IDENTIFIKASI SPESIES NEMATODA SISTA KENTANG · PDF fileidentifikasi spesies nematoda sista...

IDENTIFIKASI SPESIES NEMATODA SISTA KENTANG

(GLOBODERA SPP.) ASAL KABUPATEN BANJARNEGARA DAN

WONOSOBO

SKRIPSI

OLEH ABDI HUDAYYA

05/186156/PN/10404

PROGRAM STUDI ILMU HAMA DAN PENYAKIT TUMBUHAN

JURUSAN HAMA DAN PENYAKIT TUMBUHAN

FAKULTAS PERTANIAN

UNIVERSITAS GADJAH MADA

YOGYAKARTA

2009

iii

KATA PENGANTAR

Syukur Alhamdulillah, penulis panjatkan kehadirat Allah SWT atas rahmat dan

hidayah-Nya sehingga penelitian dan penulisan skripsi yang berjudul “Identifikasi Spesies

Nematoda Sista Kentang ( GLOBODERA SPP.) Asal Kabupaten Banjarnegara dan

Wonosobo” dapat terselesaikan dengan baik.

Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu persyaratan memperoleh derajat kesarjanaan

S1 pada Program Studi Ilmu Hama dan Penyakit Tumbuhan, Fakultas Pertanian, Universitas

Gadjah Mada, Yogyakarta. Penulis menyadari bahwa skripsi ini tidak akan terselesaikan

dengan baik tanpa ada bantuan dari semua pihak. Penulis menyampaikan penghargaan dan

terimakasih kepada:

1. Ayah dan Ibuku (Ansyarullah, S.Pi dan Siti Sarifah) tersayang. Terima kasih yang tidak

terhingga.

2. Prof. Ir. Triwibowo Yuwono, PhD. Selaku Dekan Fakultas Pertanian, Universitas

Gadjah Mada.

3. Prof. Dr. Ir. Y. Andi Trisyono, M.Sc. selaku Ketua Jurusan Hama dan Penyakit

Tumbuhan, Fakultas Pertanian, Universitas Gadjah Mada,

4. Ir. Siwi Indarti, M.P. selaku dosen pembimbing akademik dan Pembimbing Utama

Skripsi. Terima kasih atas segala kesabaran dan motivasi selama penelitian hingga

penulisan skripsi.

5. Ir. Bellarminus Triman, S.U. selaku Dosen Pembimbing Pendamping yang memberikan

saran, bimbingan, dan motivasi selama penelitian hingga penulisan skripsi.

6. Suputa, S.P., M.P. selaku dosen penguji. Terima kasih atas saran, masukan dan motivasi

yang telah diberikan kepada penulis.

7. Prof. Dr. Ir. Siti Subandiyah, M.Agr.Sc. Terima kasih atas tambahan pengetahuan dan

sarannya sehingga menambah pengetahuan penulis.

8. Dr. Tri Joko, S.P., M.Sc. Terima kasih atas saran dan motivasi yang sangat berharga.

9. Adik-adikku (Arfan Hadi dan Auliya Hafiz). Terima kasih atas kasih sayang dan

motivasi dalam mempersembahkan yang terbaik kepada orang tua.

10. Bapak Sugiyo Wahono dan keluarga. Terima kasih atas segala kebaikan selama

menempuh pendidikan di Yogyakarta

iv

11. Rahma, Salman, Wawan, Kholis, Najmu, Sakti, Gilang, Riki, Atu, Windha, Putri, dan

teman-teman HPT’05 atas kebersamaan dalam meraih cita-cita

12. Asnul, Ario, Dipo, Yery, Albert, Sewan, Rizki. Terima kasih atas segala canda tawa dan

kebersamaan.

13. Mbak Isti, Mas Yanuar, Mas Ade, Pak Ahmad, dan Pak Andri. Terima kasih atas segala

pengalaman dan pengetahuan yang telah diberikan kepada saya selama menjalankan

penelitian di Laboratorium.

14. Pak Sutardi dan keluarga beserta teman-teman KKN SubUnit Garung, Wonosobo

(Linggar, Freddy, Ilham, Bayu, Totok, Yerika, Niken dan Nita). Terima kasih atas

pengalaman yang sangat luar biasa.

15. Bapak Slamet Hadi dan Ibu Mukhaeni di Dieng. Terima kasih atas segala kebaikan

selama pengambilan sampel.

16. Semua Dosen, Karyawan, dan Laboran, serta rekan-rekan mahasiswa Hama dan

Penyakit tumbuhan serta semuanya yang tidak dapat saya sebutkan satu persatu. Terima

kasih untuk doa, dorongan semangat, bantuan dan saran kritiknya.

Penulis berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi penulis khususnya

dan para pembaca pada umumnya serta bermanfaat bagi kemajuan dunia pertanian.

Yogyakarta, Oktober 2009

Penulis

v

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL .......................................................................................... i HALAMAN PENGESAHAN ........................................................................... ii KATA PENGANTAR ...................................................................................... iii DAFTAR ISI ..................................................................................................... v DAFTAR TABEL ............................................................................................ vi DAFTAR GAMBAR ..................................................................................... viii DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................... x INTISARI ......................................................................................................... xi ABSTRACT .................................................................................................... xii I. PENDAHULUAN ....................................................................................... 1

A. Latar Belakang .................................................................................. 1

B. Tujuan ............................................................................................... 2

C. Kegunaan .......................................................................................... 2

II. TINJAUAN RUJUKAN .............................................................................. 3

A. Kentang ........................................................................................... 3

B. Nematoda Sista Kentang (Globodera spp.) ..................................... 4

C. Identifikasi Spesies Nematoda Sista Kentang ................................. 6

III. METODOLOGI PENELITIAN ................................................................. 8

A. Waktu dan Tempat Pelaksanaan ...................................................... 8

B. Penentuan Sampel ........................................................................... 8

C. Ekstraksi-isolasi sista .................................................................... 10

D. Identifikasi Morfologi ................................................................... 11

E. Identifikasi molekuler ............................................................................ 16

IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................................ 19

A. Identifikasi Morfologi .................................................................... 19

B. Identifikasi Molekuler ................................................................... 47

V. KESIMPULAN DAN SARAN ................................................................. 50

DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................... 51

LAMPIRAN .................................................................................................... 53

vi

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 3.1 Ukuran bagian-bagian tubuh nematoda L2 NSK ........................................ 15 Tabel 3.2 Ukuran bagian-bagian sista NSK ................................................................ 15

Tabel 4.1 Data identifikasi L2 yang berasal dari Batur ............................................. 19 Tabel 4.2 Data identifikasi L2 yang berasal dari Pasurenan ...................................... 21 Tabel 4.3 Data identifikasi L2 yang berasal dari Karang Tengah ............................. 23 Tabel 4.4 Data identifikasi L2 yang berasal dari Patak Banteng ............................... 24 Tabel 4.5 Data identifikasi L2 yang berasal dari Kejajar .......................................... 26 Tabel 4.6 Data identifikasi L2 yang berasal dari Dieng Wetan ................................. 27

Tabel 4.7 Data identifikasi L2 yang berasal dari Telaga Merdada ............................. 28 Tabel 4.8 Data identifikasi L2 yang berasal dari Pejawaran ...................................... 29 Tabel 4.9 Data identifikasi L2 yang berasal dari Pekasiran ....................................... 30 Tabel 4.10 Data perhitungan Formula de Man dari masing-masing lokasi ............... 31 Tabel 4.11 Populasi sista per 20 g tanah dari masing-masing lokasi ......................... 32 Tabel 4.12 Data Identifikasi sista yang berasal dari Batur ........................................ 33

Tabel 4.13 Data identifikasi sista yang berasal dari Pasurenan ................................. 34 Tabel 4.14 Data identifikasi sista yang berasal dari Karang Tengah ......................... 36 Tabel 4.15 Data identifikasi sista yang berasal dari Patak Banteng .......................... 37 Tabel 4.16 Data identifikasi sista yang berasal dari Kejajar ...................................... 39 Tabel 4.17 Data identifikasi sista yang berasal dari Dieng Wetan ............................ 40 Tabel 4.18 Data identifikasi sista yang berasal dari Telaga Merdada ....................... 42

vii

Tabel 4.19 Data Identifikasi sista yang berasal dari Pejawaran ................................. 43 Tabel 4.20 Data Identifikasi sista yang berasal dari Pekasiran .................................. 45 Tabel 4.21 Hasil identifikasi spesies NSK di Banjarnegara dan Wonosobo ............. 49

viii

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 2.1 Perbedaan stylet G. rostochiensis dan G. pallida ..................................... 7 Gambar 3.1 Areal pertanaman yang menunjukkan gejala serangan NSK ................... 8

Gambar 3.2 Peralatan Peralatan ekstraksi-isolasi sista NSK dari sampel tanah .......................................................................................... 10 Gambar 3.3 Peralatan pemindahan nematoda ke gliserin murni ............................... 12

Gambar 3.4 Peralatan pembuatan preparat ................................................................ 13

Gambar 3.5 Peralatan pengukuran tubuh nematoda stadium ...................................... 14

Gambar 4.1 Larva NSK stadium 2 yang berasal dari Batur ........................................ 20

Gambar 4.2 Larva NSK stadium 2 yang berasal dari Pasurenan ................................ 21

Gambar 4.3 Larva NSK stadium 2 yang berasal dari Karang Tengah ........................ 23

Gambar 4.4 Larva NSK stadium 2 yang berasal dari Patak Banteng ......................... 24

Gambar 4.5 Larva NSK stadium 2 yang berasal dari Kejajar ..................................... 26

Gambar 4.6 Larva NSK stadium 2 yang berasal dari Dieng Wetan ........................... 27

Gambar 4.7 Larva NSK stadium 2 yang berasal dari Telaga Merdada ...................... 28

Gambar 4.8 Larva NSK stadium 2 yang berasal dari Pejawaran ................................ 29

Gambar 4.9 Larva NSK stadium 2 yang berasal dari Pekasiran ................................. 30

Gambar 4.10 Sista dari Kabupaten Banjarnegara dan Wonosobo ............................. 32

Gambar 4.11 Perrenial pattern sista yang berasal dari Batur ..................................... 33

Gambar 4.12 Perrenial pattern sista yang berasal dari Pasurenan .............................. 35

Gambar 4.13 Perrenial pattern sista yang berasal dari Karang Tengah ...................... 36

Gambar 4.14 Perrenial pattern sista yang berasal dari Patak Banteng ........................ 38

Gambar 4.15 Perrenial pattern sista yang berasal dari Kejajar ................................... 39

Gambar 4.16 Perrenial pattern sista yang berasal dari Dieng Wetan .......................... 41

Gambar 4.17 Perrenial pattern sista yang berasal dari Telaga Merdada ..................... 42

ix

Gambar 4.18 Perrenial pattern sista yang berasal dari Pejawaran .............................. 44

Gambar 4.19 Perrenial pattern sista yang berasal dari Pekasiran ............................... 45

Gambar 4.20 Pita DNA hasil identifikasi berdasar DNA menggunakan mesin PCR .......................................................................................... 48

x

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

Lampiran 1. Data Identifikasi L2 dan Sista dari Batur .................................... 53

Lampiran 2. Data Identifikasi L2 dan Sista dari Pasurenan ........................................ 55

Lampiran 3. Data Identifikasi L2 dan Sista dari Karang Tengah ............................... 57

Lampiran 4. Data Identifikasi L2 dan Sista dari Patak Banteng ................................. 59

Lampiran 5. Data Identifikasi L2 dan Sista dari Kejajar ............................................ 61

Lampiran 6. Data Identifikasi L2 dan Sista dari Dieng Wetan ................................... 63

Lampiran 7. Data Identifikasi L2 dan Sista dari Telaga Merdada .............................. 65

Lampiran 8. Data Identifikasi L2 dan Sista dari Pejawaran ....................................... 67

Lampiran 9. Data Identifikasi L2 dan Sista dari Pekasiran ......................................... 69

xi

Intisari

IDENTIFIKASI SPESIES NEMATODA SISTA KENTANG (GLOBODERA SPP.) ASAL KABUPATEN BANJARNEGARA

DAN WONOSOBO

ABDI HUDAYYA 05/186156/PN/10404

Nematoda Sista Kentang (Globodera spp.) adalah nematoda yang dapat menyebabkan kehilangan hasil yang tinggi pada tanaman kentang (50-75%). Identifikasi yang cepat dan tepat terhadap Globodera spp. merupakan elemen kunci dalam pengelolaan NSK serta memberikan peranan dalam menentukan metode pengendalian. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui spesies NSK yang menyerang Kabupaten Banjarnegara dan Wonosobo. Sampel tanah diambil dari 9 lokasi pertanaman berbeda yang terdapat pada 3 kecamatan berbeda. Pengamatan dikhususkan kepada larva stadium 2 dan sista. Beberapa karakter morfologi yang digunakan: panjang tubuh total, lebar tubuh maksimum, panjang stylet, diameter vulva, jarak antara anus dan vulva, Granek rasio, dan jumlah paralel ridges antara anus dan vulva. Berdasarkan pengamatan pada larva stadium 2 dan sista, menunjukkan spesies yang menyerang adalah Globodera rostochiensis dengan beberapa ciri khas yaitu: panjang tubuh total 520-554µ, tipe knob stylet membulat dan terdapat bagian tubuh hialin pada ekor bagian posterior, nilai Granek rasio lebih dari 3 (>3), jumlah paralel ridges antara anus dan vulva terdapat sebanyak lebih dari 14. Identifikasi berdasarkan DNA, Patak Banteng merupakan lokasi terserang Globodera rostochiensis dengan pita DNA 434 bp.

Kata kunci : Identifikasi, Globodera spp., morfologi, DNA

xii

Abstract

IDENTIFICATION SPECIES OF POTATO CYST NEMATODE (GLOBODERA SPP.) FROM BANJARNEGARA AND

WONOSOBO

ABDI HUDAYYA 05/186156/PN/10404

Potato Cyst Nematodes (Globodera spp.) are nematodes which can cause a

major yield loss in potato crops (50-75%). The fast identification and diagnosis of Globodera spp. on potato is the key element for the management of this nematode and for the application of reasonable control methods. The aim of this research was to determine species of Globodera spp. which attack in Banjarnegara and Wonosobo potato plantation. Soil sampel were collected from 9 different potato fields in 3 different sub-district. Observation focused on second stage larvae vermiform and cyst character. Several morphological characters used are; in larvae stage 2: total body lenght, maximum body length, stylet length; in cyst: vulva diameter, distance from anus to vulva, granek ratio and number paralel ridges between anus to vulva. Based on morphological observation on second stage larvae and cyst, the nematode was identified as Globodera rostochiensis with several special characters: total body length 520-554µ with stylet knobs rounded and posterior tail hyaline. Observation on cyst, Granek ratio’s value more than 3 (>3), between anus and vulva have more than 14 paralel ridges. Identification based DNA, Patak Banteng is area which Globodera rostochiensis that shows positive result with DNA band 434 bp.

Key words: DNA, Globodera spp., identification, morphologi

1

I. PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Salah satu faktor risiko dalam usahatani kentang sejak di lapangan sampai di

penyimpanan adalah adanya serangan Organisme Pengganggu Tumbuhan (OPT). OPT

penting yang meresahkan petani kentang pada saat ini adalah Nematoda Sista Kentang

(NSK). Tingkat kerusakan yang disebabkan oleh serangan NSK dapat mencapai 50-75

%, dan mengakibatkan penurunan produksi kentang. Sebagai contoh, potensi produksi

pada lahan seluas 1,5 ha yang biasanya mencapai 24 ton menjadi 12 ton bahkan tinggal

8 ton (Deptan, 2005).

Nematoda Sista Kentang dilaporkan pertama kali ditemukan di Indonesia di

dusun Sumber Brantas, Desa Tulung Rejo, Kecamatan Bumi Aji, Kota Batu Malang,

Jawa Timur (Mulyadi et al., 2003).

Nematoda sista kentang termasuk nematoda yang sangat berbahaya untuk

tanaman kentang. Sista dapat bertahan di dalam tanah selama 10 tahun, sehingga

pertanaman kentang yang terserang NSK tidak menghasilkan produksi yang optimal.

Nematoda jenis ini tersebar di daerah subtropik dan tropik yang berhawa sejuk,

sebagaimana di daerah beriklim sedang di dunia. Nematoda sista kentang (Globodera

spp.) merupakan nematoda terpenting pada pertanaman kentang dan memperoleh

perhatian terbesar dari semua komponen pelaksana kegiatan pertanian, baik petani

hingga peneliti, sehingga penelitian secara mendalam mengenai karakteristik terhadap

nematoda tersebut memberikan tantangan tersendiri. (Jensen et al., 1979 cit Luc et al.,

1995). Identifikasi yang tepat terhadap keberadaan spesies nematoda yang menyerang

suatu pertanaman sangat menentukan keberhasilan peningkatan produksi baik secara

kualitas maupun kuantitas (Mulyadi, 1996).

Ketepatan identifikasi merupakan syarat dalam mengetahui spesies nematoda

sebagai parasit tanaman. Identifikasi pada level genus dan spesies masing-masing

mempunyai masalah dan kesulitan tersendiri. Identifikasi nematoda, meskipun hanya

2

dibatasi level genus dapat sulit dilakukan karena belum secara keseluruhan dikuasasi

para nematologist (Fortuner, 1989).

Identifikasi dan diagnosis yang cepat dan tepat (akurat) terhadap Globodera spp.

pada pertanaman kentang merupakan elemen kunci dalam pengelolaan nematoda parasit

tanaman tersebut serta memberikan peranan dalam menentukan metode aplikasi

pengendalian (Hlaoua, 2008).

Kajian tentang identifikasi spesies Globodera yang menginfeksi dan menyebar

pada pertanaman kentang di Kabupaten Wonosobo dan Banjarnegara perlu dilakukan.

Identifikasi secara cepat dan akurat akan membantu dalam memahami spesies yang

dominan dan telah establish.

B. Tujuan

Mengetahui spesies nematoda sista kentang (Globodera spp.) yang menyerang

pertanaman kentang di beberapa lokasi sentra pertanaman di Kabupaten Wonosobo dan

Banjarnegara.

C. Kegunaan

Penelitian ini diharapkan dapat memberikan tambahan informasi mengenai

penyebaran spesies nematoda sista kentang di Indonesia khususnya di Kabupaten

Banjarnegara dan Wonosobo.

3

II. TINJAUAN RUJUKAN

A. Kentang

Di Indonesia, kentang merupakan salah satu jenis sayuran yang mendapat

prioritas penelitian dan pengembangan. Pengembangan agribisnis kentang sangat

strategis, karena dapat meningkatkan pendapatan dan taraf hidup petani, menunjang

program penganekaragaman (diversifikasi) pangan, meningkatkan komoditas ekspor

non migas dan bahan baku industri pangan, serta mempunyai potensi nilai ekonomi

yang tinggi (Rukmana, 2002).

Kentang adalah tanaman di daerah iklim sedang atau subtropika dan di daerah

tropika pada ketinggian 1000-3000 m dpl (Williams, 1986).

Kentang (Solanum tuberosum L.) berasal dari negara beriklim dingin (Belanda,

Jerman). Meskipun kentang bukan berasal dari Indonesia, akan tetapi konsumennya

cenderung meningkat dari tahun ke tahun karena jumlah penduduk makin bertambah,

taraf hidup masyarakat semakin meningkat, dan wisatawan aing atau orang asing yang

tinggal di Indonesia meningkat. Serangan hama, penyakitdan parasit pada tanaman

kentang merupakan salah satu faktor pembatas produksi kentang. Penurunan

produktivitas kentang dipengaruhi oleh pathogen yang ada pada bibit. Oleh karena itu,

pengelolaan tanaman kentang, pengendalian hama, penyakit dan parasit harus

dilaksanakan secara terpadu dan terkontrol (Soelarso, 1997).

Globodera spp. adalah salah satu genera dari nematoda parasit yang dapat

merugikan pada pertanaman kentang. Pada keadaan serangan berat, keadaan akar

menjadi rusak dan tidak berfungsi secara normal dalam menyerap air dan hara,

pertumbuhan tanaman terganggu, klorosis dan cenderung layu pada kelembaban yang

relatif kering (Widjaja, 1989).

4

B. Nematoda Sista Kentang (Globodera spp.)

1. Morfologi dan daur hidup

G. rostochiensis dalam perkembangannya melalui tahapan stadium telur,

larva, dan dewasa. Siklus hidup dari telur sampai dewasa berlangsung selama 38 -

48 hari. NSK betina berbentuk bulat (globose), sessile, dan motile (bergerak).

Sedangkan NSK jantan berbentuk seperti cacing (vermiform). Globodera memiliki

stylet dengan tipe stomatostylet di mana stylet terdiri atas 3 bagian, yaitu: konus,

tabung dan knob. Globodera tidak memiliki bursa pada ekor. Ekor memiliki 70 %

bagian hyalin. Pada sista tidak ditemukan adanya vulval cone (vulva terlihat

menonjol seperti kerucut), vulval basin hilang dan membentuk single circular

fenestra, sedang pada Heterodera membentuk bifenestra. Daur hidup antara 5-7

minggu tergantung kondisi lingkungan. Produksi telur 200-500 butir. Kemampuan

bertahan hidup pada kondisi lingkungan kurang menguntungkan (tidak ada inang,

suhu sangat rendah, suhu tinggi, dan kekeringan) membentuk sista. Nematoda aktif

kembali setelah kondisi lingkungan sesuai, terutama adanya eksudat akar tanaman

inang. Sista dapat bertahan lebih dari 10 tahun (Deptan, 2005). Telur tersimpan di

dalam sista, akan tetapi tidak terdapat massa telur yang dihasilkan. Ukuran telur

memiliki panjang 101-104 µm, dan lebar 46-48 µm. Telur menetas di dalam sista.

Larva stadium 2 dicirikan dengan bentuk kepala membulat dan memiliki ekor

dengan dua pertiga bagiannya merupakan bagian hialin. G. pallida memiliki

morfologi yang relatif sama dengan G. rostochiensis. Pada juvenil stadium 2, G.

pallida memiliki ukuran yang sedikit lebih besar (CABI, 2000).

2. Biologi

Nematoda Sista Kentang termasuk jenis nematoda yang tergolong dalam

famili Heteroderidae dan berasal dari genus Globodera. Pada tanaman kentang ada

2 (dua) spesies, yaitu: Globodera rostochiensis atau yang dikenal sebagai

Nematoda Sista Kuning (NSK, Golden Cyst Nematode) dan Globodera pallida

(White Potato Cyst Nematode) (CABI, 2000).

5

Pada nematoda betina dewasa tubuhnya membengkak, sebagian besar

tubuhnya keluar dari jaringan akar tetapi kepala tetap berada di dalam jaringan

akar. Nematoda betina yang telah dibuahi tubuhnya menjadi besar dan berbentuk

seperti bola dan secara bertahap warnanya berubah sebelum mati dan akhirnya

menjadi sista. Nematoda sista kentang pada umumnya dapat menyelesaikan satu

generasinya selama musim tanam (Luc et al., 1995).

3. Gejala Kerusakan dan Perkembangan Penyakit

Tidak terdapat gejala spesifik yang mempunyai nilai diagnostik pada bagian

tanaman di atas permukaan tanah yang berasosiasi dengan infeksi nematoda sista

kentang. Walaupun demikian, kerusakan akar menyebabkan stress dan

berkurangnya penyerapan air dan hara sehingga tanaman menjadi kerdil, berwarna

kekuningan dan perubahan warna yang lain, serta daun-daun layu apabila keadaan

kering. Masak awal dan tumbuhnya akar samping yang banyak sering erat

hubungannya dengan infeksi nematoda. Nematoda betina yang berwarna putih dan

kuning dapat diamati pada permukaan akar tanaman kentang yang sedang

berbunga. Nematoda betina dari rostochiensis akan menjadi stadium yang berwarna

kuning, sedang pallida betina tetap berwarna putih sampai mati. Nematoda betina

dapat diamati juga pada permukaan umbi kentang, tetapi hal tersebut jarang terjadi.

Apabila nematoda betina mati akan menjadi sista, kutikulanya akan berwarna

coklat atau berwarna seperti kulit dan berisi telur sebanyak kurang lebih 500 butir

(Deptan, 2005).

Larva stadium dua yang infektif menginfeksi secara langsung pada akar

primer muda atau bagian ujung meristem dari akar sekunder. Selanjutnya masuk ke

dalam cortex secara intraseluler dan menyebabkan kerusakan dan kematian sel.

Larva kerap kali melewati cortex dan menusukkan stiletnya ke dalam sel

endodermis atau pericycle. Selama dua hari melakukan penetrasi, kemudian larva

beristirahat dan makan pada sel cortex dan jaringan stele, sehingga menyebabkan

pembengkakan sel. Kelompok sel yang membengkak tersebut dinamakan syncytia,

yang dikelilingi oleh satu lapisan sel hiperplastik. Dalam perkembangan larva

menjadi stadium tiga, sel cortex di sekeliling larva terpecahkan oleh semakin

6

membesarnya tubuh larva nematoda, terutama bagi perkembangan nematoda

betina. Faktor lingkungan yang mempengaruhi perkembangan penyakit adalah

adalah faktor biotik (tanaman inang dan organisme lain) dan faktor abiotik (tanah,

suhu, kelembaban, senyawa kimia) (Deptan, 2008).

C. Identifikasi Spesies Nematoda Sista Kentang (Globodera spp.)

Identifikasi merupakan kegiatan yang harus dilakukan, sebelum seseorang

mempelajari lebih jauh tentang nematoda. Identifikasi secara benar tentang suatu

spesies yang ditemukan di lapangan, dapat digunakan sebagai dasar untuk menetapkan

strategi pengendalian. Agar kegiatan ini dapat dilakukan dengan baik, diperlukan

pengetahuan mengenai istilah-istilah yang berhubungan dengan deskripsi nematoda

(Deptan, 2008).

Beberapa teknik yang dapat digunakan dalam identifikasi spesies nematoda

sista kentang adalah identifikasi berdasarkan morfologi (morfometri), yaitu identifikasi

berdasarkan ukuran-ukuran bagian tubuh. Beberapa karakter yang dapat digunakan

dalam identifikasi nematoda secara umum adalah tipe kepala (tingkat sklerotisasi pada

rangka kepala), tipe stilet (stomatostylet dan odontostylet), bentuk knob stylet, tipe

esofaghus, posisi intestinum terhadap esofagus, tipe vulva, dan tipe ekor (ada tidaknya

bursa). Sedangkan teknik identifikasi lainnya, yaitu berdasarkan titik isoelektrik protein

dan identifikasi DNA menggunakan PCR (Fleming, 1998).

Identifikasi spesies nematoda sista kentang dapat dilakukan dengan dengan

membandingkan karakteristik morfologi, akan tetapi identifikasi menggunakan metode

ini membutuhkan waktu yang relatif lama sehingga dibutuhkan metode tambahan

metode lain seperti metode identifikasi berdasarkan DNA. Untuk identifikasi spesies

NSK berdasarkan DNA menggunakan PCR, teridentifikasi sebagai G. rostochiensis

pita DNA berada pada 434 pasangan basa (base pare) apabila menggunakan primer

PITSr3, sedangkan pita DNA yang teridentifikasi sebagai G. pallida berada pada 256

bp apabila menggunakan primer PITSp4. Metode ini dapat dilakukan dengan cepat dan

akurat. Perpaduan identifikasi baik secara morfologi maupun molekuler akan

7

memberikan keuntungan berupa hasil identifikasi yang bersifat lebih kompleks dan

dapat dipercaya (Quader, 2008).

Identifikasi berdasarkan karakter morfologi secara umum dalam membedakan

antar spesies nematoda dapat dilihat dari berbagai karakter seperti: bentuk tubuh, tipe

stylet dan bentuk knob, tipe esofagus, kutikula berdasarkan anulasi serta berbagai

parameter pendukung seperti warna dan ukuran tubuh (Dropkin, 1991).

Identifikasi spesies pada genus Globodera sebagian besar berdasarkan karakter

morfologi pada nematoda betina, yaitu pada sista juvenil (larva) stadium dua (Siddiqi,

1986).

Perbedaan utama kedua spesies Globodera terletak pada warna sista dewasa

betina dan stiletnya. Betina dewasa G. rostochiensis berwarna putih kemudian menjadi

kuning keemasan, sedangkan G. pallida dewasa betinanya berwarna putih tetapi pada

beberapa populasi ada yang berubah menjadi krem. Stilet G. rostochiensis memiliki

pangkal (knob) membulat ke arah posterior, sedangkan G. pallida meruncing ke arah

anterior, seperti ditunjukkan pada Gambar 2.1. (Deptan, 2005).

Sumber : www. fadil.gov.au Gambar 2. 1. Perbedaan knob stylet Globodera rostochiensis dan Globodera pallida.

Beberapa karakter morfologi yang dapat digunakan dalam membedakan spesies

Globodera diantaranya: jumlah anulasi antara anus dan vulva, panjang dan tipe knob

stilet (Hlaoua, 2008).

8

III. METODE PENELITIAN

A. Waktu dan Tempat Pelaksanaan

Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Februari 2009 sampai dengan Juni 2009

bertempat di Laboratorium Nematologi, Jurusan Hama dan Penyakit Tumbuhan,

Fakultas Pertanian, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.

B. Penentuan Sampel

Sampel diambil dengan menggunakan kombinasi metode Acak berkelompok

(Cluster random sampling) dan metode Purposive Sampling. Obyek pengamatan

dilakukan pengelompokan atas satu atau lebih petak alami pada beberapa lokasi

pertanaman dengan batasan kelurahan pada satu kecamatan. Selanjutnya pada petak

alami dilakukan pengambilan sampel secara acak pada masing-masing lokasi. Sampel

tanah diambil dari areal pertanaman yang menunjukkan gejala terserang Nematoda

Sista Kentang. Gejala tersebut berupa adanya tanaman menguning yang bersifat spot-

spot dan tidak menyeluruh, seperti pada Gambar 3.1.

Gambar 3.1. Areal pertanaman (Batur) yang menunjukkan gejala terserang NSK.

9

Lokasi yang merupakan tempat pengambilan sampel antara lain:

1. Batur, Kecamatan Batur, Kabupaten Banjarnegara (1437-2212 mdpl)

2. Pasurenan, Kecamatan Batur, Kabupaten Banjarnegara (1587-2150 mdpl)

3. Karang Tengah , Kecamatan Batur, Kabupaten Banjarnegara

(1887-2300 mdpl)

4. Patak Banteng, Kecamatan Kejajar, Kabupaten Wonosobo (1962-2575 mdpl)

5. Kejajar, Kecamatan Kejajar, Kabupaten Wonosobo (1300-2112 mdpl)

6. Dieng Wetan, Kecamatan Kejajar, Kabupaten Wonosobo (1300-2575 mdpl)

7. Telaga Merdada, Kecamatan Batur, Kabupaten Banjarnegara

(1437-2212 mdpl)

8. Pejawaran, Kecamatan Pejawaran, Kabupaten Banjarnegara

(1050-1437 mdpl)

9. Pekasiran, Kecamatan Batur, Kabupaten Banjarnegara (1050-2200 mdpl)

10

C. Ekstraksi-Isolasi Sista

Untuk mendapatkan sista yang akan digunakan pada identifikasi morfologi atau

molekuler, terlebih dahulu dilakukan ekstraksi-isolasi sista dari sampel tanah dengan

alat-alat dan bahan seperti pada Gambar 3.2. Tanah yang akan diekstrak dituang ke

dalam saringan 250 µ untuk kemudian disaring. Tanah yang telah disaring ditiriskan di

atas piring yang dilapisi tisu. Selanjutnya diambil sista menggunakan pinset. Untuk

identifikasi morfologi dari masing-masing lokasi diambil 5 (lima) sista yang

berkualitas baik, sedangkan untuk identifikasi molekuler dari masing-masing lokasi

diambil sebanyak 80 sista.

Gambar 3.2. Peralatan ekstraksi-isolasi sista NSK dari sampel tanah: (a) saringan 1mm,

(b) saringan 250µm, (c) tisu, (d) piring kecil, (e) pinset, (f) botol semprot.

11

D. Identifikasi Morfologi

Stadium yang digunakan dalam identifikasi morfologi pada penelitian ini

adalah larva stadium 2 dan stadium sista.

1. Pemindahan nematoda ke gliserin murni

Sebanyak 5 sista yang telah diambil dari masing-masing lokasi dipecah

untuk kemudian diambil nematoda L2 sebanyak 5 ekor dari masing-masing

sista. Nematoda L2 yang telah didapat selanjutnya difiksasi dengan larutan

FAA untuk pengawetan sementara. Setelah itu dilakukan pemindahan nematoda

ke gliserin murni. Pemindahan nematoda ke gliserin murni berfungsi untuk

mencegah terjadinya kerusakan pada tubuh nematoda yang akan digunakan

dalam pembuatan preparat awetan. Nematoda yang telah difiksasi dipindahkan

ke dalam gelas sirakus (Gambar 3.3.a) yang sebelumnya telah diisi dengan

larutan fiksatif sebanyak 2 ml. Tutup sebagian permukaan gelas sirakus dengan

lempeng kaca. Gelas sirakus yang telah berisi nematoda dimasukkan ke dalam

desikator yang berisi alkohol 95% (Gambar 3.3.b). Desikator dimasukkan ke

dalam oven (Gambar 3.3.c)dan panaskan pada suhu 40°C selama 12 jam.

Setelah 12 jam desikator dikeluarkan dari oven. Gelas sirakus yang ada

dikeluarkan dan dibuka tutupnya kemudian ditambahkan larutan Seinhorst I (95

cc alkohol + 5 cc gliserin) sebanyak 2 – 3 ml. Kemudian sirakus dimasukkan ke

dalam oven dan dipanaskan pada suhu 40°C selama 3 jam. Setelah 3 jam gelas

sirakus dikeluarkan dari oven kemudian ditambahkan 2-3 ml larutan Seinhorst

II (50 ml alkohol + 50 ml gliserin) dan dipanaskan pada suhu 40°C di dalam

oven selama 3 jam. Gelas sirakus yang berisi nematoda dalam gliserin murni

dikeluarkan dari oven. Simpan di dalam esikator yang berisi CaCO3. CaCO3

bersifat absorben yang berfungsi untuk menyerap uap air dalam desikator.

a

12

a

b c

Gambar 3.3.Peralatan pemindahan nematoda L2 NSK ke gliserin murni: (a) gelas sirakus, (b) desikator, (c) oven.

2. Pembuatan preparat awetan L2

Preparat L2 berfungsi sebagai objek dalam melakukan pengukuran

dimensi tubuh namatoda. Disiapkan gelas benda berukuran 7,2 cm x 2,7 cm

(Gambar 3.4.f) dan gelas penutup berukuran 24 mm x 24 mm. Dibuat lingkaran

parafin di atas gelas benda dengan pencetak cincin parafin yang dipanaskan.

Gelas benda yang telah dicetak cincin parafin (Gambar 3.4.d) di atasnya diberi

satu tetes gliserin di tengah-tengah cincin parafin. Kait dua ekor nematoda L2

(yang telah diproses ke dalam gliserin murni). Ambil sebatang potongan glass

wool (Gambar 3.4.e). Diameter glass wool lebih besar dari pada nematoda yang

akan dibuat preparat dan potong menjadi 3 bagian. Letakkan ketiga bagian

potongan glass wool tersebut di dekat gliserin dan atur radier 3 arah menempel

pada cincin parafin (di luar nematoda yang akan ditempatkan). Tutup nematoda

dengan meletakkan gelas penutup secara hati-hati di atas cincin parafin pada

gelas benda tersebut. Kemudian dilakukan pemanasan gelas benda beserta

nematoda di atas lempeng pemanas (Gambar 3.4.a) sampai cincin parafin leleh

dan rata pada gelas penutup. Angkat dan dinginkan beberapa saat, selanjutnya

olesi sepanjang tepi gelas penutup dengan cat kuku.

13

Gambar 3.4. Peralatan untuk pembuatan preparat: (a) lempeng pemanas, (b) lampu bunsen, (c) parafin, (d) pencetak cincin parafin, (f) glass wool, (g) objek glass.

3. Pembuatan preparat perrenial pattern

Pembuatan preparat perrineal pattern berfungsi untuk mengetahui

jumlah paralel ridges antara anus dan vulva serta dapat digunakan untuk

mendapatkan Granek ratio, yaitu suatu formula yang dapat digunakan untuk

mengidentifikasi spesies dari genus Globodera. Granek ratio didapatkan dengan

membandingkan nilai dari jarak anus hingga diameter terluar vulva dan nilai

diameter vulva.

Parameter yang digunakan untuk identifikasi terhadap sista dalam

penelitian ini adalah: panjang tubuh tidak termasuk leher, panjang kepala, lebar

tubuh, jarak dari anus ke tepi terdekat fenestra, diameter vulva, paralel ridges

dari anus-vulva, dan Granek ratio.

4. Pengukuran bagian-bagian tubuh nematoda L2 untuk memperoleh nilai- nilai menurut formula J.G. de Man (Hooper, 1986)

Formula J.G.de Man merupakan salah satu metode yang dapat

digunakan dalam mengukur dimensi nematode vermiform. Dimensi nematoda

vermiform berperan dalam identifikasi nematoda secara proporsional.

14

Pengukuran ukuran tubuh nematoda L2 nematoda dilakukan dengan

menggunakan pita skala dan kurvimeter (alat untuk mengukur panjang garis

lengkung). Pita skala digunakan untuk pengukuran secara langsung, sedangkan

kurvimeter digunakan untuk pengukuran secara tidak langsung. Pada

pengukuran langsung menggunakan pita skala (Gambar 3.5.b). Gambar

nematoda yang telah dibuat secara skematis, diukur meggunakan pita skala

berdasarkan pengamatan micrometer menggunakan berbagai macam

perbesaran. Pada pengukuran tidak langsung,

terlebih dahulu dibuat daftar yang menyatakan hubungan antara jumlah skala

pada kurvimeter (Gambar 3.5.a) dan ukuran panjang pada micrometer (µ)

(Gambar 3.5.c) pada perbesaran tertentu.

c

a b

Gambar 3.5. Peralatan pengukuran tubuh nematoda: (a) kurvimeter, (b) pita skala

dengan berbagai perbesaran, (c) micrometer.

Di bawah ini adalah Formula de Man (Hooper, 1986) yang digunakan

dalam penentuan rasio bagian-bagian tubuh nematoda:

a =

b =

b’ =

c =

15

Parameter yang digunakan untuk identifikasi terhadap larva stadium 2

dalam penelitian ini adalah: panjang tubuh total, lebar tubuh maksimum,

panjang stylet, panjang esophagus dari ujung anterior sampai perbatasan

esophagus dengan usus, panjang esophagus dari ujung anterior sampai

esophagus yang overlaping dengan usus, panjang ekor, dan panjang ekor hialin.

Tabel di bawah ini adalah perbedaan beberapa karakter ukuran tubuh

antara G.rostochiensis dan G. pallida (CABI, 2000). Data-data di bawah ini

juga digunakan sebagai dasar identifikasi morfometri pada penelitian ini.

Tabel 3.1. Ukuran bagian-bagian tubuh nematoda L2 NSK

Spesies Panjang tubuh

Panjang stylet

Panjang ekor hialin

Bentuk knob sylet

G. rostochiensis 468±100µ 22±0.7µ 26.5±12 µ Membulat G. pallida 486±2.8µ 23±1µ 26.6±4.1µ Meruncing

Sumber : CABI, 2000

Tabel 3.2. Ukuran bagian-bagian sista NSK

Sumber: CABI, 2000

SPESIES Panjang

sista Panjang leher

Lebar sista

Jarak anus-vulva

Diameter vulva

Granek ratio

Anulasi anus-vulva

G. rostochiensis 445±50µ 104±19µ 382±60µ 66.5±10.3µ 19±2µ 3.6±0.8µ 12-31(>14)

G. pallida 579±70µ 188±20µ 534±66µ 50±13.4µ 24.5±5µ 2.2±1 µ 8-20 (<14)

16

e

E. Identifikasi Molekuler

1. Ekstraksi DNA Nematoda Sista Kentang menggunakan metode CTAB (Zhou et al, 2007)

Sebanyak 10-100 sista, dimasukkan ke dalam tabung eppendorf 1,5 ml,

tambahkan larutan Buffer DNA CTAB sebanyak 50-100 µl (CTAB 2 %, NaCl

1,4 M, EDTA 100 mM, Tris-Cl 50 mM pH 8, mercaptoethanol 1 %). Kemudian

sista digerus menggunakan spatula plastic untuk memecah sista dan melisiskan

sel. Selanjutnya tambahkan larutan 250-400 µl CTAB dan campur dengan baik.

Kemudian sampel diinkubasi pada suhu 65°C selama 30 menit dengan dikocok

setiap 10 menit. Tambahkan CIAA (Chloroform Isoamylic Alcohol 24 : 1)

dengan volume yang sama, kemudian tabung divortex atau dikocok agar

tercampur dengan sempurna selama 1 menit. Sampel terus disentrifus pada

kecepatan 12.000 rpm selama 10 menit. Kemudian supernatan diambil dan

dimasukkan ke dalam tabung yang baru, tinggalkan kotoran yang ada.

Tambahkan etanol absolut dingin (2 kali volume) sehingga tercampur dengan

baik. Inkubasikan sampel selama beberapa jam atau biarkan semalam pada suhu

-20 °C. Seterusnya sampel disentrifus pada kecepatan 12.000 rpm selama 15

menit, buang supernatannya dengan cara dituang kemudian kumpulkan pellet

DNA yang sudah ada. Pellet dikeringkan dengan menambahkan 500-1000 µl

etanol dingin 70 % kemudian disentrifus pada kecepatan 12.000 rpm selama 10

menit. Supernatannya dibuang, pellet DNA nya dikering anginkan atau

menggunakan pompa vacuum. Pellet sampel DNA selanjutnya dilarutkan ke

dalam 20-30 µl buffer TE (Tris-Cl, mM, EDTA 1 mM pH 8 atau dilarutkan ke

dalam aquabides).

17

2. Pengujian kualitas DNA menggunakan elektroforesis

Untuk memastikan apakah DNA yang digunakan pada proses PCR

(Polymerase Chain Reaction) berkualitas baik, dapat diuji menggunakan

elektroforesis, yaitu dengan mengambil 1µl DNA sampel ditambah dengan 5µl

loading buffer. Selanjutnya dirunning pada agarose gel konsentrasi 1%

menggunakan elektroforesis selama selama 45 menit dengan tegangan 75 volt.

DNA yang berkualitas baik akan terlihat berpendar ketika diamati

menggunakan Ultra Violet transilluminator. Pemisahan DNA dilakukan dengan

menggunakan elektroforesis gel. Molekul DNA terpisah berdasarkan ukuran

ketika dilewatkan pada matriks gel dengan aliran listrik. DNA memiliki

muatan negatif, dan saat berada dalam aliran listrik, akan bermigrasi melalui gel

menuju kutub positif. Molekul yang berukuran besar, memiliki kesulitan

melewati pori-pori gel sehingga bermigrasi lebih lambat melalui gel

dibandingkan DNA yang berukuran lebih kecil. Setelah elektroforesis selesai,

molekul DNA divisualisasi dengan pewarna fluorescent seperti ethidium yang

berikatan dengan DNA dan berada di antara basa-basa DNA.

3. PCR DNA sampel

Primer yang digunakan dalam identifikasi molekuler nematoda sista

kentang menggunakan PCR yaitu: PITSr3 (AGCGCAGACATGCCGCAA)

sebagai primer untuk rostochiensis, PITSp4 (ACAACAGCAATCGTCGAG)

untuk pallida dan ITS5 (GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG) untuk

nematoda secara universal. Bahan-bahan (komposisi) yang digunakan sebelum

melakukan PCR adalah:

a. MMR (Mega Mix Royal) : 12,5 µl

b. Primer ITS 5 : 2 µl

c. Primer PIT Sr 3 : 2 µl

d. Primer Sp 4 : 2 µl

e. DNA sampel : 2 µl

f. Aquabides : 4,5 µl

Jumlah : 25 µl

18

PCR dilakukan dalam 35 siklus, dengan tahapan pemisahan utas DNA

pada suhu 94°C selama 30 detik, penempelan primer pada DNA template pada

suhu 55°C selama 30 detik, dan sintesis DNA pada suhu 72°C.

Selanjutnya dianalisis menggunakan elektroforesis. Menurut Quader

(2008), Pita DNA hasil PCR yang teridentifikasi sebagai G. rostochiensis

berada sekitar 434 bp, sedangkan G. pallida berada pada 256 bp.

19

IV. HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Identifikasi Morfologi

1. Identifikasi Nematoda Larva Stadium 2

Parameter yang digunakan dalam identifikasi morfologi Nematoda Sista

Kentang L2 adalah: panjang tubuh total, lebar tubuh maksimum, panjang stylet,

panjang esophagus dari ujung anterior sampai perbatasan esophagus dengan

usus, panjang esophagus dari ujung anterior sampai esophagus yang overlaping

dengan usus, panjang ekor, dan panjang bagian tubuh posterior yang tampak

hialin. Di bawah ini adalah hasil identifikasi L2 dari masing-masing lokasi

pengambilan sampel.

a. Batur

Hasil pengamatan dan pengukuran bagian-bagian tubuh NSK stadium 2

secara lengkap dari Batur terlampir pada lampiran 1. Tabel berikut

menunjukkan hasil analisis bagian-bagian tubuh NSK stadium 2.

Tabel 4.1. Data identifikasi L2 NSK yang berasal dari Batur

Parameter Range (µ) Rata-rata SD

Panjang tubuh total 520-560 541.3 12.8 Lebar tubuh maksimum 20-28 24 2.4

Panjang stylet 20-35 25.2 3.8 Panjang esophagus dari ujung anterior sampai perbatasan esophagus dengan

usus 114-140 126.12 7.11

Panjang esophagus dari ujung anterior sampai esophagus yang overlaping

dengan usus 126-160 143.8 11.4

Panjang ekor 52-65 56.2 2.5 Panjang ekor hialin 20-40 28.72 5.4

20

Gambar 4.1. Larva NSK stadium 2 yang berasal dari Batur: (a) knob stylet membulat ke arah posterior, (b) bagian tubuh posterior nematoda (ujung ekor yang tampak hialin) dan (c) anus.

Berdasarkan data pada Tabel 4.1, diperoleh nilai yang menunjukkan

spesies Globodera rostochiensis, tetapi dari nilai tersebut juga terdapat nilai

dengan kisaran yang dapat dimiliki oleh spesies Globodera pallida. NSK

stadium 2 yang berasal dari desa Batur. Sebagai contoh pada panjang stylet

NSK stadium 2 yang berasal dari Batur, berdasarkan pengukuran diperoleh

panjang stylet sebesar 25,2 ± 3,8µ (Lampiran 1). Menurut Hooper (1973), G.

rostochiensis memiliki panjang stylet 22,9 ± 1,2 µ, sedangkan G. pallida 27,1 ±

1,1 µ. Nilai yang diperoleh dari hasil identifikasi dimana berada di antara

keduanya menyebabkan dibutuhkannya data tambahan untuk memastikan jenis

spesies. Pada buku yang sama Hooper menjelaskan G. rostochiensis memiliki

knob stylet dengan bentuk yang membulat ke arah posterior sedangkan pada G.

pallida meruncing ke arah anterior. Seperti tertera pada Gambar 4.1, NSK

stadium 2 yang menyerang pertanaman kentang di Batur adalah Globodera

dengan bentuk knob stylet membulat ke arah posterior, sehingga dapat

disimpulkan bahwa Globodera yang menyerang lokasi ini adalah spesies

Globodera rostochiensis.

21

b. Pasurenan


secara lengkap dari Pasurenan terlampir pada lampiran 2. Tabel berikut


Tabel 4.2. Data Identifikasi L2 NSK yang berasal dari Pasurenan

Gambar 4.2. Larva NSK stadium 2 yang berasal dari Pasurenan: (a) knob stylet membulat ke arah posterior, (b) bagian tubuh posterior nematoda (ujung ekor yang tampak hialin) dan (c) anus.

Di daerah Pasurenan, spesies Nematoda Sista Kentang yang menyerang

lokasi ini diduga Globodera rostochiensis. Keadaan ini ditunjukkan dengan

data-data yang didapat dari pengukuran berbagai macam parameter merujuk

pada ciri-ciri yang dimiliki oleh G. rostochiensis (Tabel 4.2.). Dugaan ini

diperkuat dengan pengamatan bentuk stylet dengan knob yang membulat ke

arah posterior, sedangkan Globodera pallida memiliki knob stylet yang

Parameter Range (µ) Rata-rata SD Panjang tubuh total 532-560 546.68 8.2

Lebar tubuh maksimum 20-28 24.56 2.4 Panjang Stylet 20-30 25.2 3

Panjang esophagus dari ujung anterior sampai perbatasan esophagus dengan

usus 114-140 129 6


dengan usus 134-156 151.44 4.8


22

meruncing ke arah anterior. Pasurenan merupakan lokasi dengan populasi sista

terkecil, rata-rata hanya terdapat 2 sista per 20 g tanah. Keadaan ini disebabkan

oleh keadaan areal pertanaman di mana selain terserang NSK, pada pertanaman

yang sama juga terserang penyakit hawar daun yang disebabkan oleh jamur

Phytophtora infestans (Semangun, 1996). Penyakit hawar daun kentang lebih

dominan di daerah ini. Lebih dominannya serangan hawar daun disebabkan

oleh perkembangan penyakit yang lebih cepat pada tanaman kentang ketika

terserang Phytopthora infestans dibandingkan apabila terserang Nematoda Sista

Kentang. Gejala penyakit apabila terserang hawar daun terlihat ketika k3ntang

berumur 20 hari, sedangkan apabila terserang NSK, gejala terlihat ketika

kentang berumur 50-60 hari.

23

c. Karang Tengah


secara lengkap dari Karang Tengah terlampir pada lampiran 3. Tabel berikut


Tabel 4.3. Data Identifikasi L2 NSK yang berasal Karang Tengah

Gambar 4.3. Larva NSK stadium 2 yang berasal dari Karang Tengah: (a) knob stylet membulat ke arah posterior, (b) bagian tubuh posterior nematoda (ujung ekor yang tampak hialin) dan (c) anus.

Kisaran nilai yang sangat relatif pada berbagai ukuran tubuh antara

kedua spesies NSK menyebabkan pengamatan terhadap bentuk knob stylet

mutlak dibutuhkan dalam identifikasi spesies Globodera. Sering ditemui

keadaan di mana nilai yang diperoleh tidak terlalu dapat digunakan dalam

menentukan spesies yang diidentifikasi. Keadaan ini disebabkan oleh kisaran

nilai ukuran tubuh yang sangat berdekatan antara kedua spesies, terlebih nilai

yang didapat dari hasil kegiatan identifikasi juga tidak mutlak atau berada pada

Parameter Range (µ) Rata-rata SD Panjang tubuh total 540-565 550,64 6.7

Lebar tubuh maksimum 20-26 23.9 1.7 Panjang Stylet 24-30 25.7 1.6


usus 114-134 124.4 4.9


dengan usus 132-150 141.56 5.1


24

dua kisaran yang dimiliki kedua spesies. Oleh karena itu pengamatan terhadap

bentuk stylet sangat dibutuhkan karena terdapat perbedaan yang jelas dari

bentuk knob stylet dari masing-masing spesies. Untuk sampel yang berasal dari

Karang Tengah, NSK yang menyerang juga memiliki knob stylet dengan bentuk

yang membulat ke arah posterior.

d. Patak Banteng


secara lengkap dari Patak Banteng terlampir pada lampiran 4. Tabel berikut


Tabel 4.4. Data Identifikasi L2 NSK yang berasal Patak Banteng

Gambar 4.4. Larva NSK stadium 2 yang berasal dari Patak Banteng: (a) knob stylet membulat ke arah posterior, (b) bagian tubuh posterior nematoda (ujung ekor yang tampak hialin) dan (c) anus.

Parameter Range (µ) Rata-rata SD Panjang tubuh total 540.56 552.3 5.6



usus 130-150 137.4 5.6


dengan usus 142-162 150 5.5

Panjang ekor 52-60 55 2 Panjang ekor hialin 28-36 31.9 2.5

25

Ciri-ciri yang sama setelah dilakukan pengamatan parameter dalam

pengidentifikasian spesies NSK yang menyerang lokasi pertanaman kentang di

daerah Patak Banteng juga mengidentifikasikan bahwa spesies yang menyerang

adalah G. rostochiensis.

26

e. Kejajar


secara lengkap dari Kejajar terlampir pada lampiran 5. Tabel berikut


Tabel 4.5. Data Identifikasi L2 NSK yang berasal Kejajar

Gambar 4.5. Larva NSK stadium 2 yang berasal dari Kejajar: (a) knob stylet membulat ke arah posterior, (b) bagian tubuh posterior nematoda (ujung ekor yang tampak hialin) dan (c) anus.

Berdasarkan data (Tabel 4.5), kemudian disesuaikan pustaka menurut

Hooper (1973). Spesies nematoda sista kentang yang menyerang Kejajar adalah

Globodera rostochiensis. Data-data yang ada juga didukung dengan

pengamatan-pengamatan lain, seperti bentuk knob stylet.


Lebar tubuh maksimum 22-26 24.7 1 Panjang Stylet 24-30 26.9 1.9


usus 130-150 141.6 6


dengan usus 148-162 155.7 3.8

Panjang ekor 52-58 55.1 1.8 Panjang ekor hialin 28-34 30.2 2

27

f. Dieng Wetan


secara lengkap dari Dieng Wetan terlampir pada lampiran 6. Tabel berikut


Tabel 4.6. Data Identifikasi L2 NSK yang berasal Dieng Wetan

Gambar 4.6 Larva NSK stadium 2 yang berasal dari Dieng Wetan: (a) knob stylet membulat ke arah posterior, (b) bagian tubuh posterior nematoda (ujung ekor yang tampak hialin) dan (c) anus.

Globodera rostochiensis juga merupakan spesies yang menyerang

pertanaman kentang di Dieng Wetan. Ciri-ciri dan karakter yang

mengidentifikasikan ke arah G. rostochiensis didapat dari daerah ini (Tabel

4.6).




usus 130-150 141.6 6


dengan usus 148-162 155.72 3.8


28

g. Telaga Merdada


secara lengkap dari Telaga Merdada terlampir pada lampiran 7. Tabel berikut


Tabel 4.7. Data Identifikasi L2 NSK yang berasal Telaga Merdada

Gambar 4.7. Larva NSK stadium 2 yang berasal dari Telaga Merdada: (a) knob stylet membulat ke arah posterior, (b) bagian tubuh posterior nematoda (ujung ekor yang tampak hialin) dan (c) anus.

Spesies yang menyerang di daerah ini juga merupakan Globodera

rostochiensis. Ciri dan karakter dari rostochiensis juga ditemukan pada NSK

yang berasal dari daerah ini.


Lebar tubuh maksimum 22-26 24 1.4 Panjang Stylet 24-30 25.8 2.3


usus 134-148 141.7 3.9


dengan usus 148-156 153.1 2.6


29

h. Pejawaran


secara lengkap dari Pejawaran terlampir pada lampiran 8. Tabel berikut


Tabel 4.8. Data Identifikasi L2 NSK yang berasal Pejawaran

Gambar 4.8 Larva NSK stadium 2 yang berasal dari Pejawaran: (a) knob stylet membulat ke arah posterior, (b) bagian tubuh posterior nematoda (ujung ekor yang tampak hialin) dan (c) anus.

Untuk lokasi Pejawaran, dari hasil identifikasi L2 terhadap berbagai

parameter. Disimpulkan spesies yang menyerang juga merupakan Globodera

rostochiensis.




usus 124-138 130 4


dengan usus 138-156 148.7 5.3


30

i. Pekasiran


secara lengkap dari Pekasiran terlampir pada lampiran 9. Tabel berikut


Tabel 4.9. Data Identifikasi L2 NSK yang berasal Pekasiran

Gambar 4.9. Larva NSK stadium 2 yang berasal dari Pekasiran: (a) knob stylet membulat ke arah posterior, (b) bagian tubuh posterior nematoda (ujung ekor yang tampak hialin) dan (c) anus.

Globodera rostochiensis juga menyerang pertanaman kentang di daerah

Pekasiran. Data yang didapat selama pengamatan paremeter-parameter yang

ada mengarahkan kepada G. rostochiensis. Penetapan G. rostochiensis sebagai

spesies NSK yang menyerang Pekasiran didukung dengan hasil pengamatan

lain, seperti bentuk knob stylet dan gejala kerusakan serta bentuk sista. Keadaan

ini sama seperti yang dilakukan di daerah lain dalam kegiatan identifikasinya.

Parameter Range (µ) Rata-rata SD Panjang tubuh total 552-560 556.2 2

Lebar tubuh maksimum 22-26 24.3 1.5 Panjang Stylet 24-28 26 1.3


usus 124-144 132 5.2


dengan usus 136-156 147 5.8


31

Berikut hasil perhitungan beberapa formulasi dari Formula De Man dari

masing-masing lokasi.

Tabel 4.10. Data penghitungan mengunakan Formula de Man dari tiap-tiap lokasi Lokasi a b b' c

Batur 22.55 4.29 3.76 9.63

Pasurenan 22.25 4.23 3.6 9.68 Karang Tengah 23.03 4.42 3.88 9.92 Patak Banteng 24.11 4.01 3.82 10.04

Kejajar 22.34 3.89 3.54 10.01 Dieng wetan 23.02 3.89 3.6 10.29

Telaga Merdada 23.27 4.27 3.83 9.73 Pejawaran 23.33 4.27 3.73 9.54 Pekasiran 22.8 4.21 3.78 9.52

Formula De Man merupakan salah satu cara yang dapat digunakan

untuk mengetahui dimensi nematoda. Dimensi nematoda adalah suatu sistem

pengukuran yang dipergunakan dalam identifikasi nematoda secara

proporsional

32

2. Identifikasi Sista.

Pada penelitian ini parameter yang digunakan dalam identifikasi

terhadap sista adalah : Panjang tubuh termasuk leher, panjang kepala, lebar

tubuh, jarak dari anus ke tepi terdekat fenestra, diameter vulva, jumlah paralel

ridges dari anus-vulva, Granek ratio; yaitu perbandingan antara jarak anus-

vulva dan diameter vulva.

Gambar 4.10. Sista dari kabupaten Banjarnegara dan Wonosobo.

Sista yang berasal dari Wonosobo dan Banjarnegara secara keseluruhan

berwarna coklat kehitaman. Pada saat ketika di lahan dan belum berubah

menjadi sista berwarna kuning keemasan. Populasi sista berbeda-beda untuk

setiap lokasi pengambilan sampel. Dari hasil penghitungan populasi

sista.Karang tengah dan Telaga Merdada merupakan dua lokasi dengan

serangan terparah. Di bawah ini adalah populasi sista per 20 g tanah untuk

masing-masing lokasi.

Tabel 4.11. Populasi sista per 20 g tanah dari masing-masing lokasi

Lokasi Ulangan

Rata-rata 1 2 3

Batur 9 6 7 7 Pasurenan 2 3 0 1

Patak Banteng 1 8 7 5 Kejajar 3 4 2 3

Dieng Wetan 18 6 4 9 Karang Tengah 24 28 23 25 Telaga Merdada 40 21 26 29

Pejawaran 5 6 4 5 Pekasiran 17 10 11 13

33

Berikut hasil identifikasi karakter morfologi berdasarkan pengamatan

pada sista dari masing-masing lokasi :

a. Batur

Hasil pengamatan dan pengukuran bagian-bagian tubuh NSK stadium

sista secara lengkap dari Batur terlampir pada lampiran 1. Tabel berikut

menunjukkan hasil analisis bagian-bagian tubuh NSK stadium sista.

Tabel 4.12. Data identifikasi sista yang berasal dari Batur Parameter Range (µ) Rata-rata SD

Panjang tubuh tidak termasuk leher

938-1002 974 25.6

Panjang Kepala 94-102 97.6 3.2

Lebar Tubuh 468-688 574 87.9 Jarak dari anus ke tepi

terdekat fenestra 48-68 60.2 8.7

Diameter Vulva 17-19 17.6 0.8 Paralel ridges dari

anus ke vulva 15-17 16.2 0.8

Granek ratio 2.8-4 3.4 0.5

Gambar 4.11 Perrenial pattern sista yang berasal dari Batur: (a) vulva, (b) anus, (c) paralel ridges antara anus dan vulva, (d) diameter vulva.

Berdasarkan data hasil identifikasi sista yang berasal dari Batur (Tabel

4.12), nilai-nilai yang diperoleh menunjukkan spesies NSK yang menyerang

34

pertanaman kentang di Batur adalah Globodera rostochiensis. Nilai-nilai hasil

identifikasi yang dibutuhkan dalam membedakan antara G. rostochiensis dan G.

pallida juga dapat dilihat dari data hasil identifikasi. Pengukuran terhadap nilai

Granek ratio misalnya, sista yang berasal dari pertanaman kentang di Batur

memiliki Granek ratio dengan nilai lebih besar dari 3. Dari berbagai pustaka

disebutkan bahwa antara rostochiensis dan pallida memiliki nilai Granek ratio

yang berbeda. G. rostochiensis memiliki Granek ratio lebih dari 3, sedangkan

G. Pallida kurang dari 3. Granek ratio adalah perbandingan antara jarak anus-

vulva dan nilai diameter vulva. Nilai Granek ratio dibutuhkan dalam

membedakan G. rostochiensis dan G. pallida karena keduanya memiliki tipe

vulva yang sama, yaitu tidak terdapat vulval cone (vulva tampak menonjol

seperti kerucut). Vulval cone dimiliki nematoda sista yang berasal dari genus

Heterodera.

b. Pasurenan


sista secara lengkap dari Pasurenan terlampir pada lampiran 2. Tabel berikut


Tabel 4.13. Data identifikasi sista yang berasal dari Pasurenan Parameter Range (µ) Rata-rata SD


950-987 971.4 14.5

Panjang Kepala 96-100 97.2 1.7 Lebar Tubuh 458 -640 530.8 73.8

Jarak dari anus ke tepi terdekat fenestra

58-70 64 4.4

Diameter Vulva 16-19 17 1.4 Paralel ridges dari anus

ke vulva 14-16 15 1

Granek ratio 3.2-4.7 3.7 0.5

35

Gambar 4.12. Perrenial pattern sista yang berasal dari Pasurenan: (a) vulva, (b)

anus, (c) paralel ridges antara anus dan vulva, (d) diameter vulva.

Berdasarkan data hasil identifikasi sista yang berasal dari Pasurenan

(Tabel 4.13), nilai-nilai yang diperoleh menunjukkan spesies NSK yang

menyerang pertanaman kentang di Pasurenan adalah Globodera rostochiensis.

Selain nilai Granek ratio, pengukuran terhadap jumlah anulasi (paralel ridges)

dari anus-vulva juga dapat digunakan untuk membedakan G. rostochiensis dan

G. pallida. G. rostochiensis memiliki paralel ridges dari anus-vulva dengan

nilai lebih dari 14, sedangkan G. pallida kurang dari 14. Dari tabel 4.13 dapat

dilihat, NSK yang menyerang pertanaman kentang di Pasurenan memiliki

paralel ridges dengan nilai rata-rata sebesar 15, sehingga dapat disimpulkan

NSK yang menyerang pertanaman kentang di Pasurenan adalah G.

rostochiensis.

36

c. Karang Tengah


sista secara lengkap dari Karang Tengah terlampir pada lampiran 3. Tabel

berikut menunjukkan hasil analisis bagian-bagian tubuh NSK stadium sista.

Tabel 4.14. Data identifikasi sista yang berasal dari Karang Tengah Parameter Range (µ) Rata-rata SD


964-992 975.8 11.7

Panjang Kepala 95-104 98.6 3.2 Lebar Tubuh 464-655 609.2 82


60-72 64.8 5.2

Diameter Vulva 17-19 17.6 0.9 Paralel ridges dari anus

ke vulva 14-16 14.8 1.1

Granek ratio 3.1-4 3.6 0.3

Gambar 4.13. Perrenial pattern sista yang berasal dari Karang Tengah: (a) vulva,

(b)anus, (c) paralel ridges antara anus dan vulva, (d) diameter vulva.

Berdasarkan data hasil identifikasi sista yang berasal dari Karang

Tengah (Tabel 4.14), nilai-nilai yang diperoleh menunjukkan spesies NSK

yang menyerang pertanaman kentang di Karang Tengah adalah Globodera

rostochiensis. Sista yang berasal dari Karang Tengah memiliki nilai Granek

37

ratio lebih dari 3, jumlah paralel ridges dengan nilai rata-rata 14,8 memberikan

kesimpulan bahwa spesies NSK di Karang Tengah adalah G. rostochiensis.

Seperti halnya identifikasi terhadap larva stadium 2, identifikasi

berdasarkan sista juga dibutuhkan pengamatan terhadap beberapa parameter.

Variasi parameter pengamatan yang lebih banyak akan memberikan hasil

identifikasi yang lebih akurat. Dalam kegiatan identifikasi spesies berdasarkan

ukuran-ukuran tubuh, sering dijumpai adanya nilai yang tidak dapat digunakan

untuk menentukan spesies apabila hanya menggunakan satu parameter

pengamatan, sehingga ragam parameter pengamatan dapat membantu

mengatasi masalah tersebut.

d. Patak Banteng


sista secara lengkap dari Patak Banteng terlampir pada lampiran 4. Tabel


Tabel 4.15. Data identifikasi sista yang berasal dari Patak Banteng Parameter Range (µ) Rata-rata SD


874-995 956.2 48.5

Panjang Kepala 95-100 97.4 1.9 Lebar Tubuh 486-632 578.2 66.8


62-72 68.2 3.7


ke vulva 14-17 15 1.2

Granek ratio 3.8-4.5 4.2 0.2

38

Gambar 4.14. Perrenial pattern sista yang berasal dari Patak Banteng: (a) vulva,

(b) anus, (c) paralel ridges antara anus dan vulva, (d) diameter vulva.

Berdasarkan data hasil identifikasi sista yang berasal dari Patak Banteng


menyerang pertanaman kentang di Karang Tengah adalah Globodera

rostochiensis. Pengamatan terhadap nilai Granek ratio (lebih dari 3) dan

jumlah paralel ridges dari anus-vulva (lebih dari 14), mempresentasikan ke arah

G. rostochiensis. Pengukuran apabila hanya berdasarkan ukuran panjang dan

lebar sista tidak dapat digunakan untuk mengidentifikasi spesies NSK. G.

rostochiensis dan G. pallida memiliki ukuran panjang dan lebar sista yang

relatif sama, sehingga mutlak dibutuhkan pengamatan-pengamatan terhadap

parameter lain.

39

e. Kejajar


sista secara lengkap dari Kejajar terlampir pada lampiran 5. Tabel berikut


Tabel 4.16. Data identifikasi sista yang berasal dari Kejajar Parameter Range (µ) Rata-rata SD


886-984 952.2 40.2



68-76 70.8 3.3

Diameter Vulva 14-17 16 1.4 Paralel ridges dari anus ke

vulva 14-17 15.2 1.3

Granek ratio 4-5.4 4.4 0.5

Gambar 4.15. Perrenial pattern sista yang berasal dari Kejajar: (a) vulva,

(b) anus, (c) paralel ridges antara anus dan vulva, (d) diameter vulva.

Berdasarkan data hasil identifikasi sista yang berasal dari Kejajar (Tabel

4.16), nilai-nilai yang diperoleh menunjukkan spesies NSK yang menyerang

pertanaman kentang di Kejajar adalah Globodera rostochiensis. Berdasarkan

40

pengukuran pada nilai Granek ratio dan jumlah paralel ridges dari anus-vulva,

sista yang berasal dari Kejajar memiliki Granek ratio sebesar 4,4 dan jumlah

paralel ridges lebih dari 14, dengan nilai rata-rata 15,2. Nilai-nilai tersebut

menerangkan NSK yang menyerang pertanaman kentang di Kejajar adalah G.

rostochiensis. Dapat dikatakan nilai Granek ratio dan jumlah paralel ridges

antara anus-vulva merupakan parameter kunci dalam melaksanakan identifikasi

spesies NSK berdasarkan sista. Hampir seluruh pustaka terkait kegiatan

identifikasi spesies NSK menjelaskan bahwa nilai Granek ratio untuk G.

rostochiensis lebih dari 3 dan kurang dari 3 untuk G. pallida, sedangkan jumlah

paralel ridges untuk G. rostochiensis sebesar lebih dari 14 dan G. pallida

kurang dari 14. Nilai dengan kisaran yang tegas membantu peneliti dalam

menentukan hasil identifikasi terhadap spesies NSK.

f. Dieng Wetan


sista secara lengkap dari Dieng Wetan terlampir pada lampiran 6. Tabel berikut


Tabel 4.17. Data identifikasi sista yang berasal dari Dieng Wetan Parameter Range (µ) Rata-rata SD


840-990 938 57.6

Panjang Kepala 82-96 88.6 6.7 Lebar Tubuh 468-520 492 19.8


68-76 72.4 3.5


ke vulva 14-16 15 0.7

Granek ratio 4-5 4.66 0.4

41

Gambar 4.16. Perrenial pattern sista yang berasal dari Dieng Wetan: (a) vulva, (b) anus, (c) paralel ridges antara anus dan vulva, (d) diameter vulva.

Berdasarkan data hasil identifikasi sista yang berasal dari Dieng Wetan


menyerang pertanaman kentang di Dieng Wetan adalah Globodera

rostochiensis. Berdasarkan hasil pengukuran parameter yang ada dalam

identifikasi berdasarkan sista, Dieng Wetan merupakan pertanaman kentang

terserang NSK dari spesies G. rostochiensis. Granek ratio dengan nilai lebih

dari 3 dan jumlah paralel ridges dengan nilai rata-rata 15 (di atas 14),

merupakan nilai-nilai yang dimiliki G. rostochiensis.

42

g. Telaga Merdada


sista secara lengkap dari Telaga Merdada terlampir pada lampiran 7. Tabel


Tabel 4.18. Data identifikasi sista yang berasal dari Telaga Merdada Parameter Range (µ) Rata-rata SD


924-994 952.4 29.23



66-75 70.6 3.5

Diameter Vulva 15-18 16.2 1 Paralel ridges dari

anus ke vulva 14-17 15 1.4

Granek ratio 4-4.6 4.2 0.2

Gambar 4.17. Perrenial pattern sista yang berasal dari Telaga Merdada: (a) vulva, (b) anus, (c) paralel ridges antara anus dan vulva, (d) diameter vulva.

Berdasarkan data hasil identifikasi sista yang berasal dari Telaga

Merdada (Tabel 4.18), nilai-nilai yang diperoleh menunjukkan spesies NSK

yang menyerang pertanaman kentang di Telaga Merdada adalah Globodera

43

rostochiensis. Berdasarkan pengukutan terhadap nilai Granek ratio dan jumlah

paralel ridges anus-vulva, sista yang berasal dari Telaga Merdada memiliki

Granek ratio lebih dari 4 (rata-rata 4,2) dan jumlah paralel ridges lebih dari 14

(rata-rata 15). Nilai Granek ratio dan jumlah paralel ridges yang diperoleh

menunjukkan spesies NSK yang menyerang pertanaman kentang di Telaga

Merdada adalah spesies G. rostochiensis.

h. Pejawaran


sista secara lengkap dari Pejawaran terlampir pada lampiran 8. Tabel berikut


Tabel 4.19. Data identifikasi sista yang berasal dari Pejawaran Parameter Range (µ) Rata-rata SD


878-996 909.4 48.8

Panjang Kepala 82-90 85.6 3 Lebar Tubuh 480-494 487.2 6.7


68-74 70.8 2.2

Diameter Vulva 16-17 16.6 0.5 Paralel ridges dari

anus ke vulva 14-16 14.8 1

Granek ratio 4.1-4.3 4.2 0.1

44

Gambar 4.18. Perrenial pattern sista yang berasal dari Pejawaran: (a) vulva, (b) anus, (c) paralel ridges antara anus dan vulva, (d) diameter vulva.

Berdasarkan data hasil identifikasi sista yang berasal dari Pejawaran


menyerang pertanaman kentang di Pejawaran adalah Globodera rostochiensis.

Nilai yang diperoleh dari pengukuran terhadap parameter kunci (Granek ratio

dan jumlah paralel ridges anus-vulva) mempresentasikan keberadaan G.

rostochiensis dimana nilai Granek ratio sista yang berasal dari Pejawaran

memiliki nilai lebih dari 4 dengan rata-rata 4,2 dan jumlah paralel ridges

bernilai lebih 14 dengan rata-rata 14,8.

45

i. Pekasiran


sista secara lengkap dari Pekasiran terlampir pada lampiran 9. Tabel berikut


Tabel 4.20. Data identifikasi sista yang berasal dari Pekasiran Parameter Range (µ) Rata-rata SD


865-990 902.2 50.5



68-72 70.4 1.6


ke vulva 14-17 14.6 1.3

Granek ratio 3.7-4.5 4.25 0.3

Gambar 4.19. Perrenial pattern sista yang berasal dari Pekasiran: (a) vulva, (b) anus, (c) paralel ridges antara anus dan vulva, (d) diameter vulva.

Berdasarkan data hasil identifikasi sista yang berasal dari Pekasiran


menyerang pertanaman kentang di Pejawaran adalah Globodera rostochiensis.

Nilai Granek ratio dan jumlah paralel ridges sista yang berasal dari pertanaman

kentang di Pekasiran mempresentasikan spesies G. rostochiensis di mana nilai

46

Granek ratio lebih dari 3 (rata-rata 4,25) dan jumlah paralel ridges lebih dari

14 dengan rata-rata 14,6.

Sista dari genus Globodera berbentuk membulat (globose), sedangkan

nematoda sista yang berasal dari genus Hetrodera, sista berbentuk lemon shape.

Identifikasi terhadap sista dapat digunakan untuk mempertegas hasil

identifikasi yang sudah didapat ketika mengidentifikasi larva stadium 2. Warna

sista dapat digunakan dalam identifikasi, akan tetapi karena warna bersifat

relatif antar tiap pengamat, maka perbedaan warna antara G. rostochiensis dan

G. pallida tidak terlalu dapat digunakan. Oleh karena itu dibutuhkan parameter-

parameter lain yang lebih mempertegas hasil identifikasi. Nilai yang sangat

dibutuhkan dalam mengidentifikasi NSK berdasarkan sista adalah Jumlah

paralel ridges dan nilai Granek ratio. Berbeda dengan ketika mengidentifikasi

L2. Kisaran nilai yang ada dalam membedakan spesies sangat berdekatan

sehingga kegiatan identifikasi hanya berdasarkan karakter morfologi L2 dirasa

sangatlah tidak cukup.

Menurut Den Nijs dan Karssen (2008) dalam tulisannya pada “Protocol for the

diagnosis of quarantine organism. Globodera rostochinensis and Globodera pallida”.

G. rostochiensis memiliki nilai Granek ratio lebih dari 3 (>3) sedangkan G. pallida <3.

Pada tulisan Den Nijs dan Karssen tersebut, terdapat kisaran yang tegas

sehingga sangat membantu dalam menetukan ke arah mana spesies yang

diidentifikasi. Hasil identifikasi berdasarkan karakter morfologi pada sista

terhadap NSK yang menyerang pertanaman kentang di Kabupaten Wonosobo

dan Banjarnegara, nilai Granek ratio secara keseluruhan lebih dari 3. Ditambah

dengan pengamatan terhadap bentuk knob stylet yang juga keseluruhan dari

masing-masing lokasi memiliki bentuk knob stylet membulat ke arah posterior,

sehingga dapat disimpulkan bahwa NSK yang menyerang kedua kabupaten ini

adalah Globodera rostochiensis.

47

B. Identifikasi Molekuler

Pada penelitian ini juga dilaksanakan kegiatan identifikasi berdasarkan

DNA menggunakan mesin PCR (Polymerase Chain Reaction). Teknik PCR

dilakukan dengan mencampurkan sampel DNA dengan primer oligonukleotida,

enzim termostabil (enzim yang tahan terhadap perlakuan suhu tinggi) (Yuwono,

2006).

Fase-fase dalam proses PCR adalah: denaturasi, penempelan primer (primer

annealing) dan polimerasi (sintesis DNA baru). Pada saat denaturasi, suhu diatur

mencapai 95-100°C selama beberapa menit. Pada fase ini molekul DNA cetakan

mengalami pemisahan untaian DNA. Pemisahan untai DNA diperlukan agar primer

dapat menempel karena primer tidak dapat menempel pada untaian ganda (double

stranded). Setelah fase denaturasi, suhu alat diturunkan sehingga mencapai suhu

yang sesuai untuk penempelan primer pada DNA cetakan, biasanya suhu yang

diperlukan adalah 50-60°C. Molekul primer yang telah menempel berfungsi

sebagai molekul awal dalam proses polimerasi DNA. Selanjutnya suhu kembali

dinaikkan hingga mencapai suhu optimum untuk proses polimerasi (sekitar 70°C).

Setelah proses polimerasi, kemudian dilakukan lagi siklus seperti semula, yaitu

dengan menaikkan suhu menjadi 95-100°C (denaturasi), kemudian diturunkan

menjadi 50-60°C (penempelan primer), dan kemudian dinaikkan lagi menjadi

72°C. Umumnya, kendala dalam proses PCR adalah penentuan suhu yang tepat

pada saat proses penempelan primer, sehingga perlu dilakukan optimasi suhu.

Optimasi berguna dalam penentuan suhu yang tepat saat penempelan primer.

Primer yang telah tepat menempel pada DNA cetakan akan akan menentukan

keberhasilan pada saat proses polimerasi.

Dilakukannya identifikasi berdasarkan karakter DNA pada penelitian ini

bertujuan untuk mempertegas hasil yang didapat dari identifikasi berdasarkan

karakter morfologi (morfometri). Primer yang digunakan adalah ITS5 untuk

nematoda universal, PITSr3 untuk Globodera rostochiensis dan PITSp4 untuk

Globodera pallida. Primer-primer yang digunakan merupakan oligonukleotida

48

berukuran pendek, ITS5 terdiri atas 22 basa, PITSr3 terdiri atas 18 basa dan

PITSp4 terdiri atas 18 basa (Skantar, 2007).

Gambar 4.20 Pita DNA hasil identifikasi berdasar DNA menggunakan mesin PCR.

Keterangan lokasi: 1) Batur, 2) Pasurenan, 3) Karang Tengah, 4) Patak Banteng, 5) Kejajar.

Berdasarkan percobaan yang mendapatkan nilai positif, Globodera

rostochiensis adalah spesies yang menyerang pertanaman kentang di Patak Banteng

(Gambar 4.20). Pita DNA hasil PCR berada pada kisaran 400-500 bp. Menurut

Quader (2008), pita DNA hasil PCR yang teridentifikasi sebagai G. Rostochiensis

berada pada 434 bp, sedangkan untuk G. pallida berada pada 256 bp. Hasil

identifikasi DNA yang tidak positif untuk seluruh lokasi disebabkan tidak

ditemukannya optimasi suhu yang tepat saat PCR dilakukan. Kegagalan dalam

PCR juga dapat disebabkan oleh ketidakmurnian ekstrak DNA yang diperoleh saat

ekstraksi DNA. Ekstrak DNA yang digunakan dalam proses PCR merupakan

ekstrak DNA murni tanpa terikut kandungan lain seperti protein. DNA yang akan

digunakan dalam PCR harus terpisah dari kandungan RNA, sehingga sebelum

DNA digunakan untuk PCR perlu ditambahkan RNAse untuk memisahkan

kandungan RNA.

49

Tabel 4.21. Hasil identifikasi spesies Nematoda Sista Kentang di Kabupaten Banjarnegara dan Wonosobo berdasarkan karakter morfologi dan DNA

Berdasarkan hasil identifikasi morfologi, spesies NSK yang menyerang

pertanaman kentang di Kabupaten Banjarnegara dan Wonosobo adalah Globodera

rostochiensis. Nilai yang diperoleh berdasarkan ukuran-ukuran tubuh pada larva

stadium 2 dan sista mengarah kepada identitas yang dimiliki oleh Globodera

rostochiensis (hasil pengukuran ukuran-ukuran tubuh berdasarkan larva stadium 2

dan sista dari seluruh lokasi dapat dilihat pada bagian lampiran). Berdasarkan

identifikasi molekuler berdasarkan DNA, hasil yang mendapatkan nilai positif

hanya sampel yang berasal dari Patak Banteng. Spesies NSK yang menyerang

lokasi pertanaman kentang di Patak Banteng memiliki pita DNA 434 bp. Spesies

NSK yang teridentifikasi dengan pita DNA sebesar 434 bp adalah Globodera

rostochiensis.

No Lokasi Ketinggian Identifikasi morfologi

Identifikasi DNA

1 Batur 1437-2215 mdpl Globodera rostochiensis ‐

2 Pasurenan 1587-2150 mdpl Globodera rostochiensis ‐

3 KarangTengah 1887-2300 mdpl Globodera rostochiensis ‐

4 Patak Banteng 1962-2575 mdpl Globodera rostochiensis Globodera rostochiensis 5 Kejajar 1300-2112 mdpl Globodera rostochiensis ‐

6 Dieng Wetan 1300-2575 mdpl Globodera rostochiensis ‐

7 Telaga Merdada 1437-2212 mdpl Globodera rostochiensis ‐

8 Pejawaran 1050-1437 mdpl Globodera rostochiensis ‐

9 Pekasiran 1050-2200 mdpl Globodera rostochiensis ‐

50

V. KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan

1. Spesies Nematoda Sista Kentang di Kabupaten Banjarnegara dan

Wonosobo adalah Globodera rostochiensis.

2. Identifikasi berdasarkan teknik molekuler dengan primer PITSr3, PITSp4

dan ITS5. NSK dengan berat molekul DNA 434 bp yang ada di Patak

Banteng adalah Globodera rostochiensis

B. Saran

Perlu dilakukan optimasi untuk proses PCR dalam identifikasi NSK

secara molekuler berdasarkan karakter DNA.

51

DAFTAR RUJUKAN

Deptan. 2005. Pengenalan dan Pengendalian NSK <http://ditlin.hortikultura.deptan. go.id/makalah/nsk_kentang.html>. Diakses tanggal 10 Januari 2009.

Deptan. 2008. Identifikasi Nematoda Parasit Tanaman <http://ditlin.hortikultura. deptan.go.id/makalah/nsk_kentang.html>. Diakses tanggal 29 Januari 2009.

CABI. 2000. Crop Protection Compendium. CD Room.

Fleming, C. C., Thomas, O. P. 1998. Potato Cyst Nematode: Morphology, Differential Host and Biochemical Techniques. In: Marks, R.J., B.B. Brodie (Eds) Potato Cyst Nematodes; Biology, Distribution and Control. CAB International, p: 91-114.

Den Nijs, L., & G. Karssen. 2008. Protocol or The Diagnosis Of Quarantine Organisms, Globodera rostochinensis and Globodera pallida <http://www.csl.gov.uk/specialInterest/ ECYR3Globodera.pdf>. Diakses tanggal 26 Februari 2009.

Dropkin, V.H. 1991. Introduction to Plant Nematology (Pengantar Nematologi Tumbuhan, alih

bahasa Supratoyo). Gadjah Mada University Press, Yogyakarta.

Fortuner, R. 1989. A new description of the process og identification of plant parasitic nematodes genera. In: Fortuner, R. (Ed.), Nematode Identification and Expert System Technology, New York, Plenum Publishing Corp : 35-44.

Hlaoua, W.,N. Horrigue-Raouani., D. Fouville, & D. Mugniery. 2008. Mophological and Molecular Characterisation of Potato Cyst Nematode Population from Tuniasia and Survey of Their Probable Geographical Origin. Biotechnology.

Hooper, D.J. 1973. Description of Plant Parasitic Nematodes. Commonwealth Institute of Helmintolhology. St. Albans Herts., England.

Hooper, D.J. 1986. Drawing and Measuring Nematodes. In: J.F. Southey. Laboratory Methods for Work With Plant and Soil Nematodes, p: 87-94.

Luc, M., R. A. Sakora & J. Bridge. 1995. Nematoda Parasitik Tumbuhan Di Pertanian Subtropik dan Tropik. Gadjah Mada University Press. Yogyakarta.

Mulyadi. 1996. Nematologi. Jurusan Hama dan Penyakit Fakultas Pertanian Universitas Gadjah Mada. Yogyakarta.

52

Mulyadi, B. Rahayu, B. Triman, & S. Indarti. 2003. Identifikasi Nematoda Sista Kuning (Globodera rostochiensis) Pada Kentang Di Batu, Jawa Timur. Jurnal Perlindungan Tanaman Indonesia. 9(1): 46-53.

Quader, M., L. Nambiar & J.Cunnington. 2008. Conventional and Real Time PCR-Based Species Identification and Diversity of Potato Cyst Nematodes (Globodera spp.) from Victoria, Australia. Journal of Nematology. 00 (0): 1-8.

Rukmana, R. 2002. Usaha Tani Kentang Sistem Mulsa Plastik. Kanisius. Yogyakarta.

Siddiqi, M.R. 1986. Tylenchida. Parasites of Plant and Insects. Commonwealth Institute of Parasitology. St. Albans. United Kingdom.

Soelarso, B. 1997. Budidaya Kentang Bebas Penyakit. Kanisius. Yogyakarta.

Semangun, H. 1996. Pengantar Ilmu Penyakit Tumbuhan. Gadjah Mada University Press. Yogyakarta.

Skantar, A.M., Z.A. Handoo, L.K. Carta & D.J. Chitwood. 2007. Morphological and Molecular Identification of Globodera pallida Associated with Potato in Idaho. Journal of Nematology. 39(2): 133-144.

Widjaja, A., Hadisoeganda. 1989. Nematoda Parasit Kentang dan Cara Pengendaliannya. Pada : Asandhi, A.A., S. Sastrowiswojo, Suhardi, Z. Abidin, Subhan. Kentang. Edisi Kedua. Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian. Balai Penelitian Hortikultura. Lembang, halaman: 151-163.

Williams, C.N, J.O.Uzo & W.T.H. Peregrine. 1986. Vegetable Production in The Tropics (Produksi Sayuran di Daerah Tropika, alih bahasa Soedharodjian Ronoprawiro). Gadjah Mada University.Press. Yogyakarta.

Yuwono, T. 2006. Bioteknologi Pertanian. Gadjah Mada University Press. Yogyakarta.

Zhou, X.Q.Li, J. Zhou & K. Tang. 2007. Comparison of Rapid DNA. Extraction Methods Applied to PCR Identification of Medical Mushroom Ganoderma spp. Preparative Biochemistry and Biotechnology, 37: 369-380.

53

Lampiran 1. Data Identifikasi L2 dan Sista dari Batur

Data identifikasi L2

n=25 Parameter Pengukuran

A B C D E F G 550 20 20 120 132 56 32

542 25 21 114 126 60 20

545 25 35 116 130 55 28

560 28 30 120 140 65 40

520 22 32 132 158 55 30

522 24 25 140 155 56 24

536 22 28 116 128 56 36

540 26 20 130 144 56 38

555 25 20 128 150 58 24

560 25 24 132 158 56 24

542 25 25 126 160 56 24

545 28 25 122 138 56 34

525 24 26 125 140 60 32

525 20 24 122 140 54 34

560 24 24 122 136 55 28

550 24 28 120 134 58 24

550 24 26 136 156 55 26

542 22 26 134 160 54 22

560 25 24 134 156 55 30

542 22 20 138 158 55 36

530 20 22 122 134 52 28

534 28 28 124 134 56 28

534 26 25 122 138 54 26

520 22 24 128 136 56 22

544 26 28 130 154 56 28

Jumlah 13533 602 630 3153 3595 1405 718

Mean 541.32 24.08 25.2 126.12 143.8 56.2 28.72

sd 12.78906 2.361497 3.774917 7.119925 11.38713 2.533114 5.38145

Keterangan:

A = Panjang tubuh total B = Lebar tubuh maksimum

C = Panjang stylet D = Panjang esophagus dari ujung anterior sampai perbatasan esophagus dengan usus

E = Panjang esophagus dari ujung anterior sampai F = Panjang ekor esophagus yang overlaping dengan usus G = Panjang ekor hialin n = Jumlah NSK stadium 2 yang berasal dari Batur

54

Data identifikasi sista

n=5 Parameter Pengukuran A B C D E F G

984 96 468 54 19 17 2.842105

1002 94 560 66 18 15 3.666667

958 102 520 48 17 16 2.823529

938 100 634 65 17 17 3.823529

988 96 688 68 17 16 4

Jumlah 4870 488 2870 301 88 81 17.15583

sd 25.6515107 3.286335 87.95453 8.729261 0.894427 0.83666 0.558837

Mean 974 574 60.2 17.6 16.2 3.431166

Keterangan

A = Panjang tubuh tidak termasuk leher

B = Panjang kepala

C = Lebar tubuh

D = Jarak dari anus ke tepi terdekat fenestra

E = Diameter vulva

F = Paralel ridges anus – vulva

G = Granek ratio

n = Jumlah sista yang berasal dari Batur

55

Lampiran 2. Data Identifikasi L2 dan Sista dari Pasurenan

Data identifikasi L2 n= 25 Parameter pengukuran

A B C D E F G

560 26 25 140 155 52 25

555 25 30 114 134 55 30

552 28 20 128 144 65 40

560 24 20 122 155 60 40

550 20 30 120 146 55 30

548 25 24 136 154 54 28

554 25 24 134 154 62 34

532 20 20 134 156 62 34

548 28 25 130 154 55 26

560 24 26 128 150 56 28

540 26 24 124 148 56 32

540 22 28 124 150 54 28

538 22 28 135 156 58 26

542 22 24 138 155 58 35

544 25 20 136 154 54 32

550 28 25 128 152 60 34

538 26 25 124 148 56 28

534 22 24 125 150 56 28

540 22 28 128 154 54 28

542 25 28 130 155 55 24

550 24 28 126 152 54 36

538 26 28 132 154 56 34

544 26 28 130 154 52 26

556 25 26 130 152 58 36

552 28 22 128 150 54 36

Jumlah 13667 614 630 3224 3786 1411 778

Mean 546.68 24.56 25.2 128.96 151.44 56.44 31.12

sd 8.239741 2.364318 3.082207 5.982474 4.831149 3.241399 4.594562

Keterangan:



E = Panjang esophagus dari ujung anterior sampai F = Panjang ekor esophagus yang overlaping dengan usus G = Panjang ekor hialin n = Jumlah NSK stadium 2 yang berasal dari Pasurenan

56

Data Identifikasi sista

n = 5 Parameter pengukuran A B C D E F G

950 98 466 62 19 16 3.263158

976 96 548 66 16 16 4.125

964 96 542 58 18 14 3.222222

987 96 640 64 16 14 4

980 100 458 70 16 15 4.375

Jumlah 4857 486 2654 320 85 75 18.98538

sd 14.587666 1.788854 73.89993 4.472136 1.414214 1 0.523983

Mean 971.4 530.8 64 17 15 3.797076

Keterangan


B = Panjang kepala

C = Lebar tubuh


E = Diameter vulva


G = Granek ratio

n = Jumlah sista yang berasal dari Pasurenan

57

Lampiran 3. Data Identifikasi L2 dan Sista dari Karang Tengah

Data identifikasi L2 n= 25 Parameter pengukuran

A B C D E F G

565 22 25 120 150 60 35

550 20 30 114 134 60 35

560 22 25 118 135 60 38

540 26 24 118 140 60 30

560 22 25 114 132 50 28

542 24 28 118 138 52 32

548 24 28 126 140 52 34

555 24 24 124 142 58 30

560 24 24 126 138 54 30

554 22 28 126 138 56 34

542 26 26 134 148 52 30

548 24 24 126 148 58 30

552 24 25 125 138 55 30

550 22 25 125 136 55 32

546 24 28 125 150 55 34

542 24 26 132 148 56 28

548 24 26 128 138 58 32

548 26 26 125 144 60 34

556 24 25 126 142 58 28

560 26 24 128 142 52 34

542 22 26 124 140 50 32

548 26 25 126 148 50 34

548 26 25 128 140 56 35

550 26 24 128 144 56 35

552 24 28 126 146 55 35

Jumlah 13766 598 644 3110 3539 1388 809

mean 550.64 23.92 25.76 124.4 141.56 55.52 32.36

sd 6.756972 1.681269 1.665333 4.91596 5.148463 3.355592 2.690725

Keterangan:



E = Panjang esophagus dari ujung anterior sampai F = Panjang ekor esophagus yang overlaping dengan usus G = Panjang ekor hialin n = Jumlah NSK stadium 2 yang berasal dari Karang Tengah

58



964 98 464 72 18 16 4

976 95 648 64 17 14 3.764706

982 104 625 68 17 14 4

965 98 654 60 19 14 3.157895

992 98 655 60 17 16 3.529412

Jumlah 4879 493 3046 324 88 74 18.45201

Mean 975.8 98.6 609.2 64.8 17.6 14.8 3.690402

sd 11.798305 3.286335 82.07131 5.215362 0.894427 1.095445 0.355916

Keterangan


B = Panjang kepala

C = Lebar tubuh


E = Diameter vulva


G = Granek ratio

n = Jumlah sista yang berasal dari Karang Tengah

59

Lampiran 4. Data Identifikasi L2 dan Sista dari Patak Banteng



555 20 32 148 160 56 28

562 24 30 150 162 54 34

540 22 25 148 155 56 36

565 24 24 134 154 56 32

545 26 20 130 146 60 30

552 25 28 146 146 52 30

548 22 26 130 142 55 34

546 22 24 130 144 58 32

554 22 28 134 142 52 28

554 22 26 134 142 58 30

554 22 26 134 142 54 28

550 25 26 140 155 56 32

548 22 26 134 148 54 34

552 22 28 134 146 55 36

560 22 25 140 152 52 32

558 22 30 134 148 55 30

556 24 28 138 150 54 34

552 22 28 142 155 58 36

555 25 28 134 150 56 30

554 25 24 138 155 54 34

548 25 24 138 152 53 30

548 22 24 138 152 55 32

546 22 25 136 152 56 34

552 22 28 136 150 54 30

554 22 25 136 152 54 32

Jumlah 13808 573 658 3436 3752 1377 798

Mean 552.32 22.92 26.32 137.44 150.08 55.08 31.92

sd 5.602975 1.525341 2.528504 5.61308 5.506965 1.998333 2.481935

Keterangan:



E = Panjang esophagus dari ujung anterior sampai F = Panjang ekor esophagus yang overlaping dengan usus G = Panjang ekor hialin n = Jumlah NSK stadium 2 yang berasal dari PatakBanteng

60



964 98 464 72 18 16 4

976 95 648 64 17 14 3.764706

982 104 625 68 17 14 4

965 98 654 60 19 14 3.157895

992 98 655 60 17 16 3.529412

Jumlah 4879 493 3046 324 88 74 18.45201

Mean 975.8 98.6 609.2 64.8 17.6 14.8 3.690402

sd 11.798305 3.286335 82.07131 5.215362 0.894427 1.095445 0.355916

Keterangan


B = Panjang kepala

C = Lebar tubuh


E = Diameter vulva


G = Granek ratio

n = Jumlah sista yang berasal dari Patak Banteng

61

Lampiran 5. Data Identifikasi L2 dan Sista dari Kejajar



560 24 30 134 148 52 30

550 26 28 146 154 58 32

554 24 28 150 160 54 34

544 25 25 134 150 56 28

556 24 26 130 148 58 28

546 22 30 148 154 58 28

548 24 28 134 150 58 32

558 26 25 138 152 54 32

554 24 30 138 154 56 30

554 26 28 134 156 56 28

544 25 24 138 160 56 32

546 25 25 142 156 56 34

548 25 26 138 155 56 30

550 24 24 148 160 52 28

550 25 26 150 160 54 30

544 25 28 140 158 55 28

554 26 28 142 158 56 32

556 24 26 144 156 56 34

556 26 26 146 156 54 28

564 25 26 150 160 54 30

548 26 25 140 158 54 30

550 24 30 140 156 54 30

554 24 30 150 162 54 30

554 25 26 138 156 56 28

554 24 26 148 156 52 30

Jumlah 13796 618 674 3540 3893 1379 756

Mean 551.84 24.72 26.96 141.6 155.72 55.16 30.24

Sd 5.1935858 0.9797959 1.9680786 6.0827625 3.8462103 1.8184242 2.0264912

Keterangan:



E = Panjang esophagus dari ujung anterior sampai F = Panjang ekor esophagus yang overlaping dengan usus G = Panjang ekor hialin n = Jumlah NSK stadium 2 yang berasal dari Kejajar

62



984 102 490 68 15 15 4.533333

964 96 524 70 17 14 4.117647

945 89 626 76 14 14 5.428571

982 84 498 68 17 16 4

886 100 534 72 17 17 4.235294

Jumlah 4761 471 2672 354 80 76 22.31485

Mean 952.2 94.2 534.4 70.8 16 15.2 4.462969

sd 40.2268567 7.563068 54.30285 3.34664 1.414214 1.30384 0.575057

Keterangan


B = Panjang kepala

C = Lebar tubuh


E = Diameter vulva


G = Granek ratio

n = Jumlah sista yang berasal dari Kejajar

63

Lampiran 6. Data Identifikasi L2 dan Sista dari Dieng Wetan


n =25 Parameter pengukuran A B C D E F G

548 22 26 142 156 54 28

546 24 24 136 152 45 30

550 25 24 142 152 54 30

552 25 30 138 150 58 32

548 22 28 134 150 54 32

554 26 24 144 150 54 34

548 22 25 138 148 57 30

558 25 30 144 154 55 30

556 25 30 144 154 52 28

548 25 24 138 152 54 33

550 22 25 145 156 52 30

548 24 24 142 156 54 28

548 26 24 136 150 56 32

556 26 30 146 154 54 30

562 24 26 148 155 52 32

550 22 25 142 155 54 30

562 25 24 138 155 52 30

562 26 25 140 152 54 30

562 24 30 140 150 55 34

550 24 24 148 156 55 32

560 24 24 144 156 52 28

554 25 26 144 156 52 32

548 22 24 138 150 54 28

548 24 25 146 156 54 30

548 22 24 146 154 56 32

Jumlah 13816 601 645 3543 3829 1343 765

mean 552.64 24.04 25.8 141.72 153.16 53.72 30.6

sd 5.499091 1.457166 2.345208 3.931921 2.592939 2.406934 1.825742 Keterangan:



E = Panjang esophagus dari ujung anterior sampai F = Panjang ekor esophagus yang overlaping dengan usus G = Panjang ekor hialin n = Jumlah NSK stadium 2 yang berasal dari Dieng Wetan

64


n= 5 Parameter pengukuran A B C D E F G

990 96 482 76 15 15 5.066667

956 88 520 76 5 15 15.2

964 95 502 68 17 14 4

940 82 488 72 15 16 4.8

840 82 468 70 16 15 4.375

JUMLAH 4690 443 2460 362 68 75 33.44167

Mean 938 88.6 492 72.4 13.6 15 6.688333

sd 57.6888204 6.76757 19.84943 3.577709 4.878524 0.707107 4.775529

Keterangan


B = Panjang kepala

C = Lebar tubuh


E = Diameter vulva


G = Granek ratio

n = Jumlah sista yang berasal dari Dieng Wetan

65

Lampiran 7. Data Identifikasi L2 dan Sista dari Telaga Merdada



554 25 25 120 136 54 30

548 24 26 130 154 55 28

552 22 25 126 142 62 32

554 24 28 134 148 58 30

550 22 28 134 152 54 32

552 22 30 122 140 56 28

554 22 28 126 138 58 32

550 22 28 130 144 58 32

552 26 26 132 145 56 32

555 24 25 136 144 58 28

555 24 24 125 135 58 32

550 25 26 126 136 56 30

552 22 30 136 148 60 32

555 22 28 128 152 60 30

560 26 26 124 150 56 32

555 24 26 135 150 62 32

558 24 28 134 150 58 30

556 25 30 130 146 56 30

558 26 28 130 144 56 28

558 22 26 136 144 56 32

562 25 28 126 138 55 34

562 26 28 128 138 54 30

550 24 30 120 138 56 28

546 22 26 138 150 54 34

554 25 25 134 154 56 30

Jumlah 13852 595 678 3240 3616 1422 768

Mean 554.08 23.8 27.12 129.6 144.64 56.88 30.72

sd 4.081666 1.527525 1.78699 5.236093 6.026884 2.2971 1.814754

Keterangan:



E = Panjang esophagus dari ujung anterior sampai F = Panjang ekor esophagus yang overlaping dengan usus G = Panjang ekor hialin n = Jumlah NSK stadium 2 yang berasal dari Telaga Merdada

66


Keterangan


B = Panjang kepala

C = Lebar tubuh


E = Diameter vulva


G = Granek ratio

n = Jumlah sista yang berasal dari Telaga Merdada


994 86 488 75 16 16 4.6875

952 86 512 66 16 14 4.125

966 84 488 68 15 14 4.53333

924 92 488 72 18 14 4

926 98 518 72 16 17 4.5

Jumlah 4762 446 2494 353 81 75 21.8458

Mean 952.4 89.2 498.8 70.6 16.2 15 4.36916

sd 29.23696 5.76194 14.9398 3.57770 1.09544 1.41421 0.2921

67

Lampiran 8. Data Identifikasi L2 dan Sista dari Pejawaran



552 22 24 125 138 56 30

556 22 28 128 145 58 32

550 22 26 132 154 60 32

558 24 24 134 156 56 32

556 25 25 128 156 60 30

558 24 25 128 148 62 30

554 25 30 128 146 56 34

556 22 26 132 146 58 28

560 22 28 134 150 54 28

555 24 26 128 144 60 30

558 25 25 125 144 56 32

558 26 25 124 140 58 32

560 25 28 138 154 62 30

558 25 26 130 150 56 28

558 25 28 128 152 56 32

546 22 28 136 156 60 30

555 24 26 135 154 58 32

556 24 28 128 145 58 32

558 25 26 126 144 60 32

562 22 25 132 156 60 30

550 25 24 128 145 62 32

552 24 30 126 144 56 32

552 24 28 126 146 58 32

552 22 28 136 152 56 34

556 26 26 135 154 60 28

Jumlah 13886 596 663 3250 3719 1456 774

mean 555.44 23.84 26.52 130 148.76 58.24 30.96

sd 3.708998 1.404754 1.758787 4.062019 5.37184 2.259794 1.74356

Keterangan:



E = Panjang esophagus dari ujung anterior sampai F = Panjang ekor esophagus yang overlaping dengan usus G = Panjang ekor hialin n = Jumlah NSK stadium 2 yang berasal dari Pejawaran

68



996 84 480 72 17 14 4.235294

878 90 490 68 16 16 4.25

892 85 492 70 16 14 4.375

896 87 494 70 17 14 4.117647

885 82 480 74 17 16 4.352941

Jumlah 4547 428 2436 354 83 74 21.33088

Mean 909.4 85.6 487.2 70.8 16.6 14.8 4.266176

sd 48.8958076 3.04959 6.723095 2.280351 0.547723 1.095445 0.103256

Keterangan


B = Panjang kepala

C = Lebar tubuh


E = Diameter vulva


G = Granek ratio

n = Jumlah sista yang berasal dari Pejawaran

69

Lampiran 9. Data Identifikasi L2 dan Sista dari Pekasiran Data identifikasi L2

Keterangan:



E = Panjang esophagus dari ujung anterior sampai F = Panjang ekor esophagus yang overlaping dengan usus G = Panjang ekor hialin n = Jumlah NSK stadium 2 yang berasal dari Pekasiran


556 24 26 134 146 58 28

556 26 25 128 145 60 28

554 22 28 126 140 58 30

555 25 24 135 154 62 28

556 22 28 126 138 56 30

555 26 24 134 142 58 32

555 24 28 134 144 60 29

555 22 25 126 145 58 32

558 25 26 136 152 58 30

556 26 28 126 142 60 28 556 24 26 124 136 56 29 560 24 25 128 140 56 29

556 25 27 134 156 58 32

558 26 25 140 155 58 30

554 26 25 144 155 62 32

552 22 26 138 155 60 28

554 24 26 136 152 56 30

558 22 26 128 144 58 30

556 25 28 132 148 56 30

560 25 25 134 145 56 28

558 25 24 138 152 60 28

558 22 27 134 152 58 28

556 26 27 128 144 58 32

554 25 26 126 145 62 30

560 26 25 132 148 60 32

Jumlah 13906 609 650 3301 3675 1462 743

Mean 556.24 24.36 26 132.04 147 58.48 29.72

sd 2.067204 1.524248 1.322876 5.216001 5.838093 1.939072 1.541644

70



990 86 480 70 17 14 4.117647

894 94 495 68 18 14 3.777778

890 102 496 70 16 14 4.375

865 80 480 72 16 14 4.5

872 84 496 72 16 17 4.5

Jumlah 4511 446 2447 352 83 73 21.27042

Mean 902.2 89.2 489.4 70.4 16.6 14.6 4.254085

sd 50.5489861 8.786353 8.590693 1.67332 0.894427 1.341641 0.308647

Keterangan


B = Panjang kepala

C = Lebar tubuh


E = Diameter vulva


G = Granek ratio

n = Jumlah sista yang berasal dari Pekasiran

IDENTIFIKASI SPESIES NEMATODA SISTA KENTANG · PDF fileidentifikasi spesies nematoda sista...

Documents

Transcript of IDENTIFIKASI SPESIES NEMATODA SISTA KENTANG · PDF fileidentifikasi spesies nematoda sista...