5/26/2018 Lembar Kerja Bioselmol 2014
1/13
LEMBAR KERJA PAKTIKUM BIOLOGI SEL DAN MOLEKULER 2013/2014
1
Judul Kegiatan/Acara Hari/Tanggal
PEMBUATAN PROSEDUR KERJA DI LABORATORIUM
Nama Mahasiswa NIM Paraf Mahasiswa
Nama Asisten Nilai Paraf Asisten
5/26/2018 Lembar Kerja Bioselmol 2014
2/13
LEMBAR KERJA PAKTIKUM BIOLOGI SEL DAN MOLEKULER 2013/2014
2
Judul Kegiatan/Acara Hari/Tanggal
PERSIAPAN BAHAN
Nama Mahasiswa NIM Paraf Mahasiswa
Nama Asisten Nilai Paraf Asisten
1. Buatlah diagram alir cara pembuatan larutan-larutan stok berikut ini dan lengkapi dengan perhitungannya(gram, volume) untuk memperoleh konsentrasi larutan stok yang diperlukan. Konsentrasi larutan stok
ditentukan dengan memperhitungkan konsentrasi akhir larutan siap pakai yang akan digunakan serta
volumenya.
1) Tris-HCL, pH 8.0 (satuan konsentrasi: M)
2) EDTA, pH 8.0 (satuan konsentrasi: M)
5/26/2018 Lembar Kerja Bioselmol 2014
3/13
LEMBAR KERJA PAKTIKUM BIOLOGI SEL DAN MOLEKULER 2013/2014
3
3) NaOH (satuan konsentrasi: N)
4) SDS (satuan konsentrasi: %)
5) BSA (satuan konsentrasi: mg/ml)
6) TE (satuan konsentrasi: X)
5/26/2018 Lembar Kerja Bioselmol 2014
4/13
LEMBAR KERJA PAKTIKUM BIOLOGI SEL DAN MOLEKULER 2013/2014
4
2. Larutan siap pakai. Berdasarkan larutan stok yang telah dibuat sebelumnya, buatlah perhitungan volume larutanstok yang ditambahkan untuk membuat larutan-larutan berikut ini (gunakan rumus pengenceran):
a. Lengkapi tabel berikut ini untuk membuat 500 ml buffer ekstraksi TENSdari larutan stok yang tersediaReagen Konsentrasi stok Konsentrasi akhir Volume yang ditambahkan
Tris-HCL, pH 8.0 10mM
EDTA, pH 8.0 1 mM
NaOH 0.1 N
Sodium Dodecyl Sulfate (SDS) 0.5%
H2O -
b. Lengkapi tabel berikut ini untuk membuat 500 ml buffer ekstraksi dari larutan stok yang tersediaReagen Konsentrasi stok Konsentrasi akhir Volume yang ditambahkan
Tris-HCl, pH 8.0 100 mM
EDTA, pH 8.0 20 mM
NaCl 0.5 M
Sodium Dodecyl Sulfate (SDS) 2 %
H2O -
c. Lengkapi tabel berikut untuk membuat 10 ml larutan STE dari larutan stok yang tersediaReagen Konsentrasi stok Konsentrasi akhir Volume yang ditambahkan
Tris-HCl, pH 8.0 10 mM
EDTA, pH 8.0 1 mM
NaCl 0.1 mM
H2O -
d. Lengkapi tabel berikut ini untuk membuat 100 ml larutan TE 1X dari larutan stok yang tersediaReagen Konsentrasi stok Konsentrasi akhir Volume yang ditambahkan
TE 1X
H2O -
5/26/2018 Lembar Kerja Bioselmol 2014
5/13
LEMBAR KERJA PAKTIKUM BIOLOGI SEL DAN MOLEKULER 2013/2014
5
Judul Kegiatan/Acara Hari/Tanggal
FRAKSINASI SEL
Nama Mahasiswa NIM Paraf Mahasiswa
Nama Asisten Nilai Paraf Asisten
1. Dalam praktikum ini, Anda melakukan serangkaian percobaan dengan menggunakan teknik sentrifugasi secarabertingkat. Kecepatan sentrifugasi dapat diatur dalam RCF (Ratio of centrifugal force, dengan satuan g) atau
dalam rpm. Tuliskan rumus konversi dari RCF ke rpm.
Salah satu tahap dalam metode digunakan kecepatan sentrifugasi 500g. Jika digunakan rotor dengan radius
2,5 cm, maka kecepatan dalam rpm adalah .................................... rpm.
2. Metode sentrifugasi bertingkat (differential centrifugation) umumnya dilakukan dengan sentrifugasi bahandalam tabung, kemudian memindahkan supernatan ke dalam tabung kedua, lalu dilakukan lagi sentrifugasi pada
tabung yang kedua. Apa yang membedakan antara sentrifugasi pertama dan sentrifugasi kedua, ditinjau darikecepatan/settingalat sentrifuga?
3. Lingkaran di bawah ini menggambarkan 4 organel yang berbeda, yaitu A, B, C, dan D. Jika Anda inginmengisolasi organel C dengan cara sentrifugasi secara bertingkat, maka Anda akan elakukan sentrifugasi pertama
dengan kecepatan tertentu yang akan mengendapkan organel (-organel) ................................................ hinggamembentuk pelet. Kemudian, Anda akan mengambil supernatan, lalu melakukan sentrifugasi dengan kecepatanlebih tinggi sehingga organel (-organel) ...................................... mengendap dan membentuk pelet, dan organel (-organel) ......................... dalam supernatan. Bagian manakah yang akan Anda ambil?...................................................................................................
A B C D
5/26/2018 Lembar Kerja Bioselmol 2014
6/13
LEMBAR KERJA PAKTIKUM BIOLOGI SEL DAN MOLEKULER 2013/2014
6
4. Mengapa semua tahap dalam metode fraksinasi sel selalu dijaga dalam suhu dingin?
5. Metode differential centrifugation menghasilkan organel-organel yang tidak sepenuhnya murni. Mengapademikian?
Saran apa yang dapat Anda berikan agar dapat dihasilkan organel-organel yang lebih murni?
5/26/2018 Lembar Kerja Bioselmol 2014
7/13
LEMBAR KERJA PAKTIKUM BIOLOGI SEL DAN MOLEKULER 2013/2014
7
Judul Kegiatan/Acara Hari/Tanggal
ISOLASI DNA
Nama Mahasiswa NIM Paraf Mahasiswa
Nama Asisten Nilai Paraf Asisten
1. Memecahkan sel bisa dilakukan dengan 3 cara, yaitu secara kimiawi, mekanik, dan enzimatis. Jelaskan (definisi)masing-masing cara tersebut, bahan yang digunakan serta contoh aplikasinya (bakteri, fungi,hewan, tumbuhan,
dll).15 poin
Cara memecah sel(@ 4 poin) Aplikasi(@ 1 poin)
1. Kimiawi
2. Mekanik
3. Enzimatis
2. Purifikasi DNA dilakukan dengan memisahkan DNA dari protein dan RNA.
a. Prinsip apa saja yang digunakan untuk memisahan DNA dengan protein? Jelaskan!(10 poin)
5/26/2018 Lembar Kerja Bioselmol 2014
8/13
LEMBAR KERJA PAKTIKUM BIOLOGI SEL DAN MOLEKULER 2013/2014
8
b. Sebutkan alat dan bahan yang digunakan untuk memisahkan DNA dan protein dalam masing-masing prosedur
isolasi DNA yang dilakukan pada praktikum ini!(10 poin)
c. Jelaskan bagaimana cara memisahkan DNA dengan RNA!(5 poin)
3. Presipitasi DNA.
a. Apa yang dimaksud dengan presipitasi DNA? Jelaskan!(5 poin)
b. Sebutkan dan jelaskan alat dan bahan apa saja yang digunakan dalam tahap ini pada masing-masing prosedur!(5
poin)
4. Kriteria apa saja yang digunakan untuk melakukan isolasi DNA dalam skala kecil (miniprep) atau skala besar
(maxiprep)? Jelaskan!(10 poin)
5/26/2018 Lembar Kerja Bioselmol 2014
9/13
LEMBAR KERJA PAKTIKUM BIOLOGI SEL DAN MOLEKULER 2013/2014
9
Judul Kegiatan/Acara Hari/Tanggal
ESTIMASI KONSENTRASI DAN KEMURNIAN DNA DENGAN
SPEKTROFOTOMETER
Nama Mahasiswa NIM Paraf Mahasiswa
Nama Asisten Nilai Paraf Asisten
1. Tuliskan hasil pengukuran larutan DNA hasil isolasi dengan spektrofotometer pada tabel berikut ini!(@ nomor, 5
poin total 30 poin )
Kelompok Jenis DNA A260 A280
A260/
A280(@ 2
poin)
Konsentrasi DNA
(g/ml)(@ 3 poin)
12
3
4
5
6
2. Apa artinya jika rasio A260/ A280lebih kecil atau lebih besar dari 1.8? Jelaskan! (10 poin)
1.8
3. Langkah apa yang harus dilakukanjika rasio A260/ A2801.49 atau 1.98? Jelaskan! (10 poin)
A260/ A2801.49
A260/ A2801.98
4. Lengkapi tabel berikut ini untuk membuat 500 l larutan DNA dengan konsentrasi 1000 g/ml dari larutan stok
DNA hasil isolasi yang diperoleh pada praktikum ini.
Kelompok Konsentrasi larutan stok DNA Volume stok
DNA(@ 2.5 poin)
Volume
ddH2O(@ 2.5
poin)
1
2
3
4
56
5/26/2018 Lembar Kerja Bioselmol 2014
10/13
LEMBAR KERJA PAKTIKUM BIOLOGI SEL DAN MOLEKULER 2013/2014
10
Judul Kegiatan/Acara Hari/Tanggal
ELEKTROFORESIS
Nama Mahasiswa NIM Paraf Mahasiswa
Nama Asisten Nilai Paraf Asisten
1. Apa fungsi dari:
a. agarose (nilai 5)
b. TAE(nilai 5)
c. loading dye
d. EtBr
2. DNA hasil isolasi
a. Tempelkan gambar hasil elektroforesis disini, tulis keterangan gambar pada kotak yang tersedia.(nilai 5)
Keterangan:
5/26/2018 Lembar Kerja Bioselmol 2014
11/13
LEMBAR KERJA PAKTIKUM BIOLOGI SEL DAN MOLEKULER 2013/2014
11
b. Lengkapi tabel berikut ini.(nilai @ 10 total 60)
Klmpk Jenis DNA Deskripsikan hasil dan jelaskan mengapa hasilnya demikian
1
2
3
4
5
6
5/26/2018 Lembar Kerja Bioselmol 2014
12/13
LEMBAR KERJA PAKTIKUM BIOLOGI SEL DAN MOLEKULER 2013/2014
12
b. Lengkapi tabel berikut ini.(nilai @ 10 total 60)
Klmpk Deskripsikan hasil dan jelaskan mengapa hasilnya demikian
1
2
3
4
5
6
5/26/2018 Lembar Kerja Bioselmol 2014
13/13
LEMBAR KERJA PAKTIKUM BIOLOGI SEL DAN MOLEKULER 2013/2014
13
Top Related