Morfologa de Mohos, Levaduras y esporas en bacterias

Morfologa de Mohos, Levaduras y esporas en bacterias

Universidad de San CarlosFacultad de IngenieraEscuela de Ingeniera SanitariaMicrobiologa del AguaIng. Xenon Much Santos

Autor:Ing. David Armando Dvila CantoralIng. Ricardo de Len Sols Ing. Yankel Fuentes

Morfologa de Mohos, Levaduras y esporas en bacterias2015

ndiceTabla de contenidoResumen4Objetivos5Objetivo General5Objetivos Especficos5Marco Terico6Mohos..6Forma del Moho6Estructuras o partes reproductoras7Caractersticas del cultivo7Clasificacin de los Mohos8Algunos Mohos de inters microbiolgico8Levaduras9Caractersticas generales10Caractersticas morfolgicas10Caractersticas del cultivo11Tipos de Levaduras11Esporas.13Propiedades de las esporas13Cunto puede vivir una espora?14Practica..16Material utilizado16Procedimiento Prctica morfologa de una levadura en crecimiento..16Procedimiento Prctica morfologa de los mohos ms comunes17Procedimiento Prctica morfologa de una levadura en crecimiento..17Procedimiento Prctica Esporas Bacterianas18Resultados20Conclusiones22Bibliografa23

Resumen

El mundo micro orgnico resulta ser complejo y fascinante a la vez, las bacterias cuando son sometidas a condiciones y ambientes adversos tienden a formar esporas alrededor de ellas para du proteccin, como mecanismo de defensa, para poder observar esporas en el microscopio se den teir de algn color para poder diferenciarse de entre las bacterias comunes.

Los mohos y las levaduras perteneces al reino de los hongos, se distinguen de las bacterias por su mayor tamao y estructura ms compleja, y de las algas en que los hongos no realizan fotosntesis y tienen una estructura ms definida.

En este reporte de laboratorio de microbiologa es con referencia a los microorganismos hongos, levaduras y bacterias en forma de esporas. Estos parmetros son importantes para el saneamiento del agua. Pues esporas, mohos y levaduras singulares a dura afectaran la calidad el agua.

Objetivos

Objetivo General

Realizar correctamente el reporte de morfologa de levaduras y mohos. Adems de esporas bacterianas.

Objetivos Especficos

1. Poder observar la morfologa de mohos y levaduras comunes, mediante realizar la prctica de mohos y levaduras correctamente en laboratorio.

2. Teir esporas bacterias en una misma muestra, para poder hacer una diferencia entre ellas, observar las bacterias y sus esporas con el microscopio.

3. Aprender ms sobre los microorganismos. Y reforzar conocimientos en ingeniera sanitaria.

Marco Terico

Mohos

El moho es un hongo que se encuentra tanto al aire libre como en interiores. Existen muchas especies de mohos que son especies microscpicas del reino fung que crecen en formas de filamentos pluricelulares o unicelulares, Crecen mejor en condiciones clidas y hmedas; se reproducen y propagan mediante esporas. Las esporas del moho pueden sobrevivir en variadas condiciones ambientales, incluso en extrema sequedad, si bien sta no favorece su crecimiento normal.Algunos mohos son txicos porque emiten la toxina mico toxina, la cual puede afectar gravemente al sistema inmune.

Forma del Moho

Su forma es la hifa o caa, estructura tubular ramificada de 2-10 micras de dimetro. Al crecer, las hifas producen ramificaciones entretejidas o micelios, que dan lugar a una colonia o talo. Las hifas tienen un crecimiento apical (elongacin de sus extremos) y un crecimiento lateral (produccin de ramas). Las hifas que penetran en el medio del que el hongo obtiene sus nutrientes se denominan en conjunto micelio vegetativo, en contraposicin con el micelio areo o reproductor, en el que se localizan las clulas reproductivas o esporas. La mayor parte de las colonias crecen en la superficie de medios lquidos o slidos, con aspecto irregular, seco o filamentoso, y son mucho ms tenaces que las bacterianas por el tejido que forman las hifas filamentosas. En el centro del micelio, las hifas se necrosan por dficit de nutrientes y oxgeno, y tal vez por acumulo de cido orgnicos. Es frecuente que las hifas se hallen divididas por septos. Los cigomicetos o ficomicetes carecen de estos septos, presentando, por tanto, un micelio continuo.

Estructuras o partes reproductoras

Los mohos pueden desarrollarse a partir de micelio, pero es raro que esto ocurra. Generalmente la reproduccin se realiza por medio de esporas a sexuales. Algunos hongos forman tambin esporas sexuales y reciben el nombre de Perfectos. Estos pueden ser: No Tabicados (Comicitos y Zigomicetos) o Tabicados (Ascomicetos y Basidiomicetos). Los hongos llamados Imperfectos (tpicamente tabicados forman slo esporas asexuales).

Caractersticas del cultivo

El aspecto general de los mohos que crecen en los alimentos es con frecuencia suficiente para indicar su gnero. Algunos son poco tupidos y lanosos, otros compaeros en otras ocasiones estn como aterciopelados en su superficie, en otras son sexos y pulverizados, mientras que algunos estn como humedecidos o gelatinosos. Existen gneros de tamao limitado; otros, por el contrario su lmite de crecimiento y expansin lo seala el alimento o la vasija que los contiene. El aspecto que presenta el reverso de un moho que crece sobre una placa de agar puede ser muy demostrativo.

Clasificacin de los Mohos

Los mohos son plantas del grupo talofitas, que crecen de races, tallos y hojas; divisin hongos, sin clorofila. Se encuadran en el tipo Eumicetos, hongos propiamente dichos. Se deducen que los criterios seguidos para la clasificacin e identificacin

Algunos Mohos de inters microbiolgico

Muchas propiedades, caractersticas y actividades de los mohos se pueden describir mejor con ejemplos: Los siguientes son algunos de los gneros ms frecuentes y de mayor inters para los microbilogos ya que por sus peculiares propiedades biolgicas o por su singular importancia econmica.a) Mucor: Los miembros de este gnero abundan en el suelo, estircol, frutas, vegetales y fculas. Algunos descomponen los alimentos; en cambio, otros son elaborados para hacer quesos u otros productos alimenticios.

b) Rhizopus: Son hongos comunes del pan que daan otros alimentos. Se desarrollan en el pan, vegetales, frutas y otros. c) Aspergillus: Los aspergilos, miembros de la clase tentativa Deuteromycetes, estn ampliamente distribuidos en la naturaleza: frutas, vegetales u otros sustratos que sirven de alimento. Algunas especies se hallan involucradas en el deterioro de los alimentos.

d) Penicillium: Los miembros de este grupo, tambin deuteromicetes, se encuentran muy difundidos en la naturaleza. Algunas especies pudren o deterioran las frutas, vegetales, conservas, granos o pastos. Otra se usa en el curado de los quesos y otros en la industria en la fermentacin y en la medicina en la penicilina.

e) Neurospora: Este gnero de Azcomicetes tiene particular inters para los bilogos por el gran uso que se le ha dado en estudios genticos y metablicos. Algunas especies descomponen los alimentos y otras veces son utilizadas en la industria de la fermentacin.f) Sporotrichum: Este gnero de deuteromicetes se caracteriza porque su micelio claro y tabicado presenta conidias piriformes, pequeas, colocadas lateralmente en las puntas de los conidiforos.

Levaduras

Las levaduras perteneces al reino de los, las levaduras son organismos unicelulares, la mayora se multiplican por gemacin y algunas por escisin. Este grupo de microorganismos comprende alrededor de 60 gneros y unas 500 especies.

Existe un gran nmero de especies que se diferencian por su aspecto, sus propiedades, sus formas de reproduccin. Las levaduras del vino pertenecen a varios gneros, cada uno dividido en especies.

Caractersticas generales

Las levaduras se clasifican en base a sus caracteres morfolgicos, aunque para algunos microbilogos, sus propiedades fisiolgicas tienen mayor importancia. La mayora de las levaduras son hongos unicelulares sencillos microscpicos, la mayora se reproducen asexualmente por gemacin, y otras especies lo hacen por fisin mltiple. Las levaduras que pueden reproducirse sexualmente se conocen como verdaderas, este proceso implica la formacin de ascosporas, sirviendo la propia levadura como asca, de aqu que ellas se clasifican como Ascomicetos; por el contrario las falsas que no producen ascosporas, pertenecen a los hongos imperfectos.

Caractersticas morfolgicas

Los caracteres morfolgicos de las levaduras se determinan mediante su observacin microscpica. Adems, los criterios morfolgicos se basan en el modo de reproduccin vegetativa de la morfologa celular. La forma de la levadura puede ser desde esfrica a ovoide, en forma de limn, piriforme, cilndrica, triangular, e incluso alargada formando un verdadero micelio o un falso micelio. Tambin se diferencian en cuanto a su tamao. Caractersticas del cultivo

En la mayora de los casos, el crecimiento en masa de las levaduras no resulta apropiado para su identificacin. En los cultivos con agar, es difcil diferenciar las colonias de levaduras de las colonias bacterianas, por lo que la observacin microscpica es la nica forma segura que existe para poderlas diferenciar. La mayora de las colonias jvenes de levaduras son hmedas y algo mucosas, y es posible que tengan aspecto harinoso.

Tipos de Levaduras

En general, las clulas de las levaduras son ms grandes que las de la mayor parte de las bacterias pero las ms pequeas no son tan grandes como las bacterias mayores. Las levaduras varan considerablemente de tamao, pudiendo tener entre 1 y 5 micrmetros de ancho por 5 a 30 micrmetros o ms de largo.

La forma de las levaduras se determina mediante las tcnicas de tincin que ordinariamente se usa para las bacterias, pero como muchas tinciones enmascaran el contenido celular, se emplean mtodos especiales para demostrar las estructuras especficas.

a) Cpsulas: Algunas levaduras estn cubiertas con un material extracelular limoso, viscoso, grueso, que es la sustancia capsular. La mayor parte de las cpsulas de las levaduras se compone de polisacridos, precursores insolubles del manan y sustancias del tipo almidn.

b) Pared Celular: La pared celular de las levaduras es fina cuando las clulas son jvenes y se engruesa con la edad. Las micrografas electrnicas de cortes ultra finos de levaduras descubren una cubierta externa de la clula que mide aproximadamente la sptima parte de su dimetro. Las protenas son constituyentes constantes de todas las paredes celulares de las levaduras. El promedio de concentracin de los lpidos es entre 8.5 y 13.5%. La cantidad de quitina vara con los diferentes gneros de levaduras.

c) Membrana Citoplasmtica: Esta barrera osmtica funciona a la misma capacidad que se ha descrito para las clulas bacterianas. Con grosor aproximado de 8 micrmetros dos de sus capas son electro densas. El anlisis de fragmentos aislados de la membrana citoplasmtica ha demostrado la presencia de lpidos, protenas y polisacridos.

d) Ncleo: Es un organo bien definido por una membrana nuclear semipermeable, la que es funcional en el metabolismo y reproduccin de los organismos.e) Mitocondrias: Se presentan como organeros rodeados de membranas que examinadas al microscopio electrnico tienen la apariencia de filamentos doblados. Poseen dimetros de alrededor de 0.3 a 1 micrmetro y longitudes de hasta ms de 3 micrmetros. Se encuentran rodeadas de dos membranas, la membrana interna forma algunas crestas hacia adentro. Las mitocondrias se componen de RNA y DNA.

f) Vacuolas: Cada clula de levadura contiene en su citoplasma una o ms vacuolas o gotas transparentes. Se las ve con el microscopio de luz cuando se tien en forma apropiada y con el microscopio electrnico se les puede diferenciar del citoplasma que las rodea porque se ven como las reas transparentes a los electrones limitadas por una membrana.

Esporas

Las esporas son clulas diferenciadas altamente resistentes al estrs fsico y qumico, tal como calor, presin, sequedad, cidos y bases fuertes y radiacin UV. Las bacterias que forman esporas se encuentran habitualmente en el suelo, y pertenecen principalmente a los gneros Streptomyces, Clostridium y Bacillus. Cuando una clula bacteriana capaz de especular abandona su crecimiento exponencial debido a la derivacin de nutrientes esenciales en su hbitat debe tomar la decisin de especular o arriesgarse a continuar creciendo como tal y correr el riesgo de morir. Si la clula elige especular se embarcar en un proceso irreversible de diferenciacin celular que dar como resultado una forma de vida inactiva que permanecer como tal indefinidamente hasta que mejoren las condiciones de su medio externo, las cuales le permitirn germinar y volver a crecer.

Propiedades de las esporas

El ncleo de una espora madura difiere mucho de la clula vegetativa de la cual proviene. Adems del abundante contenido en dipicolinato de calcio, el ncleo de esta estructura se presenta en un estado parcialmente deshidratado, conteniendo solo el 10-30 % del agua de la clula vegetativa, por lo que la consistencia del citoplasma se corresponde con la de un gel denso.

La deshidratacin aumenta dramticamente el termo-resistencia de la espora y al mismo tiempo le confiere resistencia frente a sustancias qumicas, como el perxido de hidrgeno. El pH del citoplasma de la espora es aproximadamente una unidad menor que el de la clula vegetativa y contiene niveles elevados de protenas especficas denominadas SASPs (del ingls: Soluble Acid Small Protenas). Estas protenas tienen al menos dos funciones. Por un lado se unen fuertemente al ADN y lo protegen de las lesiones potenciales de la radiacin UV, la desecacin y el calor seco. Por otro lado las SASPs pueden servir como fuente de carbono y energa para el desarrollo de una nueva clula vegetativa a partir de la espora, proceso conocido como germinacin.

Cunto puede vivir una espora?

Los datos publicados sobre la longevidad de las endo esporas indican que pueden permanecer viables durante varias dcadas y probablemente mucho tiempo ms segn las condiciones a las que est sometida. En 1981 se coloc en un medio nutritivo una suspensin de esporas de la bacteria Clostridium aceticum que haba sido preparada y extraviada en 1947, luego de 34 aos y en 12 horas de crecimiento se recuper un cultivo de este microorganismo1. Existen muchos otros ejemplos de esporas de mucha ms antigedad. El anlisis microbiolgico de los restos arqueolgicos romanos hallados en el Reino Unido, y datados en 2000 aos permitieron recuperar un gran nmero de esporas viables del gnero Thermoactinomyces en distintas muestras de residuos. Tambin se recuperaron muestras de esporas viables de esta bacteria en fracciones de estratos de sedimento en un lago de Minessota que datan de 7000 aos.

En 1995 un grupo de cientficos public la resurreccin de endoesporas bacterianas cuya edad se estima en 25-40 millones de aos. Supuestamente, estas esporas del gnero Bacillus fueron preservadas en los intestinos de una abeja extinta atrapada en un cristal de mbar. Algo an ms increble fue el aislamiento de bacterias halfilas formadoras de endosporas en cristales de sal procedentes del perodo Prmico, es decir, de hace ms de 250 millones de aos. Estas publicaciones han permitido especular con la idea de que si las esporas se conservan de manera adecuada podran llegar a perdurar viables de manera indefinida.

Practica

Material utilizado

1. cultivo con agar nutritivo de 72 horas de incubacin de Bacillos Subtillis.2. Portaobjetos.3. Cubre objetos.4. Asa bacteriolgica 5. mechero de bunsen.6. Solucin de lugol.7. Microscopio.8. Solucin lacto fenol.9. Solucin Cristal Violeta.10. Solucin Verde malaquita11. Solucin acuosa safranina.12. Diversas muestras de mohos y levaduras.

Procedimiento Prctica morfologa de una levadura en crecimiento

1. Colocar dos o tres lupas de caldo glucsido con S. Cervisiae en un portaobjetos y cubrirlo cuidadosamente.2. Enfocar con el objetivo de menor potencia, mover el revlver y enfocar con el objetivo seco de mayor potencia.3. Examinar las clulas de levadura cuidadosamente.4. Notar la presencia de nuclolos, vacuolas, grnulos, pared celular, etc.

Procedimiento Prctica morfologa de los mohos ms comunes

1. Colocar dos o tres lupas de una solucin de lacto fenol en el centro con una lamina de microscopio limpia.2. Remover una pequea porcin del moho del material contaminado y colocarla en la solucin de lacto fenol colocada en la lmina.3. Cuidadosamente por medio del uso de unas agujas de diseccin extender y separar el material humedecindolo en la solucin de lacto fenol.4. Cubrir la preparacin con el cubreobjetos teniendo cuidado que al hacerlo no queden burbujas de aire.5. Enfocar con el objetivo de menor aumento y traspasar al de mayor aumento.

Procedimiento Prctica morfologa de una levadura en crecimiento

1. Colocar dos o tres lupas de caldo glucsido con S. Cervisiae en un portaobjetos y cubrirlo cuidadosamente.2. Enfocar con el objetivo de menor potencia, mover el revlver y enfocar con el objetivo seco de mayor potencia.3. Examinar las clulas de levadura cuidadosamente.4. Notar la presencia de nuclolos, vacuolas, grnulos, pared celular, etc.

Procedimiento Prctica Esporas Bacterianas

Mtodo de Hucker:

1. Prepare un frote de Bacilos Subtilis de 72 horas de incubacin.2. Seque el frote colocando la lmina a una distancia prudencial arriba de la llama del mechero y fjelo por el calor.3. Cubra el frote con la solucin de Cristal de Violeta y Oxalato de Amonio durante un minuto.4. Lave la preparacin con agua de grifo y squela al aire.5. Examine por medio del objetivo de inmersin.6. Las clulas vegetativas aparecen prpuras y las esporas no se colorean.

Mtodo de Schaeffer y Fulton:

1. Prepare un frote de Bacilos Subtilis de 72 horas de incubacin.2. Seque el frote colocando la lmina a una distancia prudencial arriba de la llama del mechero y fjelo por el calor.3. Cubra el frote con una solucin acuosa al 5% de Verde Malaquita, djela actuar de 30 a 60 segundos; caliente la preparacin en la llama del mechero durante 30 segundos.4. Lave la preparacin con agua del grifo durante 30 segundos.5. Cubra el frote con una solucin acuosa de safranina al 0.5% durante 30 segundos.6. Lave la preparacin con agua de grifo, squela al aire.7. Las esporas se tien de verde y las clulas bacterianas de rojo.

Resultados

Muestra: EsporasPractica: Esporas en las bacterias

Muestra: LevadurasPractica: Morfologia de levadura en crecimiento

Muestra: MohoPractica: Morfologia de Mohos mas comunes

Conclusiones

Las esporas o endosporas permiten a las bacterias adaptarse a cambios en el medio en el que se desarrollan, cuando las condiciones no son adecuadas, y de esta manera sobrevivir.

La localizacin y el tamao de las esporas no es el mismo para todas las especies; en este caso las esporas eran centrales, y el tamao era menor que el de la bacteria.

EL Moho encontrado comparado con el de los compaeros es muy diferente, esto se debe a que algunos era de materia organica procesada y otros de frutas naturales.

Las levaduras son muy parecidas a bacterias pero son de colores blancos, beiges o un poco mas oscuros. Algunas son rosadas o rojas por la presencia de carotenoides.

Bibliografa

1. Microbiologa. Michael J. Pelczar, Jr. Roger D. Reid. E.C.S Chan. Cuarta Edicin. McGraw Hill.

2. Manual de Prctica de Laboratorio de Microbiologa del Agua. M. Sc. Ing. Zenn Much Santos.

3. Los hongos de sus alimentos y forrajes. Leonor Carrillo. 1997. Espaa.

4. Manual de laboratorio para el manejo de hongos, Veronica Caedo. Espaa.

5. De bacterias a esporas, Documentos Terragenta. Argentina.

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