LAPORAN AKHIR PRAKTIKUM ANALISIS FISIKOKIMIA

Penentuan Kadar Kapsaisin Dalam Produk Pilus Garuda Pedas

Dengan Metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)

Disusun Oleh:

SEPTIYANI MUSTIKAWATI

NPM: 260110120059

LABORATORIUM ANALISIS FISIKOKIMIA

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS PADJADJARAN

JATINANGOR

2014

PENENTUAN KADAR KAPSAISIN DALAM PRODUK PILUS GARUDA PEDAS

DENGAN METODE KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI (KCKT)

Septiyani Mustikawati

Laboratorium Anasisis Fisikokimia

Fakultas Farmasi, Universitas Padjadjaran, Jl. Raya Bandung Sumedang Km 21 Jatinangor 45363

Telp./Fax. (022) 779 6200

Septiyani.mustika@gmail.com

PENDAHULUAN

Cabai (Capsicum) merupakan salah satu

buah yang penting karena sudah sejak lama

dikenal sebagai bumbu yang memberikan rasa

pedas pada aneka masakan serta obat (Yola dkk.,

2013). Buah Cabai berasal dari tanaman yang

bergenus Capsicum dan dari keluarga

Solanaceae. Buah cabai yang sering digunakan

di indonesia antara lain, Capsicum annuum, C.

frutescens dan C. chinense, yang mana jenis-

jenis cabai tersebut memiliki banyak varietas

(Ahmed et al., 2011).

Kapsaisinoid adalah senyawa yang

memberikan rasa pedas pada cabai dan produk-

produk olahannya (Ahmed et al., 2011). Dua

jenis senyawa kapsaisinoid yang banyak terdapat

pada cabai adalah kapsaisin (8-methyl-N-

vanillyl-trans-6-nonenamide) dengan kadar

sekitar 71% dari total kapsaisinoid yang terdapat

pada cabai (Kosuge & Furuta, 1970). Cabai

merah lebih pedas rasanya dibandingkan cabai

hijau, karena kadar kapsaisin dalam cabai merah

dua atau tiga kali lebih banyak dibanding cabai

hijau (Yaldiz & Ozguven, 2011).

Kapsaisin juga dianggap sebagai zat aktif

yang memiliki beberapa khasiat secara

farmakologi. Kapsaisin telah digunakan sebagai

analgesik untuk nyeri dan inflamasi arthritis

(Deal et al., 1999). Kapsaisin juga telah

dilaporkan dapat memberikan efek antikanker

(Moore & Moore, 2003) dan secara aktif

melawan inflamasi neurogenik (Szolcsanyi,

2004).

Kadar kapsaisin yang terdapat dalam

produk makanan ringan dapat dianalisis dengan

menggunakan metode Kromatografi Cair Kineja

Tinggi (KCKT). Pada sistem KCKT data yang

dihasilkan adalah waktu retensi dan luas area

dari komponen-komponen sampel. Analisa

kuantitatif pada KCKT dilakukan dengan cara

membandingkan luas puncak standar senyawa

murni dengan sampel, sedangkan analisa

kualitatif pada KCKT dilakukan dengan cara

mencari kesamaan komponen kapsaisin sampel

dengan standar (Yola dkk., 2013).

Penggunaan KCKT dapat digunakan untuk

menganalisis berbagai macam kandungan yang

komplek dalam suatu bahan menurut jenis

kolom yang digunakan. Senyawa kompleks yang

masuk ke dalam KCKT terlebih dahulu akan

mailto:Septiyani.mustika@gmail.com

masuk kedalam kolom yang merupakan bagian

utama KCKT. Di dalam kolom, senyawa

tersebut akan dipisah menurut ikatan kimianya

terutama rantai karbon. Senyawa yang

mempunyai rantai karbon panjang, akan

terdeteksi paling akhir. Ketepatan pemilihan

kolom sangat berpengaruh terhadap performan

kromatogram (Baarri, 2003).

Dalam penelitian ini, senyawa kapsaisin

yang dianalisis merupakan senyawa kapsaisin

yang terdapat dalam produk makanan Pilus

Garuda Pedas yang dianalisis dengan

menggunakan metode Kromatografi Cair

Kinerja Tinggi (KCKT).

METODE

Alat

Alat-alat yang digunakan adalah botol vial,

kertas perkamen, kertas saring, mikropipet,

mikrosentrifugator, mortir, penangas air,

sentrifugator, stamper, tabung reaksi, tabung

sentrifuga, vortex, ultrasonic vibrator, dan

instrumen KCKT.

Bahan

Bahan-bahan yang digunakan dalam

penelitian ini adalah standar kapsaisin

(C18H27NO3), metanol (CH3OH), aquadest, dan

sampel berupa produk Pilus Garuda Pedas

dengan nomor batch 1F12.

Preparasi Standar dan Pembuatan Kurva

Kalibrasi

Standar yang digunakan adalah larutan

baku standar kapsaisin (8-metil-N-vaniflyl-6-

noneamida) yang diencerkan secara bertingkat

menjadi beberapa konsentrasi yaitu 1 ppm, 2

ppm, 6 ppm, 10 ppm, 20 ppm, dan 40 ppm

dengan penambahan pelarut, yaitu metanol : air

dengan perbandingan 70 : 30. Larutan standar

kemudian dianalisis menggunakan KCKT. Hasil

yang diperoleh digunakan untuk membuat kurva

standar kapsaisin baku.

Proses Ekstraksi dan Analisis Sampel

Sampel yang akan dianalisis, yaitu produk

Pilus Garuda Pedas terlebih dahulu dihaluskan

dengan cara digerus menggunakan mortir dan

stamper hingga diperoleh serbuk halus. Sampel

kemudian ditimbang sebanyak 1 gram dengan

neraca analitik dan dimasukkan ke dalam tabung

sentrifugasi. Sebanyak 8 mL kloroform

ditambahkan ke dalam tabung kemudian

disentrifugasi pada 3000 g selama 15 menit.

Supernatan yang dihasilkan disaring

menggunakan kertas saring dan ditampung

dalam botol vial. Filtrat hasil penyaringan

diuapkan dalam penangas air hingga semua

kloroform menguap. Sampel bebas kloroform

kemudian dilarutkan kembali dengan

menambahkan metanol sebanyak 2 mL. Sampel

tersebut disonikasi dengan ultrasonic vibrator

selama 5 menit. Sampel dipindahkan sebanyak 1

mL ke dalam tabung eppendorf dan

disentrifugasi dalam mikrosentrifuga pada 3000

g selama 5 menit agar larutan bening. Sampel

yang telah bening diambil sebanyak 10 L,

dipindahkan ke dalam tabung eppendorf lain dan

ditambahkan dengan 990 L fase gerak berupa

metanol : air (70:30). Sampel kemudian

diinjeksikan ke dalam instrumen KCKT untuk

proses analisis.

Penentuan konsentrasi kapsaisin dalam

sampel dilakukan dengan memasukkan nilai

AUC (Area Under Curve) yang diperoleh ke

dalam persamaan kurva kalibrasi yang

didapatkan dari kapsaisin standar. Konsentrasi

sampel yang didapat kemudian dikalikan dengan

faktor pengenceran untuk mendapatkan nilai

konsentrasi sampel dari satu gram sampel.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Metode KCKT digunakan dalam

percobaan ini dipilih karena KCKT merupakan

metode pemisahan yang waktu analisisnya

singkat, efisiensinya tinggi, sederhana, cepat,

akurat, dan presisi (Ahmed, 2001). KCKT dapat

memisahkan suatu komponen dari campurannya

dan mengidentifikasinya berdasarkan waktu

retensi (Ajmera, 2012). Kapsaisin dapat larut

dalam pelarut metanol : air (70 : 30) yang

digunakan sebagai fasa gerak. Pelarut yang

digunakan merupakan fasa gerak yang berfungsi

membawa komponen-komponen menuju detek-

tor dan dapat berinteraksi dengan zat terlarut.

Berikut ini merupakan kurva baku regresi

linier yang didapatkan dari analisis larutan baku

standar dengan variasi konsentrasi 1 ppm, 2

ppm, 5 ppm, 10 ppm, 20 ppm, dan 40 ppm

Kurva ini didapatkan dari data pengukuran

larutan standar pada panjang gelombang 227 nm

dan 281 nm.

Gambar 1. Kurva kalibrasi standar kapsaisin

pada panjang gelombang 227 nm

Dari kurva baku diatas dapat diperoleh

persamaan sebagai berikut: y = 19914x + 3951

dengan nilai regresi sebesar 0,998.

Gambar 2. Kurva kalibrasi standar kapsaisin

pada panjang gelombang 281 nm

Dari kurva baku diatas dapat diperoleh

persamaan sebagai berikut: y = 8018x 1201

dengan nilai regresi sebesar 0,999.

y = 19914x + 3951R = 0.998

0

200000

400000

600000

800000

1000000

0 10 20 30 40 50

AU

C

Konsentrasi (ppm)

Kurva Kalibrasi Standar pada 227 nm

y = 8018.x - 1201.R = 0.999

0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

350000

0 10 20 30 40 50

AU

C

Konsentrasi (ppm)

Kurva Kalibrasi Standar pada 281 nm

Berdasarkan kedua kurva baku standar

kapsaisin tersebut, didapatkan nilai korelasi

yang cukup tinggi, yaitu 0,998 pada panjang

gelombang 227 nm dan 0,999 pada panjang

gelombang 281 nm. Hal tersebut menunjukkan

bahwa panjang gelombang 281 nm memberikan

regresi yang lebih tinggi dibandingkan dengan

regresi pada 227 nm, sehingga persamaan

garisnya digunakan sebagai pembanding

terhadap penentuan kadar capsaicin dalam

sampel.

Sampel yang dianalisis berupa produk

Pilus Garuda Pedas sebanyak 1 gram yang

terlebih dahulu dihaluskan dan dimasukkan ke

dalam tabung sentrifuga. Sebanyak 8 mL

kloroform dimasukkan ke dalam tabung

kemudian disentrifugasi pada 3000 g selama 15

menit. Proses ekstraksi dilakukan menggunakan

kloroform untuk menarik kapsaisin karena

kapsaisin mudah larut dalam kloroform.

Sentrifugasi dilakukan untuk memisahkan

kapsaisin dengan campuran lain yang terdapat

dalam sampel. Supernatan yang diperoleh

kemudian disaring menggunakan kertas saring

dan ditampung filtratnya. Pelarut kloroform

kemudian dihilangkan dengan memanaskan

campuran di atas penangas air karena kloroform

dapat mengganggu hasil analisis kapsaisin pada

instrument. Sampel bebas kloroform

ditambahkan dengan 2 mL methanol sebagai

fase gerak. Sampel dan metanol yang belum

larut disonikasi menggunakan ultrasonic vibrator

agar dapat tercampur lebih homogen. Sebanyak

1 mL sampel tersebut dimasukkan ke dalam

tabung eppendorf dan kemudian disentrifugasi

kembali untuk memisahkan dengan endapan.

Endapan dapat menyebabkan gangguan pada

pengukuran serta dapat menyumbat komponen

instrumen yang menyebabkan rusaknya

instrumen. Sebanyak 10 L supernatan yang

diperoleh dimasukkan ke dalam tabung

eppendorf lain dan kemudian ditambahkan

dengan 990 L fase gerak berupa campuran

metanol : air dengan perbandingan 70 : 30.

Larutan sampel dari tabung eppendorf kemudian

dianalisis dengan menggunakan KCKT.

Hasil analisis sampel dengan

menggunakan KCKT berupa kromatogram dan

diperoleh nilai AUC dari dua panjang

gelombang yang berbeda, yaitu 227 nm dan 281

nm seperti yang tertera pada Gambar 3 dan 4.

Gambar 3 Hasil kromatogram sampel pada panjang gelombang 227 nm.

Gambar 4 Hasil kromatogram sampel pada panjang gelombang 281 nm.

Minutes

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Volts

-0.00025

0.00000

0.00025

0.00050

0.00075

0.00100

0.00125

0.00150

0.00175

0.00200

0.00225

Volts

-0.00025

0.00000

0.00025

0.00050

0.00075

0.00100

0.00125

0.00150

0.00175

0.00200

0.00225

(Ca

psa

icin

)

9.0

50

88

0

0.5

4

Detector A - 1 (227nm)

28nov2014

28nov2014 sampel Pilus Garuda Pedas_Septi

Retention Time

Area

Name

Width

Minutes

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Volts

0.0000

0.0001

0.0002

0.0003

0.0004

0.0005

Volts

0.0000

0.0001

0.0002

0.0003

0.0004

0.0005

1340

0.9

83

5201

1.2

75

642

1.4

83

162

4.5

25

Cap

saic

in

45

9.0

58

151

9.2

25

71

9.3

75

Detector A - 2 (281nm)

28nov2014

28nov2014 sampel Pilus Garuda Pedas_Septi

Area

Retention Time

Name

Kapsaisin AUC 162

Dari hasil kromatogram dapat diperoleh

nilai AUC untuk sampel pada panjang

gelombang 281 nm adalah sebesar 162.

Persamaan yang digunakan untuk menentukan

kadar kapsaisin dalam sampel adalah persamaan

pada panjang gelombang 281 nm karena regresi

yang didapatkan lebih tinggi dibandingkan pada

panjang gelombang 227 nm. Nilai AUC tersebut

dimasukkan ke dalam persamaan pada kurva

baku kapsaisin pada panjang gelombang 281 nm

yang kemudian dikalikan dengan faktor

pengenceran sebesar 200 sehingga diperoleh

nilai konsentrasinya. Konsenstrasi kapsaisin

dalam sampel yang diperoleh sebesar 34 g/1

gram atau 34 ppm.

KESIMPULAN

Berdasarkan analisis yang dilakukan pada

senyawa kapsaisin dari sampel produk makanan

Pilus Garuda Pedas, di dapatkan kadar

kapsaisin yang terkandung dalam sampel

tersebut adalah 34 g/1 gram atau 34 ppm.

DAFTAR PUSTAKA

Ahmed Y. B., Al Othman Z. A., Habila M. A.,

Ghafar A. A. 2011. Determination of

capsaicin and dihydrocapsaicin in

Capsicum fruit samples using high

performance liquid chromatography.

Molecules 16: 8919-8929.

Ajmera A., Deshpande S., Patel P., Patel K.,

Solanki S., Rathod K. Reverse Phase High

Performance Liquid Chromatographic

(HPLC) Method for Simultaneous

Determination of Atorvastatin,

Torvastatin, Ezetimibe and Fenofibrate in

Commercial Tablets, Int J Pharm Pharm

Sci 2012; 4: 206-209.

Baarri. 2003. Analisis Perbedaan Kolom pada

Determinasi Karbohidrat Susu Fermentasi

dengan Metode HPLC. Journal of The

Indonesian Tropical Animal Agriculture,

Vol 28(1):28.

Deal C. L., Schnitzer T. J., Lipstein E., Seibold

J. R., Stevens R. M., Levy M. D., Albert

D., Renold F. Treatment of arthritis with

topical capsaicin: A double-blind trial.

Clin. Ther., 13,383-395.

Kosuge S., Furuta M. 1970. Studies on the

pungent principle of Capsicum. Part XIV:

Chemical constitution of the pungent

principle. Agric. Biol. Chem., 34, 248-

256.

Moore D. J., Moore D. M. 2003. Synergistic

Capsicum-tea mixtures with anticancer

activity. J. Pharm. Pharmacol., 55, 987-

994.

Szolcsanyi J. 2004. Forty years in capsaicin

research for sensory pharmacology and

physiology. Neuropeptides, 38, 377-384.

Yaldiz G., Ozguven M. A. 2011. Study of yield

and yield components of different

ornamental pepper (Capsicum sp.) species

and lines in cukurova ecological

conditions. Pak J Biol Sci, 14: 273- 281.

Yola R., Zulfarman, & Refilda. 2013. Penentuan

Kandungan Kapsaisin pada Berbagai

Buah Cabai (Capsicum) dengan Metode

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

(KCKT). Jurnal Kimia, Vol 2(2): 115.

.