Karakterisasi Ebastine, Hydroxyebastine, dan Carebastine Yang Dimetabolisme Oleh Mikrosom Hati Manusia dan Ekspresi Enzim Sitokrom

P450: Peran Utama CYP2J2 dan CYP3A

Abstrak

Ebastine mengalami metabolisme yang panjang untuk membentuk dealkylebastine dan hydroxyebastine. Hydroxyebastine selanjutnya dimetabolisme menjadi carebastine. Meskipun CYP3A4 dan CYP2J2 terlibat dalam proses dealkylation N-ebastine dan hidroksilasi, enzim katalisator subsequen metabolik selanjutnya (konversi hydroxyebastine menjadi desalkylebastine dan carebastine) belum teridentifikasi. Oleh karena itu, kami menggunakan mikrosom hati manusia (HLMs) dan ekspresi sitokrom P450 (P450s) untuk mengkarakterisasi metabolisme ebastine dan metabolitnya, yakni hydroxyebastine dan carebastine. Dalam HLMs, ebastine dimetabolisme menjadi dealkyl-, hidroksi-, dan carebastine; hydroxyebastine menjadi dealkyl-dan carebastine, dan carebastine menjadi dealkylebastine. Dari 11 cDNA menyatakan P450s, CYP3A4 adalah enzim katalisator utama N-dealkylation dari ebastine, hydroxyebastine, dan carebastine menjadi dealkylebastine [Intrinsik klirens (CLint) = masing-masing 0,44, 1,05, dan 0,16 ml / menit / pmolP450]. Ebastine dan hydroxyebastine juga dealkylasi menjadi desalkylebastine sampai batas tertentu oleh CYP3A5. Hidroksilasi ebastine menjadi hydroxyebastine dimediasi oleh CYP2J2 (masing-masing 0,45 ml / menit / pmol P450, 22,5-dan 7,5 kali lipat lebih tinggi dari itu untuk CYP3A4 dan CYP3A5), sedangkan CYP2J2 dan CYP3A4 memberikan kontribusi terhadap pembentukan carebastine dari hydroxyebastine. Temuan ini didukung oleh penghambatan kimia dan studi analisis kinetik di mikrosom hati manusia. CLint dari hydroxyebastine jauh lebih tinggi daripada ebastine dan carebastine, dan carebastine adalah metabolit yang lebih stabil daripada ebastine dan hydroxyebastine. Sebagai kesimpulan, menunjukkan bahwa kedua CYP2J2 dan CYP3A memainkan peran penting dalam metabolisme berurutan, ebastine: dealkylation dari ebastine dan metabolitnya terutama dikatalisis oleh CYP3A4, sedangkan reaksi hidroksilasi preferentially dikatalisis oleh CYP2J2. Data ini akan sangat berguna untuk memahami dan interaksi farmakokinetik obat ebastine in vivo.

Ebastine, sebuah histamin ampuh dan selektif antagonis reseptor H1-, generasi kedua dari antihistamin nonsedating tapi dengan sifat tanpa antikolinergik dan antiserotonergic (Llupia et al., 2003). Ebastine mengalami metabolisme panjang berurutan dalam hati (Hashizume et al., 1998, 2001). Metabolit primer utama yang diidentifikasi pada manusia hidroksi-dan desalkylebastine, dan hydroxyebastine selanjutnya dimetabolisme menjadi carebastine. Studi invitro menunjukkan bahwa pembentukan desalkyl-dan hydroxyebastine dari ebastine masing-masing dikatalisis oleh CYP3A4, dan CYP2J2 (Hashizume et al., 2002). Enzim spesifik sitokrom P450 (P450s) yang terlibat dalam hidroksi-dan proses metabolisme carebastine belum diidentifikasi sejauh ini, meskipun beberapa informasi dapat diperoleh dari publikasi farmakokinetik ebastine. Setelah pemberian oral pada hewan percobaan dan manusia, ebastine hampir sepenuhnya dimetabolisme dengan prinsip farmakologi aktif, metabolit terkarboksilasi (carebastine), dan metabolit tidak aktif lainnya (desalkylebastine) (Yamaguchi et al, 1994;. Rohatagi et al, 2001.). Nilai Cmax dari hydroxyebastine, metabolit utama ebastine in vitro,

adalah sekitar 50-kali lipat lebih rendah daripada carebastine secara in vivo (Kang et al., 2004). Sebuah studi terbaru oleh Chaikin et al. (2005) telah melaporkan bahwa ketokonazol, inhibitor poten CYP3A4, dapat mengurangi clearance ebastine, menyebabkan akumulasi ebastine, dengan sedikit efek pada farmakokinetik carebastine. Namun, karena mereka tidak mengukur perubahan metabolit intermedietnya, hydroxyebastine, masih terbuka untuk pertanyaan yang isoform P450 dapat berkontribusi untuk pembentukan carebastine. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengidentifikasi dan mengkarakterisasi secara in vitro kinetik isoform P450 yang bertanggung jawab dalam proses metabolisme ebastine dan metabolitnya. Informasi dari studi ini akan memungkinkan pemahaman yang lebih baik dari faktor-faktor yang mempengaruhi farmakokinetik dan interaksi obat ebastine.

Bahan dan Metode

Kimia dan Reagen. Ebastine, desalkylebastine, hydroxyebastine, dan carebastine disumbangkan oleh Almirall Prodesfarma, SA (Barcelona, Spanyol). Astemizol, coumarin, dietilditiokarbamat, furafylline, ketoconazole, quinidine, sulfaphenazole, terfenadine, thio-Tepa, β-nikotinamida adenin dinukleotida fosfat, EDTA, MgCl2, glukosa 6-fosfat, dan glukosa-6-fosfat dehidrogenase dibeli dari Sigma-Aldrich ( St Louis, MO). Pelarut grade HPLC (Fisher Scientific Co, Pittsburgh, PA) dan bahan kimia lainnya dengan kualitas tertinggi yang tersedia. Pole (H161) atau single-donor (H003, H056, dan HK34) mikrosom hati manusia (HLMs), dan 11 manusia yang berbeda isoform P450 rekombinan, 1A2, 2A6, 2B6, 2C8, 2C9, 2C19, 2D6, 2E1, 2J2, 3A4 , dan 3A5 (Supersomes), dibeli dari BD Gentest (Woburn, MA). P450s manusia 2A6, 2B6, 2C8, 2C9, 2C19, 2E1, 2J2, 3A4, dan 3A5 yang coexpressed dengan P450 reduktase manusia dan sitokrom b5, namun, P450s 1A2 dan 2D6 hanya coexpressed dengan P450 reduktase manusia. Produsen yang disertakan informasi mengenai konsentrasi protein dan konten isoformP450.

Metabolisme Ebastine dan Metabolit nya di mikrosom hati Manusia atau Ekspresi P450s.

Kondisi optimal untuk inkubasi mikrosomal ditentukan dalam kisaran linier untuk pembentukan metabolit dari ebastine, hydroxyebastine, dan carebastine. Tingkat pembentukan metabolit yang sebanding dengan waktu inkubasi hingga 60 menit dan konsentrasi protein sampai dengan 1,0 mg / ml pada 30 menit. Dalam semua percobaan, ebastine, hydroxyebastine, dan carebastine dilarutkan dan diencerkan dengan metanol serial dengan konsentrasi yang dibutuhkan; pelarut kemudian dihilangkan dengan penguapan sampai kering, di bawah tekanan berkurang dengan SpeedVac AES2010 (Thermo Electron Corporation, Waltham, MA).

Campuran inkubasi, yang mengandung baik ml 25 dari mikrosom (2,5 mg protein / ml stok, disiapkan dari tiga persiapan hati manusia yang berbeda mikrosomal) atau 25 ml cDNA-

diekspresikan pH P450 (diencerkan sampai 200 pmol / ml dengan buffer fosfat, 7.4 ) dan berbagai konsentrasi ebastine, hydroxyebastine, atau carebastine (0-100 M) dilarutkan dalam 100 pM buffer fosfat (pH 7,4) dan pemanasan awal selama 5 menit pada 37 ° C. Reaksi dimulai dengan menambahkan NADPH-sistem regenerasi (1,3 mM β-nikotinamida adenin dinukleotida fosfat, 3,3 mM glukosa 6-fosfat, 3,3 mM MgCl2, dan 1,0 U / ml glukosa-6-fosfat dehidrogenase) dan selanjutnya diinkubasi (volume akhir dari 250 ml) selama 30 menit pada 37 ° C dalam penangas air gemetar. Reaksi dihentikan dengan menempatkan tabung inkubasi pada es dan dengan segera menambahkan 100 ml asetonitril. Setelah menambahkan standar internal (terfenadine, 1 M), campuran disentrifugasi pada 1000g selama 5 menit pada suhu 4 ° C dan alikuot dari supernatan disuntikkan ke dalam sistem LC / MS / MS.

Studi Penghambatan Kimia dengan Mikrosom Hati Manusia.

HLMs disatukan (H161, gabungan dari 27 mikrosom individu) dan inhibitor P450-selektif yang ditambahkan ke campuran inkubasi mirip dengan yang dijelaskan di atas. Ebastine, hydroxyebastine, dan carebastine konsentrasi yang 5 pM. Isoform P450 inhibitor selektif-digunakan adalah furafylline (10 M) untuk CYP1A2, coumarin untuk CYP2A6 (100 M), thio-Tepa untuk memberi sinyal pada CYP2B6 (5 M), sulfaphenazole untuk CYP2C9 (10 M), S-benzylnirvanol untuk CYP2C19 (1 M ), quinidine untuk CYP2D6 (10 M), dietilditiokarbamat untuk CYP2E1 (10 M), dan ketokonazol untuk CYP3A (1 M). Astemizol (50 M), substrat CYP2J2 dan CYP3A4, digunakan sebagai inhibitor kompetitif. Kecuali untuk penambahan isoform P450-selektif inhibitor, semua kondisi inkubasi lainnya serupa dengan yang dijelaskan sebelumnya (Shin et al., 1999, 2002). Setelah menambahkan standar internal dan sentrifugasi seperti dijelaskan di atas, alikuot dari supernatan dianalisis pada sistem LC / MS / MS.

Prosedur Analitis.

Konsentrasi desalkyl-, hidroksi-, dan carebastine diukur oleh LC / MS / MS (Kang et al, 2004.). Sistem ini terdiri dari sebuah API 3000 LC / MS / MS sistem (Terapan Biosystems, Foster City, CA) dilengkapi dengan antarmuka ionisasi elektrospray digunakan untuk menghasilkan ion positif [M + H] +. Senyawa-senyawa dipisahkan pada kolom fase terbalik (Luna C18, 2,0 mm × 50 mm id, 3-pM ukuran partikel; Phenomenex, Torrance, CA) dengan fase gerak asetonitril isokratik terdiri dari dan air (40/60 v / v ) mengandung asam formiat 0,1%. Fase gerak dielusi menggunakan HP 1100 pompa seri (Agilent, Wilmington, DE) sebesar 0,2 ml / menit.

Turboion Spary Interface dioperasikan dalam modus ion positif di 5500 V dan 375 ° C. Kondisi operasi ditentukan sebagai berikut: aliran gas nebulizing, 1,04 l / menit; gas tambahan aliran, 4,0 l / menit; tirai aliran gas, 1,44 l / min; tegangan lubang, 40 V; tegangan cincin, 350 V; gas tabrakan ( nitrogen) tekanan, 3,58 × 10-5 Torr. Transisi massa digunakan untuk kuantisasi hydroxyebastine, carebastine, dan terfenadine adalah m / z 486,7 167,1 →, 500,6 167,1 →, dan

472,7 436,0 → masing-masing (tabrakan energi 40 eV): bahwa untuk desalkylebastine adalah m / z 268,4 167,1 → (tabrakan energi 15 eV). Data analitis diproses oleh software Analis (versi 1.2; Terapan Biosystems).

Analisis Data

Hasil dinyatakan sebagai ± S.D. estimasi yang diperoleh dari tiga persiapan yang berbeda microsome hati dalam duplikasi percobaan . Parameter kinetik jelas ebastine, hydroxyebastine, dan metabolisme carebastine ditentukan oleh fitting data kinetik unweighted dari HLMs dan P450s diungkapkan ke persamaan satu-enzim Michaelis-Menten atau model (Hill) persamaan sigmoidal [V = Vmax • [S] n / (KNM + [S] n)], atau model inhibisi substrat [V = Vmaks / (1 + km / [S] + [S] / ksi)]. Parameter dihitung adalah tarif maksimum pembentukan metabolit (Vmax), Michaelis konstan (Km), bersihan intrinsik (Clint = Vmaks / Km), Hill koefisien (n), dan inhibisi substrat konstan (KSI). Persentase inhibisi dihitung dengan rasio laju pembentukan metabolit dengan dan tanpa inhibitor spesifik. Perhitungan dilakukan dengan menggunakan perangkat lunak WinNonlin (Pharsight, Mountain View, CA).

Hasil dan Diskusi

Kami berusaha mengkarakterisasi rinci metabolisme in vitro ebastine dan metabolitnya menggunakan enzim P450 hati manusia seperti diringkas dalam Gambar. 1. Kami telah menunjukkan bahwa: 1) pertama, ebastine mengalami hidroksilasi oksidatif dari kelompok metil dari bagian tert-butil dari ebastine menjadi hydroxyebastine dan dealkylation di ikatan alisiklik yang menempel dengan Piperidina nitrogen untuk membentuk desalkylebastine, dan metabolisme sekunder menjadi carebastine, 2) rute utama dari metabolisme ebastine yang dikatalisis oleh CYP2J2,, CYP3A4 dan CYP3A5, dan 3) CYP2J2 selaku kinetika atipikal. Data ini harus memberikan basis ilmiah di mana untuk membangun studi klinis terfokus yang akan membantu dalam memahami farmakokinetik dan faktor-faktor yang mempengaruhi keberhasilan terapi farmakogenetik ebastine, interaksi obat, dan keamanan.

Pembentukan metabolit mengikuti kinetika sederhana Michaelis-Menten dengan 0-100uM ebastine, hydroxyebastine, atau carebastine, menunjukkan keterlibatan enzim tunggal atau lebih dari satu enzim dengan afinitas yang sama (Gambar 2). Sebuah profil kinetik serupa telah diamati dengan hidroksilasi ebastine di mikrosom usus manusia (Hashizume et al., 2002) dan CYP2J2-dimediasi hidroksilasi terfenadine pada rekombinan CYP2J2 (Parikh et al., 2003). Parameter kinetik dirangkum dalam Tabel 1. Pembentukan carebastine dari hydroxyebastine oleh rCYP2J2 menunjukkan penghambatan substrat (Gambar 3), tidak seperti data yang diperoleh dalam HLMs kinetik, yang ditandai dengan persamaan Michaelis-Menten hiperbolik (Gambar 2). Perbandingan kebaikan-of-fit nilai yang dihasilkan dari data ini menunjukkan bahwa penghambatan model enzim substrat kinetik disediakan lebih cocok daripada model lain. Plot Eadie-Hofstee terkait menunjukkan "hook" di wilayah atas plot ini (Gambar 3B, inset), yang

merupakan karakteristik dari inhibisi substrat. Km, Vmaks, dan Ksi diestimasi dari data tersebut, masing-masing, 0,75 pM, 9,86 pmol / menit / pmol P450, dan 5,55 pM (Tabel 2). Profil substrat serupa penghambatan telah diamati sebelumnya dengan memberi sinyal pada pembentukan CYP2B6-dimediasi 8,14-dihydroxyefavirenz (Ward et al., 2003) dan CYP3A-dimediasi hidroksilasi triazolam (Schrag dan Wienkers, 2001), yang sugestif dari beberapa substrat-mengikat situs ( atau beberapa daerah dalam sebuah situs aktif tunggal). Untuk pengetahuan kita, ini adalah laporan pertama dari CYP2J2-dimediasi inhibisi substrat. Meskipun pengamatan ini mungkin tidak memiliki relevansi klinis karena konsentrasi yang diharapkan dari hydroxyebastine dalam plasma manusia setelah mengambil dosis biasa ebastine (Kang et al., 2004) jauh lebih rendah daripada konstanta inhibisi substrat kita diperoleh di sini, hal itu mungkin menawarkan wawasan ke karakteristik enzim.

Gb.1 Jalur metabolisme ebastine di mikrosom hepar manusia

Gb.2 Kinetika untuk pembentukan metabolit dari ebastine (A), hydroxyebastine (B), dan carebastine (C) dalam tiga mikrosom hati manusia. Peningkatan konsentrasi substrat (0-100 M) diinkubasi dengan mikrosom hati manusia dan sistem yang menghasilkan NADPH

pada 37 ° C selama 30 menit. Kecepatan (pmol / menit / mg protein) versus konsentrasi substrat sangat cocok persamaan Michaelis-Menten (lihat "Analisis Data" di bawah Bahan dan Metode). Setiap titik mewakili rata-rata yang diperoleh dari tiga mikrosom hati manusia yang berbeda.

Kami menyediakan bukti bahwa hidroksilasi ebastine dominan dikatalisis oleh CYP2J2. Pertama, pembentukan tingkat hydroxyebastine yang potently dihambat (~ 70%) dengan astemizol, sebuah substrat CYP2J2 dan CYP3A4, dan sedikit dihambat oleh ketokonazol, inhibitor selektif CYP3A-kuat (Gambar 4A). Kedua, menyatakan CYP2J2 manusia dimetabolisme ebastine untuk hydroxyebastine, sedangkan isoform P450 yang lain tidak (Gambar 5A). Kami juga mencatat bahwa rekombinan CYP3A4 manusia terbentuk hydroxyebastine dari ebastine, tetapi kontribusi dari isoform ini untuk metabolisme ebastine muncul kecil: 1) CLint untuk pembentukan hydroxyebastine oleh CYP3A4 adalah 22,5 kali lipat lebih rendah dari yang diperoleh di rekombinan CYP2J2 manusia (Tabel 2); dan 2) inhibitor CYP3A-spesifik (ketoconazole) sedikit terhambat (~ 25%) tingkat pembentukan hydroxyebastine di HLMs (Gambar 4A). Temuan ini konsisten kualitatif dengan pekerjaan sebelumnya yang melaporkan bahwa CYP2J2 adalah hidroksilase ebastine dominan dalam mikrosom usus manusia

Gb.3 Kinetika untuk pembentukan metabolit dari ebastine (A) dan hydroxyebastine (B) dalam rekombinan CYP2J2 manusia. Peningkatan konsentrasi substrat (0-100 M) diinkubasi dengan rekombinan CYP2J2 manusia dan sistem yang menghasilkan NADPH pada 37 ° C selama 30 menit. Kecepatan (pmol / menit / pmol P450) versus ebastine atau konsentrasi hydroxyebastine sangat cocok persamaan Michaelis-Menten atau substrat persamaan inhibisi (lihat "Analisis Data" di bawah Bahan dan Metode). Plot Eadie-Hofstee yang sesuai (kecepatan dibandingkan kecepatan / hydroxyebastine konsentrasi) yang ditampilkan dalam inset. Setiap titik mewakili rata-rata ± S.D. dari incubations rangkap tiga.

Enzim-enzim hati khusus P450 yang terlibat dalam hidroksi-dan metabolisme carebastine belum diidentifikasi sejauh ini. Kedua ketokonazol (CYP3A inhibitor) dan astemizol (substrat CYP2J2 dan CYP3A4) (Matsumoto et al., 2003) nyata menghambat (> 82%) dan pembentukan desalkylebastine (Gambar 4, B dan C). CYP2J2 rekombinan manusia dan CYP3A4 terbentuk carebastine dari hydroxyebastine (Gambar 5B). Mirip dengan pembentukan desalkylebastine dari ebastine, pembentukan desalkylebastine dari hidroksi-dan carebastine dimediasi oleh enzim CYP3A hanya (Gambar 5). Hasil ini menunjukkan bahwa pembentukan desalkylebastine dari hidroksi-dan carebastine jelas dimediasi oleh CYP3A, dan hydroxyebastine dioksidasi untuk carebastine oleh CYP2J2 dan CYP3A4. Ini akan menarik untuk mempertimbangkan enzim yang bertanggung jawab untuk metabolisme terfenadine alkohol, yang memiliki kesamaan kimia struktural untuk hydroxyebastine. Terfenadine alkohol juga memiliki dua jalur yang sama metabolik utama dari karboksilasi dan N-dealkylation. Tidak seperti hydroxyebastine, karboksilasi dari terfenadine alkohol dilaporkan dikatalisis didominasi oleh CYP3A4 (Ling dkk., 1995). Namun, penelitian sebelumnya tidak mengevaluasi CYP2J2. Berdasarkan hasil terakhir (Parikh et al., 2003), yang melaporkan bahwa CYP2J2 merupakan enzim utama yang terlibat dalam terfenadine (analog struktural dari ebastine) hidroksilasi, kita bisa berspekulasi bahwa CYP2J2 serta CYP3A4 mungkin terlibat dalam pembentukan asam terfenadine dari terfenadine alkohol.

Setelah pemberian oral kepada manusia, ebastine hampir sepenuhnya dimetabolisme ke desalkylebastine (Kang et al, 2004;.. Lasseter et al, 2004). Hal ini konsisten dengan temuan dalam vitro, yang melaporkan bahwa ebastine didominasi dimetabolisme menjadi hidroksi-dan dealkylebastine (Hashizume et al., 1998, 2001, 2002). Untuk memperjelas hal ini, kami melakukan dalam studi metabolisme in vitro ebastine serta metabolitnya, hidroksi-dan carebastine, menggunakan mikrosom hati manusia. Jarak intrinsik hydroxyebastine jauh lebih tinggi daripada ebastine dan carebastine (Tabel 1). Rasio kecepatan maksimum dealkylation (Vmax) dari hydroxyebastine juga lebih tinggi daripada ebastine dan carebastine. Berbeda dengan hydroxyebastine, carebastine menunjukkan afinitas enzim rendah dan tingkat metabolisme, sehingga mengakibatkan pembukaan metabolisme relatif rendah. Dalam P450s mengungkapkan, pembentukan hidroksi-dan desalkylebastine dari ebastine yang dikatalisis terutama oleh CYP2J2, dan CYP3A4 masing-masing (Tabel 2). Ketika hydroxyebastine digunakan sebagai substrat, kami menyimpulkan bahwa CYP2J2 dan isoform CYP3A4 bertanggung jawab untuk oksidasi hydroxyebastine, sedangkan CYP3A4 dan CYP3A5 bertanggung jawab untuk pembentukan desalkylebastine. Analisis kinetik menunjukkan bahwa pembersihan intrinsik hydroxyebastine jauh lebih tinggi daripada ebastine dan carebastine (Tabel 1). Hasil ini memberikan bukti bahwa sekali hydroxyebastine terbentuk, itu mengalami biotransformasi cepat untuk menghasilkan mobil-dan desalkylebastine. Carebastine tampaknya relatif metabolik stabil untuk ebastine dan hydroxyebastine, mendukung dalam temuan vivo yang carebastine merupakan metabolit utama ebastine. Selain itu, penting untuk dicatat, bagaimanapun, bahwa CYP2J2 juga dinyatakan dalam jaringan ekstrahepatik seperti jantung, usus, dan ginjal. Oleh karena itu, dalam penelitian in vitro menggunakan jaringan ekstrahepatik metabolisme seperti mikrosom usus diperlukan untuk menentukan kontribusi jaringan ekstrahepatik dalam metabolisme ebastine dan metabolitnya.

Gb.4 Efek isoform P450-selektif inhibitor pada metabolisme ebastine (A), hydroxyebastine (B), dan carebastine (C) dengan mikrosom hati manusia. Ebastine, hydroxyebastine, atau carebastine (5 M) diinkubasi dengan mikrosom hati manusia dikumpulkan di hadapan berbagai inhibitor. Data yang disajikan sebagai rata-rata ± S.D, determinasi rangkap tiga. FF, furafylline (10 M); cou, coumarin (100 M); Tepa, thio-Tepa (5 M); SFZ, sulfaphenazole (10 M); BEN, S-benzylnirvanol (1 M); QND, quinidine (10 M ); DEDC, dietilditiokarbamat (10 M); KCZ, ketoconazole (1 M); ATZ, astemizol (50 M).

Gb.5 Perwakilan plot pembentukan masing-masing metabolit dari ebastine (A), hydroxyebastine (B), dan carebastine (C) dengan cDNAmanusia-mengekspresikan isoform P450. cDNA manusia-mengekspresikan P450s 1A2, 2A6, 2B6, 2C8, 2C9, 2C19, 2D6, 2E1, 2J2, 3A4, dan 3A5 diinkubasi dengan ebastine 5 pM, hydroxyebastine, atau carebastine. Data yang ditampilkan adalah rata-rata eksperimen rangkap tiga.

Identifikasi CYP2J2 sebagai katalis hidroksilasi ebastine dan hydroxyebastine (Gambar 1) dapat memungkinkan kita untuk menggunakan ebastine untuk menyelidiki sistem enzim. Meskipun identifikasi daftar pertumbuhan obat klinis penting (Hashizume et al, 2001;. Matsumoto et al, 2003;.. Parikh et al, 2003) dan zat endogen (Wu et al, 1996;.. Hashizume et al, 2002 ) sebagai substrat dari CYP2J2 in vitro, tetap saja sulit untuk menentukan atau memprediksi konsekuensi klinis karena tidak tersedianya probe spesifik dan aman untuk mengukur aktivitas enzim in vivo. Data kami menunjukkan bahwa hidroksilasi ebastine adalah penanda tertentu dalam reaksi in vitro CYP2J2 dan mungkin memiliki utilitas sebagai alat fenotip untuk mempelajari peran enzim ini dalam metabolisme obat manusia.