5/24/2018 Lapak Mic Alat Dan Bahan

1/4

1. ALAT DAN BAHAN Alat :

1. Mortir dan stamper2.

Tabung reaksi besar (3) dan kecil (6)

3. Rak tabung4. Cawan petri (3)5. Volume pipet beukuran 1 ml dan 10 ml6. Labu ukur 100 ml7. Labu ukur 25 ml (ga usah)8. Ose dan lampu spiritus9. Inkubator

Bahan :1. Sediaan uji (Kloramfenikol)2. Suspensi bakteri Gram negatif (E coli, S. aureus,Bacillus subtilis)3. Nutrient Agar (NA)4. Nutrient Broth (DS dan SS)5. Pelarut sediaan uji (etanol) (nggak usah)6. Air suling

5. PROSEDUR

5.1 MIC PADAT

Kloramphenicol digerus terlebih dahulu kemudian dimasukkan dalam labu

ukur dan dilarutkan dalam pelarutnya. Kemudian ditambah dengan aquadest sampai

tanda batas labu ukur 100ml. Kemudian rencanakan pengenceran dan konsentrasi tiap

tabung dihitung konsentrasi masing-masing pengenceran dalam tabung besar yang

diinginkan adalah 100g, 10 g, dan 5 g. Selanjutnya dilakukan pengenceran

bertingkat larutan antibiotik dan air suling steril pertama disiapkan tiga buah tabung

reaksi besar, kemudian tabung reaksi besar 1 diisi dengan 0.5 ml sampel antibiotik

yang telah dilarutkan dalam labu ukur dan 12 ml aquadet steril. Dikocok. Lalu

diambil 1 ml sediaan uji dari tabung reaksi besar 1 dan dipipet ke dalam tabung reaksi

besar 2 berisi 9 ml aquades. Lalu, diambil 2 ml larutan uji dari tabung reaksi besar 2

dan dipipet ke dalam tabung reaksi besar 3 berisi aquades 2 ml. Setelah itu disiapkan

3 buah cawan petri. Permukaan cawan kemudian dibagi tiga bidang sama besar, dan

5/24/2018 Lapak Mic Alat Dan Bahan

2/4

diberi label nama bakteri yang akan digunakan pada setiap area. Kemudian dari tiap

pengenceran yang telah dibuat dimasukkan ke dalam tiga buah cawan petri masing-

masing sebanyak 1 ml dari tiap pengenceran, kemudian ditambahkan ke dalamnya 19

ml dengan menggunakan tabung reaksi yang sudah ditara NA/Nutrient Agar. Cawan

petri tersebut kemudian digoyangkan perlahan agar campuran tercampur rata. Lalu

didiamkan hingga membeku. Lalu, digoreskan ke masing-masing cawan petri

sebanyak satu ose bakteri (s.a, e.c, b.s) di masing-masing bidang pada tiap cawan

petri. Semua cawan petri diinkubasi pada suhu 370C selama 18-24 jam. Diamati hasil

kekeruhan yang terjadi.

5.2 MIC CAIR

Sediaan uji (kloramfenikol) dimasukkan dalam labu ukur 100 ml dan dilarutkan

dengan aquades, kemudian ditambahkan pelarut akhir sampai batas akhir labu ukur.

Kemudian direncanakan pengenceran dan dihitung konsentrasi dari tiap tabung. Disediakan

tiga buah tabung besar untuk dilakukan pengenceran dengan konsentrasi 100g, 10g dan

5g. Untuk pengenceran konsentrasi 100 g, dipipet 0.5 ml larutan uji kloramfenikol dan

dimasukkan ke dalam tabung reaksi besar 1 berisi 12 ml aquades. Lalu, disiapkan tabung

reaksi 2 untuk dipipet ke dalamnya larutan dari tabung reaksi besar 1 sebanyak 1 ml dan

ditambahkan 9 ml aquades. Terakhir disiapkan tabung reaksi besar 3 untuk dipipet ke

dalamnya larutan dari tabung reaksi besar 2 sebanyak 2 ml dan 2 ml aquades. Setelah itu,

diambil 1 ml dari tabung reaksi besar 3 dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi kecil 1

berisi nutrient broth double strenght sehingga didapatkan konsentrasi 2,5g. Lalu, diambil 1

ml dari tabung reaksi kecil 1 dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi kecil 2 berisi nutrient

broth single strenght sehingga didapatkan konsentrasi 1,25g. Prosedur ini diulang untuk

mendapatkan konsentrasi 0,625g (tabung reaksi kecil 3) dan 0,3125g (tabung reaksi kecil

4). Setelah keempat tabung reaksi kecil itu siap ditambahkan ke dalam masing-masing

tabung reaksi kecil 1 ose bakteri E. Coli. Dibuat juga kontrol negatif dengan memasukkan 1

ml nutrient broth dan kontrol positif berisi 1 ml nutrient broth dan 1 ose bakteri di tabung

reaksi kecil lainnya. Setelah itu inkubasikan pada suhu 37C selama 18---24 jam. Dilihat

tingkat kekeruhan yang terjadi.

5/24/2018 Lapak Mic Alat Dan Bahan

3/4

6. DATA PENGAMATAN

Keterangan gambar : (+) : terdapat pertumbuhan bakteri.

Pengenceran:Di dalam labu ukur

Konsentrasi tetrasiklin : 250mg/100ml = 2500g/ml

a) Pengenceran tabung besar 1 :Konsentrasi yang diinginkan 100g/ml

0.5 ml larutan + 12 ml aquadest

V total=12.5 ml

V1N1 = V2N2

V1 x 2500 = 12.5 x 100

V1 = 0.5 ml

b) Pengenceran tabung besar 2 :Konsentrasi yang diinginkan adalah 10 g/ml

V total= 10 ml

V1N1 = V2N2

1 x 100 = V2 x 10

V2 = 10 ml

Jadi Vtotal =1 ml hasil pengenceran tabung I sebanyak + 9 ml aquadest

c) Pengenceran tabung besar 3 :Konsentrasi yang diinginkan adalah 5 g/ml

V total= 4 ml

V1N1 = V2N2

1 x 10 = V2 x 5

V2 = 2 ml

Jadi Vtotal =2 ml hasil pengenceran tabung II + 2 ml aquadest

5/24/2018 Lapak Mic Alat Dan Bahan

4/4

d) Pengenceran tabung kecil 1Konsentrasi yg diinginkan 2.5