PEMERIKSAAN SEDIAAN HAPUS DARAH TEPI

Bagian Patologi Klinik FK YARSI

Tujuan

• Melihat sel darah tepi : memperkirakan perubahan kuantitas melihat kelainan morfologi sel

• mencari parasit : malaria, tripanosoma,

mikrofilaria

Sediaan hapus yang dibuat dan dipulas dengan baik merupakan syarat mutlak untuk mendapatkanhasil yang baik.

Cara membuat dan memulas baik dan benar

Sediaan hapus baik

Penilaian yang obyektif

Bahan pemeriksaan

• Darah segar vena / kapiler• Sediaan hapus dibuat langsung atau

ditampung dalam wadah penampung K3EDTA

• Dibuat < 1 jam setelah pengambilan• Segera difiksasi dengan metanol absolut 2 - 3

menit

Membuat sediaan hapus

Segera !Alat : - kaca obyek 25 x 75 mm

bersih, kering & tidak berlemak- kaca penghapus

Reagen : Pulasan Romanowsky - May Grunwald Giemsa - Wright - Wright - Giemsa

Cara membuat:

• Pilih kaca obyek yang bertepi rata untuk digunakan sebagai kaca penghapus.

• letakkan setetes darah pada salah satu ujung lebar kaca obyek, 1 - 2 cm dari tepi

• kaca penghapus diletakkan dengan sudut 30 - 45o & dorong ke arah berlawanan dengan gerakan mantap

• biarkan mengering, beri identitas pada

bagian tebal

Steps for Blood FilmSteps for Blood Film

The shape of blood film

The thickness of the spread notes

Memulas sediaan hapus

Fiksasi metanol absolut 2 – 3 menit

Pewarnaan

larutan Wright 5 - 10 menit

larutan dapar pH 6,4 10-12 menit

Pencucian

air mengalir sampai

bersih

Biarkan kering dalam posisi tegak

Ciri sediaan hapus yang baik

• Panjang sediaan 1/2 - 2/3 panjang kaca obyek• Lebarnya tidak sampai ke tepi• Mempunyai bagian yang cukup tipis utk diperiksa

eritrosit tidak bertumpuk• Sediaan rata, tidak berlubang atau bergaris• Warna merata, biru keunguan• Ada bagian dengan ketebalan sedang

penyebaran leukosit baik, tidak berhimpit di ujung/pinggir sediaan

Perlu diperhatikan !

• Sediaan hapus yang dibiarkan selama

beberapa jam dalam suhu ruangan tanpa

difiksasi :

- perubahan morfologi sel

- latar belakang sediaan menjadi biru

sulit mengenal sel

Penilaian hasil pewarnaan

• Eritrosit : kemerahan• Inti leukosit : berwarna ungu sampai violet• Basofil : granula violet tua sampai hitam • Eosinofil : granula merah bata sampai merah coklat• Neutrofil : granula merah pink• Limfosit : sitoplasma biru muda, granula merah

keunguan• Monosit : sitoplasma violet tua • Trombosit : violet

MENILAI SEDIAAN HAPUS DARAH TEPI

- makroskopik : sediaan cukup baik untuk dinilai

- mikroskopik :

lensa obyektif 10 x

40 x

bila diperlukan 100 x

- lensa obyektif 10 x Gambaran keseluruhan

penyebaran sel merata / tidak

- lensa obyektif 40 xEritrosit : lihat di bagian tipis/tidak menumpuk!

a. size ukuran, bandingkan dgn inti limfosit kecil.

b. shape bentuk, normal bulat.

c. staining warna, bagian tengah lebih pucat < ½

diameter eritrosit

Leukosit : a. kesan jumlah b. hitung jenis c. kelainan morfologi Trombosit : a. kesan jumlah b. kelainan morfologi

The shape of blood film

Common causes of a poor blood Common causes of a poor blood smearsmear

1. Drop of blood too large or too small.

2. Spreader slide pushed across the slide in a jerky manner.

3. Failure to keep the entire edge of the spreader slide against the slide while making the smear.

4. Failure to keep the spreader slide at a 30° angle with the slide.

Common causes of a poor blood Common causes of a poor blood smearsmear

5. Failure to push the spreader slide completely across the slide.

6. Irregular spread with ridges and long tail: Edge of spreader dirty or chipped; dusty slide.

Common causes of a poor blood Common causes of a poor blood smearsmear

7. Holes in film: Slide contaminated with fat or grease and air bubbles.

8. Cellular degenerative changes: Delay in fixing, inadequate fixing time or methanol contaminated with water.

A: A: Blood film with jagged tail made from a spreader with a chipped end.B: B: Film which is too thick C: C: Film which is too long, too wide, uneven thickness and made on a greasy slide.D: D: A well-made blood film

Examples of unacceptable Examples of unacceptable smearssmears

too acidic suitable too basictoo acidic suitable too basic

Observing direction:Observing direction:

Observe one field and record the number of WBC according to the different type then turn to another field in the snake-liked direction**avoid repeat or miss some cellsavoid repeat or miss some cells

Cytoplasm : pinkCytoplasm : pink

Granules: dark blue –Granules: dark blue –black obscure nucleusblack obscure nucleus

Nucleus: blueNucleus: blue

BASOPHIL

BASOPHIL

Eosinophils

• The most common reasons for an increase in the eosinophil count are Allergic reactions such as hay fever, asthma, or drug hypersensitivity.

1.Parasitic infection

2.Eosinophilic leukemia

Eosinophils

Cytoplasm : full of granulesCytoplasm : full of granules

Granules: large refractile, Granules: large refractile, orange-red orange-red Nucleus: blueNucleus: blue dense chromatindense chromatin 2 lobes like a pair of glass2 lobes like a pair of glass

Eosinophil

Cytoplasm : pink

Granules: primary secondary

Nucleus: dark purple bluedense chromatin

BAND NEUTROPHIL

Segmented neutrophile Band neutrophil

Shift to left Increased bands mean acute infection, usually bacterial.

Shift to right Increased hypersegmented neutrophile.

SEGMENTED NEUTROPHIL

Cytoplasm : pink

Granules: primary secondary

Nucleus: dark purple blue dense chromatin 2-5 lobes

SEGMENTED NEUTROPHIL

Diameter: small 7-9Diameter: small 7-9 large 12-16large 12-16

Cytoplasm: medium blueCytoplasm: medium blueGranules: small agranularGranules: small agranularLarge a few primary granules.Large a few primary granules. Nucleus: dark blue \roundNucleus: dark blue \round dense chromatindense chromatin

Lymphocytes:

Lymphocyte:

Cytoplasm : grey blueCytoplasm : grey blue

Granules: dust-like lilac Granules: dust-like lilac color granules color granules Nucleus: blue Nucleus: blue large irregularly large irregularly shaped and folded shaped and folded

Monocytes

Segmented neutrophile Band neutrophil

Shift to left Increased bands mean acute infection, usually bacterial.

Shift to right Increased hypersegmented neutrophile.

SELAMAT PRAKTIKUM