Post on 21-Oct-2020
PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ALGA COKELAT (Sargassum sp.)
TERHADAP PENURUNAN SKOR INTEGRITAS MUKOSA LAMBUNG YANG
DIAMATI SECARA MIKROSKOPIS PADA LAMBUNG TIKUS Rattus norvegicus
STRAIN WISTAR YANG DIINDUKSI INDOMETASIN
TUGAS AKHIR
Untuk Memenuhi Persyaratan
Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran Umum
Oleh:
Shintia Lailatul Firdaus
NIM 145070100111026
PROGRAM STUDI KEDOKTERAN
FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS BRAWIJAYA
MALANG
2017
DAFTAR ISI
Halaman
Halaman Judul ...................................................................................... i
Halaman Persetujuan ........................................................................... ii
Halaman Pengesahan .......................................................................... iii
Halaman Pernyataan Keaslian ................................................................ iv
Kata Pengantar ..................................................................................... v
Abstrak ................................................................................................. vii
Abstract ................................................................................................ viii
Daftar Isi ............................................................................................... ix
Daftar Tabel .......................................................................................... xiii
Daftar Gambar ...................................................................................... xiv
Daftar Lampiran ..................................................................................... xv
Daftar Singkatan .................................................................................... xvi
BAB 1 PENDAHULUAN ...................................................................... 1
1.1 Latar Belakang ...................................................................... 1
1.2 Rumusan Masalah ................................................................. 4
1.3 Tujuan Penelitian ................................................................... 4
1.3.1 Tujuan Umum .............................................................. 4
1.3.2 Tujuan Khusus ............................................................. 4
1.4 Manfaat Penelitian ................................................................. 5
1.4.1 Bagi Peneliti ................................................................. 5
1.4.2 Bagi Keilmuan .............................................................. 5
1.4.3 Bagi Pelayanan Kesehatan .......................................... 5
1.4.4 Bagi Kemasyarakatan .................................................. 5
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA .............................................................. 6
2.1 Lambung ............................................................................... 6
2.1.1 Fisiologi dan Sekresi Lambung .................................... 6
2.2 Peradangan Lambung (Gastritis) ............................................ 8
2.2.1 Gastritis Akut ............................................................... 8
2.2.2 Gastritis Kronis ............................................................ 8
2.3 Ulkus Peptikum ..................................................................... 9
2.3.1 Definisi dan Etiologi ..................................................... 9
2.3.2 Patofisiologi ................................................................. 9
2.3.3 Tanda dan Gejala ........................................................ 10
2.3.4 Terapi Farmakologi Ulkus Peptikum ............................. 11
2.3.4.1 Antagonis Reseptor H2 .................................... 11
2.3.4.2 PPI (Proton Pump Inhibitor) .............................. 12
2.3.4.3 Analog Prostaglandin: Misoprostol ................... 12
2.4 Non-Steroid Anti-Inflammatory Drugs (NSAIDs) .................... 13
2.4.1 Definisi dan Pembagian NSAID ................................... 13
2.4.2 Farmakodinamik .......................................................... 15
2.4.3 Efek Samping .............................................................. 16
2.5 Sargassum sp. ....................................................................... 17
BAB 3 KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN ........... 19
3.1 Kerangka Konsep Penelitian ................................................... 19
3.3 Hipotesis Penelitian ............................................................... 21
BAB 4 METODE PENELITIAN ............................................................. 22
4.1 Desain Penelitian ................................................................... 22
4.1.1. Studi In Vivo ................................................................ 22
4.2 Subjek Penelitian ................................................................... 22
4.2.1 Populasi dan Sampel Penelitian ................................... 22
4.2.2 Perhitungan Besar Subjek Penelitian ........................... 23
4.3 Tempat dan Waktu Pelaksanaan Penelitian ........................... 24
4.4 Variabel Penelitian ................................................................. 24
4.4.1 Variabel Bebas ............................................................. 24
4.4.2 Variabel Tergantung .................................................... 24
4.5 Definisi Operasional ............................................................... 24
4.5.1 Indometasin ................................................................. 24
4.5.2 Alga Cokelat (Sargassum sp.) ...................................... 25
4.5.2.1 Alga Cokelat ..................................................... 25
4.5.2.2 Ekstrak Alga Cokelat ........................................ 25
4.5.3 Tikus Model Gastritis .................................................... 25
4.5.4 Gambaran Pendarahan Secara Mikroskopis ................ 26
4.6 Alat dan Bahan Penelitian ...................................................... 27
4.6.1 Bahan Penelitian .......................................................... 27
4.6.1.1 Bahan untuk Pemeliharaan Hewan Coba ......... 27
4.6.1.2 Bahan untuk Perlakuan Hewan Coba ............... 27
4.6.1.3 Bahan untuk Pengambilan Organ ............................. 27
4.6.1.4 Bahan untuk Pembuatan Preparat ................... 27
4.6.2 Alat Penelitian .............................................................. 28
4.6.2.1 Alat untuk Pemeliharaan Hewan Coba ............. 28
4.6.2.2 Alat untuk Penimbangan Berat Badan .............. 28
4.6.2.3 Alat untuk Pemberian Indometasin, Ekstrak Sargassum sp.,
dan Gold Standard .......................................... 28
4.6.2.4 Alat untuk Pengambilan Organ ......................... 29
4.6.2.5 Alat untuk Pembuatan Preparat ........................ 29
4.6.5.6 Alat Penilaian Mikroskopis Lesi Mukosa Lambung Tikus
......................................................................... 29
4.7 Prosedur Penelitian ............................................................... 29
4.7.1 Pembuatan Model Hewan Gastritis .............................. 29
4.7.2 Pemberian Ekstrak Alga Cokelat dan Pembedahan Kelompok
Perlakuan ..................................................................... 30
4.7.3 Prosedur Pembuatan Preparat Histopatologi ............... 30
4.7.4 Persiapan Hewan Coba ............................................... 31
4.7.5.1 Sebelum Penelitian .......................................... 31
4.7.5.2 Selama Penelitian ............................................ 32
4.7.5.3 Sesudah Penelitian .......................................... 32
4.8 Alur Penelitian dan Pengumpulan Data ................................ 33
4.8.1 Alur Penelitian .............................................................. 34
4.8.2 Teknik Pengumpulan Data ........................................... 35
4.9 Analisis Data ......................................................................... 35
4.10 Jadwal Kegiatan ................................................................. 37
BAB 5 HASIL PENELITIAN DAN ANALISIS DATA ............................ 38
5.1 Hasil Pemeriksaan Mikroskopis (Integritas Sel Epitel) Mukosa Lambung
Tikus ...................................................................................... 38
5.2 Rata-Rata Skor Integritas Mukosa Lambung Tikus Bedasarkan Ekstrak
Sargassum sp. ....................................................................... 41
5.3 Pengujian Pengaruh Ekstrak Sargassum sp. Terhadap Skor Integritas
Mukosa Lambung Tikus ........................................................ 43
5.3.1 Pengujian Kenormalan Residual Pengaruh Ekstrak Sargassum sp.
Terhadap Skor Integritas Mukosa Lambung Tikus ...... 43
5.3.2 Pengujian Homogenitas Residual Pengaruh Ekstraj Sargassum sp.
Terhadap Skor Integritas Mukosa Lambung Tikus ...... 43
5.3.3 Pengujian Perbedaan Pengaruh Ekstrak Sargassum sp. terhadap
Skor Integritas Mukosa Lambung Tikus ...................... 44
5.4 Analisis Pengaruh Ekstrak Sargassum sp. terhadap Skor Integritas Mukosa
Lambung Tikus ..................................................................... 47
5.4.1 Hasil Estimasi Pengaruh Ekstrak Sargassum sp. Terhadap Skor
Integritas Mukosa Lambung Tikus ............................... 47
5.4.1.1 Pengujian Koefisien Determinasi ...................... 47
5.4.1.2 Koefisien Korelasi ............................................ 48
5.4.1.3 Pengujian Hipotesis .......................................... 48
5.4.1.3.1 Uji Hipotesis Parsial ........................... 48
5.4.1.4 Model Empirik Regresi Linier Sederhana 49
BAB 6 PEMBAHASAN ........................................................................ 51
6.1 Hasil Penelitian ............................................................... 51
BAB 7 PENUTUP ................................................................................. 55
7.1 Kesimpulan ............................................................................ 55
7.2 Saran ..................................................................................... 55
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................. 56
LAMPIRAN .......................................................................................... 62
vii
ABSTRAK
Firdaus, Shintia Lailatul. 2017. Pengaruh Pemberian Ekstrak Alga Cokelat
(Sargassum sp.) Terhadap Penurunan Skor Integritas Mukosa Lambung
yang Diamati Secara Mikroskopis pada Lambung Tikus Rattus
norvegicus Strain Wistar yang Diinduksi Indometasin. Tugas Akhir,
Program Studi Kedokteran, Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya.
Pembimbing: (1) dr. Bayu Lestari, M.Biomed., (2) dr. Dewi Mustika, M.Biomed.
Peptic ulcer disease (PUD) merupakan kondisi yang muncul saat lapisan mukosa protektif dari mukosa gastrointestinal mengalami kerusakan. Hal ini dikarenakan tidak seimbangnya antara factor agresif (perusak mukosa lambung) dan factor defensive (pemelihara keutuhan mukosa lambung). Sargassum mengandung agen yang memiliki efek anti-ulcer, dengan cara menjaga volume serta keasaman dari cairan lambung, dan meningkatkan system pertahanan antioksidan mukosa lambung pada model hewan coba gastritis. Penelitian ini adalah eksperimen murni dengan metode Randomized Post Only Controlled Group Design, yang dilakukan secara in vivo menggunakan tikus yang diinduksi indometasin. Dilakukan pengelompokan tikus sesuai perlakuan yang diberikan, yaitu kontrol negatif, kontrol positif, dosis 1 (150mg/KgB), dosis 2 (300mg/KgBB), dosis 3 (600mg/KgBB), dan kelompok misoprostol. Hasil penelitian dilakukan uji Pengujian Kolmogorov-Smirnov, sebesar 0.100 dengan probabilitas sebesar 0.200, menghasilkan probabilitas > alpha (5%), maka dinyatakan normal. Pengujian Levene sebesar 0.185 dengan probabilitas sebesar 0.965 menghasilkan probabilitas > alpha (5%), sehingga dinyatakan memiliki ragam yang homogen. Pengujian hipotesis secara parsial konstanta menghasilkan nilai t hitung sebesar 5.207 dengan probabilitas sebesar 0.000, menunjukkan
probabilitas < level of significance (=5%). Sehingga terdapat pengaruh signifikan secara parsial konstanta terhadap skor integritas mukosa lambung. Dari penelitian yang telah dilakukan, menunjukkan hasil yang optimum pada dosis 2 (300mg/KgBB). Pada pemberian dosis 1 (150mg/KgBB) dan 3 (600mg/KgBB) memberikan skor yang lebih tinggi dibandingkan dengan dosis 2. Maka dapat disimpulkan dengan pemberian dosis 300 mg/KgBB memberikan hasil yang paling baik, ditunjukkan dari skor integritas mukosa yang dihasilkan paling rendah dibandingkan dengan skor integritas yang dihasilkan oleh dosis 150 mg/KgBB dan 600 mg/KgBB. Kata kunci: Sargassum sp., skor integritas mukosa, ulkus peptikum
viii
ABSTRACT
Firdaus, Shintia Lailatul. 2017. The Influence of Chocolate Algae Extract
(Sargassum sp.) on Reduction of Integrity Score of Gastric Mucosa
Observed Microscopically on Stomach Rat Rattus norvegicus Wistar
Strain in Indomethacin induction. Final assignment, Medical Program,
Faculty of Medicine, Brawijaya University. Supervisors: (1) dr. Bayu Lestari,
M.Biomed., (2) dr. Dewi Mustika, M.Biomed.
Peptic ulcer disease (PUD) is a condition that occurs when the protective mucosal
layer of the gastrointestinal mucosa is damaged. This is due to the unbalanced
between aggressive factors (gastric mucosal destroyer) and defensive factor
(maintaining the integrity of the gastric mucosa). Sargassum contains agents that have
anti-ulcer effects, keeping the volume and acidity of the stomach fluid, and improving
the gastric mucosal antioxidant defense system in animal models of gastritis. This
research is a pure experiment with Randomized Post Only Controlled Group Design
method, which is done in vivo using indomethacin-induced rats. Grouped mice
according to given treatment, negative control, positive control, dose 1 (150mg / KgB),
dose 2 (300mg / KgBB), dose 3 (600mg / KgBB), and misoprostol group. The result of
the experiment was Kolmogorov-Smirnov test, 0,100 with probability equal to 0200,
yielding probability> alpha (5%), then it was stated normal. Levene test of 0.185 with
probability of 0.965 yields probability> alpha (5%), so it is stated to have a
homogeneous variety. Hypothesis testing by partial constant yields t value of 5.207
with probability of 0.000, shows probability
1
BAB 1
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Lambung adalah suatu organ berongga besar yang meluas dan menyerupai
kantung dalam rongga peritonium. Lambung terletak melintasi abdomen bagian atas
antara hepar dan diafragma disebelah anterior dan kolon transfersum disebelah
posterior. Lambung dilindungi oleh lapisan mukus. Pada mukosa lambung diproduksi
glikoprotein (berupa mukus) dan bikarbonat. Lapisan mukus ini menutupi permukaan
mukosa dengan tebal 2-3 kali tinggi sel epitel permukaan. Mukus dan bikarbonat ini
berfungsi sebagai pelindung dari mukosa terhadap pengaruh asam dan pepsin,
empedu, dan zat perusak dari luar (Abbas et. al., 2007).
Gastritis merupakan salah satu penyebab kerusakan dari mukosa lambung,
dimana proses inflamasi terjadi disana (Sudoyo, 2006). Gastritis disebabkan oleh
bakteri atau obat-obatan yang dapat bersifat akut, kronik, difus, atau lokal (Price,
2006). Gambaran yang akan ditemukan adalah berupa dyspepsia atau indigesti
(Mansjoer, 2001).
Selain gastritis gangguan lambung yang lain ialah ulkus peptikum. Dimana
terdapat luka terbuka dengan pinggiran edema disertai indurasi dengan tukak tertutup
debris (Tarigan, 2009). Hal ini dikarenakan tidak seimbangnya antara faktor agresif
(perusak mukosa lambung) dan faktor defensif (pemelihara keutuhan mukosa
lambung) (Robbins et. al., 2007). Peptic ulcer disease (PUD) merupakan kondisi yang
muncul saat lapisan mukosa protektif dari mukosa gastrointestinal mengalami
kerusakan. Lapisan protektif pada mukosa lambung berupa mucus dan bikarbonat
2
dapat rusak akibat asam lambung dan pepsin yang berasal dari usus duabelas jari.
PUD utamanya terjadi pada lambung (ulkus lambung) atau pada proksimal duodenum
(ulkus duodenum) (Lau et al., 2011).
Sebagian besar ulkus lambung disebabkan oleh infeksi Helicobacter pylori dan
Non-Steroid Anti Inflamasi Drug (NSAID), ulkus lambung terjadi pada lebih dari 25%
pasien yang menggunakan NSAID dalam jangka panjang (Borody et. al., 1998).
Mekanisme gastritis akibat NSAID sendiri diakibatkan oleh defisiensi prostaglandin
yang memiliki kontribusi dominan dalam menyebabkan ulkus pada lambung. Gastritis
akibat NSAID memiliki pathogenesis yang kompleks diantaranya karena definsiensi
prostaglandin serta interaksi dari neutrophil dan radikal bebas (Yoshikawa et. al.,
2000).
Idealnya, NSAID dihentikan sebagai langkah pertama terapi ulkus. Selanjutnya,
diberikan obat penghambat sekresi asam (penghambat histamin 2 (H2), proton pump
inhibitors (PPIs)). Akan tetapi, penghentian NSAID tidak selalu memungkinkan karena
beratnya penyakit yang mendasari (Valle, 2008). Salah satu contoh PPIs adalah
Omeprazole, Omeprazole memiliki beberapa efek samping yaitu menurunkan jumlah
magnesium dalah darah bila dikonsumsi lebih dari 3 bulan dan dapat meningkatkan
risiko osteoporosis (Dexcel, 2015).
Penurunan prostaglandin dan peningkatan radikal bebas merupakan salah satu
pathway dari terbentuknya ulkus peptikum. Sehingga dengan meningkatkan
prostaglandin dan pengikatan radikal bebas dapat menjadi pencetus pencegahan dari
ulkus peptikum. Salah satu sumber daya Indonesia yang memiliki kandungan sebagai
3
agen pencegahan ulkus peptikum dengan penghambatan pathway tersebut adalah
dengan alga cokelat (Sargassum sp).
Indonesia menyimpan potensi yang sangat besar untuk menjadi sumber utama
rumput laut di dunia. Berdasarkan identifikasi penelitian terdapat sekitar 555 jenis
rumput laut yang tumbuh di perairan Indonesia. Salah satu jenis alga yang banyak
terdapat di Indonesia adalah jenis alga cokelat seperti Sargassum sp. (Putri, 2011).
Dari berbagai penelitian, diketahui bahwa Sargassum sp. memiliki banyak manfaat
diantaranya adalah sebagai antiinflamasi, antioksidan, antitumor, imunomodulator,
dan banyak pula digunakan sebagai bahan suplemen makanan (Teng et. al., 2015).
Studi Zhang dan kawan-kawan pada 2012 menyatakan bahwa Sargassum sp.
memiliki efek terhadap sistem imun dan aktivitas antioksidan. Sargassum sp. terbukti
memiliki efek proteksi melalui peningkatan interleukin-2 (IL-2), interleukin-4 (IL-4),
interleukin-10 (IL-10). Zat ini juga memiliki kemampuan untuk menurunkan interleukin-
6 (IL-6), interleukin-1β (IL-1β), tumor necrosis factor-α (TNF-α), menormalkan aktivitas
enzim antioksidan, serta menghambat lipid peroxidation pada mukosa lambung
(Zhang et al., 2012). Studi lain menyatakan Sargassum sp. mengandung agen yang
memiliki efek anti-ulcer, dengan cara menjaga volume serta keasaman dari cairan
lambung, dan meningkatkan sistem pertahanan antioksidan mukosa lambung pada
model hewan coba gastritis menggunakan etanol. (Raghavendran et al., 2004). Studi
dari Mori dan kolega menyatakan bahwa efek anti ulkus yang dimiliki oleh Sargassum
sp., dicapai melalui pembentukan prostaglandin endogen (Mori et. al., 2006). Oleh
karena itu, melalui penelitian ini ingin membuktikan bahwa ekstrak Sargassum sp.
memiliki potensi kuat sebagai agen pencegahan ulkus peptikum yang efektif dan
4
efisien serta terjangkau bagi semua kalangan karena sumbernya yang murah dan
mudah diperoleh terutama di Indonesia.
1.2 Rumusan Masalah
Bagaimanakah pengaruh pemberian Sargassum sp. terhadap gambaran
mikroskopis lambung tikus Rattus novergicuss strain wistar model ulkus peptikum
yang telah diinduksi indometasin?
1.3 Tujuan Penelitian
1.3.1 Tujuan Umum
Mengetahui pengaruh pemberian ekstrak Sargassum sp. terhadap gambaran
perdarahan yang diamati secara mikroskopis pada lambung tikus Rattus novergicuss
strain wistar model ulkus peptikum yang telah diinduksi indometasin.
1.3.2 Tujuan Khusus
1. Mengetahui potensi ekstrak Sargassum sp. dalam menurunkan skor
integritas mukosa lambung yang diamati secara mikroskopis pada lambung
tikus Rattus novergicuss strain wistar yang telah diinduksi indometasin.
2. Mengetahui dosis optimal pemberian ekstrak Sargassum sp. berdasarkan
penurunan skor integritas mukosa lambung yang diamati secara mikroskopis
pada lambung tikus Rattus novergicuss strain wistar yang telah diinduksi
indometasin.
5
1.4 Manfaat Penelitian
1.4.1 Bagi Peneliti
1. Mengaplikasikan salah satu peran dokter sebagai researcher (peneliti) guna
mengembangkan ilmu pengetahuan.
2. Sebagai landasan ilmiah untuk penelitian selanjutnya dalam skala yang lebih
luas berhubungan dengan Sargassum sp.
1.4.2 Bagi Keilmuan
Memberikan informasi ilmiah tentang manfaat Sargassum sp. sebagai salah
satu alternatif pengobatan anti inflamasi dalam mengurangi tingkat keparahan ulkus
peptikum.
1.4.3 Bagi Pelayanan Kesehatan
1. Mampu memberikan asuhan dalam pemenuhan kebutuhan nutrisi sebagai
kebutuhan fisiologis manusia.
2. Dapat dijadikan sebagai bahan pertimbangan perusahaan industri obat
untuk menciptakan suatu alternatif baru dalam pencegahan ulkus peptikum
menggunakan ekstrak Sargassum sp.
1.4.4 Bagi Kemsyarakatan
1. Dengan mengetahui manfaat dari Sargassum sp., maka dapat
disosialisasikan pada masyarakat agar dapat memanfaatkan sebagai
pengobatan alternatif untuk ulkus peptikum.
2. Memanfaatkan Sargassum sp. sebagai komplementer bagi pengguna
NSAID.
6
BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Lambung
2.1.1. Fisiologi dan Sekresi Lambung
Lambung adalah perluasan organ berongga besar menyerupai kantung dalam
rongga peritoneum yang terletak diantara esofagus dan usus halus. Dalam keadaan
kosong, lambung menyerupai tabung bentuk J, dan bila penuh, berbentuk seperti
buah pir raksasa. Lambung terdiri dari antrum kardia (yang menerima esofagus),
fundus besar seperti kubah, badan utama atau korpus dan pylorus (Price et. al., 2006).
Lambung adalah bagian saluran cerna yang melebar dengan fungsi utama
menambahkan cairan asam pada makanan yang masuk, mengubahnya melalui
aktifitas otot menjadi massa kental (khimus) dan melanjutkan proses pencernaan
yang telah dimulai dalam rongga mulut dengan menghasilkan enzim proteolitik pepsin.
Lambung juga membentuk lipase lambung yang menguraikan trigliserida dengan
bantuan lipase lingual (Junqueira et al., 2007).
Mukosa lambung terdiri atas epitel permukaan, lamina propia, dan mukosa
muskularis. Permukaan lumen mukosa ditutupi epitel selapis silindris. Epitel ini juga
meluas kedalam dan melapisi foveola gastrica yang merupakan invaginasi epitel
permukaan. Di daerah fundus lambung, foveola ini tidak dalam dan masuk kedalam
mukosa sampai kedalaman seperempat tebalnya. Di bawah epitel permukaan
terdapat lapisan jaringan ikat longgar, yaitu lamina propia, yang mengisi celah
diantara kelenjar gastrika. Lapisan luar mukosa dibatasi selapis tipis otot polos yaitu
mukosa muskularis yang terdiri atas lapisan sirkuler didalam dan longitudinal diluar.
7
Berkas serat otot polos dan mukosa muskularis meluas dan terjulur ke dalam lamina
propria diantara kelenjar lambung ke arah epitel permukaan (Junqueira et al., 2007).
Submukosa adalah lapisan tepat dibawah mukosa muskularis. Pada lambung
kosong, lapisan ini meluas sampai ke dalam lipatan atau rugae. Submukosa
mengandung jaringan ikat tidak teratur yang lebih padat dengan lebih banyak serat
kolagen dibandingkan dengan lamina propria. Muskularis mukosa tampak jelas pada
sediaan lambung, terdiri atas dua lapis otot polos yaitu lapisan sirkular dalam dan
longitudinal luar (Junqueira et al., 2007). Mukosa lambung melindungi diri dari
autodigesti melalui beberapa komponen, yaitu:
1. Sekresi mukus : merupakan lapisan tipis pada permukaan mukosa lambung.
2. Sekresi bikarbonat: merupakan sel sel epitel permukaan lambung yang
mensekresi bikarbonat ke zona batas adhesi mukus, membuat pH
mikrolingkungan netral pada perbatasan dengan sel epitel.
3. Pertahanan epitel: merupakan tautan interseluler yang menjadi pertahanan
dari difusi balik ion hidrogen.
4. Aliran darah mukosa : suplai darah mukosa menyediakan oksigen,
bikarbonat, dan nutrien untuk sel epitel.
5. Sintesis prostaglandin: produksi prostaglandin mempengaruhi banyak
komponen lain dari pertahanan mukosa, antara lain merangsang produksi
mukus dan bikarbonat yang akan menghambat sekresi asam sek parietal.
Disamping itu, aksi vasodilatasi dari prostaglandin E dan I meningkatkan
aliran darah mukosa. Obat yang menghambat sintesis prostaglandin,
misalnya NSAIDs dan obat-obat yang serupa dengan aspirin seperti
8
paracetamol akan menurunkan cytoprotection dan memicu perlukaan
mukosa lambung dan ulserasi.
Mukosa lambung memiliki fungsi melindungi lambung dari luka akibat asam
lambung dan segera melakukan perbaikan apabila hal tersebut terjadi melalui jalur
neural, endokrin, parakrin, dan autokrin. Asam lambung bermanfaat sebagai pelancar
pencernaan protein, menekan pertumbuhan bakteri, dan penyerapan kalsium, zat
besi, dan vitamin B12 (Hall dan Guyton, 2015).
2.2. Peradangan Lambung (Gastritis)
2.2.1. Gastritis Akut
Gastritis akut merupakan peradangan mukosa lambung yang disebabkan oleh
iritan lokal seperti NSAID, kafein, alkohol, endotoksin bakteri. Bahan tersebut melekat
pada epitel lambung dan menghancurkan lapisan mukosa pelindung, meninggalkan
daerah epitel yang gundul (Price & Wilson, 2006).
Peradangan mungkin disertai perdarahan ke dalam mukosa, terdapat edema
mukosa, infiltrat peradangan neutrofil dan terlepasnya epitel mukosa superfisialis
(erosi) (Robbins et al., 2007).
2.2.2. Gastritis Kronis
Gastritis kronis didefinisikan sebagai peradangan mukosa kronis yang
akhirnya menyebabkan atrofi mukosa dan metaplasia epitel (Robbins, 2007). Dinding
lambung menjadi tipis dan mukosa mempunyai permukaan yang rata (Price & Wilson,
2006).
9
2.3. Ulkus Peptikum
2.3.1. Definisi dan Etiologi
Ulkus peptikum (UP) adalah kerusakan pada lapisan mukosa, sub mukosa
sampai lapisan otot saluran cerna yang disebabkan oleh aktifitas pepsin dan asam
lambung. Ulkus peptikum dapat mengenai esofagus sampai usus halus, tetapi
kebanyakan terjadi pada bulbus duodenum (90%) dan kurvatura minor (Dodge, 2007).
Bila terjadi di antara kardia dan pilorus disebut ulkus lambung dan bila terjadi pada
daerah setelah pilorus disebut ulkus duodenum (Spiro, 2006). Ulkus peptikum sangat
jarang terjadi pada bayi dan anak dibanding dewasa, namun insiden yang pasti belum
diketahui. Pada kelompok anak, usia yang paling sering mengalami ulkus peptikum
adalah 12-18 tahun, dimana laki-laki lebih banyak dibanding perempuan (Sondheimer
et al., 2003).
2.3.2. Patofisiologi
Patogenesis Ulkus Peptikum umumnya terjadi akibat sekresi asam yang
berlebihan dan gangguan ketahanan / integritas mukosa, sehingga terjadi difusi balik
ion H+ dari lumen usus masuk ke dalam mukosa (Djuwantoro, 2000). Mekanisme
keseimbangan antara faktor agresif (perusak) dan faktor defensif (ketahanan mukosa)
sangat penting untuk mempertahankan fungsi dan integritas saluran cerna. Faktor
agresif yang utama adalah asam lambung dan pepsin. Faktor defensif yang berperan
adalah mucous barrier (mukus dan bikarbonat), mucosal resistance barrier (resistensi
mukosa), microcirculation (aliran darah mukosa) dan prostaglandin (Soemanto et al.,
2001).
10
Mekanisme kerja obat golongan non-steroid adalah melalui penghambatan
prostaglandin (Tjay et al., 2006). Prostaglandin diproduksi oleh mukosa lambung dan
diduga mempunyai efek sitoprotektif dan mekanisme kerja utama prostaglandin
adalah menghambat sekresi lambung (Katzung et al., 2004). Hambatan sintesis
prostaglandin menyebabkan sekresi asam yang berlebih, sehingga meningkatkan
keasamannya yang berpotensi menimbulkan tukak (ulcer) (Mutschler, 1986).
Kerusakan mukosa lambung dapat disebabkan oleh etanol. Etanol atau yang
dikenal sebagai alkohol di masyarakat telah menjadi masalah sosial (Brunton et al.,
2008). Etanol dapat meningkatkan produksi Reactive Oxygen Species dan
menurunkan kadar antioksidan (Fernandez-Checa et al., 2005), sehingga dapat
merusak sawar mukosa lambung. Etanol cepat berpenetrasi ke dalam mukosa
lambung dengan cara melepaskan radikal bebas dan meningkatkan permeabilitas
mukosa sehingga memungkinkan difusi balik HCl (Suleyman et al., 2001).
2.3.3. Tanda dan Gejala
Ulkus biasanya sembuh sendiri tetapi dapat timbul kembali. Nyeri dapat timbul
selama beberapa hari atau minggu dan kemudian berkurang atau menghilang. Gejala
bervariasi tergantung lokasi ulkus dan usia penderita. Contohnya anak dan orang tua
biasanya tidak memiliki gejala yang sering atau tidak ada gejala sama sekali. Oleh
karena itu ulkus biasanya diketahui ketika komplikasi terjadi. Hanya setengah dari
penderita ulkus duodenum mempunyai gejala yang sama seperti perih, rasa seperti
terbakar, nyeri, pegal, dan lapar. Rasa nyeri berlangsung terus-menerus dengan
intensitas ringan sampai berat biasanya terletak di bawah sternum. Kebanyakan
orang yang menderita ulkus duodenum, nyeri biasanya tidak terjadi ketika bangun
11
tidur tetapi timbul menjelang siang. Minum susu dan makan (yang menyangga
keasaman PH lambung) atau meminum obat antasida dapat mengurangi nyeri, tapi
mulai timbul kembali setelah 2 atau 3 jam kemudian. Nyeri yang dapat
membangunkan orang ketika malam hari juga kadang terjadi. Seringkali nyeri timbul
sekali atau lebih dalam sehari selama beberapa minggu dan hilang tanpa diobati.
Namun, nyeri biasanya timbul kembali 2 tahun kemudian dan terkadang juga dalam
beberapa tahun kemudian. Penderita biasanya akan belajar mengenai pola sakitnya
ketika kambuh (biasanya terjadi ketika stres). Makan bisa meredakan sakit untuk
sementara tetapi bisa juga malah menimbulkan sakit. Ulkus lambung terkadang
membuat jaringan bengkak (edema) yang menjalar ke usus halus, yang bisa
mencegah makanan melewati lambung. Blokade ini bisa menyebabkan kembung,
mual, atau muntah setelah makan (Keshav, 2004).
2.3.4. Terapi Farmakologi Ulkus Peptikum
2.3.4.1 Antagonis Reseptor H2
Antagonis Reseptor H2 mengurangi sekresi asam lambung dengan cara
berkompetisi dengan histamin untuk berikatan dengan reseptor H2 pada sel parietal
lambung. Bila histamin berikatan dengan H2 maka akan dihasilkan asam. Dengan
diblokirnya tempat ikatan antara histamin dan reseptor digantikan dengan obat-obat
ini, maka asam tidak akan dihasilkan. Efek samping obat golongan ini yaitu diare, sakit
kepala, kantuk, lesu, sakit pada otot dan konstipasi (Berardy and Lynda, 2005).
Contoh obat seperti Simetidin, Ranitidine, Famotidin, Nizatidin (Lacy et al, 2008).
Kemampuan antagonis reseptor H2 menurunkan asam lambung disamping dengan
toksisitas rendah merupakan kemajuan dalam pengobatan penyakit. Hasil dari
12
beberapa uji klinik menunjukkan obat-obat ini dapat menjaga gejala dengan efektif
selama episode akut dan mempercepat penyembuhan ulkus duodenal (Ghosh dan
Kinnear, 2003).
2.3.4.2 PPI (Proton Pump Inhibitor)
Mekanisme kerja PPI adalah memblokir kerja enzim KH ATPase yang akan
memecah KH ATP akan menghasilkan energi yang digunakan untuk mengeluarkan
asam dari kanalikuli serta parietal ke dalam lumen lambung. Pemakaian jangka
panjang dapat menimbulkan kenaikan gastrin darah dan dapat menimbulkan tumor
karsinoid pada tikus percobaan. Pada manusia belum terbukti gangguan
keamanannya pada pemakaian jangka panjang (Tarigan, 2009). Penghambat pompa
proton dimetabolisme dihati dan dieliminasi di ginjal. Dengan pengecualian penderita
disfungsi hati berat, tanpa penyesuaian dosis pada penyakit liverdan penyakit ginjal.
Dosis Omeprazol 20-40 mg/hr, Lansoprazol 15-30 mg/hr, Rabeprazol 20 mg/hr,
Pantoprazol 40 mg/hr dan Esomeprazol 20-40 mg/hr (Lacyet al, 2008). Inhibitor
pompa proton memiliki efek yang sangat besar terhadap produksi asam. Omeprazol
juga secara selektif menghambat karbonat anhidrase mukosa lambung, yang
kemungkinan turut berkontribusi terhadap sifat suspensi asamnya (Parischa
danHoogerwefh, 2008). Efek samping obat golongan ini jarang, meliputi sakit kepala,
diare, konstipasi, muntah, dan ruam merah pada kulit. Ibu hamil dan menyusui
sebaiknya menghindari penggunaan PPI (Lacyet al, 2008).
2.3.4.3 Analog Prostaglandin: Misoprostol
Mekanisme kerja mengurangi sekresi asam lambung, menambah sekresi
mukus, sekresi bikarbonat dan meningkatkan aliran darah mukosa. Biasanya
13
digunakan sebagai penangkal terjadinya ulkus peptikum pada pasien yang
menggunakan OAINS. Dosis 4 x 200mg atau 2 x 400 mg pagi dan malam hari. Efek
samping diare, mual, muntah, dan menimbulkan kontraksi otot uterus sehingga tidak
dianjurkan pada wanita yang bakal hamil (Tarigan, 2006). Misoprostol dapat
menyebabkan eksaserbasi klinis (kondisi penyakit bertambah parah) pada pasien
yang menderita penyakit radang usus, sehingga pemakaiannya harus dihindari pada
pasien ini. Misoprostol dikontraindikasikan selama kehamilan, karena dapat
menyebabkan aborsi akibat terjadinya peningkatan kontraktilitas uterus. Sekarang ini
misoprostol telah disetujui penggunaannya oleh United States Food and Drug
Administration (FDA) untuk pencegahan luka mukosa akibat NSAID (Parischa dan
Hoogerwefh, 2008).
2.4. Non-Steroid Anti-Inflammatory Drugs (NSAIDs)
2.4.1. Definisi dan Pembagian NSAIDs
Obat anti inflamasi non-steroid atau OAINS merupakan obat dengan sediaan
yang peresepannya paling luas, obat ini banyak digunakan untuk kasus-kasus nyeri
inflamasi karena efeknya adalah mengurangi rasa nyeri dari tingkat ringan sampai
sedang. OAINS mengandung bahan aktif yang secara farmakologi tidak homogen dan
terutama bekerja menghambat produksi prostaglandin (Sala et al., 2009). Umumnya
OAINS dibagi berdasarkan struktur kimia, waktu paruh plasma dan selektifitas
terhadap COX-1 dan COX-2. Sebagian besar OAINS dengan berapapun jumlah
dosisnya, akan diabsorpsi di traktus gastrointestinal dan 90% obat akan berikatan
dengan protein plasma, apabila protein plasma mengalami saturasi dengan obat,
14
konsentrasi obat yang aktif meningkat dengan cepat dibandingkan total kosentrasi
obat. NSAIDs dimetabolisme di hati sedangkan metabolit inaktif dikeluarkan lewat
empedu dan urin. Klasifikasi NSAIDs secara lengkap tampak pada Tabel 2.1
Tabel 2.1 Klasifikasi NSAIDs (IRA, 2014)
Obat Waktu konsentrasi puncak ( jam )
Waktu paruh ( jam)
Dosis Selektivitas
Salisilat
Asipirin 0,5 – 1 0,3 Q 4-6 jam COX1=COX2
Diflunisal 2-3 12 Q 8-12 TAD
Asam asetat
Indometasin 1.5 2.5 Q 12 jam COX1>COX2
Sulindac 8 13 Q 12 jam Tad
Etodolac 1 7 Q 6-8 jam COX1
15
Nabumetone 4-5 24 Q 12-24
jam
COX1=COX2
Coxib
Celecoxib 2-3 11 Q 12-24
jam
COX1
16
kedua isoform COX-1 dan COX-2, sehingga efek sampingnya pada gastrointestinal
meningkat dan salah satunya menyebabkan ulkus peptikum. (IRA, 2014)
2.4.3. Efek Samping
Pemakaian OAINS sering kali menimbulkan efek yang tidak diinginkan pada
gastro intestinal karena mempunyai efek secara langsung yang mana secara alamiah
obat ini merupakan bahan asam dan juga efek sistemik yang dapat menghambat
sekresi mukus, bikarbonat dan prostaglandin. Efek samping berupa lesi pada
gastrointestinal bagian atas baik peradangan maupun ulkus adalah komplikasi yang
paling sering dijumpai pada penggunaan OAINS yang dimungkinkan karena
hambatan terhadap COX-1. (IRA, 2014).
Tabel 2.2 Pengaruh NSAID (Non-Steroid Anti Inflammatory Drug) selektif dan non-selektif terhadap sistem organ (IRA, 2014)
Sistem organ NSAID non
selektif
Selektif COX 2
Gastrointestinal Dispepsia + ↓
Ulkus GI + ↓
Kolitis + ↓
Pendarahan + ↓
Renal Hipertensi + +
Retensi cairan dan
garam
+ +
Nefritis interstisial + +
Nekrosis papilaris + +
Gagal ginjal akut + +
Hepar Peningkatan serum
transaminase
+ +
Paru Serangan asma + +
17
2.5. Sargassum sp.
Rumput laut adalah makro alga yang hidup di laut maupun di air payau.
Berdasarkan identifikasi penelitian terdapat sekitar 555 jenis rumput laut yang tumbuh
di perairan Indonesia. Salah satu jenis alga yang banyak terdapat di Indonesia adalah
jenis alga cokelat (Putri, 2011). Sargassum sp. adalah salah satu genus dari kelompok
rumput laut cokelat yang merupakan genera terbesar dari famili Sargassaceae
(Sugiono et al., 2014).
Sargassum sp. mengandung natrium alginat (Na-alginat), laminarin, fucoidan,
selulosa, manitol dan mengandung antioksidan (polifenol), zat besi, iodium, vitamin C
dan mineral seperti Ca, K, Mg, Na, Fe, Cu, Zn, S, P, Mn serta mineral-mineral lainnya.
Kandungan gizi per 2gram bubuk kering Sargassum sp. adalah karbohidrat 17,835 %,
protein 0,776 %, dan polifenol 24,58 % (491,5 mg). Selain itu Sargassum sp juga
mengandung senyawa fitokimia seperti flavanoid, triterpenoid, tanin dan saponin yang
dipercaya dapat dimanfaatkan sebagai bahan pengobatan herbal (Putri, 2011).
Kemampuan Sargassum sp. sebagai obat berhubungan dengan bidang
farmakologi disebabkan adanya kandungan senyawa metabolit sekunder. Metabolit
sekunder merupakan bioactive substances yang dikembangkan melalui berbagai
penelitian untuk dijadikan obat alternatif. Studi Zhang dan kawan-kawan pada 2012
menyatakan bahwa Sargassum memiliki efek terhadap system imun dan aktivitas
antioksidan. Sargassum terbukti memiliki efek proteksi terhadap interleukin-2 (IL-2),
Kulit Alergi sulfa - + ( celecoxib)
Kardiovaskular Trombosis - +
Sistem Saraf pusat Vertigo + +
Disfungsi kognitif - +
18
interleukin-4 (IL-4), interleukin-10 (IL-10), menormalkan aktivtas enzim antioksidan,
serta menghambat lipid peroxidation pada mukosa lambung (Zhang et al., 2012).
Studi lain menyatakan Sargassum sp. mengandung agen yang memiliki efek anti-
ulcer, dengan cara menjaga volume serta keasaman dari cairan lambung, dan
meningkatkan system pertahanan antioksidan mukosa lambung pada model hewan
coba gastritis menggunakan ethanol (Raghavendran et al., 2004). Studi dari Mori dan
kolega menyatakan bahwa efek anti ulkus yang dimiliki oleh Sargassum, dicapai
melalui pembentukan prostaglandin endogen (Mori et al., 2006).
19
BAB 3
KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN
3.1 Kerangka Konsep Penelitian
Gambar 3.1 Skema Cara Kerja Ekstrak Sargassum sp. dalam Menghambat Ulkus Peptikum
20
Pada penelitian ini, tikus akan diberi Indometasin yang merupakan NSAID non
selektif. Indometasin memiliki kemampuan untuk menghambat enzim siklooksigenase
(COX). Terdapat dua jenis COX yang dihambat oleh NSAID yaitu COX-1 dan COX-2.
Hambatan pada COX-1 dan COX-2 merupakan mekanisme utama penghambatan
pembentukan prostaglandin (PG). Penghambatan jalur COX yang tidak spesifik,
penghambatan padai COX-1 dan COX-2, menyebabkan penurunan produksi
prostaglandin (PG) terutama diakibatkan oleh hambatan pada COX-1. Prostaglandin
dari COX-1 memberikan efek gastroprotektif pada lambung. Hilangnya prostaglandin
menyebabkan hilangnya perlindungan mukosa lambung dari asam lambung.
Hambatan pada jalur COX-2 berperan dalam meningkatkan radikal bebas dan
mendorong terjadinya inflamasi. Hambatan pada COX-1 dan COX-2 menyebabkan
keseimbangan enzim sikloksigenase menjadi terganggu dan menyebabkan
peningkatan pada efek ulcerogenic gaster (IRA, 2014). NSAIDs juga menyebabkan
hipermotilitas pada lambung yang akan berujung pada kerusakan mukosa lambung.
Kerusakan mukosa lambung yang terus menerus dapat berkembang menjadi ulkus
gaster. Ulkus gaster dapat menyebabkan munculnya bitnik-bintik perdarahan yang
selanjutnya akan tampak pada analisa makroskopis.
Ekstrak alga cokelat Sargassum sp diketahui mengandung zat aktif seperti
fucoidan, flavonoid, dan plastoquion yang mampu meningkatkan kadar prostaglandin
dan menurunkan radikal bebas (Zhang et al., 2012). Pada penelitian ini, akan melihat
efek pemberian ekstrak alga cokelat Sargassum sp sebagai pencegahan ulkus
peptikum yang dilihat dari skor integritas mukosa lambung pada tikus.
21
3.2 Hipotesis Penelitian
Pemberian ekstrak alga cokelat (Sargassum sp.) dapat menurunkan skor
integritas mukosa lambung yang diamati secara mikroskopis pada lambung tikus
Rattus novergicuss strain wistar model ulkus peptikum yang telah diinduksi
indometasin.
22
BAB 4
METODE PENELITIAN
4.1. Desain Penelitian
4.1.1. Studi In Vivo
Rancangan penelitian ini merupakan Randomized Pre-Clinical Trial yang
bersifat eksperimen murni (true experimental design) di laboratorium secara in vivo
dengan rancangan Randomized Post Test Only Controlled Group Design.
4.2. Subjek Penelitian
4.2.1. Populasi dan Sampel Penelitian
Populasi penelitian ini adalah tikus putih (Rattus noverrgicus) yang didapatkan
dari Laboratorium Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya yang
memenuhi kriteria inklusi dan eksklusi. Sampel penelitian adalah 30 ekor tikus (Rattus
novergicus) dengan kriteria inklusi:
a. Jenis kelamin : jantan
b. Usia : 2-3 bulan
c. Berat badan : 150-200 gram
d. Kondisi sehat yang ditandai dengan gerakannya yang aktif dan bulu
yang halus
23
Kriteria eksklusi :
a. Tikus yang selama penelitian tidak mau makan
b. Tikus yang kondisinya menurun atau mati selama penelitian
berlangsung
c. Tikus sakit selama penelitian berlangsung
Cara pengambilan sampel dengan metode simple random sampling (sampel
diambil random) dari populasi yang kemudian dikelompokkan kedalam masing-
masing kelompok kontrol dan perlakuan.
4.2.2. Perhitungan Besar Subjek Penelitian
Perhitungan besarnya pengulangan pada sampel adalah sebagai berikut
(Federer, 2012):
(t-1) (r-1) 15
t: jumlah perlakuan, r: jumlah ulangan
Pada penelitian ini t = 6 sehingga jumlah pengulangan adalah:
(6-1) (r-1) 15
r-1 3
r 4
jadi dalam penelitian ini jumlah sampel tiap perlakuan adalah 4
Berdasarkan perhitungan, sampel penelitian ini berjumlah 24 ekor tikus yang
dibagi menjadi 6 kelompok perlakuan sehingga setiap kelompok berisikan 4 ekor tikus.
Dilakukan penambahan 1 ekor dari jumlah minimal pengulangan sebagai cadangan
24
apabila terjadi hal-hal yang tidak diinginkan selama penelitian berlangsung. Sehingga
total sampel penelitian ini berjumlah 30 ekor tikus yang dibagi menjadi 5 kelompok
perlakuan sehingga jumlah tikus setiap kelompok berisikan 5 ekor tikus.
4.3. Tempat dan Waktu Pelaksanaan Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan September 2017 sampai Oktober 2017 di
Laboratorium Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya Malang.
4.4 Variabel Penelitian
4.4.1 Variabel Bebas
Variabel bebas dalam penelitian ini adalah ekstrak alga cokelat (Sargassum
sp).
4.4.2 Variabel Tergantung
Variabel tergantung pada penelitian ini adalah skor integritas mukosa lambung
tikus yang damati secara mikroskopis lambung tikus.
4.5 Definisi Operasional
4.5.1 Indometasin
Indometasin adalah obat golongan Non-Steroid Antiinflammatory Drugs
(NSAIDs) yang digunakan sebagai inducer perdarahan pada lambung tikus dengan
25
dosis 30mg/kgBB (Purnamawati, 2009). Indometasin dengan merek SIGMA,
disediakan di Laboratorium Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya.
4.5.2 Alga Cokelat (Sargassum sp.)
4.5.2.1 Alga Cokelat
Alga cokelat yang digunakan pada penelitian ini adalah jenis Sargassum sp
yang dihasilkan oleh para petani di Madura.
4.5.2.2 Ekstrak Alga Cokelat
Proses ekstraksi alga cokelat diawali dengan pengeringan dan penggilingan.
Setelah itu bubuk alga akan dicampur dengan larutan MeOH-CHCl3-H2O (4:2:1).
Proses dilanjutkan dengan melarutkan alga dengan HCl dan ultasonic extraction
(amplitudo 80%, 15 menit). Lalu dilakukan ekstraksi menggunakan waterbath pada
suhu 7090°C selama 3-5 jam. Proses selanjutnya adalah filtrasi dan presipitasi
dengan 1 M CaCl2 pada suhu 4°C semalaman. Larutan difiltrasi kemudian
dicampurkan dengan etanol absolut (3 volume) pada suhu 4°C selama 8 jam. Pada
tahapan akhir ekstrak kemudian dilakukan sentrifugasi (8500 rpm, 15 menit) pada
suhu 4°C.
4.5.3 Tikus Model Gastritis
Tikus yang digunakan adalah tikus putih (Rattus novergicus) galur wistar
dengan berat 150-200gram yang dibuat model ulkus dengan diinduksi indometasin
per oral dengan dosis 30 mg/kgBB.
26
4.5.4 Gambaran Pendarahan Secara Mikroskopis
Pengukuran hasil gambaran mikroskopis berupa kedalaman ulkus adalah
kerusakan yang terjadi mulai dari diinduksinya indometasin sampai diberikannya
Sargassum sp., kemudian dilakukan pembedahan, pengecatan HE, dan diamati
secara histopatologi, klasifikasi dari kerusakan sel adalah:
a. Ulserasi epitel mukosa lambung
Disebut ulserasi jika terdapat gap > 10 sel epitel pada lesi mukosa tiap
lapang pandang berdasarkan dengan skoring modifikasi skor integritas
epitel Barthel Manja. Diamati sebanyak 5 lapang pandang secara random
pada perbesaran mikroskop 400x.
b. Erosi permukaan epitel mukosa lambung
Disebut sebagai erosi jika terdapat gap 1-10 sel epitel pada lesi mukosa
tiap lapang pandang berdasarkan dengan skoring modifikasi skor
integritas epitel Barthel Manja. Diamati sebanyak 5 lapang pandang
secara random pada perbesaran mikroskop 400x.
c. Deskuamasi epitel
Jika terjadi kerusakan atau pengangkatan sedikit pada sel epitel mukosa
lambung berdasarkan dengan skoring modifikasi skor integritas epitel
Barthel Manja. Diamati sebanyak 5 lapang pandang secara random pada
perbesaran mikroskop 400x.
27
4.6 Alat dan Bahan Penelitian
4.6.1 Bahan Penelitian
4.6.1.1 Bahan untuk Pemeliharaan Hewan Coba
Bahan yang digunakan selama pemeliharaan Rattus novergicus strain wistar
adalah:
a. Sekam
b. Makanan tikus, makanan standar berupa campuran dari makanan ayam
jenis BK 1 dan tepung terigu dengan perbandingan 2:1 kemudian dibuat
pelet.
4.6.1.2 Bahan untuk Perlakuan Hewan Coba
Bahan yang digunakan selama perlakuan pada Rattus novergicus strain
wistar adalah:
a. Indometacin 30mg/KgBB
b. Aquades sebagai Pelarut Indometasin
c. Ekstrak Sargassum sp. 150 mg/KgBB, 300 mg/KgBB, dan 600 mg/KgBB
d. Misoprostol 90 mcg/KgBB
e. Aquades
4.6.1.3 Bahan Untuk Pengambilan Organ
a. Air untuk mencuci kotoran
4.6.1.4 Bahan untuk Pembuatan Preparat
a. Lambung Tikus
b. Formalin 10%
28
c. Alkohol 80%, 95%, 96%, dan 100%
d. Alkohol asam
e. Parafin
f. Xylol
g. Counter staining
h. Canadian balsem atau Entellan
i. Putih telur
j. Air
k. Cat Hematoksilin-Eosin (Haris Hematoxilen)
4.6.2 Alat Penelitian
4.6.2.1 Alat Untuk Pemeliharaan Hewan Coba
a. Kandang tikus berupa kotak plastik yang diisi sekam dan ditutup dengan
kawat. Ukuran kandang 15cm x 30cm x 42 cm, masing-masing kandang
berisi 5 ekor tikus
b. Wadah air minum tikus
c. Spidol untuk memberi identitas pada tikus
4.6.2.2 Alat Untuk Penimbangan Berat Badan Hewan Coba
a. Timbangan
4.6.2.3 Alat Untuk Pemberian Indometasin, Ekstrak Sargassum sp, dan
Misoprostol
a. Sonde
b. Spuit 1 cc
c. Spuit 3 cc
29
4.6.2.4 Alat untuk Pengambilan Organ
a. Handscoon
b. Papan dan nampan bedah
c. Alat bedah minor berupa: pinset, pisau bedah (scaple), gunting
d. Tempat organ berupa tabung plastik untuk pemeriksaan histopatologi
4.6.2.5 Alat untuk Pembuatan Preparat
a. Rotatory microtome
b. Object glass
c. Cover glass
4.6.2.6 Alat Penilaian Mikroskopis Lesi Mukosa Lambung Tikus
a. Mikroskop cahaya
b. Minyak imersi
c. Camera digital
d. Software komputer untuk pengambilan gambar
e. Alat tulis
4.7 Prosedur Penelitian
4.7.1 Pembuatan Model Hewan Gastritis
a. Tikus dipuaskan sehari, kemudian diinduksi indometasin 30mg/kgBB per
oral (Purnamawati, 2009)
b. Setelah 8 jam pasca induksi indometasin, dilakukan pembedahan.
c. Hasil lambung yang dibedah segera diamati secara mikroskopis.
30
4.7.2 Pemberian Ekstrak Alga Cokelat dan Pembedahan Kelompok Perlakuan
Pemberian ekstrak Sargassum sp dilakukan per oral dengan menggunakan
sonde. Diberikan pada kelompok hewan D1, D2, D3 secara berurutan sebanyak 150
mg/kgbb, 300 mg/kgbb, dan 600 mg/kgbb selama 3 hari dan 1 jam sebelum induksi
indometasin.
4.7.3 Prosedur Pembuatan Preparat Histopatologi
Metode teknik pembuatan preparat histopatologi (Muhartono, 2013)
1. Organ lambung yang telah diambil dan sudah difiksasi formalin 10% 3 jam
kemudian dipotong secara representatif (perwakilan jaringan lambung tikus
dari masing-masing kelompok)
2. Bilas organ tersebut dengan air mengalir sebanyak 3-5 kali
3. Dehidrasi organ lambung dengan: alkohol 70% selama 0,5 jam, alkohol
absolut selama 1 jam, alkohol absolut selama 1 jam, alkohol absolut selama
1 jam, alkohol xylol 1:1 selama 0,5 jam
4. Clearing: xylol selama 1 jam, xylol selama 1 jam
5. Impregnansi dengan parafin selama 1 jam dalam oven suhu 65° C
6. Blok parafin didingingkan dalam lemari es sebelum dipotong, pemotongan
menggunakan rotary microtome dengan menggunakan disposale knife, Pita
parafin dimekarkan pada waterbath dengan suhu 60° C
7. Setelah preparat jadi, kemudian dilakukan pengecatan jaringan lambung
tikus menggunakan pewarna Hematoxylin Eosin (HE)
8. Prosedur pulasan HE:
31
a. Dilakukan deparafinisasi dalam alrutan xylol selama 5 menit, larutan
xylol selama 5 menit, etanol absolut selama 1 jam
b. Hydrasi dalam alkohol 96% selama 2 menit, alkohol 70% selama 2
menit, air selama 10 menit
c. Pulasan inti dengan haris hematoksilin selama 15 menit, air mengalir,
eosin selama maksimal 1 menit
d. Dehidrasi: alkohol 70% selama 2 menit, xylol selama 2 menit, Mounting
dengan entelan dan tutup dengan deck glass.
4.7.4 Identifikasi Lesi Mukosa Lambung secara Histopatologis
Pengamatan dan pengumpulan data dilakukan dengan mengamati dibawah
mikroskop terhadap 30 preparat histopatologi mukosa lambung tikus dengan
pembesaran 400x. Setiap preparat dipilih 6 lapang pandang untuk dilihat integritas
epitelnya berdasarkan modifikasi skor integritas sel epitel Barthel Manja (Manja,
2003). Lapangan pandang dipilih secara random.
4.7.5 Persiapan Hewan Coba
4.7.5.1 Sebelum Penelitian
1. Hewan coba diseleksi sesuai dengan kriteria inklusi yang telah ditentukan.
2. Persiapan pemeliharaan hewan coba mulai dari kandang yang sudah
dibersihkan, rak tempat kandang yang sudah dibersihkan, anyaman kawat,
sekam, botol minum yang tidak bocor, timbangan dalam gram, wadah
makanan minum dan pekan.
3. Hewan coba diadaptasikan di Laboratorium Farmakologi Fakultas
Kedokteran Universitas Brawijaya selama 7 hari.
32
4. Masing-masing kandang berisi 6 ekor hewan coba dalam keadaan
kandang bersih dan penggantian sekam dilakukan 3 hari sekali.
5. Hewan coba tikus putih diberi makan dan minum sesuai dengan standart
laboratorium, kemudian dilakukan juga penimbangan berat badan diawal
dan diakhir adaptasi untuk mengetahui adanya kenaikan atau penurunan
berat badan sebagai standar pemberian ekstrak alga cokelat dan
indometasin.
4.7.5.2 Selama Penelitian
Setelah diadaptasikan selama 7 hari, tikus pada perlakuan control negatif tetap
diberi makan dan minum sesuai dengan standar laboratorium. Untuk tikus pada
kelompok D1, D2, dan D3 masing-masing akan diberikan ekstrak alga cokelat per oral
dengan dosis 150 mg/kgbb, 300 mg/kgbb, dan 600 mg/kgbb selama 4 hari. Satu jam
kemudian pada kelompok control positif dan kelompok D1, D2, dan D3 akan diinduksi
indometasin per oral pada hari ke empat.
Pembedahan dilakukan 8 jam setelah pemberian indometasin. Prosedur ini
diawali dengan dilakukannya dislokasi cervical pada tikus oleh orang yang telah
berpengalaman. Setelah itu, pengambilan organ lambung yang telah dicuci dengan
NaCl0,9% untuk menghilangkan kotoran atau darah yang tersisa.
4.7.5.3 Sesudah Penelitian
1. Pembedahan dilakukan pada hari ke-4 atau setelah 8 jam induksi
indometasin. Prosedur ini diawali dengan dilakukannya dislokasi cervical
pada tikus oleh orang yang telah berpengalaman.
33
2. Pengambilan organ lambung yang telah dicuci dengan NaCl0,9% untuk
menghilangkan kotoran atau darah yang tersisa
3. Tubuh tikus yang tersisa dibersihkan dan dikubur dengan baik.
4. Alat-alat yang digunakan dicuci dengan sabun, dan dikeringkan.
4.8 Alur Penelitian dan Pengumpulan Data
Telah ditentukan bahwa dosis Indometasin adalah 30 mg/kgBB dan dosis ekstrak
alga cokelat adalah 150 mg/kgBB, 300 mg/kgBB, dan 600 mg/kgBB, serta misoprostol
90mcg/KgBB. Sampel Penelitian dibagi dalam 6 perlakuan yaitu:
A. Kelompok 1, yaitu kelompok kontrol negatif: tidak diinduksi indometasin
maupun diberi ekstrak alga cokelat.
B. Kelompok 2, yaitu kelompok kontrol positif: diinduksi indometasin 30 mg/kgbb
tanpa tanpa ekstrak alga cokelat.
C. Kelompok 3, yaitu kelompok dosis 1: diberi ekstrak alga cokelat dosis 1 yaitu
150 mg/kgbb selama 4 hari, kemudian diinduksi indometasin 30 mg/kgbb satu
jam kemudian.
D. Kelompok 4, yaitu kelompok dosis 2: diberi ekstrak alga cokelat dosis 2 yaitu
300 mg/kgbb selama 4 hari, kemudian diinduksi indometasin 30 mg/kgbb satu
jam kemudian.
E. Kelompok 5, yaitu kelompok dosis 3: diberi ekstrak alga cokelat dosis 3 yaitu
600 mg/kgbb selama 4 hari, kemudian diinduksi indometasin 30 mg/kgbb satu
jam kemudian.
34
F. Kelompok misoprostol: diberi misoprostol 90mcg/KgBB selama 4 hari,
kemudian diinduksi indometasin 30 mg/kgbb satu jam kemudian.
4.8.1 Alur Penelitian
Gambar 4.1 Skema Alur Penelitian
35
4.8.2 Teknik Pengumpulan Data
Data dikumpulkan dalam bentuk rerata skor integritas mukosa lambung yang
didapatkan dari sampel yang dibagi menjadi 6 kelompok yaitu 1 kelompok kontrol
negatif (tikus sehat dan tidak diberi perlakuan), 1 kelompok kontrol positif (tikus hanya
diinduksi indometasin 30 mg/kgBB), 3 kelompok perlakuan (tikus diberikan ekstrak
Alga cokelat dengan dosis 150mg/kgBB, 300mg/kgBB, dan 600mg/kgBB setelah
diinduksi indometasin 30mg/kgBB), dan 1 kelompok misoprostol. Pengamatan
penurunan skor perdarahan secara mikroskopis dilakukan sesudah pemberian
perlakuan, kemudian melakukan analisa data.
4.9 Analisis Data
Rancangan pada penelitian ini menggunakan “The Post Test Control Group
Design” dimana pengukuran hanya dilakukan setelah pemberian perlakuan selesai
karena penilaian mikroskopis skor integritas mukosa lambung pada tikus hanya
mungkin dilakukan pada hewan coba yang sudah dibedah (dimatikan dulu).
Perhitungan skor integritas mukosa lambung didasarkan pada keberadaan kelompok
kontrol negatif sebagai kelompok yang menggambarkan kondisi lambung normal
(tanpa kerusakan pada mukosa).
Data yang diperoleh pada penelitian ini adalah data skor integritas mukosa
lambung tikus secara mikroskopis pada masing-masing kelompok perlakuan. Data
hasil penelitian tersebut akan diuji normalitas data dengan Kolmogorov Smirnov (nilai
P>0.05 merepresentasikan data normal) dan homogenitas data dengan Levenne
36
statistik (nilai P
37
4.10 Jadwal Kegiatan
Berikut adalah jadwal kegiatan penelitian ini :
Tabel 4.1 Jadwal Penelitian
No Kegiatan Bulan1 Bulan2
1 2 3 4 1 2 3 4
Tahap Persiapan
1. Mengurus ethical clearance
2. Mengurus perijinan laboratorium
3. Belanja alat dan bahan penelitian
4. Aklimatisasi Tikus
5 Pembuatan ekstrak kasar Sargassum sp
Tahap Pelaksanaan
1. Pemberian ekstrak kasar Sargassum
2. Penginduksian indometasin
5. Pembedahan tikus
Tahap Penyelesaian
1. Analisa data
2. Penyusunan Laporan akhir
38
BAB 5
HASIL PENELITIAN DAN ANALISA DATA
5.1 Hasil Pemeriksaan Mikroskopis (Integritas Sel Epitel) Mukosa Lambung
Tikus
Pada hari keempat setelah dilakukan pembedahan, lambung tikus dicuci dan
dilakukan pembuatan preparat histologi dengan pengecatah HE. Setelah itu dilakukan
pengamatan preparat dibawah mikroskop. Preparat dibagi bedasar perlakuan pada
tikus, yaitu kelompok negatif, kelompok positif, kelompok dosis 1, 2, dan 3, serta
kelompok misoprostol dengan jumlah 5 ekor tiap masing-masing kelompok.
Penilaiaan mikroskopis preparat didasarkan pada modifikasi skoring integritas epitel
Barthel Manja, yang memiliki tingkat kerusakan sel epitel (Manja, 2003) yang masing
masing diamati sebanyak 6 lapang pandang secara random dengan perbesaran 400x.
Berikut tabel modifikasi skoring epittel Barthel Manja.
Tabel 5.1 Tabel Modifikasi Skoring Integritas Mukosa Bedasarkan Skoring Barthel Manja (Manja, 2003)
Skor Integritas Epitel Mukosa
0 Epitel Normal (Tidak Ada Perubahan Patologis)
1 Adanya Deskuamasi Epitel
2 Erosi Permukaan Epitel Mukosa
3 Ulserasi Epitel Mukosa
39
Gambar histopatologi epitel mukosa lambung normal, adanya deskuamasi
epitel, erosi permukaan epitel mukosa, dan ulserasi diilustrasikan pada gambar
berikut.
Keterangan panah :
Sel epitel normal
Deskuamasi epitel
Erosi epitel
Ulserasi epitel
Gambar 5.1 Histopatologi Mukosa Lambung Tikus Rattus Novergicus Strain Wistar pada Perbesaran 400x. (a) kontrol negatif didapatkan sel-sel normal; (b) kontrol positif didapatkan ulserasi, erosi, dan deskuamasi sel epitel; (c) kelompok D1 didapatkan erosi dan deskuamasi sel epitel; (d) kelompok D2 didapatkan deskuamasi dan sel normal;kelompok (e) D3 didapatkan erosi dan deskuamasi; (f) kelompok misoprostol terdapat deskuamasi sel dan erosi.
(a) (b) (c)
(d) (e) (f)
40
Data yang diperoleh pada penelitian ini adalah data skor integritas mukosa
lambung tikus secara mikroskopis pada masing-masing kelompok perlakuan. Data
hasil penelitian tersebut akan diuji normalitas data dengan Kolmogorov Smirnov (nilai
P>0.05 merepresentasikan data normal) dan homogenitas data dengan Levenne
statistik (nilai P
41
5.2 Rata-Rata Skor Integritas Mukosa Lambung Tikus Berdasarkan Ekstrak
Sargassum sp.
Gambar 5.2 Rata Rata Skor Integritas Mukosa Lambung Tikus Bedasarkan
Ekstrak Sargassum sp.
Gambar diatas menginformasikan bahwa kelompok yang diinduksi indometasin
30 mg/KgBB tanpa ekstrak Sargassum sp. (K+) memiliki rata-rata skor integritas
mukosa lambung tikus Rattus norvegicus strain Wistar sebesar 2.067 ± 0.303.
Kelompok yang tidak diinduksi indometasin maupun diberi ekstrak Sargassum sp. (K-
) memiliki rata-rata skor integritas mukosa lambung tikus Rattus norvegicus strain
Wistar sebesar 0.567 ± 0.346. Selanjutnya kelompok yang diinduksi indometasin 30
mg/kgbb dengan ekstrak Sargassum sp. 150 mg/KgBB (D1) memiliki rata-rata skor
integritas mukosa lambung tikus Rattus norvegicus strain Wistar sebesar 1.767 ±
0.418. Kemudian kelompok yang diinduksi indometasin 30 mg/KgBB dengan ekstrak
Sargassum sp. 300 mg/KgBB (D2) memiliki rata-rata skor integritas mukosa lambung
tikus Rattus norvegicus strain Wistar sebesar 1.000 ± 0.391. Berikutnya kelompok
2.067 ± 0.303
0.567 ± 0.346
1.767 ± 0.418
1.000 ± 0.391
1.500 ± 0.4711.633 ± 0.492
0.000
0.500
1.000
1.500
2.000
2.500
K+ K- D1 (150mg/KgBB)
D2 (300mg/KgBB)
D3 (600mg/KgBB)
GS
Sko
r U
lku
s La
mb
un
g
Ekstrak Sargassum sp.
misoprostol
42
yang diinduksi indometasin 30 mg/KgBB dengan ekstrak Sargassum sp. 600
mg/KgBB (D3) memiliki rata-rata skor integritas mukosa lambung tikus Rattus
norvegicus strain Wistar sebesar 1.500 ± 0.471. Kemudian kelompok yang yang
diinduksi indometasin 30 mg/KgBB dengan misoprostol dosis 90 mcg/KgBB memiliki
rata-rata skor integritas mukosa lambung tikus Rattus norvegicus strain Wistar
sebesar 1.633 ± 0.492.
Berdasarkan analisis deskriptif dari keenam perlakuan dapat diketahui bahwa
kelompok yang diinduksi indometasin 30 mg/KgBB tanpa ekstrak Sargassum sp. (K+)
memiliki rata-rata skor integritas mukosa lambung tikus Rattus norvegicus strain
Wistar yang paling tinggi, sedangkan kelompok yang tidak diinduksi indometasin
maupun diberi ekstrak Sargassum sp. (K-) memiliki rata-rata skor integritas mukosa
lambung tikus Rattus norvegicus strain Wistar yang paling rendah. Sementara dari
keempat perlakuan tanpa kontrol dapat diketahui bahwa kelompok yang diinduksi
indometasin 30 mg/KgBB dengan ekstrak Sargassum sp. 300 mg/KgBB (D2) memiliki
rata-rata skor integritas mukosa lambung tikus Rattus norvegicus strain Wistar yang
paling rendah, sedangkan kelompok yang diinduksi indometasin 30 mg/KgBB dengan
ekstrak Sargassum sp. 150 mg/KgBB (D1) memiliki rata-rata skor integritas mukosa
lambung tikus Rattus norvegicus strain Wistar yang paling tinggi.
43
5.3 Pengujian Pengaruh Ekstrak Sargassum sp. Terhadap Skor Integritas
Mukosa Lambung Tikus
5.3.1 Pengujian Kenormalan Residual Pengaruh Ekstrak Sargassum sp.
terhadap Skor Integritas Mukosa Lambung Tikus
Pengujian kenormalan residual pengaruh ekstrak Sargassum sp. terhadap
skor integritas mukosa lambung tikus Rattus norvegicus strain Wistar bertujuan untuk
mengetahui normal tidaknya residual yang dihasilkan dari pengaruh ekstrak
Sargassum sp. terhadap skor integritas mukosa lambung tikus Rattus norvegicus
strain Wistar. Pengujian kenormalan residual dilakukan menggunakan Kolmogorov-
Smirnov, dengan kriteria apabila nilai probabilitas > level of significance (alpha = 5%)
maka residual dinyatakan normal.
Pada pengujian kenormalan residual didapatkan bahwa pengaruh ekstrak
Sargassum sp. terhadap skor integritas mukosa lambung tikus Rattus norvegicus
strain Wistar menghasilkan statistik Kolmogorov-Smirnov sebesar 0.100 dengan
probabilitas sebesar 0.200. Hal ini dapat diketahui bahwa pengujian normalitas
residual pengaruh ekstrak Sargassum sp. terhadap skor integritas mukosa pada
Lambung Tikus Rattus Norvegicus Strain Wistar menghasilkan probabilitas > alpha
(5%), sehingga residual tersebut dinyatakan normal.
5.3.2 Pengujian Homogenitas Residual Pengaruh Ekstrak Sargassum sp.
terhadap Skor Integritas Mukosa Lambung Tikus
Pengujian homogenitas residual pengaruh ekstrak Sargassum sp. terhadap
skor integritas mukosa lambung tikus Rattus norvegicus strain Wistar bertujuan untuk
mengetahui apakah residual memiliki ragam yang homogen atau tidak. Pengujian
44
kehomogenan residual pengaruh ekstrak Sargassum sp. terhadap skor integritas
mukosa pada Lambung Tikus Rattus Norvegicus Strain Wistar dilakukan
menggunakan Levene Test, dengan kriteria apabila nilai probabilitas > level of
significance (alpha = 5%) maka residual dinyatakan homogen.
Pada pengujian kehomogenan residual pengaruh ekstrak Sargassum sp.
terhadap skor integritas mukosa pada Lambung Tikus Rattus Norvegicus Strain
Wistar menghasilkan statistik Levene sebesar 0.185 dengan probabilitas sebesar
0.965. Hal ini dapat diketahui bahwa pengujian residual pengaruh ekstrak Sargassum
sp. terhadap skor integritas mukosa pada lambung tikus Rattus norvegicus Strain
Wistar menghasilkan probabilitas > alpha (5%), sehingga residual tersebut dinyatakan
memiliki ragam yang homogen.
5.3.3 Pengujian Perbedaan Pengaruh Ekstrak Sargassum sp. terhadap Skor
Integritas Mukosa Lambung Tikus
Pengujian perbedaan pengaruh ekstrak Sargassum sp. terhadap skor integritas
mukosa lambung tikus Rattus norvegicus strain Wistar dilakukan menggunakan
Anova dengan hipotesis berikut ini:
H0: Tidak ada perbedaan pengaruh yang signifikan ekstrak Sargassum sp. terhadap
skor integritas mukosa lambung tikus Rattus norvegicus strain Wistar
H1: Minimal ada satu pasang pengaruh ekstrak Sargassum sp. terhadap skor
integritas mukosa lambung tikus Rattus norvegicus strain Wistar yang berbeda
signifikan
Kriteria pengujian menyebutkan apabila probabilitas ≤ level of significance
(alpha = 5%) maka H0 ditolak, sehingga dapat dinyatakan bahwa minimal ada satu
45
pasang ekstrak Sargassum sp. terhadap skor integritas mukosa pada lambung tikus
Rattus norvegicus Strain Wistar yang berbeda signifikan.
Pengujian perbedaan pengaruh ekstrak Sargassum sp. terhadap skor integritas
mukosa lambung tikus Rattus norvegicus strain Wistar menghasilkan statistik uji F
sebesar 8.946 dengan probabilitas sebesar 0.000. Hal ini dapat diketahui bahwa
probabilitas > alpha (5%), sehingga H0 ditolak. Oleh karena itu, dapat dinyatakan
bahwa minimal ada satu pasang pengaruh ekstrak Sargassum sp. terhadap skor
integritas mukosa lambung tikus Rattus norvegicus strain Wistar yang berbeda
signifikan.
Untuk mengetahui pengaruh ekstrak Sargassum sp. terhadap skor integritas
mukosa lambung tikus Rattus norvegicus strain Wistar yang berbeda signifikan
dilakukan menggunakan uji tukey. Hasil uji tukey terhadap perbedaan pengaruh
ekstrak Sargassum sp. terhadap skor integritas mukosa lambung tikus Rattus
norvegicus strain Wistar dapat diketahui melalui tabel berikut ini:
Tabel 5.3 Hasil Uji Tukey Perlakuan Rata-Rata Notasi
K- 0.467 A
D2 (300 mg/KgBB) 1.000 AB
D3 (600 mg/KgBB) 1.500 BC
Misoprostol 1.633 BC
D1 (150 mg/KgBB) 1.767 BC
K+ 2.067 C
46
Gambar 5.3 Rata Rata Skor Integritas Mukosa Lambung Tikus Bedasarkan
Ekstrak Sargassum sp. dengan Notasi Tukey
Hasil analisis di atas menginformasikan bahwa kelompok yang diinduksi
indometasin 30 mg/KgBB tanpa ekstrak Sargassum sp. (K+) memiliki skor integritas
mukosa lambung tikus Rattus norvegicus strain Wistar yang paling tinggi dan berbeda
signifikan dengan kelompok yang tidak diinduksi indometasin maupun diberi ekstrak
Sargassum sp. (K-), dan kelompok yang diinduksi indometasin 30 mg/KgBB dengan
ekstrak Sargassum sp. 300 mg/KgBB (D2). Namun tidak berbeda signifikan dengan
kelompok yang diinduksi indometasin 30 mg/kgbb dengan ekstrak Sargassum sp. 150
mg/KgBB (D1), kelompok yang diinduksi indometasin 30 mg/KgBB dengan ekstrak
Sargassum sp. 600 mg/KgBB (D3), dan kelompok yang yang diinduksi indometasin
30 mg/KgBB dengan misoprostol dosis 90 mcg/KgBB.
2.067 ± 0.303
0.567 ± 0.346
1.767 ± 0.418
1.000 ± 0.391
1.500 ± 0.471
1.633 ± 0.492
0.000
0.500
1.000
1.500
2.000
2.500
K+ K- D1 (150mg/KgBB)
D2 (300mg/KgBB)
D3 (600mg/KgBB)
GS
Sko
r In
tegr
ota
s M
uko
sa L
amb
un
g
Ekstrak Sargassum sp.
(AB)
(BC)
(C)
(A)
(BC)
(BC)
47
Sedangkan kelompok yang tidak diinduksi indometasin maupun diberi ekstrak
Sargassum sp. (K-) memiliki skor integritas mukosa lambung tikus Rattus norvegicus
strain Wistar yang paling rendah dan berbeda signifikan kelompok yang diinduksi
indometasin 30 mg/KgBB tanpa ekstrak Sargassum sp. (K+), kelompok yang diinduksi
indometasin 30 mg/kgbb dengan ekstrak Sargassum sp. 150 mg/KgBB (D1),
kelompok yang diinduksi indometasin 30 mg/KgBB dengan ekstrak Sargassum sp.
600 mg/KgBB (D3), dan kelompok yang yang diinduksi indometasin 30 mg/KgBB
dengan misoprostol dosis 90 mcg/KgBB. Namun tidak berbeda signifikan dengan
kelompok yang diinduksi indometasin 30 mg/KgBB dengan ekstrak Sargassum sp.
300 mg/KgBB (D2).
5.4 Analisis Pengaruh Ekstrak Sargassum sp. terhadap Skor Integritas Mukosa
Lambung Tikus
Analisis pengaruh ekstrak Sargassum sp. terhadap skor integritas mukosa
lambung tikus Rattus norvegicus strain Wistar dilakukan dengan menggunakan
analisis regresi linier sederhana.
5.4.1 Hasil Estimasi Pengaruh Ekstrak Sargassum sp. terhadap Skor Integritas
Mukosa Lambung Tikus
5.4.1.1 Pengujian Koefisien Determinasi
Besarnya kontribusi ekstrak Sargassum sp. terhadap skor integritas mukosa
lambung dapat diketahui melalui koefisien determinasinya (R2) yaitu sebesar 0.010.
Hal ini berarti keragaman skor integritas lambung dapat dijelaskan oleh ekstrak
Sargassum sp. sebesar 1.0% atau dengan kata lain kontribusi ekstrak Sargassum sp.
48
terhadap skor integritas mukosa lambung sebesar 1.0%. Sedangkan sisanya sebesar
99.0% merupakan kontribusi dari variabel lain yang tidak dibahas dalam penelitian ini.
5.4.1.2 Koefisien Korelasi
Koefisien korelasi digunakan untuk mengetahui tingkat keseratan hubungan
dan arah hubungan ekstrak Sargassum sp. dan skor integritas mukosa lambung. Hasil
koefisien korelasi sebesar -0.101 menunjukkan ada hubungan yang lemah antara
ekstrak Sargassum sp. dan skor integritas mukosa lambung dengan arah negatif
(berlawanan). Hal ini berarti semakin tinggi ekstrak Sargassum sp. maka skor
integritas mukosa lambung semakin rendah, dan sebaliknya semakin rendah ekstrak
Sargassum sp. maka skor integritas mukosa lambung semakin tinggi.
5.4.1.3 Pengujian Hipotesis
5.4.1.3.1 Uji Hipotesis Parsial
Pengujian hipotesis parsial digunakan untuk mengetahui ada tidaknya
pengaruh ekstrak Sargassum sp. terhadap skor integritas mukosa lambung. Kriteria
pengujian menyatakan jika nilai thitung ≥ ttabel atau probabilitas < level of significance ()
maka terdapat pengaruh signifikan ekstrak Sargassum sp. terhadap skor integritas
mukosa lambung.
a. Uji Hipotesis Parsial Ekstrak Sargassum sp. terhadap Skor Integritas Mukosa
Lambung
Pengujian hipotesis secara parsial ekstrak Sargassum sp. menghasilkan nilai t
hitung sebesar -0.368 dengan probabilitas sebesar 0.719. Hasil pengujian tersebut
menunjukkan probabilitas > level of significance (=5%). Hal ini berarti tidak terdapat
49
pengaruh yang signifikan ekstrak Sargassum sp. terhadap skor integritas mukosa
lambung.
b. Uji Hipotesis Parsial antara Konstanta terhadap Skor Integritas Mukosa
Lambung
Pengujian hipotesis secara parsial konstanta menghasilkan nilai t hitung sebesar
5.000 dengan probabilitas sebesar 0.004. Hasil pengujian tersebut menunjukkan
probabilitas < level of significance (=5%). Hal ini berarti terdapat pengaruh signifikan
secara parsial konstanta terhadap skor integritas mukosa lambung.
5.4.1.4 Model Empirik Regresi Linier Sederhana
Persamaan regresi dari hasil estimasi analisis regresi linier sederhana adalah:
Gambar 5.4 Persamaan Regresi Linier Sederhana
y = 1.517 – 0.001 XR² = 0.0103
0.000
0.500
1.000
1.500
2.000
2.500
0.0 100.0 200.0 300.0 400.0 500.0 600.0 700.0
Sko
r U
lku
s La
mb
un
g
Ekstrak Sargassum sp.
50
Persamaan ini menunjukkan hal-hal sebagai berikut:
1. Konstanta sebesar 1.517 mengindikasikan bahwa apabila ekstrak Sargassum sp.
bernilai konstan (tidak berubah) maka rata-rata perubahan skor integritas mukosa
lambung sebesar 1.517.
2. Koefisien ekstrak Sargassum sp. sebesar -0.001 mengindikasikan bahwa ekstrak
Sargassum sp. berpengaruh negatif terhadap skor integritas mukosa lambung.
Hal ini berarti setiap peningkatan ekstrak Sargassum sp. sebesar 1 mg/KgBB,
maka akan menurunkan skor integritas mukosa lambung sebesar 0.001.
51
BAB 6
PEMBAHASAN
6.1 Hasil Penelitian
Tujuan dari dilakukannya penelitian ini ialah untuk membuktikan bahwa
adanya efek dari ekstrak Sargassum sp. dalam penurunan kedalaman lesi mukosa
lambung tikus Rattus norvegicus strain wistar yang diinduksi dengan indometasin
yang diamati secara mikroskopis. Dalam penelitian yang telah ada, Sargassum sp.
terbukti mengandung agen yang memiliki efek anti-ulcer, dengan cara menjaga
volume serta keasaman dari cairan lambung, dan meningkatkan system pertahanan
antioksidan mukosa lambung pada model hewan coba gastritis menggunakan
ethanol. Maka dari itu dalam penelitian ini digunakan indometasin sebagai agen
pembentuk ulcer, dan diperlukan beberapa dosis untuk mengetahui keoptimalan dari
manfaat Sargassum sp.
Salah satu faktor dari ulkus peptikum ialah obat golongan NSAID (Non-Steroid
Anti-Inflammatory Drugs), yaitu obat dimana titik kerja dengan cara menghambat
enzim siklooksigenasi (COX) yang meninmbulakn terganggunya pembentukan dari
prostaglandin (PG). Enzim COX memiliki 2 bentuk rantai, yaitu COX1 dan COX2.
COX1 memiliki efek negatif pada mukosa lambung, dimana menyebabkan penurunan
terhadap proteksi mukosa lambung. Sehingga menimbulkan inflamasi dilambuna,
selain itu hal ini merupakan salah satu patogenesis dari ulkus peptikum itu sendiri.
(Matsui et al, 2011; Katzung, 2011; Zorofchian et al, 2014).
52
Sargassum mengandung agen yang memiliki efek anti-ulcer, dengan cara
menjaga volume serta keasaman dari cairan lambung, dan meningkatkan system
pertahanan antioksidan mukosa lambung pada model hewan coba gastritis
menggunakan ethanol. (Raghavendran et al., 2004). Studi dari Mori dan kolega
menyatakan bahwa efek anti ulkus yang dimiliki oleh Sargassum, dicapai melalui
pembentukan prostaglandin endogen (Mori et al., 2006).
Dalam penelitian ini menggunakan tikus Rattus norvegicus strain wistar
merupakan subjek hewan coba. Digunakan 30 ekor tikus yang dibagi dalam 6
kelompok. Kelompok penelitian eksperimental yang dibentuk adalah kelompok kontrol
positif, kelompok kontrol negatif, kelompok dosis 1 (dengan pemberian dosis ekstrak
Sargassum sp. 150mg/KgBB), kelompok dosis 2 (dengan pemberian dosis ekstrak
Sargassum sp. 300mg/KgBB), kelompok dosis 3 (dengan pemberian dosis ekstrak
Sargassum sp. 600mg/KgBB), dan kelompok dengan menggunakan gold standard
pengobatan ulkus peptikum. Pembagian dosis pada kelompok dosis 1,2, dan 3
didasarkan dari penelitian yang yang telah ada sebelumnya dimana digunakan dosis
200mg/KgBB, 400mg/KgBB, dan 800mg/KgBB sebagai anticancer pada lambung
tikus.
Dosis Sargassum sp. yang diinduksikan pada tikus merupakan variabel bebas
atau independen dari penelitian ini, sedangkan skor integritas epitel mukosa lambung
tikus merupakan variable tergantung atau dependen. Pada perlakuan hewan coba
pemberian indometasin dan ekstrak Sargassum sp. diberikan secara peroral (sonde),
sehingga indometasin yang dapat terserap oleh pencernaan tikus (khususnya di
lambung) sekitar lebih dari 87%, sehingga untuk mengetahui kadar optimal
53
indometasin yang dapat diserap oleh lambung tikus, sebelum pemberian indometasin
tikus dipuasakan dengan tujuan untuk mengosongkan lambung tikus sehingga
ekskresi asam klorida (HCl) dapat tereksresi maksimal.
Hasil penelitian menunjukkan rata-rata dari tiap kelompok. Berdasarkan analisis
deskriptif dari keenam perlakuan dapat diketahui bahwa kelompok yang diinduksi
indometasin 30 mg/KgBB tanpa ekstrak Sargassum sp. (K+) memiliki rata-rata skor
integritas mukosa lambung tikus yang paling tinggi, sedangkan kelompok yang tidak
diinduksi indometasin maupun diberi ekstrak Sargassum sp. (K-) memiliki rata-rata
skor integritas mukosa lambung tikus yang paling rendah. Sementara dari keempat
perlakuan tanpa control dapat diketahui bahwa kelompok yang diinduksi indometasin
30 mg/KgBB dengan ekstrak Sargassum sp. 300 mg/KgBB (D2) memiliki rata-rata
skor integritas mukosa lambung tikus yang paling rendah, sedangkan kelompok yang
diinduksi indometasin 30 mg/KgBB dengan ekstrak Sargassum sp. 150 mg/KgBB (D1)
memiliki rata-rata skor integritas mukosa lambung tikus yang paling tinggi. Hal ini
menunjukkan bahwa pemberian dosis Sargassum sp. 300 mg/KgBB dapat
memberikan efek yang signifikan terhadap penurunan skor integritas mukosa
lambung tikus sehingga mendekati nilai kontrol negatif.
Kemudian dilakukan uji koefisien korelasi untuk mengetahui tingkat keeratan
hubungan dan arah hubungan ekstrak Sargassum sp. dan skor integritas mukosa
lambung. Hasil koefisien korelasi sebesar -0.101 menunjukkan ada hubungan yang
lemah antara ekstrak Sargassum sp. dan skor integritas mukosa lambung dengan
arah negatif (berlawanan). Hal ini berarti semakin tinggi ekstrak Sargassum sp. maka
skor integritas mukosa lambung semakin rendah, dan sebaliknya semakin rendah
54
ekstrak Sargassum sp. maka skor integritas mukosa lambung semakin tinggi.
Pengujian hipotesis secara parsial ekstrak Sargassum sp. menghasilkan nilai t hitung
sebesar -0.468 dengan probabilitas sebesar 0.719. Hasil pengujian tersebut
menunjukkan probabilitas > level of significance (=5%). Hal ini berarti tidak terdapat
pengaruh yang signifikan ekstrak Sargassum sp. terhadap skor integritas mukosa
lambung.
Dari hasil penelitian diatas dapat disimpulkan bahwa pemberian dosis
Sargassum sp. sebesar 300 mg/kgBB dapat memberikan penurunan skor ulkus
lambung yang optimal bila dibandingkan dengan pemberian dosis 150 mg/kgBB dan
dosis 600 mg/kgBB.
55
BAB 7
PENUTUP
7.1 Kesimpulan
Bedasarkan penelitian yang dilakukan di Laboratorium Farmakologi FKUB,
mengenai ektrak Sargassum sp. terhadap skor integritas mukosa lambung tikus yang
diinduksi indometasin, dapat diambil kesimpulan bahwa:
1. Pemberian ekstrak alga cokelat (Sargassum sp.) dapat menurunkan skor
integritas mukosa lambung yang diamati secara mikroskopis pada lambung
tikus Rattus novergicuss strain wistar model ulkus peptikum yang telah
diinduksi indometasin.
2. Ditunjukkan bahwa pemberian ekstrak Sargassum sp. pada dosis
300mg/KgBB dapat memberikan hasil yang paling baik, dimana lambung tikus
yang diinduksi indometasin yang dilhat skor ulkus lambung pada dosis ini
terlihat paling rendah dari pada dosis 150mg/KgBB dan 600mg/KgBB.
7.2 Saran
1. Disarankan pada penelitian selanjutnya untuk eksplorasi kandungan dalam
Sargassum sp. yang dapat menghambat terbentuknya ulkus lambung.
2. Diperlukannya untuk pengujian lebih dalam menganai Sargassum sp. sabagai
pencegahan utama pada ulkus peptikum.
3. Dilakukannya penelitian lanjutan mengenai efek lain dari Sargassum sp. yang
dapat membantu bidang farmasi.
56
DAFTAR PUSTAKA
Abbas, A.K., Aster, J.C., dan Kumar, V. 2015. Buku Ajar Patologi Robbins. Edisi 9.
Singapura: Elsevier: 622.
Alpers DH, Kalloo AN, Kaplowitz N, Owyang C, Powell DW. Textbook of
Gastroenterology. John Wiley & Sons; 2011 Oct 13: 777-780
Aro P, Storskrubb T, Ronkainen J, Bolling-Sternevald E, Engstrand L, Vieth M, Stolte
M, Talley NJ, Agréus L. Peptic Ulcer Disease in a General Adult Population:
the Kalixanda Study: A Random Population-Based Study. American Journal of
Epidemiology. 2006 Mar 29;163(11): 1025-34.
De Vries, A. C., Haringsma, J., & Kuipers, E. J. 2007. The Detection, Surveillance and
Treatment of Premalignant Gastric Lesions Related to Helicobacter Pylori
Infection. Helicobacter, 12(1): 1-15.
Dixon, M. F., Genta, R. M., Yardley, J. H., & Correa, P. 1996. Classification and
Grading of Gastritis: The Updated Sydney System. The American Journal of
Surgical Pathology, 20(10): 1161-1181.
Filaretova, L., Bagaeva, T., & Makara, G. B. 2002. Aggravation of Nonsteroidal Anti-
Inflammatory Drug Gastropathy by Glucocorticoid Deficiency or Blockade of
Glucocorticoid Receptors in Rats. Life Sciences, 71(21): 2457-2468.
Geibel, J., Abraham, R., Modlin, I., & Sachs, G. 1995. Gastrin-stimulated changes in
Ca2 + concentration in parietal cells depends on adenosine 30,50-cyclic
monophosphate levels. Gastroenterology 109: 1060-1067.
Gretzer, B., Maricic, N., Respondek, M., Schuligoi, R., & Peskar, B. M. 2001. Effects
of Specific Inhibition of Cyclo‐Oxygenase‐1 and Cyclo‐Oxygenase‐2 in the Rat
57
Stomach with Normal Mucosa and After Acid Challenge. British Journal of
Pharmacology, 132(7): 1565-1573.
Hall, J. and Guyton, A. 2015. Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology.
Philadelphia: Elsevier: 881-886.
Hapsari, L. & Mulyani, W., 2010. Pembuatan Konsentrat Zat Warna untuk Bahan
Makanan dari Daun Pandan (Pandanus Amarylliofolius Roxb) dan Biji
Kesumba (Bixa Orellana Linn Beserta Penerapannya. Surakarta: Universitas
Sebelas Maret Program Studi D3 Teknik Kimia.
Herbst JJ. Ulcer disease. Dalam: Behrman RE, Kliegman RM, Arvin AM, penyunting.
Nelson Textbook of Pediatric.Edisi ke-15. Philadelphia: Saunders, 1996: 1078-
2079
Indrianto, A. B., Thobari, J. A., & Nugroho, A. E. 2012. Predictors of The Use of
Gastroproective Agents In Patients Using Nsaid In Yogyakarta
Indonesia. Indonesian Journal of Pharmacy: 41-47.
Jackson, L. M., Wu, K. C., Mahida, Y. R., Jenkins, D., & Hawkey, C. J. 2000.
Cyclooxygenase (COX) 1 and 2 in Normal, Inflamed, and Ulcerated Human
Gastric Mucosa. Gut, 47(6): 762-770.
Johnson LR. Gastrointestinal Physiology E-Book: Mosby Physiology Monograph
Series. Elsevier Health Sciences; 2013 Aug 27: 76.
Kaminishi M, Yamaguchi H, Nomura S, Oohara T, Sakai S, Fukutomi H, Nakahara A,
Kashimura H, Oda M, Kitahora T, Ichikawa H. Endoscopic Classification of
Chronic Gastritis Based on a Pilot Study by the Research Society for Gastritis.
Digestive Endoscopy. 2002 Oct 1;14(4): 138-51.
Kelly, M. K., Brown, J. M., & Thong, Y. H. 1985. Neutrophil and Monocyte Adherence
in Diabetes Mellitus, Alcoholic Cirrhosis, Uremia and Elderly Patients.
International Archives of Allergy and Immunology, 78(2): 132-138.
58
Korf, H.W., Wicht, H., Snipes, R.L., Timmermans, J.P., Paulsen, F., Rune, G. and
Baumgart-Vogt, E., 2008. The Dissection Course–Necessary and
Indispensable for Teaching Anatomy to Medical Students. Annals of Anatomy-
Anatomischer Anzeiger, 190(1): 16-22.
Lau, J. Y., Sung, J., Hill, C., Henderson, C., Howden, C. W., & Metz, D. C. 2011.
Systematic Review of the Epidemiology of Complicated Peptic Ulcer Disease:
Incidence, Recurrence, Risk Factors and Mortality. Digestion, 84