Slide 1

Pemeriksaan Anti-HBsKelompok 5

Diah Afrina Dian Epriliani Nanda Diana Safina Tunnajah Eka Pratywy Mira Agustina R.A M. Purnama Aji Natasya Sagita

Tujuan PemeriksaanUntuk mengetahui adanya infeksi hepatitis BUntuk mengetahui ada atau tidaknya antibodi (anti HBs) terhadap antigen permukaan dalam serum pasienPrinsip Sampel yang di uji dan peroksidase dimasukkan ke dalam microwell yang telah dilapisi dengan HBsAg murni. Jumlah peroksidase HBsAg konjugat yang terikat ke sumur sebanding dengan konsentrasi anti-HBs pada spesimen yang bertindak sebagai penghubung antara HBsAg tetap dengan HRP terkonjugasi HBsAg. Setelah inkubasi, enzim yang terikat dengan konjugat dicuci . Larutan substrat ditambahkan dan selama inkubasi lebih lanjut terbentuk warna biru. Intensitas warna akan berubah menjadi kuning setelah menambahkan larutan asam untuk menghentikan reaksi, intensitas warna yang terbentuk sebanding jumlah anti HBs yang terdapat dalam sampel.

Prinsip Kerja Alat dan Bahan

Semua reagen harus berada pada suhu kamar (15-25C) sebelum digunakan. Reagen yang tidak digunakan, disimpan pada 2-8C.Persiapan Larutan Kerja Dipipet 50l & Dimasukan ke dalam botol yang bersih dan kering akan stabil selama 2 jam bila disimpan pada suhu kamar dan terlindung dari cahaya terang

SASBSUBSUB Persiapan Reagen Persiapan Wash Solution

1 + 19 Aquabidest 20 mlStabilitas : 1 minggu disimpan pada 2-8C (Hindari dari kontaminasi)

7well x 300 uL x 6kali pencucian = 12.600 uL 12,6 mL(dibuat 20 mL)Untuk 6 kelompok = 20 mL x 6 = 120 mL (dibuat 150 ml)

6mL wash diencerkan dengan 144 mL aquadesWASHWSPROSEDURTahap 11. Dipipet ke dalam semua microwell, kecuali A1

ABCDEFGHDitambahkan 50 uL

NC

PC

Sampel

Prosedur KerjaTahap 12. Dipipet ke dalam semua microwell, kecuali A1

3. Dihomogenkan dengan hati hati menggunakan rotator selama 20 detik, jangan sampai ada cairan yang tumpah.4. Microwell ditutup dengan parafilm/alumunium foil.5. Diinkubasi 60 menit pada suhu 37oC.

ABCDEFGHDitambahkan 50 uL

CON

Prosedur KerjaTahap 16. Isi sumur diaspirasi ke dalam Natrium Hipoklorit 5%, kemudian ditambahkan pada tiap microwell kecuali A1

Setelah 30 detik, diaspirasi kembali dan diulangi lagi pencucian 5 kali.Microwell di-tapping dengan menekannya terbalik di atas kertas tissue.

ABCDEFGHDitambahkan 300 uL

WASH

Prosedur KerjaTahap 21. Dipipet ke dalam semua microwell, termasuk A1

2. Dihomogenkan di rotator 1-2 menit.3. Ditutup dengan alumunium foil.4. Diinkubasi selama 30 menit pada suhu 15-25oC, lindungi dari cahaya terang.

ABCDEFGHDitambahkan 100 uL

Substrat A + Substrat B

Prosedur KerjaTahap 25. Dipipet ke dalam semua microwell, termasuk A1

6. Dihomogenkan dengan hati hati.7. Absorban diukur dalam 30 menit pada bagian kosong di A1, pada panjang gelombang 450 nm, panjang gelombang referensi 630 690 nm (jika tersedia).

ABCDEFGHDitambahkan 100 uL

STOPPING SOLUTION

Prosedur Kerja MNC < 0,200MPC > 0,500MPC MNC 0,300jika perbedaannya lebih kecil, dapat diduga teknik yang tidak tepat. Pengujian harus diulang. jika perbedaannya secara konsisten