alat perkolator dimana pelarut ditambahkan terus

sampai semua zat terekstraksi.

b. Berdasarkan hasil ekstrak yang diperoleh

1. Ekstraksi sampai habis (ekshaustive), seperti perkolasi dan soxhletasi.

2. Ekstraksi sampai terjadi keseimbangan, seperti perebusan, seduhan,

refluks. Metode ekstraksi seperti ini menggunakan pelarut dalam jumlah

tertentu. Bila pelarut sudah jenuh, tidak dapat melarutkan senyawa yang

ada dalam tumbuhan.

c. Berdasarkan bahan yang diekstraksi dan pelarutnya

1. Ekstraksi padat-cair, yaitu bahan yang diekstraksi padat dan pelarut yang

digunakan cair.

2. Ekstraksi cair-cair, yaitu bila yang diekstraksi terlarut dalam cairan atau

pelarut atau bahan yang diekstraksi cair dan pelarut yang digunakan cair.

21

d. Ekstraksi khusus

1. Destilasi uap-air: ekstraksi dengan cara penyulingan simplisia.

2. Enfleurasi: ekstraksi dengan menggunakan lemak padat.

3. Ekstraksi cairan super kritik: ekstraksi dengan menggunakan gas

berbentuk cair.

(Voigt, 1994)

2.5.1 Metode Maserasi

Maserasi merupakan cara penyarian yang sederhana. Maserasi dilakukan

dengan merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari. Cairan penyari akan

menembus dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat

aktif, zat aktif akan larut dan karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan

zat aktif yang didalam dan diluar sel. Peristiwa ini berulang dan terjadi

keseimbangan antar larutan diluar sel dan didalam sel

Maserasi digunakan untuk penyarian simplisia yang mengandung zat aktif

yang mudah larut dalam cairan penyari, tidak mengandung zat yang mudah

mangembang dalam cairan penyari, tidak mengandung benzoin, sitrak, dan lain-

lain. Kelebihan cara maserasi ini adalah cara pengerjaan dan peralatan yang

digunakan sederhana, mudah diusahakan, dan senyawa yang terdapat dalam

simplisia dapat tetap stabil karena umumnya tidak menggunakan suhu tinggi.

Meskipun memiliki kekurangan berupa pengerjaannya yang lama dan

penyariannya kurang sempurna.

Pada penyarian dengan maserasi, perlu dilakukan pengadukan untuk

meratakan konsentrasi larutan diluar butir serbuk simplisia, sehingga dengan

22

pengadukan tersebut tetap terjaga adanya perbedaan derajat konsentrasi yang

sekecil-kecilnya antar larutan didalam dan diluar sel.

Hasil penyarian dengan cara maserasi perlu dibiarkan selama waktu

tertentu. Waktu tersebut diperlukan untuk mengendapkan zat-zat yang tidak

diperlukan tetapi ikut terlarut dalam cairan penyari seperti malam dan lain-lain.

(Depkes RI, 1986)

Metode maserasi dapat dilakukan modifikasi, misalnya:

1. Remaserasi

Cairan ekstraksi dibagi dua bagian. Seluruh serbuk simplisia dimaserasi

dengan cairan ekstraksi pertama, setelah dienap tuangkan dan diperas,

ampas dimaserasi kembali lagi dengan cairan ekstraksi kedua. Hasilnya

digabung.

2. Digesti

Digesti adalah cara maserasi dengan menggunakan pemanasan lemah,

yaitu 400 500C. Cara maserasi ini hanya dapat dilakukan untuk simplisia

yang zat aktifnya tahan terhadap pemanasan. Pemanasan dimaksudkan

untuk mengurangi kekentalan cairan ekstraksi sehingga meningkatkan

kecepatan difusi dan untuk meningkatkan kelarutan zat dalam cairan

pengekstrak.

3. Maserasi kinetik

Maserasi yang dimodifikasi dengan menggunakan mesin pengaduk

terus-menerus, waktu proses maserasi dapat dipersingkat menjadi 6 sampai

24 jam dan dilakukan pada suhu kamar.

23

4. Maserasi melingkar

Maserasi dapat diperbaiki dengan mengusahakan agar cairan

pengekstrak selalu bergerak dan menyebar. Dengan cara ini, cairan

pengekstrak selalu mengalir kembali secara berkesinambungan melalui

serbuk simplisia dan melarutkan zat aktifnya. Aliran cairan pengekstraksi

dapat mengurangi lapisan batas, cairan pengekstrak akan didistribusikan

secara seragam sehingga memperkecil kepekatan setempat, dan waktu

yang diperlukan lebih pendek.

5. Maserasi Melingkar Bertingkat

Cara maserasi ini dapat mengatasi masalah pada maserasi melingkar

yang tidak dapat dilaksanakan secara sempurna, karena pemindahan massa

akan berhenti bila keseimbangan telah terjadi.

Pada maserasi melingkar bertingkat serbuk simplisia mengalami proses

penyarian beberapa kali dengan sejumlah cairan pengekstrak, sehingga

akan mendapatkan hasil yang lebih baik daripada yang dilakukan sekali

dengan jumlah pelarut yang sama (Depkes RI, 1986; Voigt, 1994).

2.6 TINJAUAN TENTANG KROMATOGRAFI

Kromatografi adalah suatu metode untuk memisahkan komponen berdasarkan

perbedaan afinitas terhadap fase gerak dan fase diamnya. Pada dasarnya semua

cairan kromatografi menggunakan dua fase, yaitu fase gerak (stationary) dan fase

diam (mobile). Pemisahan bergantung pada gerakan relatif dari dua fase ini. Cara-

cara kromatografi dapat digolongkan berdasarkan afinitas terhadap fase gerak dan

fase diam. Semua proses tersebut dapat digolongkan dalam proses adsorpsi dan

24

partisi. Kromatografi yang proses pemisahannya secara adsorbsi disebut

kromatografi jerapan (adsorption chromatography), fase diam yang digunakan

berupa zat padat; sedangkan kromatografi yang proses pemisahannya secara

partisi disebut kromatografi partisi (partition chromatography), fase diam yang

digunakan berupa zat cair.

Pemisahan berdasarkan proses adsorbsi ini terletak pada keseimbangan

distribusi dari beberapa macam komponen yang dilarutkan pada fase diam, yang

kekuatannya tergantung dari daya adsorpsi gugus fungsinya. Kekuatan adsorbsi

diantara molekul zat dengan fase diam berbeda-beda, maka apabila dilewatkan

fase gerak, untuk molekul zat yang paling lemah adsorbsinya akan tereluasi

terlebih dahulu sehingga noda akan terbentuk paling atas dan diikuti noda lainnya

yang teradsorbsi lebih kuat oleh fase diam dan akan membentuk noda paling

bawah atau lebih rendah. Contoh, pada kromatografi lapis tipis (fase gerak zat

cair, fase diam zat padat).

Pemisahan berdasarkan proses partisi ini terjadi bila campuran didistribusikan

antara dua fase yang saling tidak campur, berdasarkan kelarutan relatif antara

masing-masing komponen dalam fase diam dan fase gerak. Bertindak sebagai fase

diam adalah cairan dan fase gerak adalah cairan. Contoh kromatografi kertas (fase

diam zat cair dan fase gerak zat cair) (Srivastava, 1976; Satrohamidjojo, 1985)

2.6.1 Tinjauan tentang Kromatografi Lapis Tipis

Kromatografi lapis tipis adalah suatu metode analisa untuk pemisahan

komponen zat-zat dari campurannya dengan cara melewatkan campuran tersebut

dengan melalui sistem dua fase yaitu fase gerak dan fase diam. Jenis kromatografi

25

berdasarkan pemisahannya antara lain adsorpsi, partisi, pertukaran ion,

penyaringan molekul, afinitas, dan elektroforesa

Lapisan yang memisahkan, yang terdiri atas bahan berbutir-butir (fase diam)

ditempatkan pada penyangga berupa plat gelas, logam, atau lapisan yang cocok.

Campuran yang akan dipisahkan berupa larutan yang akan ditotolkan berupa

bercak atau pita (awal). Setelah itu plat atau lapisan diletakkan dalam bejana

tertutup rapat yang berisi larutan pengembang yang cocok (fase gerak)

Fase gerak yang dapat digunakan, ialah:

n-Heksana Heptan Sikloheksana Karbontetraklorida makin Benzena polar Kloroform Eter (dietil eter) Etil asetat Piridina Aseton Etanol Metanol Air (Stahl, 1985)

Fase diam yang digunakan pada umumnya yaitu adsorben berupa lapisan tipis

zat penjerap yang tersebar merata pada pendukung yang berupa plat, lempeng

kaca, plastik, atau alluminium. Empat macam adsorben yang umum dipakai

adalah silika gel (asam silikat), alumina (alluminium oxyde), kieselguhr

(diatomeous earth) dan selulosa. Dari keempat jenis adsorben tersebut yang paling

banyak dipakai adalah silika gel (Adnan, 1997). Fase gerak dapat berupa pelarut

campuran atau pelarut tunggal yang akan merambat pada arah tertentu

disepanjang lapisan tipis fase diam. Warna noda yang terbentuk dapat diamati

26

pada sinar ultraviolet atau dengan pereaksi penampak noda yang sesuai sehingga

didapat kromatogram.

Beberapa keuntungan KLT adalah: Biaya yang kecil, waktu singkat untuk

analisis, jumlah cuplikan kecil, kebutuhan ruang minimum, pananganannya

sederhana. Sehingga KLT adalah yang paling cocok untuk analisis dilaboratorium

farmasi. (Stahl, 1985)

Menurut Sastrohamidjojo (1985) harga Rf dipengaruhi oleh beberapa faktor,

yaitu:

1. Struktur kimia dari senyawa yang dipisahkan

2. Sifat dari penjerap dan derajat aktivitasnya

3. Tebal dan kerataan dari lapisan penjerap

4. Jenis pelarut dan kemurniannya

5. Derajat kejenuhan dari bejana pengembang yang digunakan

6. Teknik percobaan

7. Jumlah cuplikan yang digunakan

8. Suhu

9. Kesetimbangan

2.7 TINJAUAN SKRINING GOLONGAN SENYAWA DALAM

TUMBUHAN SECARA KLT Skrining fitokimia dilakukan untuk mengetahui golongan senyawa yang

terdapat dalam suatu tanaman. Skrining golongan senyawa dapat dilakukan antara

lain dengan cara KLT.

27

2.7.1 Golongan Senyawa Minyak Atsiri

Minyak atsiri dapat ditentukan dengan menggunakan:

Fase diam : Silika gel GF 254

Fase gerak : Toluen:Etilasetat (93:7)

Penampak noda : Pereaksi vanilin-H2SO4 pekat (110C, 5-10 menit)

Suatu simplisia dikatakan mengandung minyak atsiri apabila setelah

dilakukan penyemprotan dengan penampak noda vanilin-H2SO4 pekat

memberikan noda warna biru, hijau, merah, atau coklat pada sinar tampak.

Beberapa senyawa juga berfluoresensi dibawah sinar UV 365 nm (Wagner et al,

1984).

2.7.2 Golongan Senyawa Terpenoid Bebas

Golongan senyawa terpenoid bebas ini dapat ditentukan dengan

menggunakan:

Fase diam : Silika gel GF 254

Fase gerak : Kloroform:Metanol (10:1)

Penampak noda : Antimon (III) Klorida dalam kloroform (100C, 10 menit)

Suatu simplisia dikatakan mengandung terpenoid bebas apabila setelah

dilakukan penyemprotan dengan penampakan noda Antinom (III) Klorida dalam

kloroform pekat memberikan noda yang berwarna merah-ungu atau biru.

Beberapa diantaranya berfluoresensi hijau dibawah sinar UV 365 nm

(Harborne, 1987).

28

2.7.3 Golongan Senyawa Alkaloid

Golongan senyawa alkaloid dapat ditentukan dengan menggunakan:

Fase diam : Silika gel GF 254

Fase gerak : Etilasetat:Metanol:Air (100:13,5:10)

Penampak noda : - UV 365 nm (tanpa penampakan noda) berfluoresensi

biru atau kuning

- Pereaksi Dragendorff

Suatu simplisia dikatakan mengandung alkaloid apabila setelah dilakukan

penyemprotan dengan pereaksi Dragendorff memberikan noda yang berwarna

coklat jingga berlatar belakang kuning pada sinar tampak, biasanya tidak stabil

(Wagner et al, 1984).

2.7.4 Golongan Senyawa Antrakinon

Golongan senyawa antrakinon dapat ditentukan dengan menggunakan:

Fase diam : Silika gel GF 254

Fase gerak : n-Propanol:Etilasetat:Air (40:40:30)

Penampak noda : Larutan 5% KOH dalam Metanol

Suatu simplisia dikatakan mengandung antrakinon apabila setelah

dilakukan penyemprotan dengan larutan 5% KOH dalam Metanol memberikan

noda berwarna merah pada sinar tampak dan berfluoresensi merah dibawah sinar

UV 365 nm. Antron dan antranol memberikan noda berwarna kuning dengan

berfluoresensi kuning dibawah UV 365 nm (Wagner et al, 1984).

29

2.7.5 Golongan Senyawa Flavonoid Bebas

Golongan senyawa flavonoid bebas dapat ditentukan dengan

menggunakan:

Fase diam : Silika gel GF 254

Fase gerak : Kloroform:Etilasetat (60:40)

Penampak noda : - Pereaksi uap amonia (warna kuning cepat memudar)

- UV 254 nm memberikan pemadaman fluoresensi (biru

gelap)

- UV 365 nm memberikan fluoresensi kuning, biru atau

hijau

Suatu simplisia dikatakan mengandung flavonoid bebas apabila

memberikan noda dengan gambaran seperti yang diatas (Wagner et al, 1984).

2.7.6 Golongan Senyawa Glikosida Jantung

Senyawa glikosida jantung dapat ditentukan dengan menggunakan:

Fase diam : Silika gel GF 254

Fase gerak : Etilasetat:Metanol:Air (81:11:8)

Penampak noda : Pereaksi Raymond

Suatu simplisia dikatakan mengandung glikosida jantung apabila setelah

dilakukan penyemprotan dengan pereaksi Raymond akan memberikan noda yang

berwarna merah, merah jingga atau violet (Wagner et al, 1984).

30

2.7.7 Golongan Senyawa Saponin

Senyawa saponin dapat ditentukan dengan menggunakan:

Fase diam : Silika gel GF 254

Fase gerak : Kloroform:Metanol:Air (64:50:10)

Penampak noda : Liebermann Burchard (110C, 5-10 menit)

Suatu simplisia dikatakan mengandung saponin apabila dilakukan

penyemprotan dengan Liebermann Burchard memberikan noda berwarna biru,

biru vioelet, kadang-kadang merah atau kuning coklat pada sinar tampak. Bila

diamati dengan sinar UV 365 nm umumnya menunjukkan bercak berpendar violet

biru dan hijau (Wagner et al, 1984).

2.7.8 Golongan Senyawa Glikosida Flavonoid

Senyawa glikosida flavonoid dapat ditentukan dengan menggunakan:

Fase diam : Selulosa (diaktifkan 105C selama 30 menit)

Fase gerak : Asam asetat 15%

Penampak noda : Uap amonia

Suatu simplisia dikatakan mengandung glikosida flavonoid apabila setelah

diberi uap amonia memberikan noda yang berwarna kuning (cepat memudar) dan

dibawah sinar UV 365 nm berfluoresensi. (Markham, 1988).

31

2.8 UJI FITOKIMIA DENGAN REAKSI WARNA DAN PENGENDAPAN

2.8.1 Tahap Pengujian Glikosida sianogenik atau glikosida HCN

Contoh bahan dimasukkan dalam Erlenmeyer lalu diberi asam sulfat encer

dan mulut Erlenmeyer ditutup rapat dengan gabus. Dibawah gabus penutup

digantungkan selembar kertas pikrat. Erlenmeyer kemudian dipanaskan pelan-

pelan sehingga uap yang menggandung HCN akan menyentuh kertas pikrat yang

berwarna kuning dan segera akan berubah menjadi coklat kemerahan (merah

bata). Dalam reaksi ini, natrium pikrat yang berwarna kuning akan diubah menjadi

natrium isopurpurat yang berwarna coklat kemerahan (merah bata) (Mulyani dan

Gunawan, 2004).

2.8.2 Uji Golongan Senyawa Tannin

Uji untuk tannin dilakukan berdasarkan sifat:

1. Tannin dapat mengendapkan protein, sebagai pereaksi digunakan larutan

gelatin 1% atau tannin gelatin-NaCl

2. Tannin dengan pereaksi FeCl3 memberikan warna biru kehitaman karena

terjadi pembentukkan tannin galat atau perubahan warna hijau kehitaman

karena pembentukkan tannin kathecol

(Fong et al, 1978)

2.8.3 Uji Golongan Senyawa Saponin

Uji untuk saponin yang sering dilakukan adalah berdasarkan sifat saponin

yaitu bila dikocok dengan air akan berbuih (Fong et al, 1977)