Lembar Kerja Bioselmol 2014

5/26/2018 Lembar Kerja Bioselmol 2014

1/13

LEMBAR KERJA PAKTIKUM BIOLOGI SEL DAN MOLEKULER 2013/2014

1

Judul Kegiatan/Acara Hari/Tanggal

PEMBUATAN PROSEDUR KERJA DI LABORATORIUM

Nama Mahasiswa NIM Paraf Mahasiswa

Nama Asisten Nilai Paraf Asisten


2/13


2


PERSIAPAN BAHAN



1. Buatlah diagram alir cara pembuatan larutan-larutan stok berikut ini dan lengkapi dengan perhitungannya(gram, volume) untuk memperoleh konsentrasi larutan stok yang diperlukan. Konsentrasi larutan stok

ditentukan dengan memperhitungkan konsentrasi akhir larutan siap pakai yang akan digunakan serta

volumenya.

1) Tris-HCL, pH 8.0 (satuan konsentrasi: M)

2) EDTA, pH 8.0 (satuan konsentrasi: M)


3/13


3

3) NaOH (satuan konsentrasi: N)

4) SDS (satuan konsentrasi: %)

5) BSA (satuan konsentrasi: mg/ml)

6) TE (satuan konsentrasi: X)


4/13


4

2. Larutan siap pakai. Berdasarkan larutan stok yang telah dibuat sebelumnya, buatlah perhitungan volume larutanstok yang ditambahkan untuk membuat larutan-larutan berikut ini (gunakan rumus pengenceran):

a. Lengkapi tabel berikut ini untuk membuat 500 ml buffer ekstraksi TENSdari larutan stok yang tersediaReagen Konsentrasi stok Konsentrasi akhir Volume yang ditambahkan

Tris-HCL, pH 8.0 10mM

EDTA, pH 8.0 1 mM

NaOH 0.1 N

Sodium Dodecyl Sulfate (SDS) 0.5%

H2O -

b. Lengkapi tabel berikut ini untuk membuat 500 ml buffer ekstraksi dari larutan stok yang tersediaReagen Konsentrasi stok Konsentrasi akhir Volume yang ditambahkan

Tris-HCl, pH 8.0 100 mM

EDTA, pH 8.0 20 mM

NaCl 0.5 M

Sodium Dodecyl Sulfate (SDS) 2 %

H2O -

c. Lengkapi tabel berikut untuk membuat 10 ml larutan STE dari larutan stok yang tersediaReagen Konsentrasi stok Konsentrasi akhir Volume yang ditambahkan

Tris-HCl, pH 8.0 10 mM

EDTA, pH 8.0 1 mM

NaCl 0.1 mM

H2O -

d. Lengkapi tabel berikut ini untuk membuat 100 ml larutan TE 1X dari larutan stok yang tersediaReagen Konsentrasi stok Konsentrasi akhir Volume yang ditambahkan

TE 1X

H2O -


5/13


5


FRAKSINASI SEL



1. Dalam praktikum ini, Anda melakukan serangkaian percobaan dengan menggunakan teknik sentrifugasi secarabertingkat. Kecepatan sentrifugasi dapat diatur dalam RCF (Ratio of centrifugal force, dengan satuan g) atau

dalam rpm. Tuliskan rumus konversi dari RCF ke rpm.

Salah satu tahap dalam metode digunakan kecepatan sentrifugasi 500g. Jika digunakan rotor dengan radius

2,5 cm, maka kecepatan dalam rpm adalah .................................... rpm.

2. Metode sentrifugasi bertingkat (differential centrifugation) umumnya dilakukan dengan sentrifugasi bahandalam tabung, kemudian memindahkan supernatan ke dalam tabung kedua, lalu dilakukan lagi sentrifugasi pada

tabung yang kedua. Apa yang membedakan antara sentrifugasi pertama dan sentrifugasi kedua, ditinjau darikecepatan/settingalat sentrifuga?

3. Lingkaran di bawah ini menggambarkan 4 organel yang berbeda, yaitu A, B, C, dan D. Jika Anda inginmengisolasi organel C dengan cara sentrifugasi secara bertingkat, maka Anda akan elakukan sentrifugasi pertama

dengan kecepatan tertentu yang akan mengendapkan organel (-organel) ................................................ hinggamembentuk pelet. Kemudian, Anda akan mengambil supernatan, lalu melakukan sentrifugasi dengan kecepatanlebih tinggi sehingga organel (-organel) ...................................... mengendap dan membentuk pelet, dan organel (-organel) ......................... dalam supernatan. Bagian manakah yang akan Anda ambil?...................................................................................................

A B C D


6/13


6

4. Mengapa semua tahap dalam metode fraksinasi sel selalu dijaga dalam suhu dingin?

5. Metode differential centrifugation menghasilkan organel-organel yang tidak sepenuhnya murni. Mengapademikian?

Saran apa yang dapat Anda berikan agar dapat dihasilkan organel-organel yang lebih murni?


7/13


7


ISOLASI DNA



1. Memecahkan sel bisa dilakukan dengan 3 cara, yaitu secara kimiawi, mekanik, dan enzimatis. Jelaskan (definisi)masing-masing cara tersebut, bahan yang digunakan serta contoh aplikasinya (bakteri, fungi,hewan, tumbuhan,

dll).15 poin

Cara memecah sel(@ 4 poin) Aplikasi(@ 1 poin)

1. Kimiawi

2. Mekanik

3. Enzimatis

2. Purifikasi DNA dilakukan dengan memisahkan DNA dari protein dan RNA.

a. Prinsip apa saja yang digunakan untuk memisahan DNA dengan protein? Jelaskan!(10 poin)


8/13


8

b. Sebutkan alat dan bahan yang digunakan untuk memisahkan DNA dan protein dalam masing-masing prosedur

isolasi DNA yang dilakukan pada praktikum ini!(10 poin)

c. Jelaskan bagaimana cara memisahkan DNA dengan RNA!(5 poin)

3. Presipitasi DNA.

a. Apa yang dimaksud dengan presipitasi DNA? Jelaskan!(5 poin)

b. Sebutkan dan jelaskan alat dan bahan apa saja yang digunakan dalam tahap ini pada masing-masing prosedur!(5

poin)

4. Kriteria apa saja yang digunakan untuk melakukan isolasi DNA dalam skala kecil (miniprep) atau skala besar

(maxiprep)? Jelaskan!(10 poin)


9/13


9


ESTIMASI KONSENTRASI DAN KEMURNIAN DNA DENGAN

SPEKTROFOTOMETER



1. Tuliskan hasil pengukuran larutan DNA hasil isolasi dengan spektrofotometer pada tabel berikut ini!(@ nomor, 5

poin total 30 poin )

Kelompok Jenis DNA A260 A280

A260/

A280(@ 2

poin)

Konsentrasi DNA

(g/ml)(@ 3 poin)

12

3

4

5

6

2. Apa artinya jika rasio A260/ A280lebih kecil atau lebih besar dari 1.8? Jelaskan! (10 poin)

1.8

3. Langkah apa yang harus dilakukanjika rasio A260/ A2801.49 atau 1.98? Jelaskan! (10 poin)

A260/ A2801.49

A260/ A2801.98

4. Lengkapi tabel berikut ini untuk membuat 500 l larutan DNA dengan konsentrasi 1000 g/ml dari larutan stok

DNA hasil isolasi yang diperoleh pada praktikum ini.

Kelompok Konsentrasi larutan stok DNA Volume stok

DNA(@ 2.5 poin)

Volume

ddH2O(@ 2.5

poin)

1

2

3

4

56


10/13


10


ELEKTROFORESIS



1. Apa fungsi dari:

a. agarose (nilai 5)

b. TAE(nilai 5)

c. loading dye

d. EtBr

2. DNA hasil isolasi

a. Tempelkan gambar hasil elektroforesis disini, tulis keterangan gambar pada kotak yang tersedia.(nilai 5)

Keterangan:


11/13


11

b. Lengkapi tabel berikut ini.(nilai @ 10 total 60)

Klmpk Jenis DNA Deskripsikan hasil dan jelaskan mengapa hasilnya demikian

1

2

3

4

5

6


12/13


12

b. Lengkapi tabel berikut ini.(nilai @ 10 total 60)

Klmpk Deskripsikan hasil dan jelaskan mengapa hasilnya demikian

1

2

3

4

5

6


13/13


13

Lembar Kerja Bioselmol 2014

Documents

Transcript of Lembar Kerja Bioselmol 2014