Laporan Tetap TLC

8/10/2019 Laporan Tetap TLC

1/11

LAPORAN TETAP

KIMIA ANALITIK INSTRUMEN

KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS I

Oleh : Kelompok III

1.

Bella Anggraini (061330400291)

2.

Deka Pitaloka (061330400293)

3.

Eka Anggraini (061330400298)

4.

Elvania Novianti (061330400299)

5.

Nurul Agustini (061330400306)

6.

Putri Utami (061330400307)

Kelas : 3 KA

DOSEN PEMBIMBING : Ir. Hj. Erwana Dewi, M.Eng

POLITEKNIK NEGERI SRIWIJAYA

2014


2/11

KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS

A. TUJUAN

Setelah melakukan percobaan ini, anda diharapkan dapat :

- Melakukan analisa sampel (zat warna) secara kromatografi lapis tipis.

B. ALAT DAN BAHAN YANG DIGUNAKAN

Alat yang digunakan :

-

Pelat TLC

- Chamber Kromatografi

Bahan yang digunakan :

-

Zat warna alami

- Etanol

C. DASAR TEORI

KLT (Kromatografi Lapis Tipis) / TLC (Thin Layer Chromatograph) merupakan

salah satu cara untuk memisahkan dan menganalisa zat dalam jumlah kecil. Pada TLC,

adsorben tersebar secara merata dalam permukaan gelas dan membentuk suatu lapisa

tipis, terbentuk pita-pita yang tidak horizontal, maka sulit untuk mengumpulkan

komponen-komponen. Ujung dari pita kedua terbawa sebelum seluruh pita pertama

keluar dari kolom. Ada dua penyebab masalah ini yaitu permukaan atas dari adsorben

tidak ada serta kolom tidak benar-benar vertikal.

Fenomena lain adalah terbentuknya lengkungan pada salah satu sisi pita. Hal ini

dpat terjadi bila tidak ada ketidak terautran pada permukaan adsorben atau terdapat

gelembung udara pada kolom.

Pada TLC, cuplikan yang akan dipisahkan atau dianalisa diteteskan pada pelat

dengan menggunakan kapiler. Pemisahan dapat terjadi dengan memasukkan pelat ke

dalam chamber(kamar) yang telah jenuh dengan pelarut. Pelatrut akan naik secara

perlahan-lahan sepanjang pelat tersebut. Cuplikan akan terdistribusi antara fasa diam

(adsorben) dan fasa gerak (pelarut). Sebagai fasa gerak umumnya zat yang kurang polar


3/11

dibandingkan dengan fasa diam sehingga komponen dalam cuplikan yang kurang polar

akan bergerak lebih cepat dari komponen cuplikan yang lebih polar.

Bila larutan hmapir mencapai ujung pelat maka pelat dikeluarkan dari chamber

dan dibiarkann hingga pelarut yang menempel pada pelat menguap. Akan telihat noda-

noda pada pelat yang menunjukkan jumlah komponen yang ada dalam cuplikan.

Perbandingan antar jarak perjalanan dengan komponen dengan jarak perjalanan pelarut

tersebut disebut Rf. Rf dinyatakan dengan bilangan dan dapat digambarkan seperti beikut

ini.

Nilai Rf untuk setiap warna dihitung dengan rumus sebagai berikut :

Rf =

Sebagai contoh, jika komponen berwarna merah bergerak dari 1,7 cm dari garis

awal, sementara pelarut bergerak 5,0 cm sehingga nilai Rf untuk komponen berwarna

merah menjadi :

Bila kondisi pengerjaan sama, maka nilai Rf untuk komponen tertentu adalah

sama. Nilai Rf dapat digunakan untuk megidentifikasi komponen.

PENGERTIAN KROMATOGRAFI DAN SEJARHNYA

Kromatografi adalah teknis pemisahan campuran berdasarkan perbedaan

kecepatan perambatan komponen dalam medium tertentu. Pada kromatografi, komponen-

komponennya kan dipisahkan antara dua buah fase yaitu fase diam dan fase gerak. Fase

diam akan menhan komponen campuran sedangkan fase gerak akan melarutkan zat

komponen campuran. Komponen yang mudah tertahan pada fase diam akan tertinggal,

sedangkan komponen yang mudah larut dalam fase gerak akan bergerak lebih cepat.

Semua kromatografi memiliki fase diam (dapat berupa padatan atau kombinasi

cairan dan padatan) dan fase gerak berupa (cairan atau gas). Fase gerak mengalir melalui


4/11

fase diam dan membawa komponen-komponen yang terdapat dalam campuran.

Komponen-komponen yang berbeda bergerak pada laju yang berbeda.

Kromatografi pertam kali dikenalkan oleh Michael Tsewst yaitu seorang botani

dari Rusia. Dia berhasil mencoba memisahkna klorofil dan pigmen-pigmen lain dalam

ekstrak tumbuhan dengan menggunakan serbuk kalsium karbonat yang diisikan ke dalam

kolom kaca petroleum eter sebagai pelarut.

Proses pemisahan itu diawali dengan menempatkan larutan cuplikan pada

permukaan atas kalsium karbonat, kemudian dialirkan pelarut petroleum eter. Hasilnya

berupa pita-pita berwarnya yang terlihat sepanjang kolom sebagai hasil pemisahan

komponen-komponen dalam estrak tumbuhan. Dari pita-pita warna tersebut muncul

istilah kromatografi, dari kata choram dan graphein. Menurut bahasa Yunani kdua

kata itu berarti warna dan menulis.

PENGERTIAN KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS (KLT)

Kromatografi Lapis Tipis (KLT) merupakan cara pemisahan campuran senyawa

menjadi senyawa murninya dan mengetahui kuantitasnya yang menggunakan

kromatografi. Kromatografi juga merupakan analisis cepat yang memerlukan bahan

sangat sedikit, baik penyerap maupun cuplikannya.

KLT / TLC dapat dipakai dengan dua tujuan. Pertama dipakai selayaknya sebagai

metode untuk mencapai hasil kualitatif, kuantitatif, atau preparatif. Kedua, dipakai utnuk

mengajaki sistem pelarut dan sistem penyangga yang akan dipakai di dalam kromatografi

kolom atau kromatografi cair kinerja tinggi. KLT dapat digunakan untuk memisahkan

yang sifatnya hidrofobik seperti lipida-lipida dan hidrokarbon yang sukar dikerjakan

dengan kromatografi kertas. KLT juga dapat berguna untuk mencari eluen untuk

kromatografi kolom, analisis fraksi yang diperoleh dari kromatografi kolom, identifikasi

senyawa secara kromatografi, dan isolasi senyawa murni sekala kecil. Pelarut yang dipilih

utnuk pengembang disesuaikan dengan sifat kelarutan senyawa dianalisis.


5/11

BAGIAN-BAGIAN KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS

1. Fase Diam

Fase diam yang digunakan dalam KLT merupakan penyerap berukuran kecil

dengan diameter partikel anatar 10-30 m. Semakin kecil ukuran rata-rata partikel fase

diam dan semakin sempit kisaran ukuran fase diam, maka semakin baik kinerja KLT

dalam hal efisiensi dan resolusinya. Penyerap yang paling sering digunakan adalah silika

dan serbuk selulosa, sementara mekanisme sorpsi yang utama pada KLT adalah adsorbsi

dan partisi. Berikut ini adalah beberapa penyerap fase diam yang digunakan pada KLT.

Penyerap Mekanisme Sorpsi Penggunaan

Silica Gel Adsorbsi Asam amino,

hidrokarbon, vitamin,

alkaloid

Silica

modifikasi

dengan

Hidrokarbon

Partisi

termodifikasi

Senyawa- senyawa

non plar

Serbuk

Selulosa

Partisi Asam amino,

nukleotida,karbohidrat

Alumina Adsorbsi Hidrokarbon, ion

logam, pewarna

makanan, alkaloid

Kieselgur Partisi Gula, asam-asam

Lemak

SelulosaPenukar Ion

Pertikaran Ion Asam nukleat,nukleotida, halide dan

ion-ion logam

Gel Sephadex Eksklusi Polimer, protein,

kompleks logam

-

siklodekstrin

Interaksi adsorpsi

stereospesifik

Campuran enansiomer


6/11

2. Fase Gerak

Dalam kromatografi, eluent adalah fase gerak yang berperan penting pada proses

elusi bagi larutan umpan (feed) untuk melewati fase diam (adsorbent). Interaksi antara

adsorbent dengan eluent sangat menentukan terjadinya pemisahan komponen. Oleh sebab

itu pemisahan komponen gula dalam tetes tebu secara kromatografi dipengaruhi oleh laju

alir eluent dan jumlah umpan.

Eluent dapat digolongkan dengan menurut ukuran umpan teradsorbsinya pelarut

atau campuran pelarut tersebut pada adsorben dalam hal ini yang banyak digunakan

adalah jenis adsorben alumina atau sebuah lapis tipis silika. Penggolongan ini dikenal

sebagai eluotropik pelarut. Suatu pelarut yang bersifat larutan relatif polar, dapat

mengusir pelarut yang relatif tak polar dan ikatannya dengan alumina (jel silika). Berikut

adalah beberapa petunjuk dalam memilih dan mengoptimasi fase gerak :

- Fase gerak harus mempunyai kemurnian yang sangat tinggi karena KLT merupakan

teknik yang sensitif.

-

Daya elusi gerak harus diatur sedemikian rupa sehingga harga Rf terletak antara 0,2-

0,8 untuk memaksimalkan pemisahan.

- Untuk pemisahan dengan menggunakan fase diam polar seperti silika gel, polaritas

fase gerak akan menentukan kecepatan migrasi solute yang berarti juga menetukan

nilai Rf. Penambahan pelarut yang bersifat sedikit polar seperti dietil eter ke dalam

pelarut non polar seperti metil benzene akan meningkatkan harga Rf secara

signifikan.

- Solut-solut ionik dan solut-solut polar lebih baik digunakan campuran pelarut sebgai

fase geraknya, seperti campuran air dan methanol dengan perbandingan tertentu.

Penambahan sedikit asam etanoat atau amonia masing-masing akan meningkatkan

solute-solute yang bersifat basa dan asam.

-

3. Penotolan atau Pembercakan

Untuk memperoleh reprodusibilitas, volume sampel yang ditotolkan paling sedikit

0,5. Jika volume sampel yang ditotolkan lebih besar dari 2-10, maka penotolan harus

dilakukan secara bertahap dengan dilakukan pengeringan antar totolan.

Bila sampel telah ditotolkan maka tahap selanjutnya adalah mengembangkan

sampel dalam bejana kromatografi yang sebelumnya dijenuhi dengan uap fase gerak.

Tetapi bagian bawah lempeng tipis yang ditotoli sampel dicelupkan ke dalam fase gerak

kurang lebihb 0,5-1 cm. Tinggi fase gerak dalam bejana harus dibawah lempeng yang


7/11

telah berisi totolan sampel. Bejana kromatografi harus tertutup rapat dan sedapat mungkin

volume fase gerak sedikit mungkin (akan tetapi mampu mengelusi lempeng sampai

ketinggian yang telah ditentukan).

Untuk melakukan penjenuhan fase gerak, biasanya bejana dilapisi dengan kertas

saring. Jika fase gerak telah mencapai ujung dari kertas saring maka dapat dikatakan

bahwa fase gerak telah jenuh.

4. Deteksi Bercak

Deteksi bercak pada KLT dapat dilakukan secara kimia dan fisika. Cara kimia

biasa digunakan adalah dengan mereaksikan bercak dengan suatu pereaksi melalui cara

penyemprotan sehingga bercak menjadi jelas. Cara fisika yang dapat digunakan untuk

menampakkan bercak adalah dengan cara pencacahan radioaktif dan fluoresensi sinar

ultraviolet. Fluoresensi sinar ultraviolet terutama untuk senyawa yang dapat

berfluoresensi mebuat bercak akan terlihat jelas.

D. LANGKAH KERJA

1. Menyiapkan pelat yang selesai dilapisi.

2.

Meneteskan cuplikan dengan menggunakan pipa kapiler pada permukaan pelat.

3.

Memasukkan pelat ke dalam chamber yang telah diisi dengan etanol.

Tetesan yang berada pada pelat tidak boleh terendam pelarut.

4.

Membiarkan pelarut naik perlahan-lahan sepanjang pelarut hingga dicapai ujung

lain dari pelat.

5. Membiarkan pelat kering dan membandingkan harga Rf dari noda-noda yang

terbentuk.


8/11

E. DATA PENGAMATAN

Zat warna tanpa penambahan pelarut (etanol)

NO Zat Warna Jarak yang

Ditempuh

Komponen

Jarak yang

Ditempuh

Soluent

1.

2.

3.

4.

Daun suji

Kunyit

Buah manalagi

Tomat

2,5 cm

1,6 cm

0,3 cm

0 cm

4,1 cm

4,1 cm

4,1 cm

4,1 cm

Zat warna dengan penambahan p-elarut (etanol)

NO Zat Warna Jarak yang

Ditempuh

Komponen

Jarak yang

Ditempuh

Soluent

1.

2.

3.4.

Daun suji

Kunyit

Buah manalagiTomat

2,8 cm

1,7 cm

0,8 cm0 cm

4,1 cm

4,1 cm

4,1 cm4,1 cm


9/11

F. PERHITUNGAN

Rf =

Zat warna hijau (Daun suji)

a. Tanpa Pelarut (Etanol)

Rf =

= 0,6097

b. Dengan Penambahan Pelarut (Etanol)

Rf =

= 0,6829

Zat warna kuning (Kunyit)


Rf =

= 0,3902

b.

Dengan Penambahan Pelarut (Etanol)

Rf =

= 0,4146

Zat warna orange (Buah manalagi)


Rf =

= 0,0731


Rf =

= 0,1951

Zat warna orange (Tomat)

a.

Tanpa Pelarut (Etanol)

Rf =

= 0


Rf =

= 0


10/11

G. ANALISA PERCOBAAN

Kromatografi Lapis Tipis (KLT) merupakan cara pemisahan campuran senyawa

menjadi senyawa murninya dan mengetahui kuantitasnya dengan kata lain TLC

merupakan salah satu cara untuk memisahkan dan menganalisa zat dalam jumlah kecil.

Prinsip kerja dari kromatografi lapis tipis yakni memisahkan sampel dengan pelarut yang

digunakan. Teknik ini biasanya menggunakan fase diam dari bentuk pelat silika dan fase

geraknya disesuaikan dengan jenis sampel yang ingin dipisahkan. Pada praktikum ini fase

diamnya berupa lempeng kaca yang dilapisi gel silika. Fase geraknya berupa etanol.

Bahan yang digunkan yaitu zat pewarna alami yang meliputi daun suji (hijau), kunyit

(kuning), buah manalagi dan tomat (orange).

Pada percobaan ini kami melakukan dua kali percobaan, yang pertama tanpa

pelarut dan yang kedua menggunakan pelarut (etanol). Penggunaan etanol sebagai pelarut

dikarenakan etanol bersifat semi polar sehingga dapat memisahkan antara zat polar dan

non polar. Untuk penotolan atau pembercekan, sebelumnya bahan-bahan tersebut

ditumbuk terlebih dahulu untuk memudahkan pengambilan sampel yang kemudian etanol

digunakan untuk percobaan dengan penambahan pelarut sebagai pelarutnya. Dalam

percobaan ini dapat dilihat bahwa zat warna yang memiliki karakteristik yang sama

dengan pelarut maka zat warna akan bergerak lebih cepat sedangkan zat warna yang tidak

memiliki karakteristik yang sama maka zat warna akan bergerak lambat. Jadi, cepat

lambatnya zat warna yang naik tergantung pada karakteristik zat warna dan fase gerak

yang digunakan.

Secara teori nilai Rf yang baik memiliki rentang 0,2-0,8. Sedangkan berdasarkan

praktikum nilai Rf untuk zat warfna hijau (daun suji) tanpa pelarut 0,6097, dengan pelarut

0,6829. Nilai Rf tanpa pelarut untuk zat warna kuning (kunyit) yaitu 0,3902 dan yang

menggunakan pelarut nilainya 0,4146. Zat warna orange (buah manalagi) tanpa pelarut

nilainya 0,0731 dengan pelarut 0,1951. Dan yang terakhir untuk zat warna orange (tomat)

nilai Rf tanpa pelarut dan dengn penambahan pealrut adalah 0. Nilai Rf 0 yang dimiliki

zat warna orange dari tomat ini baik tanpa pelarut atau menggunakan pelarut dikarenakan

zat warna ini tidak terdorong ke atas pada saat kedua percobaan dilakukan. Hal ini

diakrenakan tomat tersebut banyak mengandung air sehingga dapat menghambat

pergerakkan zat warna tersebut yang berkontakkan dengan etanol sebagai fase geraknya.


11/11

Laporan Tetap TLC

Documents

Transcript of Laporan Tetap TLC